目的:探讨在紫外线暴露下敲低环指蛋白20(Ring Finger Protein 20,RNF20)对胃癌细胞DNA损伤修复的影响。方法:1.构建稳定低表达RNF20的MGC803胃癌细胞系(1)针对RNF20基因设计短发夹RNA序列;(2)构建p Lent-U6-GFP-Puro-sh RNF20、p Lent-U6-GFP-Puro-sh Ctrl慢病毒载体;(3)包装慢病毒,感染人胃癌细胞MGC803,分为Ctrl对照组和RNF20敲低组,荧光显微镜观察两组细胞的绿色荧光蛋白表达,通过嘌呤霉素筛选两组细胞系;(4)采用免疫印迹法鉴定细胞中RNF20蛋白的表达情况。2.敲低RNF20对胃癌细胞增殖的影响采用CCK-8法检测敲低RNF20对胃癌细胞增殖的影响。3.敲低RNF20对胃癌细胞DNA损伤修复的影响使用总照射剂量为20J·m-2的紫外线照射胃癌细胞;采用免疫荧光染色法检测γ-H2AX、RAD51蛋白的表达,免疫印迹法检测γ-H2AX和p21蛋白的表达情况。结果NVP-TNKS656:1.稳定低表达RNF20的MGC803胃癌细胞系的建立(1)荧光显微镜观察稳转细胞感染效率均高于85%;(2)免疫印迹法结果显示,敲低组胃癌细胞中RNF20蛋白较对照组表达降低。2.敲低RNF20Food Genetically Modified对胃癌细胞增殖的影响CCK-8实验结果显示,敲低RNF20的MGC803细胞较对照组细胞的增殖能力增强。3.敲低RNF20对胃癌细胞DNA损伤修复的影响(1)免疫荧光染色法与免疫印迹法结果显示,敲低RNF20的MGC803细胞较对照组细胞的γ-H2AX消失更加迟缓;(2)免疫荧光染色法结果显示,敲低RNF20的MGC803细胞较对照组细胞的RAD51蛋白的募集发生延迟;(3)免疫印迹法结果显示,敲低RNF20的细胞较对照组细胞的p21蛋白下降的趋势更为缓慢。结论:本研究通过慢病毒载体构建RNF20敲低的胃癌细胞株,发现在紫外线暴露下,敲低RNF20RAD001使用方法会促进胃癌细胞的增殖,敲低RNF20会导致胃癌细胞DNA双链断裂损伤更加严重,并使DNA损伤修复发生缺陷。