PI3K抑制剂

目的 探讨蛋白酶体抑制剂Marizomib(Mzb)联合顺铂对人子宫颈癌细胞的抗肿瘤效应及其机制。方法 应用人子宫颈癌细胞系SiHa、C33A和子宫颈上皮永生化细胞H8,通过CCK-8、克隆形成实验、Western blot法和流式细胞术，分析Mzb联合顺铂对子宫颈癌细胞的细胞毒性和凋亡的影响。结果 CCK-8结果显示，Mzb浓度在0、0.001～0.5μmol/L时，H8细胞的增殖活性分别为100%、101.92%～28.73%,SiHa细胞的增殖活性分别为100%、100.48%～3.54%,C33A细胞增殖活性分别为100%、83.7%～17.08%。顺铂(0、0.3～40μmol/L)与Mzb(0.01μmol/L)联用后，SiHa细胞增殖活性分别为98.41%、88.0SBE-β-CD IC506%～55.04%,C33A细胞增殖活性分别为65.58%、61.0Multiplex Immunoassays4%～44.49%。克隆形成实验结果显示，Mzb浓度分别为0、0.01、0.025μmol/L时，SiHa细胞克隆数分别为535、391、318,C33A细胞克隆数分别为Roxadustat472、293、172。与子宫颈上皮永生化细胞H8相比，Mzb显著抑制子宫颈癌细胞增殖并呈剂量依赖性(P<0.05),与顺铂联用后效果更显著(P<0.05)。Western blot结果显示，Mzb促进SiHa和C33A细胞内多聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase, PARP)和Caspase 3裂解(P<0.05),与顺铂联用后效果更显著。流式细胞术结果显示，顺铂组SiHa和C33A细胞凋亡率分别为5.8%、21.5%;Mzb组细胞凋亡率分别为6.8%、28%,两药联合组细胞凋亡率分别为8.8%、33.7%。说明Mzb促进子宫颈癌细胞凋亡，与顺铂联用后凋亡更显著(P<0.05)。结论 Mzb对体外子宫颈癌细胞有较强的抗肿瘤效应，能够敏感化子宫颈癌细胞对顺铂的治疗。在治疗子宫颈癌的临床试验中，顺铂联合Mzb可能是可行且有效的治疗选择。

背景：骨关节炎是一种常见的关节退行性疾病，再生疗法促进膝骨关节炎软骨修复一直是研究热点，其中富血小板血浆来源外泌体可能是一种新的再生治疗方式。目的：综述目前文献，总结富血小板血浆来源外泌体在膝骨关节炎中的应用、作用以及潜在机制。方法：以“platelet rich plasma,extracellular vesicles,exosomes,knee osteoarthritis”为英文关键词、以“富血小板血浆，细胞外囊泡，外泌体，膝骨关节炎”为中文关maternal infection键词分别在Embase、Medline、Cochrane Central Register of ControlledTaurine化学结构 Trials、PubMed、万方数据库及中国知网检索。初检得到1 007篇文献，按纳入、排除标准最终共入选65篇文献进行综述。结果与结论：（1）富血小板血浆来源外泌体的制备涉及富血小板血浆的制备、激活以及使用试剂盒或者超高速离心法获取外泌体，鉴定方法包括标志物表达检测、形态学观察、颗粒跟踪分析等；（2）富血小板血浆来源外泌体的作用包括抑制软骨细胞凋亡，促进软骨细胞增殖与迁徙，抑制炎症因子分泌，促进细胞外基质合成与分泌；（3）在机制方面，涉及PI3K/Akt、Erk1/2、Akt/Baselleck NMRd/Bcl-2及Wnt/β-连环蛋白信号通路。

目的:研究超声弹性成像D-Lin-MC3-DMA molecular weight技术(UE)用于乳腺肿块良恶性鉴别诊断中的临床价值。方法:选择2019年10月Mirdametinib说明书—2021年1月于我院治疗的120例乳腺肿块患者(共120个肿块)。120例乳腺肿块患者均采用常规超声(BUS)及UE检查。观察病理诊断结果，以病理诊断结果作为金标准，计算BUS、UE诊断乳腺肿块良恶性敏感度、特异度与准确率，计算BUS、UE诊断结果与病理诊断结果一致性。结果:120例乳腺肿块患者经病理诊断证实恶性乳腺肿块66例，良性乳腺肿块54例；以病理诊断结果作为金标准，BUS诊断恶性、良性各有57例、63例，其中误诊11例，漏诊20例，BUS诊断乳腺肿块良恶性结果与病理诊断结果一致性较为理想(Kappa值=0.486);以病理诊断结果作为金标准，UE诊断恶性、良性各有64例、56例，其中误诊5例，漏诊7例，UE诊断乳腺肿块良恶性结果与病理诊断结果一faecal microbiome transplantation致性极好(Kappa值=0.799);UE诊断乳腺肿块良恶性敏感度(89.39%)、准确率(90.00%)高于BUS,差异有统计学意义(P<0.05);UE与BUS诊断乳腺肿块良恶性特异度对比，差异无统计学意义(P>0.05)。结论:UE鉴别诊断乳腺肿块良恶性敏感度、准确率高于BUS,鉴别诊断乳腺肿块良恶性结果与病理诊断结果一致性极好，有利于降低误诊、漏诊率，为乳腺癌的诊断及治疗提供参考。

目的 探讨基于知-信-行的护理干预模式在高血压合并脑卒中患者的应用效果。方法 选取蚌埠医学院第一附属医院老年病科因高血压合并脑卒中住院治疗的88例患者作为研究对象，随机分为观察组与对照组。其中，对照组仅应用常规护理方式，观察组使用知-信-行护理干预方式。本研究采用状态焦虑问卷调查表（S-AI）、特质焦虑问卷调查表（T-AI）、中文VX-661采购测试版Mishel疾病不GSK1349572确定感量表（MUIS）以及中文版患者积极度量表（PAM），搜集两组患者的相关数据并比较干预前后10d患者的焦虑状态、不确定感数值及对治疗的积极度数值。结果 采用本研究所提知-信-行护理干预模式后患者S-AI、T-Hepatoprotective activitiesAI、MUIS数值均显著低于对照组，PAM数值显著高于对照组，除此之外，观察组住院时间小于对照组，治疗费用小于对照组，护理满意度高于对照组，且三者P<0.05，差异具有统计学意义。结论 基于知-信-行的护理干预模式在高血压合并脑卒中患者应用后，能明显缓解患者焦虑状态，减轻对疾病的不确定感，提高对疾病诊治的积极性，缩短住院时间、减少费用、护理满意度高。

目的 筛选出三阴性乳腺癌（TNBC）免疫相关LncRNA基因，构建TNBC预后预测模型。方法 (1)从癌症基因组图谱（TCGA）项目下载TNBC组织和癌旁组织的转录组RNA表达谱原始数据，结合Immport数据库，筛选TNBC免疫相关的LncRNA。进一步应用单因素及多因素Cox分析筛选TNBC与预后关系密切的免疫相关LncRNA，然后再根据最佳AIC值确定与预后关系密切的免疫相关LncRNA。(2)根据预后关系密切的免疫相关LncRNA，构建TNselleck合成BC预后预测模型。(3)根据TNBC预后风险模型测算的风险评分值的中位值将TNBC患者样本分为高风险组和低风险组，比较高低风险组生存率。(4)采用ROC、主成分分析（PCA）评估构建的TNBC预后预测模型的预测效能。(5)采用多因素Cox分析TNBC预后预测模型预测效能的独立性。结果 共计65例份TNBC组织样本，得到369个免疫相关LncRNA，通过单因素和多因素Cox分析，共得到3个与预后关系密Killer immunoglobulin-like receptor切的免疫相关Lnselleck SAGcRNA(AC090181.2、LINC01235、LINC01943)，并构建TNBC预后预测模型，该模型表达公式如下：风险评分（RS）=(-6.24904×A C090181.2)+(0.240562×LINC01235)+(-2.18153×LINC01943)。高风险组和低风险组患者生率差异有统计学意义（P<0.001）。TNBC预后预测模型对患者预后预测效能好（AUC=0.910；高、低风险组投影点分布有区别，区分度高）。TNBC预后预测模型能独立预测TNBC预后（HR=1.028,P<0.05）。结论 成功构建了由3个与预后关系密切的免疫相关LncRNA(AC090181.2、LINC01235、LINC01943)组成的TNBC预后预测模型，其能较好预测TNBC患者的预后。

研究背景及目的:癌症是全球范围的重大健康问题,严重威胁人类的生命安全。由于肿瘤起病隐匿,多数患者在诊断时已是晚期,失去手术根治的机会。尽管在癌症诊断及治疗手段方面取得了一定的发展,靶向治疗及免疫治疗的出现很大程度提高了癌症的疗效,显著延长了患者的生存期,但是有效率低、原发或继发性耐药等问题仍亟须解决。深入阐明肿瘤发生发展机制、探索新的治疗靶点,有助于改善癌症治疗的效果、延长生存期。TP53作为突变频率最高的抑癌基因,可通过多种机制参与肿瘤细胞的凋亡、细胞周期阻滞、DNA修复、代谢重塑等过程。CircRNA为广泛存在于各种类型肿瘤中的一类环状非编码RNA,与肿瘤的发生发展密切相关。有研究表明,circRNA可通过调控p53的水平及定位,或通过影响p53下游靶基因发挥抑癌或促癌作用。目前为止,少有研究报道circRNA作为p53的直接靶点发挥其功能。本研究拟通过RNA表达谱芯片分析筛选出受p53调控的circRNA,并深入探究其功能及分子机制。研究方法:1.通过化疗药物和p53激动剂处理携带野生型p53的肿瘤细胞,随后进行RNA表达谱芯片分析筛选表达水平受p53调控的circRNA;2.通过sanger测序及反向引物PCR验证circFRMD4A的环状结构;3.通过RNase R酶及act D处理细胞后qPCR检测circFRMD4A的稳定性;4.核质分离实验检测circFRMD4A的亚细胞定位;5.在不同p53状态的细胞系中激活或干扰p53的表达后,qPCR检测circFRMD4A的表达,验证p53对circFRMD4A的调控作用;6.The p53MH algorithm预测p53与circFRMD4A母本基因FRMD4A启动子区的结合位点,并通过染色质免疫共沉淀实验验证其结合;7.荧光素酶报告基因实验验证p53对FRMD4A的转录激活作用;8.在线网站RBPsuite和RBPmap预测与组成circFRMD4A的外显子两端侧翼内含子相互结合的RNA结合蛋白(RBP),并通过siRNA敲低RBPs后检测circFRMD4A的表达水平,筛选促进circFRMD4A环化的RNA结合蛋白;9.通过RNA免疫共沉淀实验进一步证实EWSR1与组成circFRMD4A的外显子两端侧翼内含子结合;10.通过CCK-8增殖实验、克隆形成、transwell、流式细胞术检测过表达或干扰circFRMD4A对肠癌及乳腺癌细胞生物学行为的影响;11.通过慢病毒感染HCT116细胞构建稳定过表达或敲低circFRMD4A的细胞株,皮下注射构建裸鼠移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况;12.药物敏感实验检测p53及circFRMD4A对肠癌及乳腺癌细胞对铜离子载体伊利司莫的敏感性的影响;13.Western blot检测p53及circFRMD4A对铜死亡关键调节因子和标志蛋白FDX1的影响;14.通过RNA pull down实验联合蛋白质质谱分析筛选circFRMD4A的相互作用蛋白;15.RIP实验验证circFRMD4A与PKM2的相互结合,并通过western blot检测p53及circFRMD4A对PKM2表达水平的影响;16.通过检测乳酸及柠檬酸水平评估circFRMD4A对糖酵解及三羧酸循环的影响;17.通过药物联合实验探索p53激动剂APG-115与铜死亡诱导剂Elesclomol联合抗肿瘤效果。研究结果:(一)CircFRMD4A的筛选及其生物学特征的鉴定1.通过化疗药物和p53激动剂处理携带野生型p53的CAL51细胞,提取总RNA后通过RNA表达谱芯片分析得到一组差异表达的circRNA,并通过qPCR在多株细胞中验证,从中筛选出可能受p53调控的环状RNA circFRMD4A;2.CircFRMD4A是由FRMD4A基因的第16号至第21号外显子通过反向剪接形成的circRNA;3.CircFRMD4A相较线性的母本基因FRMD4A,具有稳定性更高、抵抗RNase R酶消化等特征;4.CircFRMD4A主要定位于细胞质。(二)p53通过对FRMD4A的转录激活作用上调circFRMD4A的表达1.在携带野生型p53的肿瘤细胞中,p53激动剂Nutlin-3、化疗药物顺铂(DDP)及5-氟尿嘧啶(5-FU)可上调circFRMD4A的表达;2.在p53突变或缺失的肿瘤细胞中,Nutlin-3、DDP及5-FU对circFRMD4A的表达无明显影响;3.敲低p53可抑制Nutlin-3、DDP及5-FU对circFRMD4A的上调作用;4.p53与circFRMD4A的母本基因FRMD4A的启动子结合,并对其有转录激活作用;5.RNA结合蛋白EWSR1与组成circFRMD4A的外显子两端的侧翼内含子序列结合并促进其环化;6.EWSR1不影响肠癌及乳腺癌的预后,且敲低EWSR1不影响HCT116和CAL51细胞的增殖;然而,在p53激活状态下,敲低EWSR1促进HCT116和CAL51细胞的增殖。(三)CircFRMD4A在肠癌及乳腺癌中发挥抑癌作用1.过表达cigenetic mutationrcFRMD4A抑制肠癌及乳腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,并促进细胞凋亡;2.干扰circFGDC-0068溶解度RMD4A促进肠癌及乳腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,并抑制细胞凋亡;3.过表达circFRMD4A增强肠癌及乳腺癌细胞对伊利司莫的敏感性;4.干扰circFRMD4A抑制肠癌及乳腺癌细胞对伊利司莫的敏感性;5.过表达circFRMD4A抑制铜死亡关键调节因子和标志蛋白FDX1的表达;6.干扰circFRMD4A促进FDX1的表达;7.激活p53增强肠癌及乳腺癌细胞对伊利司莫的敏感性,干扰circFRMD4A能够逆转p53激活对伊利司莫敏感性的增强作用;8.干扰p53抑制肠癌及乳腺癌细胞对伊利司莫的敏感性,过表达circFRMD4A能够逆转干扰p53对伊利司莫敏感性的抑制作用;9.激活p53抑制FDX1的表达,干扰circFRMD4A能够逆转p53激活对FDX1的抑制作用;10.干扰p53促进FDX1的表达,过表达circFRMD4A能够逆转干扰p53对FDX1的促进作用;11.过表达circFRMD4A抑制裸鼠移植瘤的生长,干扰circFRMD4A促进裸鼠移植瘤的生长。(四)p53通过circFRMD4A调控糖酵解及三羧酸循环1.RNA pull down实验联合蛋白质质谱分析显示,circFRMD4A与丙酮酸代谢相关;2.CircFRMD4A与丙酮酸激酶PKM2相互结合并抑制其表达;3.激活p53抑制PKM2的表达,干扰circFRMD4A能够逆转p53激活对PKM2的抑制作用;4.敲低p53促进PKM2的表达,过表达circFRMD4A能够逆转干扰p53对PKM2的促进作用;5.过表达circFRMD4A抑制肠癌及乳腺癌细胞乳酸的产生,干扰circFRMD4A促进肠癌及乳腺癌细胞乳酸的产生;6.过表达circFRMD4A促进肠癌及乳腺癌细胞柠檬酸的产生,干扰circFRMD4A抑制肠癌及乳腺癌细胞柠檬酸的产生;7.p53激动剂APG-115与铜死亡诱导剂Elesclomol协同抑制肠癌及乳腺癌细胞增殖。研究结BLZ945小鼠论:1.CircFRMD4A由FRMD4A基因的第16至第21号外显子通过反向剪接形成,具有高稳定性及抵抗RNase R酶消化等特点;2.p53通过对FRMDA基因的转录激活作用从而上调circFRMD4A的表达;3.RNA结合蛋白EWSR1促进circFRMD4A的环化;4.CircFRMD4A在肠癌及乳腺癌中发挥抑癌作用;5.p53通过circFRMD4A促进肠癌及乳腺癌细胞的铜死亡;6.p53通过调控circFRMD4A抑制PKM2的表达,从而抑制糖酵解并增强线粒体代谢,最终促进细胞铜死亡;7.p53激动剂APG-115与铜死亡诱导剂Elesclomol具有协同抗肿瘤作用。

目的 探讨老年乳腺癌患者心理资本在社会限制与癌症适应间的中介效应。方法 2021年7月—2022年5月在唐山市8所三级甲等医院中随机抽取3所医院，再整群纳入该时间段内住院治疗的294名老年乳腺癌患者为研究对象。采用一般资料调查表、社会限制量表、积MG132极心理资本问卷、乳腺癌患者心理社会适应问卷进行调查。采用多元线性逐步回归法和combined immunodeficiency结构方程模型分析心理资本的中介作用。结果 老年乳腺癌患者的社会限制、心理资本、癌症适应得分分别为（37.47±6.05）、（98.46±18.38）和（131.84±17.18）分；老年乳腺癌患Smoothened Agonist说明书者的心理资本与社会限制呈负相关（r=-0.201,P<0.001），与癌症适应呈正相关（r=0.456,P<0.001）；社会限制对癌症适应的直接效应为-0.126(95%CI:-0.060～-0.001)，心理资本介导后社会限制对癌症适应的间接效应为-0.241 (95%CI:-0.077～-0.100)，中介效应占比为65.67%。结论 社会限制不仅直接影响老年乳腺癌患者的癌症适应，还通过心理资本间接影响癌症适应。可通过促进配偶、家属和患者间积极性的建设性沟通来减少患者的客观性社会限制及双方性回避，同时更应注重提升患者的心理资本水平，以削弱患者的不被支持、被回避、被疏远等来自于客观限制的主观感受，进而促进患者的情感表露，提高老年乳腺癌患者的癌症适应。

目的 探讨程序性细胞死亡蛋白1(PD-1）单链抗体（ScFv）溶瘤病毒对卵巢癌裸鼠模型免疫活性、肿瘤生长及存活率FG-4592说明书的影响。方法 C57BL/6小鼠右前腋下注射SKOV-3细胞构建卵巢癌裸鼠模型，分别以0、5×10~5PFU、1×10~6PFU、5×10~6PFU、1×10~7PFU、5×10~7PFU、1×10~8PFU 滴度的PD-1 Sc Fv 溶瘤病毒瘤内注射，检测小鼠肿瘤体积，筛选最佳作用滴度。构建好的卵巢癌模型裸鼠随机分为模型组、PD-1抗体组、单独溶瘤病毒组、PD-1 Sc Fv溶瘤病毒组，每组8只，再选8只小鼠右前腋下注射等量细胞培养液作寻找更多为对照组。测定小鼠脾指数、胸腺指数及肿瘤体积；流式细胞实验检测小鼠外周血 T 淋巴细胞亚群 CD4~+、CD8~+比例与CD4~+/CD8~+比值；以酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒检测小鼠血清白细胞介素（IL)-2、IL-10、γ-干扰素（IFN-γ）水平；检测小鼠外周血白细胞比例；CCK-8实验检测小鼠产生的特异性抗肿瘤细胞杀伤率；检Medical Scribe测各组小鼠存活率。结果 与对照组比较，模型组小鼠脾指数与胸腺指数、CD4~+比例与CD4~+/CD8~+比值、IFN-γ与IL-2水平、外周血白细胞比例、特异性抗肿瘤细胞杀伤率、存活率降低（P<0.05）、CD8~+比例、IL-10水平升高（P<0.05）；与模型组比较，PD-1 Sc Fv溶瘤病毒组、单独溶瘤病毒组、PD-1抗体组小鼠脾指数与胸腺指数、CD4~+比例与CD4~+/CD8~+比值、IFN-γ与IL-2水平、外周血白细胞比例、特异性抗肿瘤细胞杀伤率、存活率均升高（P<0.05），肿瘤体积、CD8~+比例、IL-10水平均降低（P<0.05）；与单独溶瘤病毒组、PD-1抗体组分别比较，PD-1 Sc Fv溶瘤病毒组小鼠脾指数与胸腺指数、CD4~+比例与CD4~+/CD8~+比值、IFN-γ与IL-2水平、外周血白细胞比例、特异性抗肿瘤细胞杀伤率、存活率均升高（P<0.05），肿瘤体积、CD8~+比例、IL-10水平均降低（P<0.05）。结论 PD-1 Sc Fv溶瘤病毒可改善卵巢癌裸鼠免疫功能，促进特异性抗肿瘤细胞产生，并增强其对癌细胞杀伤力，抑制肿瘤生长，相比单独应用PD-1抗体或溶瘤病毒疗效能更强。

目的：探讨lnc AL928768.3如何通过miR-92a-3p/解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)轴调控类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（SFs）增殖和凋亡。方法：qPCR检测RA患者滑膜组织lnc AL928768.3和miR-92a-3p表达。生物信息学手段和双荧光素酶报告基因实验分析lnc AL928768.3、miperioperative antibiotic scheduleR-92a-3p与ADAM10的靶向关系，Western blot分析ADAM10表达。MTT检测MH7A细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测MH7A细胞增殖和凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)表达。结果：lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中呈高表达，而miR-92a-3p呈低表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验证实，lnc AL928768.3可靶向负调控miR-92a-3p表达，且ADAM10是miR-92a-3获悉更多p的直接靶基因。抑制lnc AL92876selleck ABT-2638.3表达或敲低ADAM10表达均可抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡；干扰miR-92a-3p能够逆转抑制lnc AL928768.3对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用；过表达lnc AL928768.3或干扰miR-92a-3p表达能够逆转敲低ADAM10对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用。结论：lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中表达上调，抑制lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴抑制MH7A细胞增殖并促进细胞凋亡。

氧气是机体进行新陈代谢和维持生存的必要因素。低氧适应是机体为了适应缺氧这一生理或病理现象，降低缺氧带来的影响而发生的一系列局部性和系统性的改变。竞争性内源RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）是指具有同种miRNA反应元件（microRNA response elements，MREs）的RNA分子，竞争性结合miRNA，在转录后水平调控基因的表达，进而影响细胞的生物学功能。ceRNA是一种复杂的网络调节机制，在细胞增殖PR-171化学结构与凋Immunochromatographic assay亡、炎症反应、能量代谢、动物肌肉发育、脂肪沉积、脂质代谢等多个领域发挥作用。本文详细总结长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）、环状RNA（circular RNA ，cselleck 3-MAircRNA）和假基因的生物学功能和特点，阐述经过验证的ceRNA参与动物低氧适应的生物学功能，为哺乳动物低氧适应性研究奠定基础，为促进高原畜牧业发展提供新思路。