PI3K抑制剂

【目的】CHARGE综合征是一种罕见且临床表型极为复杂的先天性异常综合征,发病率约为1/8,500-1/15,000,致病机制尚不清楚且无有效的治愈方法,临床上仅能给予对症治疗。本研究的主要目标是针对一个CHARGE综合征家系进行致病基因筛查,明确其致病基因,并探索突变对相关致病基因蛋白结构和功能的影响,以明确其致病机制,为临床上CHARGE综合征的产前筛查、诊断及研发可靠的治疗药物提供关键性依据。【方法】(1)收集一CHARGE综合征家系,依据CHARGE综合征的临床诊断标准及诊治指南,确诊为CHARGE综合征,绘制家系图谱,在获得每位受试者的知情同意后,收集患者及家属的临SAG半抑制浓度床资料并抽取外周血。(2)经全外显子组测序,基于变异有害性、隐性遗传及新生突变等方式筛选致病基因,通过显著性富集分析确hepatic cirrhosis定突变致病基因参与的最为重要的生化代谢途径及信号转导途径,Sanger测序验证候选致病基因突变位点。(3)通过蛋白水平分析研究候选致病基因突变蛋白的理化性质、疏水性质、亚细胞定位、信号肽、跨膜螺旋结构以及蛋白二级结构及其与野生型的差异。(4)构建候选致病基因所在的核心区域蛋白三维模型,并利用所建蛋白三维结构模型进行候选致病基因突变蛋白三维结构建模,分析突变对蛋白结构功能的影响。(5)依据蛋白-蛋白互作预测结果,进行蛋白-蛋白对接,比较突变前后蛋白-蛋白相互作用的变化及影响,推测在CHARGE综合征发病过程中的致病机制。【结果】(1)本研究筛选出4个致病基因CUBN(c.1952G>C)、AMOT(c.1412G>A)、TRPM4(c.1169A>T)及CHD7(c.3089A>G),然后进行 Sanger验证。(2)致病基因突变蛋白的蛋白理化性质发生不同程度的改变。(3)CUBN(Arg651Pro)、AMOT(Arg471His)、TRPM4(Lys390Met)和CHD7(Asn1030Ser)突变蛋白疏水性升高,其中以TRPM4(Lys390Met)升高最为显著。(4)TRPM4(Lys390Met)突变引起其8个跨膜螺旋结构区中的5个发跨膜螺旋结构区发生改变。(5)CUBN(Arg651Pro)、AMOT(Arg471His)、TRPM4(Lys390Met)和CHD7(Asn1030Ser)突变蛋白对蛋白二级结构造成了不同程度的影响。(6)致病基因突变位点使蛋白的三维构象发生显著变化。(7)突变位点致CUBN-AMOT、CHD7-AMOT、CUBN-AMOTCHD7蛋白之间相互作用发生变化。【结论】(1)经全外显子组测序筛选出候选基因致病位点为CUBN(c.1952G>C)、AMOT(c.1412G>A)、TRPM4(c.1169A>T)以及CHD7(c.3089A>G)基因错义突变。(2)通过蛋白理化性质分析表明Arg651Pro、Arg471His、Lys390Met以及Asn1030Ser突变蛋白理化性质发生不同程度的变化。(3)经过蛋白疏水性分析发现CUBN(Arg651Pro)、AMOT(Arg471His)、TRPM4(Lys390Met)和CHD7(Asn1030Ser)突变蛋白疏水性升高,其中以TRPM4(Lys390Metselleck化学)升高最为明显。疏水性变化可能对蛋白三维结构产生影响。(4)跨膜结构分析软件表明TRPM4(Lys390Met)突变引起其8个跨膜螺旋结构区中的5个发跨膜螺旋结构区发生构象变化。考虑是由于突变蛋白疏水性质的改变而导致跨膜螺旋区位置的改变。(5)经蛋白二级结构预测发现CUBN(Arg651Pro)、AMOT(Arg471His)、TRPM4(Lys390Met)和CHD7(Asn1030Ser)突变蛋白使其二级结构发生了改变。(6)利用同源建模软件成功构建野生型及突变型CUBN、AMOT、TRPM4及CHD7蛋白三维模型,经过各自野生型与突变型蛋白三维结构叠加对比分析,发现CUBN及CHD7突变蛋白存在重要结构域的变化,AMOT、TRPM4及CHD7突变蛋白也导致了蛋白三维结构的显著变化。(7)蛋白-蛋白相互作用分析表明,CUBN-AMOT、CHD7-AMOT、CUBN-AMOT-CHD7蛋白之间可以互相作用,并且突变后的蛋白互作接触面积、疏水相互作用、氢键、盐桥及阳离子-π相互作用均发生了巨大变化,结果提示以上突变蛋白相互作用模式极大可能是CHARGE综合征致病的关键机制之一。

目的 通过对四川省内江市3个白纹伊蚊野外群AG-221半抑制浓度体电压门控钠离子通道（voltage-gated sodium channel,VGSC）基因检测分析，在分子水平上了解白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性现状。方法 2021年6-7月，在内江市3个县（市、区）白纹伊蚊孳生地使用诱蚊灯法采集野外成蚊，鉴定为白纹伊蚊后，提取基因组DNA，扩增VGSC基因片段，检测VGSC基因抗药性NSC 125973浓度相关位点（1016、1532和1534）的突变类型及其分布频率。结果 共收集并成功测序107只白纹伊蚊，检测到1016G突变的有28只，占26.17%，发生1532T突变的有6只，占5.61%,1534位点发生突变（1534C/S）的共100只，占93.46%。对1016、1532、1534位点组合分析发现，仅1个位点为突变型的个体为76个（73.08%）,2个位点为突变型的个体共25个（24.04%），其中1016位点为野生型、1532和1534位点同时突变的个体为2个（1.92%）,1532位点为野生型、1016和1534位点同时突变的个体为22个（21.15%）,1534位点为野生型、1532cachexia mediators和1016位点同时突变的个体共1个（0.96%）。本次现场未发现3个位点同时突变的个体。结论 内江市3个白纹伊蚊野外种群存在较高频率的拟除虫菊酯类杀虫剂靶标突变，其中1534位点抗性频率较高，1534S是优势抗性等位基因，提示在化学防治蚊虫时，宜减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用，以延缓抗药性的产生，提高蚊媒控制效果。

目的 通过对四川省内江市3个白纹伊蚊野外群AG-221半抑制浓度体电压门控钠离子通道（voltage-gated sodium channel,VGSC）基因检测分析，在分子水平上了解白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性现状。方法 2021年6-7月，在内江市3个县（市、区）白纹伊蚊孳生地使用诱蚊灯法采集野外成蚊，鉴定为白纹伊蚊后，提取基因组DNA，扩增VGSC基因片段，检测VGSC基因抗药性NSC 125973浓度相关位点（1016、1532和1534）的突变类型及其分布频率。结果 共收集并成功测序107只白纹伊蚊，检测到1016G突变的有28只，占26.17%，发生1532T突变的有6只，占5.61%,1534位点发生突变（1534C/S）的共100只，占93.46%。对1016、1532、1534位点组合分析发现，仅1个位点为突变型的个体为76个（73.08%）,2个位点为突变型的个体共25个（24.04%），其中1016位点为野生型、1532和1534位点同时突变的个体为2个（1.92%）,1532位点为野生型、1016和1534位点同时突变的个体为22个（21.15%）,1534位点为野生型、1532cachexia mediators和1016位点同时突变的个体共1个（0.96%）。本次现场未发现3个位点同时突变的个体。结论 内江市3个白纹伊蚊野外种群存在较高频率的拟除虫菊酯类杀虫剂靶标突变，其中1534位点抗性频率较高，1534S是优势抗性等位基因，提示在化学防治蚊虫时，宜减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用，以延缓抗药性的产生，提高蚊媒控制效果。

目的 通过对四川省内江市3个白纹伊蚊野外群AG-221半抑制浓度体电压门控钠离子通道（voltage-gated sodium channel,VGSC）基因检测分析，在分子水平上了解白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性现状。方法 2021年6-7月，在内江市3个县（市、区）白纹伊蚊孳生地使用诱蚊灯法采集野外成蚊，鉴定为白纹伊蚊后，提取基因组DNA，扩增VGSC基因片段，检测VGSC基因抗药性NSC 125973浓度相关位点（1016、1532和1534）的突变类型及其分布频率。结果 共收集并成功测序107只白纹伊蚊，检测到1016G突变的有28只，占26.17%，发生1532T突变的有6只，占5.61%,1534位点发生突变（1534C/S）的共100只，占93.46%。对1016、1532、1534位点组合分析发现，仅1个位点为突变型的个体为76个（73.08%）,2个位点为突变型的个体共25个（24.04%），其中1016位点为野生型、1532和1534位点同时突变的个体为2个（1.92%）,1532位点为野生型、1016和1534位点同时突变的个体为22个（21.15%）,1534位点为野生型、1532cachexia mediators和1016位点同时突变的个体共1个（0.96%）。本次现场未发现3个位点同时突变的个体。结论 内江市3个白纹伊蚊野外种群存在较高频率的拟除虫菊酯类杀虫剂靶标突变，其中1534位点抗性频率较高，1534S是优势抗性等位基因，提示在化学防治蚊虫时，宜减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用，以延缓抗药性的产生，提高蚊媒控制效果。

目的 通过对四川省内江市3个白纹伊蚊野外群AG-221半抑制浓度体电压门控钠离子通道（voltage-gated sodium channel,VGSC）基因检测分析，在分子水平上了解白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性现状。方法 2021年6-7月，在内江市3个县（市、区）白纹伊蚊孳生地使用诱蚊灯法采集野外成蚊，鉴定为白纹伊蚊后，提取基因组DNA，扩增VGSC基因片段，检测VGSC基因抗药性NSC 125973浓度相关位点（1016、1532和1534）的突变类型及其分布频率。结果 共收集并成功测序107只白纹伊蚊，检测到1016G突变的有28只，占26.17%，发生1532T突变的有6只，占5.61%,1534位点发生突变（1534C/S）的共100只，占93.46%。对1016、1532、1534位点组合分析发现，仅1个位点为突变型的个体为76个（73.08%）,2个位点为突变型的个体共25个（24.04%），其中1016位点为野生型、1532和1534位点同时突变的个体为2个（1.92%）,1532位点为野生型、1016和1534位点同时突变的个体为22个（21.15%）,1534位点为野生型、1532cachexia mediators和1016位点同时突变的个体共1个（0.96%）。本次现场未发现3个位点同时突变的个体。结论 内江市3个白纹伊蚊野外种群存在较高频率的拟除虫菊酯类杀虫剂靶标突变，其中1534位点抗性频率较高，1534S是优势抗性等位基因，提示在化学防治蚊虫时，宜减少拟除虫菊酯类杀虫剂的使用，以延缓抗药性的产生，提高蚊媒控制效果。

目的 探究自体富血小板血浆(PRP)联合高压氧(HBO)治疗老年糖尿病足溃疡(DFU)患者对创面修复及血管内皮细胞活力的影响。方法 160例老年DFU患者随机分为对照组和观察组各80例。对照组予以HBO治疗，观察组予以PRP联合HBO治疗。比较两组临床疗效、创面修复情况、腘动脉及足背动脉血流速度和血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素(ILBiometal trace analysis)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)水平。结果 观察组临床总有效率明显高于对照组(P<0.05)。与对照组相比，治疗4、8 w时，观STM2457察组创面面积明显减小、创面愈合率明显升高，且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。观察组治疗8 w时血清IL-6、TNF-α、CRP水平均明显低于对照组，血清VEGF、bFGF水平及腘动脉及足背动脉血流速度均明显高于对照组(均P<0.05)。结论 自体PRPCX-5461核磁联合HBO治疗老年DFU疗效显著，可促进患者创面修复，缩短愈合时间，降低炎症因子水平，提高血管内皮细胞活力，改善足部微循环。

目的 观察健脾补肺化痰方对支气管哮喘缓解期小鼠肠道微生物群的影响。方法 通过卵白蛋白联合Al(OH)_3致敏雾化建立缓解期哮喘模型，将模型复制成功的小鼠随机Adavosertib分为模型组、健脾补肺化痰方组、孟鲁司特钠组，每组8只，分别予以生理盐水、健脾补肺化痰方溶液、孟鲁司特钠溶液，另设空白组8只。采用肺通气功能试验检测第1秒用力呼气量/用力肺活量、用力呼气量为25%～75%肺活量时的平均流量/用力肺活量；苏木精—伊红染色观察肺组织与结肠组织的病理变化；夹心酶联免疫吸附试验检测血清、粪便中组胺水平；采用16S rDNA高通量测序对肠道菌群进行检测。结果 与空白组比较，模型组小鼠结肠组织与肺组织存在病理改变，肺通气功能显著下降(P<0.05),血清中组胺水平明显升高(P<0.05),粪便中组胺水平与拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、普氏菌科(Prevotellaceae)群落丰PF-03084014采购度降低(P<0.05),厚壁菌门(Firmicutes)、毛螺菌科(LachnospiraceaBiomass exploitatione)群落丰度明显升高(P<0.05)。与模型组比较，健脾补肺化痰方组结肠组织与肺组织的病变得到缓解，肺功能提高(P<0.05),血清中组胺水平下降(P<0.05),粪便中组胺水平与拟杆菌门、放线菌门、普氏菌科、紫单胞菌科(Porphyromonadaceae)群落丰度升高(P<0.05),厚壁菌门和毛螺菌科群落丰度下降(P<0.05)。拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门与肺功能、组胺水平具有相关性。结论 健脾补肺化痰方可通过调节肠道菌群及其代谢产物组胺治疗缓解期支气管哮喘。

四苯乙烯(TPE)作为一种典型的具有聚集诱导发光现象(AIE)的分子,具有独特的螺旋桨状结构。因其合成简单,修饰方便,且具有优异的光学性能,在有机荧光材料领域备受关注,是一颗冉冉升起的新星。如何合理的修饰四苯乙烯,并在iCCA intrahepatic cholangiocarcinoma需要时开启或关闭AIE是四苯乙烯衍生物应用的关键。此外稀土元素具有优异的光、电、磁性能,一直是科研领域的重点研究对象,也是国家不可或缺的战略资源。在光学领域,由于稀土元素具有众多的电子激发能级,其荧光发射能够覆盖整个可见光和近红外波长范围。通过适当的方法将TPE衍生物与稀土元素结合,将AIE机理引入稀土领域,并探讨荧光团间的相互作用CX-5461使用方法,对荧光调控具有重要意义。在第二章的内容中,我们通过Suzuki偶联反应将吡啶环引入TPE,再通过吡啶与卤代烃的亲核取代反应引入氨基和离子键,合成了三种TPE衍生物。这三种TPE衍生物由TPE阳离子和简单溴离子组成,具有一定的水溶性。并且不同数量的电荷和氨基,对TPE衍生物的水溶性具有一定影响,并通过丁达尔效应和郎伯比尔定律进一步确认三种化合物在水中合适的溶解浓度。三种化合物在乙醇/乙酸乙酯混合体系中具有典型的AIE效应。此外,这三种具有AIE效应的水溶性离子型TPE衍生物,可以作为肝素检测的荧光探针,且每个探针都有自己的优点,可适用于不同条件,相信这三种荧光探针在荧光检测领域具有广泛的应用前景。在第三章的内容中,由于受到第二章中TPE阳离子和肝素阴离子结合的启发,我们发现抗衡离子对TPE阳离子的分子堆积以及荧光具有非常显著的影响,而大部分研究者都没有考虑阴离子本身的发光,因此,我们合成了一种离子型稀土配合物,并将其中的稀土配合物阴离子与TPE阳离子结合,构建了一种新型的有机稀土复合物,这种复合物能够同时购买Erdafitinib具有稀土优异的光学性能和TPE的AIE效应。该化合物在DMF/水的体系中具有独特的AIE/聚集诱导淬灭(ACQ)双重性质,并通过荧光寿命、紫外和磷光光谱等数据,探讨了分子内部的能量传递途径,且对其ATE/ACQ的这种独特的双重荧光性质做出了初步解释。此外,我们还发现该体系具有可协调性荧光的性质,可以通过添加三磷酸腺苷(ATP)和聚丙烯酸来调控体系的荧光发射,为设计可调谐荧光分子提供了一种新的思路和方法。

目的 分析下肢远端深静脉血栓(DDVT)住院患者的临床资料，探讨DDVT短期进展的影响因素。方法 回顾性分析2020年1月—2022年1月河南省人民医院诊治合并DDVT 165例住院患者的临床资料。165例入院后行下肢血管超声检查，诊断DDVT后依据血栓情况、临床症状及出血风险评估结果确定是否行抗凝治疗、抗凝药物及剂量。2周后复查下肢血管超声或行肺动脉造影，110例DDVT无变化或消失者为未进展组，55例DDVT进展至腘静脉、股静脉、髂静脉或形成无症状的肺栓塞者为进展组。比较2组性别比例、年龄、体质量指数、合并症(高血压、糖尿病、冠心病)、吸烟史、血栓部位、1个月内手术史、血栓史、下肢水肿、活动期肿瘤、中心静脉置管、卧床制动>3 d、抗凝治疗比率及出血并发症发生情况；记录入院时白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、C反应蛋白、白蛋白、乳酸脱氢酶、空腹血糖、血肌酐、凝血酶原时间、凝血酶原活动度、活化部分凝血活酶时间、D-二聚体、总胆固醇、三酰甘油水平；多因素logistic回归分析住院患者DDVT短期内进展的影响因素。结果 (1)165例中行抗凝治疗129例，均未发生出血并发症。进展组活动期肿瘤(20.0%)、1个月内手术史(47.3%)、血栓史(14.5%)、卧床制动>3 d(56.4%)比率均高于未进展组(8.2%、30.0%、3.6%、39.1%)(P<0.05),抗凝治疗比率(61.8%)低于未进展组(86.4%)(P<0.0Oral bioaccessibility5),2组性别比例，年龄，体质量指数，合并高血压、糖尿病、冠心病比率，血栓部位，有吸烟史、下肢水肿、中心静脉置管比率，入院时白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、selleck激酶抑制剂C反应蛋白、白蛋白、乳酸脱氢酶、空腹血糖、血肌酐、凝血酶原时间、凝血酶原活动度、活化部分凝血活酶时间、D-二聚体、总胆固醇、三酰甘油比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)血栓史(OR=9.037,95%CI:2.235～36.538,P=0.002Docetaxel分子式)、活动期肿瘤(OR=3.734,95%CI:1.274～10.940,P=0.016)是住院患者DDVT短期内进展的危险因素，抗凝治疗(OR=0.150,95%CI:0.062～0.362,P<0.001)是其保护因素。结论 有血栓史和活动期肿瘤的住院患者DDVT易在短期内进展，抗凝治疗可降低DDVT进展的风险。

羊肉营养丰富,是一种药食兼用的肉类食品。作为羊肉生产大国,近几年来,我国羊肉产量持续增加,具有良好前景,但消费量却不及其他畜禽肉,并且销售形式以生鲜肉为主。我国规模化加工羊肉的企业少,标准化程度低,羊肉加PF-03084014工种类单一,市场上的羊肉香肠并不多见,我国对于羊肉香肠的加工研究仍处于探索阶段,难以实现规模化生产,除了羊肉价格高之外,这与羊肉本身存在令人不适的特殊气味也有着密切的关系,通常将这种味道称之为“膻味”。羊肉所具有的膻味会降低消费者的可接受度。因此,本课题以羊肉为研究对象,在香肠基本配方的基础上,探究乳酸菌和酵母菌协同作用对于羊肉香肠膻味的脱除效果以及最终成品品质的影响。本研究的主要研究结果如下:(1)羊肉香肠膻味指数评价模型的建立本研究利用感官评分、电子鼻、游离脂肪酸构建羊肉膻味强度指数评价模型。将感官评分进行数学拟合,可得膻味强度y值Bio ceramic=-0.77007+0.77207e^~((x/9.16271)),R~2=0.99989。利用主成分分析法分别分析电子鼻和游离脂肪酸的测定结果,发现由游离脂肪酸所构建的膻味强度评价模型计算值与感官评价结果呈显著相关(P<0.01),相关系数为0.992。膻味强度F值=0.63625F_1+0.28808F_2,其中,F_1=0.993X_1+0.428X_2+0.983X_3+0.246X_4+0.916X_5+0.901X_6+0.960X_7+0.567X_8,F_2=0.071X_1+0.852X_2-0.133X_3+0.966X_4-0.289X_5-0.394X_6-0.251X_7+0.565X_8。(2)羊肉香肠中除膻菌株的筛选鉴定及复配研究从羊肉香肠中筛选得到5株具有产脂肪酶能力且符合肉制品发酵剂相关要求的乳酸菌,分别为戊糖片球菌(Pediococcus pentose)L1、L7、L17、L21和L211,5株具有良好产酒精能力且符合肉制品发酵剂相关要求的酵母菌,分别为近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)Y17、Y21、Y22、Y23和Y34,均不会产生吲哚类有害物质,也均不会产生α-溶血和β-溶血,不属于溶血菌株。其中,结合乳酸菌的产酶能力、酵母菌的产酒精能力及各自的生长特性,选取了戊糖片球菌L7和近平滑假丝酵母Y22进行了拮抗和复配实验。两株菌之间无拮抗作用,且最佳复配比为L7:Y22=2:1。(3)乳酸菌、酵母菌接种对羊肉香肠膻味和品质的影响通过膻味感官评分结果和膻味强度F值,发现复配接种戊糖片球菌L7和近平滑假丝酵母Y22能够显著降低羊肉香肠中的膻味(P<0.05)。降低羊肉香肠p H值,最终达到5.33±0.22,从而控制了羊肉香肠中微生物的数量,减少组胺和酪胺的积累,还能够抑制脂肪的氧化,复配接种组羊肉香肠成品的酸价为1.26±0.20 mg/kg显著低于空白对照组的3.17±0.12 mg/kg(P<0.05),过氧化值仅为0.0069±0.0006 g/100g显著低于A组的0.0095±0.0005 g/100g(P<0.05),TBARS值始为0.17±0.01 mg/kg显著低于空白对照组组的0.22±0.01 mg/kg(P<0.05)。此外,复配接种还能提高羊肉香肠的感官品质,质构特性、色度值,增加了挥发性物质的种类,提升了风味,该组羊肉香肠的感官评分为88.50±5.28分,显著高于空白对照组的69.50±7.83分(P<0.05)。(4)乳酸菌和酵母菌复配接种发酵羊肉香肠的贮藏将乳酸菌和酵母菌最佳复配比接种发酵的羊肉香肠干燥后,经真空包装在37℃、室温(20℃)、4℃、-20℃保存28 d,结果显示,第28 d时,4℃和-20℃下贮藏均能够维持羊肉香肠的感官品质,且-20℃贮藏效果最佳,4℃贮藏selleckchem28 d的羊肉香肠感官评分为77.67±2.08分,-20℃的感官评分为83.34±1.52分。并且,-20℃下贮藏28 d能够维持羊肉香肠的酸度,TBARS值为0.22±0.01 mg/kg,TVB-N值仅为13.32±0.86 mg/100g,说明复配接种发酵的羊肉香肠在-20℃下具有良好的贮藏性。本研究的结果表明,采用从羊肉香肠中筛选得到的戊糖片球菌L7和近平滑假丝酵母Y22,复配接种发酵羊肉香肠,能够降低羊肉香肠的膻味,提升其品质,为获得膻味轻、食用品质佳的羊肉香肠提供理论支持。