PI3K抑制剂

目的:探究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)的外源性补充对急性大强度运动大鼠心肌氧化应激损伤是否产生保护作用,为NMN预防运动性心肌损伤的研究提供参考依据。方法:以56只7周龄雄性SD大鼠为实验对象,将其随机分为5组:安静对照组(C,n=8)、运动对照组(CE,n=12)、低剂量NMN预处理运动组(LNE,n=12)、中剂量NMN预处理运动组(MNE,n=12)、高剂量NMN预处理运动组(HNE,n=12)。适应性喂养后,NMN补充组按大鼠体重灌以低(100 mg/kg)、中(300mg/kg)、高(500 mg/kg)三种不同浓度的NMN溶液,C组和CE组每日灌以等体积的生理盐水,每日1次,共进行4周。最后一次灌胃1 h后,所有运动组(CE、LNE、MNE、HNE组)大鼠均在倾角为10%的跑台上进行为时1 h,速度27 m/min的急性大强度运动。运动1 h后,每组随机选取4只大鼠继续运动至力竭,记录力竭时间;其余大鼠均即刻停止运动。急性大强度运动结束后2h对大鼠进行取材。光学显微镜观察大鼠心肌组织HE染色切片,透射电镜观察大鼠心肌组织电镜切片,ELISA测定大鼠血清中心肌损伤标志物c TDS-3201研究购买n I、CK-MB、NT-pro BNP水平及炎症因子IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达水平,反映大鼠心肌损伤程度;DHE染色检测心肌组织ROS水平,试剂盒检测脂质过氧化产物MDA含量及抗氧化物SOD、GPx、CAT的活性等,反映大鼠心肌氧化应激损伤程度;试剂盒检测心肌组织NAD~+、NADH水平及NAD~+/NADH比率,反映NMN进入心脏并增强细胞NAD~+水平的能力;Western blot检测大鼠心肌Sirt1、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平,反映NMN补充对该氧化应激反应相关信号通路的影响;采用Graphpad Prism 8.0.1软件进行数据统计分析与绘图。结果:(1)NMN对大鼠体重的影响。不同浓度的NMN外源性补充均对健康大鼠体重无显著影响。(2)NMN对大鼠力竭时间的影响。与CE组相比,MNE组、HNE组大鼠力竭运动时间的均值分别延长9.39%、16.97%、17.27%,其中,MNE和HNE组大鼠的力竭运动时间显著延长(P<0.05),LNE组大鼠的力竭时间有增加趋势,但无显著差异(P>0.05)。结果表明,NMN能够延长大鼠力竭时间,提高大鼠运动能力,中、高剂量效果较好。(3)NMN对急性大强度运动大鼠心肌损伤的影响。(1)与C组相比,CE组心肌损伤标志物c Tn I、CK-MB及NT-pro BNP的含量均显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组c Tn I、CK-MB和NT-pro BNP水平均显著降低(P<0.05)。(2)与C组相比,CE组心肌纤维排列紊乱,细胞肿胀、轮廓模糊,炎性细胞浸Brain Delivery and Biodistribution润;与CE组相比,LNE、MNE及HNE组形态结构变化较小,MNE组和HNE组效果尤为明显。(3)与C组相比,CE组促炎因子IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),抗炎因子IL-4、IL-10水平显著降低(P<0.05);与CE组相比,MNE组和HNE组TNF-α水平显著下降(P<0.05),且HNE组IL-10水平显著升高(P<0.05)。(4)与C组相比,CE组大鼠心肌Bax和Caspase-3的蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌Caspase-3水平显著降低(P<0.05),且MNE和HNE组大鼠心肌Bax水平显著降低(P<0.05)。结果表明,NMN补充能够对急性大强度运动诱导的心肌损伤产生保护作用,中、高剂量效果较好。(AY-22989细胞培养4)NMN对急性大强度运动大鼠心肌氧化应激水平的影响。与C组相比,CE组大鼠心肌组织中ROS水平显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组其均值分别降低19.49%、32.63%、35.66%,均为显著性降低(P<0.05)。与C组相比,CE组大鼠心肌MDA水平显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组其均值分别降低18.88%、30.45%、33.47%,均为显著性降低(P<0.05)。与C组相比,CE组大鼠心肌组织中抗氧化酶SOD、CAT及GPx活力无显著变化(P>0.05);但与CE组相比,LNE组、MNE和HNE组大鼠心肌抗氧化酶活力均有升高趋势,SOD活力均值分别升高12.27%、20.41%和23.55%,CAT活力均值分别升高12.83%、20.58%和21.9%,GPx活力均值分别升高12.27%、18.41%和18.23%,其中,LNE组三种抗氧化酶活力与CE组之间不存在显著性差异(P>0.05),MNE和HNE两组较CE组大鼠心肌抗氧化酶活力显著升高(P<0.05)。结果表明,NMN一方面能减轻急性大强度运动大鼠心肌氧化应激损伤,另一方面能提高其心肌抗氧化能力,因而对急性大强度运动诱导的心肌氧化应激损伤起到保护作用,其中,中、高剂量效果较好。(5)NMN对急性大强度运动大鼠NAD~+、NADH水平及NAD~+/NADH比率的影响。与C组相比,CE组大鼠心肌NAD~+水平显著降低(P<0.05);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌NAD~+水平均值分别提高16.83%、25.66%、30.67%,其中,MNE和HNE组大鼠心肌NAD~+水平显著升高(P<0.05)。与NAD~+水平相反,与C组相比,CE组大鼠心肌NADH水平显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌NADH水平均值分别降低13.65%、20.08%、20.07%,其中,MNE组和HNE组显著降低(P<0.05)。与C组相比,CE组大鼠心肌NAD~+/NADH水平显著降低(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌NAD~+/NADH比值的均值分别提高36.01%、59.92%和65.00%,其中MNE组和HNE组显著升高(P<0.01)。结果表明,NMN补充能增加急性大强度运动大鼠心肌NAD~+水平,减少大强度运动导致的NADH堆积,提高NAD~+/NADH比值,从而保证氧化还原反应的正常进行和下游信号通路的激活,中、高剂量效果较好。(6)NMN对急性大强度运动大鼠氧化应激通路Sirt1/Nrf2/HO-1的影响。免疫组织化学法可得,与C组相比,CE组大鼠心肌Sirt1水平显著下降(P<0.05);与CE组相比,MNE和HNE组其表达量显著升高(P<0.01);与LNE组相比,HNE组其表达量显著升高(P<0.05)。Western blot实验可得,与C组相比,CE组大鼠心肌Sirt1蛋白表达显著降低(P<0.05);与CE组相比,MNE和HNE组大鼠心肌Sirt1蛋白表达量显著升高(P<0.01);与LNE组相比,HNE组大鼠心肌Sirt1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与CE组相比,MNE组和HNE组大鼠的心肌细胞核Nrf2水平、心肌细胞HO-1水平均显著升高(P<0.05)。结果表明,NMN补充能激活急性大强度运动大鼠Sirt1/Nrf2/HO-1信号通路,其中,中、高剂量,尤其是高剂量效果较好。研究结论:4周NMN外源性补充能够降低急性大强度运动大鼠的ROS和MDA水平,并提高大鼠抗氧化酶SOD、CAT及GPx活性,减轻心肌氧化应激反应,从而对细胞肿胀、炎症、凋亡等相关心肌损伤产生保护作用,提高大鼠运动能力。其机制可能与NAD~+水平的提高及Sirt1/Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。中、高剂量的NMN补充效果较好。

为了探究鲜活鳜鱼宰后4 ℃冷藏24 h过程中肌肉代谢物的变化情况，借助超高效液相色谱-高分辨质谱技术，结合非靶向代谢组学方法进行不同组别（4 ℃，0、2、4、6、9、12、24 h）差异代谢物多元统计分析、代谢通路分析及相关风味计算。结果表明：鳜鱼冷藏24 h的过程中共有33种代谢物被鉴定为差异代谢物，包括3种有机酸Conus medullaris及衍生物（氨基酸、有机酸），8种有机杂环化合物（嘌呤和嘌呤衍生物、内酯等），7种核苷、核苷酸和类似物（嘌呤核苷及核苷酸、嘧啶核苷酸），9种有机氧化合物（碳水化合物及其结合物、少量醇类），4种脂质和类脂分子（脂肪醇、脂肪酸酯等），1种黄酮苷，1种生物碱及其衍生物；根据差异代谢物MetPA分析，得到9种关键差异代谢物分别为：琥珀酸、天冬氨酸、5′-AMP（AMP）、次黄嘌呤核苷、一磷酸腺苷琥珀酸、黄嘌呤、GMP、核糖-5-磷酸、次黄嘌呤；关键差异代谢产物参与的代谢通路主要为嘌呤代谢，其次是天冬氨酸、谷氨酸代谢和TCA循环；提出相对滋味强度值（telative taste actiRegorafenib细胞培养vity value，RTAV）和相对味精当量（relative equivalent umami concentration，REUC）的计算方法，根据计算结果：鲜鳜鱼的滋味主要由天冬氨酸等鲜味氨基酸与AMP和GMP协同产生，冷藏2～6 h，滋味的主要贡献物质是AMP和GMP，而9～24 h则主要是GMP的呈味作用，单从冷藏24 h的角度来看，鲜鳜鱼的滋味最好，冷藏后由于天冬氨酸含量下降导致鲜味损失，冷藏9～24 hCH-223191半抑制浓度主要因为GMP的累积使鳜鱼鲜味再次增加。

禽白血病J亚群病毒(ALV-J)在临床上会严重损害机体的免疫系统,可引起多种肿瘤疾病及持续性病毒血症,严重影响鸡的产蛋率、肉料比等多种生产性能,给世界家禽养殖业造成不可估量的损失。因此,禽白血病J亚群病毒的防治工作迫在眉睫。研究表明,锌指抗病毒蛋白(ZAP)通过在鸡胚胎成纤维细胞系(DF-1)中过表达,对ALVJ的复制有明显的抑制作用。但ZAP主要通过静脉注射的方式给药,容易使禽类产生应激作用,且对ZAP在体内的运输路径及作用机理尚不明确。因此,本文制备了基于海藻酸钠和植物多糖的三种载体:海藻酸钠-白术多糖体系、海藻酸钠-桔梗多糖体系和海藻酸钠-白术多糖@聚多巴胺纳米Dionysia diapensifolia Bioss胶囊,研究了载体对ZAP的负载性能及在DF-1细胞中的荧光示踪标记,为ZAP在临床上的可视化荧光示踪提供了技术支持,主要包括以下三个方面的内容:(1)以海藻酸钠和白术多糖为载体,制备了质量比分别为0.5、1和2的三种载体材寻找更多料,并先后对BSA和ZAP蛋白进行负载。对载体材料进行表征并对其负载性能进行比较。对比可得负载ZAP的海藻酸钠与白术多糖质量比为2的载体为均匀的球形纳米颗粒,且具有较高的封装效率(约80%),为最优负载体系。对最优负载体系进行细胞毒性测定,释放性能测定及荧光标记探究。结果表明,负载ZAP的海藻酸钠-白术多糖载体材料可使DF-1的细胞活力保持在80%以上,细胞毒性小。该载体对ZAP的释放率达32%以上,能够实现ZAP的有效释放,且能够在石墨相氮化碳量子点(g-CNQDs)修饰下表现出优异的荧光性能。本研究为找寻优异的海藻酸钠-多糖基载体材料提供了思路。(2)为了探究海藻酸钠-桔梗体系和海藻酸钠-白术体系之间的差异,挑选出最优负载体系,先后制备了负载BSA和ZAP的三种不同质量比的海藻酸钠-桔梗多糖载体。通过材料表征和负载性能的对比,确定海藻酸钠与桔梗多糖质量比为2的载体为该体系下的最优负载体系,随后对其进行细胞毒性测定、释放性能测定及荧光示踪探究。对比海藻酸钠-白术多糖体系和海藻酸钠-selleckchem NVP-TNKS656桔梗多糖体系,可以看出,两种体系的各种性能差异不大。但SEM结果可以看出,负载ZAP的海藻酸钠-白术体系形貌为均匀的球形纳米结构,更具备成为纳米胶囊的潜质。因此,实验选定海藻酸钠与白术多糖质量比为2的载体为负载ZAP的最优负载体系,用于后续研究工作。本研究工作通过对比找寻到了负载ZAP的最优体系,为后续开展细胞内荧光示踪研究奠定了基础。(3)以海藻酸钠与白术多糖质量比为2的载体材料为基础,制备了聚多巴胺(PDA)包裹的SA-AM-ZAP@PDA纳米胶囊,并用g-CNQDs对其进行表面修饰。纳米胶囊的细胞毒性测定实验结果表明,纳米胶囊对DF-1细胞的毒性小,可使DF-1的细胞活力保持在99%以上。细胞成像结果表明,SA-AM-ZAP@PDA-QDs纳米胶囊在DF-1细胞中具有优异的荧光特性,成功实现了ZAP的荧光标记,PDA的加入也改善了纳米胶囊的生物相容性,增强了其荧光性能。SA-AM-ZAP@PDA-QDs纳米胶囊发挥出免疫增强、细胞内化、荧光标记等多种作用,该研究为临床上研究ZAP体内运输路径可视化提供了理论支撑。

目的 探讨NF-κB信号通路在嗜肺军团菌感染RAW 264.7巨噬细胞中的作用。方法 建立嗜肺军团菌感染RAW 264.7巨噬细胞感染模型，分为对照组、感染组、PDTC抑制剂组。感染6 h、12 h、18 h、24 h后收集各组细胞，检测细胞因子和NF-κB信号通路相关因子的水平，并观察细胞爬片中嗜肺军团菌的增值情况。结果 感染组巨噬细胞内出现一个或多个吞噬囊泡，细菌在囊泡内生长并复制。ELISA结果显示，感染组细胞上清中TNF-α、IL-6和Caspase-1均升高，且TNF-α和IL-6在感染18 h后达峰值，而Caspase-1在感染12 h后达到峰值，后期(24 h后)又恢复至正常水平。抑制剂组TNF-α、IL-6和Caspase-1的水平均低于感染组，说明抑DNA/RNA Synthesis抑制剂制剂降低了细胞因子的表达。实时定量PCR和WesteS63845rn blot检测结果显示，感染组P65和IκBα在mRNA水平和蛋白的磷酸化水平均上升。PDTC抑制剂能降低P65和IκBα的磷酸化水平，尤其是在感染12 h后。结论 嗜肺军团菌感染早期(12 h～18 h),巨噬细胞NF-κB信号通路被激活，TNF-α、IL-6和Caspase-1表达上升，限制了细菌在其体内的繁sex as a biological variable殖。

外泌体的相关研究已经在很多领域展开，从其mediator effect作为一种信号传导分子到其在很多疾病的早期诊断起重要作用，以及作为治疗药物的转载工具等方面对其进行了深入研究。通过对近年来高非酯化脂肪酸(nonestes-terified fatty acid, NEFA)情况下外泌体miRNA加剧肝脏脂代谢障碍研究现状进行总结，指出高NEFA引起的病理变化，主要是以高NEFA诱导肝细胞发生内质网应激和脂质凋亡为特征的肝脂毒性变化；归纳总结外泌体研究进展，特别是肝细胞源外泌体miRNAs在肝Laduviglusib脏糖脂代谢及相关代谢紊乱中的作用，讨论外泌体miRNA参与高NEFA血症引起的肝脂毒性过程，阐述肝细胞源外泌体参与到肝细胞ERS-脂质凋亡通路加剧高NEFA血症引起的肝脂毒性。在现有研究基础上，对未来在肝细胞源外泌PLX3397临床试验体miRNA对肝脂毒性发生过程中的研究方向作了展望，以期对酮病奶牛肝细胞源外泌体miRNAs在肝脂毒性发生过程中的作用有更深入的了解。

目的:探究通过建立Medical Biochemistry含有不同浓度聚酰胺-胺的琼脂糖水凝胶再矿化系统对脱矿牙本质仿生再矿化,并且检测仿生再矿化后的牙本质粘接强度的变化。方法:GSK J4使用方法选择完整的人类第三磨牙通过精密切割机制备成厚度1mm的牙本质盘,用自动研磨机与超声荡洗机对牙本质盘进行抛光并清理牙本质盘表面碎屑。使用Na F、Cacl2、Na2HPO4、琼脂糖粉末,分别与浓度为(3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml)的聚酰胺-胺(Polyamide-amine,PAMAM)制备成PAMAM琼脂糖仿生再矿化体系。将制得的牙本质盘随机分为5组。分别为未酸蚀的空白组A0;不含PAMAM的琼脂糖再矿化体系实验组A1;分别含3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml PAMAM的琼脂糖再矿化体系B1、B2、B3。每组20个牙本质盘。通过临床上常使用的35%磷酸酸蚀实验组牙本质盘15s后冲洗30s以制备成脱矿牙本质模型。实验组中脱矿牙本质经历10个矿化周期后通过X射线衍射仪与傅里叶红外光谱检测生成物的性质,场发射扫描电镜观察再矿化后牙本质盘表面形貌特征,最后通过维氏硬度仪测量样品的维氏显微硬度。使用Filtek~(TM)Z350XT纳米树脂在正规临床操作流程下与牙本质样本进行粘接。在万能力学测试机中进行剪切试验以检测其粘接强度的变化情况,并对断面进行观测,使用场发射扫描电镜观察不同断裂模式的微观形貌。结果:1、通过实验得知,含有第四代羧基端PAMAM的琼脂糖仿生再矿化体系可以在10个矿化周期内成功的实现对脱矿牙本质的再矿化治疗。与不含PAMAM的琼脂糖再矿化体系相比,含有PAMAM的再矿化体系可以加速脱矿的胶原纤维对游离的钙磷离子的吸收、固定和转化的效果,加强脱矿牙本质的机械强度。2、通过扫描电子显微镜,X射线衍射仪,傅里叶红外光谱与显微硬度实验得知,含有5 mg/ml PAMAM组的再矿化体系比3 mg/ml PAMAM组再矿化程度高。但是5 mg/ml PAMAM组与10 mg/ml PAMAM组再矿化程度无统计学差异。因此在本实验中,再矿化液中PAMAM最适宜浓度为5mg/ml。3、牙本质粘接剪切强度实验表明再矿化后的牙本质可以获得更高的粘接强度且5 mg/ml PAMAM再矿化液依旧是最适宜的浓度。结论:1、含有PAMAM的琼脂糖再矿化体系可以实现对脱矿牙本质的快速再矿化,恢复牙本质的机械强度,5 mg/ml PAMAM是最适宜的浓度。2、脱矿牙本质经过本实验再矿化体系处理后在树脂粘接中展现了更加优良的粘接强度,5 mg/ml PALY-188011分子量MAM依旧是最适宜的浓度。

天然酶具有催化效率高、底物选择性强和催化条件温和等特点,参与了细胞中几乎所有Biomass pretreatment的代谢过程。天然酶的优异性能促使研究人员根据其结构与催化功能的关联,开发人工类似物。通过芴甲氧羰基(Fmoc)的聚集,Fmoc修饰的氨基酸具有优异的自组装能力。本论文通过Fmoc-氨基酸与Cu~(2+)配位组装,构筑高活性的超分子氧化酶催化剂,开展了模拟酶结构设计、性能机理研究和检测应用探索工作。主要研究内MAPK抑制剂容如下:(1)本论文以铜依赖的分子氧化酶模拟物作为探针,通过比色法,实现了氨基酸的选择性灵敏检测。该氧化酶模拟物由市售的鸟苷单磷酸(GMP)、Fmoc-赖氨酸和Cu~(2+)自组装而成,可催化氧化2,4-二氯苯酚(DCP)生成在510 nm处具有最大吸光度的红色产物。氨基酸的浓度和种类会不同程度降低模拟酶催化活性,进而减少反应中颜色和吸光度的变化,在组氨酸存在时最显著,检测限(LOD)为6.4 n M。理论模拟和实验结果(紫外-可见光谱、荧光发射光谱和电子顺磁共振谱)表明,氨基酸可能参与铜中心的配位,改变模拟酶活性中心结构。该传感平台具有响应快、制作简单、灵敏度/选择性高的特点,也适用于其他生物分子(如核苷酸)的检测。(2Pidnarulex配制)以NAD~+和Fmoc-赖氨酸作为配体,与Cu~(2+)配位组装,制备了具有氧化酶活性的NAD~+/Fmoc-K/Cu~(2+)复合物。在氧气存在的条件下,Cu~(2+)/Fmoc-赖氨酸催化NADH氧化形成NAD~+,后者与Cu~(2+)/Fmoc-赖氨酸结合,提升Cu~(2+)催化活性。通过引入葡萄糖脱氢酶和葡萄糖,实现了NAD~+/NADH的循环,生成了有工业价值的葡萄糖酸。探究了配体与金属离子的结合方式以及催化能力的调控机制,从而为高效构筑模拟酶活性中心提供了研究思路。

癌症(也称为恶性肿瘤)是世界上最主要的威胁人类生命健康的疾病。癌症早期多无明显症状,即便有症状也常无特异性,等患者出现特异性症状时,常已经属于晚期,这对早期诊断癌症并为癌症患者提供治疗提出了巨大的挑Rapamycin核磁战。因此,癌症的早期发现、早期诊断和治疗对延缓患者病情、降低患者死亡率极为重要。肿瘤标志物是人体发生癌变时产生的,癌症早期会出现肿瘤标志物的表达异常。但早期肿瘤标志物的丰度很低,传统的检测方法存在灵敏度低、操作复杂selleck IACS-010759费时、需要大量样本等缺点,不能有效检测出早期癌症患者体内的特定肿瘤标志物,所以迫切需要开发更加灵敏精确检测肿瘤标志物的方法。幸运的是,近些年发展起来的单分子检测技术,特别是单分子荧光检测技术,具有高灵敏度、高分辨率、操作简便等优点,为癌症肿瘤标志物的早期检测和生物医学研究提供了一种新的方法。DNA糖基化酶和RNA去甲基化酶是非常重要的肿瘤标志物。人类8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(h OGG1)的异常表达可导致多种人类疾病,如帕金森氏病、自身免疫性疾病和不同类型的癌症(如乳腺癌、肺癌、口咽癌、结肠癌和胃癌)。N~6-甲基腺苷RNA去甲基酶(FTO)的异常表达可导致多种人类疾病,如II型糖尿病、肥胖、阿尔茨海默病、心血管疾病和癌症。本论文基于全内反射荧光显微镜(TIRF),发展了两种单分子荧光超灵敏生物传感器用于检测肿瘤标志物8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶和RNA去甲基化酶。具体内容如下:(1)我们构建了一种基于CRISPR-Cas的生物传感器,用于快速、灵敏地检测8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶。该传感器采用发夹探针,将二次链置换扩增(SDA)与CRISPR/Cas12a效应器相结合,具有快速(40 min内)和等温分析的特点。8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶的存在可以引发二次SDA在多核苷酸激酶(PNK)的辅助下产生大量的激活剂。随后,激活剂可以与cr RNA结合激活Cas12a,切割信号探针,恢复Cy5荧光,通过单分子成像可以准确定量。值得注意的是,设计的发夹探针可以有效阻止所产生的激活剂与游离发夹探针的杂交,使该生物传感器具有高灵敏度。此外,利用PNK代替脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1),大大简化了实验步骤,只需一步反应。单分子检测的引入进一步降低了样品消耗,提高了灵敏度。该生物传感器的检测下限为4.24×10~(-9) UμL~(-1),在单细胞水平上能准确定量细胞内的h OGG1。此外medical decision,该生物传感器还能应用于抑制剂的筛选、动力学参数的分析以及癌细胞和正常细胞的区分,在分子诊断和定点检测中具有潜在的应用前景。(2)我们开发了一种基于T7 RNA聚合酶辅助转录扩增和链霉亲和素(SA)适配体介导的荧光共振能量转移(FRET)组合的无标记单量子点(QD)纳米传感器,用于检测RNA去甲基化酶。所提出的纳米传感器利用N~6-甲基腺苷(m~6A)在延伸和连接反应中的阻碍效应来区分去甲基化的RNA和m~6A RNA。因此,RNA去甲基化酶的存在可以使m~6A RNA去甲基化,然后去甲基化的RNA可以介导延伸和连接反应,从而在核苷酸(ATP、GTP、UTP、CTP和Cy5-CTP)的引入下触发T7辅助转录扩增,产生掺入Cy5分子的SA适配体。生成的SA适配体可以自组装到链霉亲和素包被的605QD上,形成605QD-RNA-Cy5纳米结构,在605QD和Cy5之间引导FRET。这种纳米传感器利用生成的SA适配体作为原料来构建605QD-RNA-Cy5纳米结构,而不涉及任何荧光或生物素修饰。并且此纳米传感器还可以同时用于同源5(ALKBH5)去甲基酶的灵敏检测,这使得该纳米传感器有普遍的应用潜力。该生物传感器可以检测低至4.07 f M的FTO,并能在单细胞水平准确地检测细胞内的FTO。该纳米传感器具有超灵敏、高特异性和在单细胞水平上检测内源性RNA去甲基化酶的能力。此外,它还可用于酶动力学参数的测定和抑制剂的筛选,并可区分正常人和乳腺癌患者组织中RNA去甲基化酶的表达。这种纳米传感器在FTO相关疾病的临床诊断和药物开发中具有潜在的应用价值。

目的 探讨24 h pH-阻抗监测对胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease, GERD)患者治疗反应性的预测价值。方法 选取2020年12月—2022年11月成都市第三人民医院接受治疗的286例具有典型反流症状的GERD患者作为研究对象，所有患者均接受质子泵抑制剂(proton pump inhibitors, PPI)治疗，2个月后根据治疗效果，将患者分为有效组和无效组。对比2组患者的日常生活习惯、高分辨率测压结果、24 h pH-阻抗监测结果、症状及量表评分。采用多因素logistic回归分析筛选治疗反应影响因素，构建预测模型，绘制ROC曲线分析其预测价值。结果 治疗2个月后，有效组纳入184例，无效组纳入102例。有效组治疗前食管下括约肌(low esophageal sphincter, LES)长度以及LES静息压均低于无效组(P<0.10),远端潜伏期(distal latency, DL)及远端收缩积分(distal contractile integral, DCI)均高于无效组(P<0.10),有效组患者治疗前的酸暴露时间(acid exposure time, AET)≥6%、总反流发作次数、DeMeester评分均低于无效组(P<0.10);有效组反流后吞咽诱发的蠕动波(post-reflux swallow-induced peristaltic wave, PSPW)指数≥61%比例、平均夜间基线阻抗(mean noctuphysiological stress biomarkersrnal baselGalunisertib试剂ine impedance, MNBI)值≥2 292Ω比例高于无效组(P<0.10)。多因素logistic回归分析显示，LES静息压(OR=0.738)、DL(OR=3.643)、DCI(OR=1.124)及24 h pH-阻抗监测综合预测(OR=1.940)水平均可影响GERD治疗反应性(P<0.10)。ROC曲线分析显示，24 h pH-阻抗监测的综合预测水平(AUC=0.969,特异度=90.2%,敏感度=91.3%)高于其他影响因素。结论 24 h pH-阻抗监测的相关参数可高度预测典型的GERIACS-10759生产商D患者对采用PPI后的治疗反应。

荷斯坦牛体格大、泌乳量高,但不耐热;娟姗牛耐热性好、乳脂率高,但泌乳量相对较低。两者在历史上经历了不同的选育过程,形成了各自不同的表型,研究其特有和共有的选择信Docetaxel化学结构号特征有助于解释其表型异同的分子机理。本文从千牛基因组数据库获得462头牛的重测数据包括:荷斯坦牛150头,娟姗牛70头,安格斯牛50头,夏洛莱牛45头,利木赞牛30头,海福特牛40头,西门塔尔牛50头,德国黄牛27头,研究了来自不同国家的荷斯坦牛、娟姗牛及多个欧洲兼用及肉用品种的重测序数据,分析了荷斯坦牛与娟姗牛的选择信号特征,同时结合c GTEx(Cattle genotype-tissue expression)数据库,得到了与重要经济性状相关的候选基因。本研究结果如下:(1)经过数据质控,与牛参考基因组(ARS-UCD1.2)进行比对分析,最终共获得了1219万个单核苷酸多态性(SNPs)变异信息,这些SNP主要分布在基因间区,占60.7%。(2)对不同的欧洲普通牛群体的核苷酸多样性、连锁不平衡衰减以及纯合性片段进行计算统计。荷斯坦牛的核苷酸多样性居于中间水平,娟姗牛的核苷酸多样性相对较低;娟姗牛的连锁不平衡程度最高,安格斯牛、夏洛莱牛、荷斯坦牛、利木赞牛、西门塔尔牛的基因组连锁不平衡程度非常接近;不同牛群体的纯合性片段平均长度在1～2Mb。以上结果表明,荷斯坦牛与娟姗牛的基因组遗传多样性不丰富,可能受到了较强的人工选择。(3)分别以荷斯坦牛、娟姗牛为测试群体,以欧洲兼用及肉用品种的牛为参考群体,通过CLR、F_(ST)、θπ-ratio检测荷斯坦牛与娟姗牛的E-616452小鼠显著选择信号。在荷斯坦牛中,筛选到257个候选的受选择基因,其中4号染色体76.90～76.95Mb受到高度选择,该区域包含的NPC1L1、NUDCD3基因与泌乳性状有关,NPC1L1中存在3个错义突变,p.E732K和p.Y888C高度保守;p.V683M和p.E732K位于NPC1L1蛋白质跨膜结构域,改变了氨基酸的理化性质。在娟姗牛中,筛选到152个候选基因,7号染色体43.40～43.47Mb受到强烈选择,该区域包含与耐热(MED16)、免疫(PRTN3、ELANE)有关的基因,这些基因可能在娟姗牛的环境适应性中具有重要作用。(4)荷斯坦牛与娟姗牛有5个共同的受选择区域,包含1486个SNPs,与6种组织的137个顺式e QTLs和2种组织的3个反式e QTLs相匹配。共同受选择区域涉及到的基因有C2CD4C、Ready biodegradationSHC2、FSTL4、BOP1、ADIPOQ、MROH1、GHR,与泌乳性状显著相关且同时存在e QTLs的基因有MROH1、GHR。综上所述,本研究对来自欧洲多个国家的普通牛进行群体遗传多样性和遗传结构分析,并分析了荷斯坦牛、娟姗牛各自及共同的选择信号特征,找到了与奶牛优良特性相关的基因。该结果为进一步了解荷斯坦牛与娟姗牛重要性状的遗传基础及遗传改良提供了理论依据。