PI3K抑制剂

目的:从药食同源植物粉葛中发掘具有抗氧化、抗癌、抑菌活性的内生菌资源并分离鉴定其活性次生代谢产物。方法:采用组织匀浆法分离粉葛内生菌,稀释涂布法和划线培养法进行纯化,利用形态学并结合ITS和16S r DNA序列比对鉴定内生菌种属和构建系统发育树;小规模液体并采用不同溶剂甲醇、乙酸乙酯和石油醚萃取获得内生菌不同极性提取物,测定其对12株供试菌的抑菌活性、人肺癌细胞A549的细胞毒活性、1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基的清除能力。筛选出活性显著的菌株大规模液体发酵,利用硅胶柱色谱、凝胶色谱、半制备液相等方法分离次生代谢产物,核磁共振波谱、高分辨质谱等技术鉴定单体化合物的结构,并进一步通过活性追踪,筛选具有抗癌、抑菌活性的单体化合物。结果:首次从粉葛块根中分离出20株内生菌,其中有11株内生真菌:青霉属Penicillium Sp.FGZ4、汉斯德巴氏酵母菌Debaryomyces hansenii FGZ5、巨腔茎点霉菌Phoma macrostoma FGZ6、裂褶菌属Schizophyllum sp.FGZ9、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum FGZ12、Porostereum crissum FGZ15、生赤壳属Bionectria Sp.FGZ20、Apiospora marii FGZ21、粉红粘帚霉Clonostachys rosea FGZ35、草茎点霉Phoma herbarum FGZ36、栓菌属Trametes sp.FG4Z1;7株革兰氏阴性细菌,分别是:假单胞菌属3个种Pseudomonas Sp.FGX4、Pseudomonas Sp.FGX8、Pseudomonas Sp.FGX20,维氏假单胞菌Pseudomonas veronii FGX35,阿氏肠杆菌Enterobacter asburiae FGX1,拉恩氏菌属Rahnella aceris FGX2,Lelliottia Sp.FGX18;2株革兰氏阳性菌,分别是葡萄球菌属Staphylococcus Sp.FGX48和类芽胞杆菌属Paenibacillus Sp.FGX50。活性初筛结果显示,内生菌的乙酸乙酯萃取物活性整体较好,其中内生真菌A.marii FGZ21的抑菌效果与细胞毒活性最为显著,对多耐药粪链球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球有较强的抑制效果,抑菌圈分别为23.76±0.04mm、19.61±0.16mm,MIC值分别为1.563mg/m L、0.098mg/m L,MBC值分别为1.563mg/m L、0.195mg/m L,同时对人肺癌A549细胞有明显的抑制作用,IC_(50)值为36.03μg/m L;粉葛内生真菌Penicillium Sp.FGZ4的DPPH自由基的清除效果最佳,IC_(50)值为0.085 mg/m L;进一步从A.marii FGZ21的乙酸乙酯萃取物中分离鉴定了8个单体次生代谢产物:对羟基苯甲酸(1)、2-(乙酰胺基)-苯甲酸(2)、苯甲酸(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、3,4-二甲氧基苯甲酸(5)、Schizostatin(6)、焦谷氨酸乙酯(7)、2-氨plot-level aboveground biomass基苯甲酸(8)。活性测定中,8个单体化合物对多耐药粪链球菌和MRSA均有抑制效果,抑菌圈直径为9.21±0.01 mm～24.73±0.55 mm,且邻苯二甲酸二丁酯(4)对粪链球菌有高度敏感抑制效果,抑菌selleck产品圈高达24.73±0.55 mm;对羟基苯甲酸(1)、2-(乙酰胺基)-苯甲酸(2)、邻苯二甲酸二丁酯(4)对A549肺癌细胞生长有显著的抑制作用,其中邻苯二甲酸二丁酯(4)的细胞毒活性最好,IC_(50)值为50.94μg/m L。结论:首次对粉葛块根的内生菌进行系统的分离鉴定,得到了20株内生菌资源,极大的丰富了葛属植物的内生菌资源库。20株内生菌的次生代谢产物均有较为显著的抗氧化、抗癌、抑菌活性,并从中分离鉴定了8个具有抗癌、抑菌活性的单体化合物。此外,粉葛作为药食同源植物其内生菌具有安全、低毒、易于Alisertib研究购买放大生产等优势。这为粉葛内生菌资源在抗氧化、抗癌的功能性食品和天然食品防腐剂研发以及工业化生产提供了科学参考。

核黄素是人类和动物必需的营养元素,在食品添加剂和制药工业中有着广泛的应用。鸟苷5′-三磷酸(GTP)是核黄素生物合成的关键前体。增加GTP的供应可以改善核黄素前体的供应,从而增加核黄素的产量。为了阐明GTP合成途径中基因对核黄素合成的影响,增加核黄素的产量,我们过表达了GTP合成途径中的10个基因,并研究了不同基因组合对GTP合成的影响,并用GTP产量最高的3种组合验证了其对核黄素合成的影响。通过调节大肠杆菌中鸟苷核苷酸的生物合成途径,促进了核黄素的产生。不同的基因剂量可以平衡鸟苷的新生和恢复途径。guaA和guaB基因的过表达使细胞内GTP浓点击此处度达到5.1μmol/g DCW,是野生型的1.8倍。摇瓶培养的核黄素滴度最高,达到78.6 mg/L,比只过表达ribA和ribB基因的菌株高68.6%。这neurology (drugs and medicines)表明调节GTP合成途径之间的代谢平衡对增加下游合成途径的通量是有效的。这里提出的策略也可以应用于Dinaciclib分子量使用GTP作为前体或需要GTP作为辅助因子的其他产品。

[摘要]该研究将探讨瑞香狼毒提取物（SCL）抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231，及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象，通过噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力；DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细胞凋亡，Westernblot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬酶9（caspase-9）、半胱天冬酶3（caspase-3）的表达水平，免疫荧光染色观察Nrf2细胞内分布，流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平。实验结果显示SCL的耐药因子是0.69，对应地，阿霉素和紫杉醇的耐药因子分别是8.40、16.36；DAPI染色结果显示SCL能够导致乳腺癌细胞核皱缩、碎裂；Annexin-V/Pi凋亡双染显示，在中、高剂量SCL的作用下，耐药细胞的平均凋亡率分别为32.64%、50.29%（P<0.05）；WB检测结果提示：SCL能够明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase-9和caspase-3表达水平，明显升高促凋亡蛋白Bax表达水平（P<0.05），进一步研究发现，SCL能够显著促进Keap1的表达，而明显抑制Nrf2和HO-1的表达（P<0https://www.selleck.cn/products/BafilomycinA1.html.05），同时能够明显减少Nrf2的入核表达水平（P<0.05）；相应地，流式检测细胞内ROSbiomass pellets水平明显升高（P<0.0）。综上所述，瑞香狼毒能够显Bemcentinib供应商著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231多药耐药细胞的增殖，引起细胞凋亡，其机制与抑制Keap1/Nrf2信号通路，导致耐药细胞内ROS累积，并增加凋亡相关蛋白的表达有关。

致病菌的感染和恶性肿瘤一直是威胁着人类健康的重大疾病,近年来许多新兴的治疗方法在抗肿瘤/抗菌领域展现出巨大的潜力。光动力治疗因其Tamoxifen研究购买无耐药性、副作用小、具有时空选择性的优点日渐成为一种非常有前景的新型疗法,但单一的治疗方式难以获得理想的治疗效果,将光动力治疗与其他疗法联合应用以实现协同的治疗效果已成为目前研究的新方向。本研究构建了两种不同的基于酞菁锌的纳米颗粒,分别用于抗菌和抗肿瘤的联合治疗。首先,本研究将光敏剂酞菁锌与多粘菌素B组装成纳米颗粒Zn Pc(COOH)_8:PMB用于光动力治疗和抗生素的联合治疗,该纳米颗粒能够与革兰氏阴性菌特异性结合而实现药物的释放,与游离的Zn Pc(COOH)_8和PMB相比,Zn Pc(COOH)_8:PMB对革兰氏阴性菌有着更强的光动力活性和抗菌活性,并通过破坏细菌外膜促进药物的摄取,加快细菌的死亡,发挥出协同的抗菌作用。体内抗菌活性评价表明Zn Pc(COOH)_8:PMB对大肠杆菌具有更强的抗菌能力,具有明显地加速感染伤口愈合的作用。值得一提的是,Zn Pc(COOH)_8的荧光性能还使得Zn Pc(COOH)_8:PMB对革兰氏阴性菌有着显著的检测效果。而且因其对革兰氏阴性菌的特异性,Zn Pc(COOH)_8:PMB纳米颗粒在发挥协同的抗菌作用的同时,还降低了多粘菌素B的毒副作用,表现出更好的生物相容性。本研究的纳米颗粒的构建原理和联合抗菌策略可应用于其他光敏剂和抗生素的细菌检测和伤口感染的治疗。其次,本研究将光敏剂酞菁锌和Fe~(3+)制备成了一种新的纳米颗粒Zn Pc(COOH)_4-Fe,并负载了化疗药物阿霉素,用于光动力治疗以及化疗法的联合应用。Zn Pc(COOH)_4-Fe:DOX不仅实现了对DOX的负载,immature immune system还有着良好的稳定性。Zn Pc(COOH)_4-Fe和Zn Pc(COOH)_4-Fe:DOX都具有良好的荧光性能和ROS生成能力,能发挥出优异的光动力活性。Zn Pc(COOH)_4-Fe:DOX具有更强的细胞毒性,发挥出协同的抗肿瘤活AZD6738价格性。Zn Pc(COOH)_4-Fe纳米颗粒也可以用于其他抗肿瘤药物的装载,对抗肿瘤的联合治疗提供了新的途径。

目的:探究烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)的外源性补充对急性大强度运动大鼠心肌氧化应激损伤是否产生保护作用,为NMN预防运动性心肌损伤的研究提供参考依据。方法:以56只7周龄雄性SD大鼠为实验对象,将其随机分为5组:安静对照组(C,n=8)、运动对照组(CE,n=12)、低剂量NMN预处理运动组(LNE,n=12)、中剂量NMN预处理运动组(MNE,n=12)、高剂量NMN预处理运动组(HNE,n=12)。适应性喂养后,NMN补充组按大鼠体重灌以低(100 mg/kg)、中(300mg/kg)、高(500 mg/kg)三种不同浓度的NMN溶液,C组和CE组每日灌以等体积的生理盐水,每日1次,共进行4周。最后一次灌胃1 h后,所有运动组(CE、LNE、MNE、HNE组)大鼠均在倾角为10%的跑台上进行为时1 h,速度27 m/min的急性大强度运动。运动1 h后,每组随机选取4只大鼠继续运动至力竭,记录力竭时间;其余大鼠均即刻停止运动。急性大强度运动结束后2h对大鼠进行取材。光学显微镜观察大鼠心肌组织HE染色切片,透射电镜观察大鼠心肌组织电镜切片,ELISA测定大鼠血清中心肌损伤标志物c TDS-3201研究购买n I、CK-MB、NT-pro BNP水平及炎症因子IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达水平,反映大鼠心肌损伤程度;DHE染色检测心肌组织ROS水平,试剂盒检测脂质过氧化产物MDA含量及抗氧化物SOD、GPx、CAT的活性等,反映大鼠心肌氧化应激损伤程度;试剂盒检测心肌组织NAD~+、NADH水平及NAD~+/NADH比率,反映NMN进入心脏并增强细胞NAD~+水平的能力;Western blot检测大鼠心肌Sirt1、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平,反映NMN补充对该氧化应激反应相关信号通路的影响;采用Graphpad Prism 8.0.1软件进行数据统计分析与绘图。结果:(1)NMN对大鼠体重的影响。不同浓度的NMN外源性补充均对健康大鼠体重无显著影响。(2)NMN对大鼠力竭时间的影响。与CE组相比,MNE组、HNE组大鼠力竭运动时间的均值分别延长9.39%、16.97%、17.27%,其中,MNE和HNE组大鼠的力竭运动时间显著延长(P<0.05),LNE组大鼠的力竭时间有增加趋势,但无显著差异(P>0.05)。结果表明,NMN能够延长大鼠力竭时间,提高大鼠运动能力,中、高剂量效果较好。(3)NMN对急性大强度运动大鼠心肌损伤的影响。(1)与C组相比,CE组心肌损伤标志物c Tn I、CK-MB及NT-pro BNP的含量均显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组c Tn I、CK-MB和NT-pro BNP水平均显著降低(P<0.05)。(2)与C组相比,CE组心肌纤维排列紊乱,细胞肿胀、轮廓模糊,炎性细胞浸Brain Delivery and Biodistribution润;与CE组相比,LNE、MNE及HNE组形态结构变化较小,MNE组和HNE组效果尤为明显。(3)与C组相比,CE组促炎因子IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),抗炎因子IL-4、IL-10水平显著降低(P<0.05);与CE组相比,MNE组和HNE组TNF-α水平显著下降(P<0.05),且HNE组IL-10水平显著升高(P<0.05)。(4)与C组相比,CE组大鼠心肌Bax和Caspase-3的蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌Caspase-3水平显著降低(P<0.05),且MNE和HNE组大鼠心肌Bax水平显著降低(P<0.05)。结果表明,NMN补充能够对急性大强度运动诱导的心肌损伤产生保护作用,中、高剂量效果较好。(AY-22989细胞培养4)NMN对急性大强度运动大鼠心肌氧化应激水平的影响。与C组相比,CE组大鼠心肌组织中ROS水平显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组其均值分别降低19.49%、32.63%、35.66%,均为显著性降低(P<0.05)。与C组相比,CE组大鼠心肌MDA水平显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组其均值分别降低18.88%、30.45%、33.47%,均为显著性降低(P<0.05)。与C组相比,CE组大鼠心肌组织中抗氧化酶SOD、CAT及GPx活力无显著变化(P>0.05);但与CE组相比,LNE组、MNE和HNE组大鼠心肌抗氧化酶活力均有升高趋势,SOD活力均值分别升高12.27%、20.41%和23.55%,CAT活力均值分别升高12.83%、20.58%和21.9%,GPx活力均值分别升高12.27%、18.41%和18.23%,其中,LNE组三种抗氧化酶活力与CE组之间不存在显著性差异(P>0.05),MNE和HNE两组较CE组大鼠心肌抗氧化酶活力显著升高(P<0.05)。结果表明,NMN一方面能减轻急性大强度运动大鼠心肌氧化应激损伤,另一方面能提高其心肌抗氧化能力,因而对急性大强度运动诱导的心肌氧化应激损伤起到保护作用,其中,中、高剂量效果较好。(5)NMN对急性大强度运动大鼠NAD~+、NADH水平及NAD~+/NADH比率的影响。与C组相比,CE组大鼠心肌NAD~+水平显著降低(P<0.05);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌NAD~+水平均值分别提高16.83%、25.66%、30.67%,其中,MNE和HNE组大鼠心肌NAD~+水平显著升高(P<0.05)。与NAD~+水平相反,与C组相比,CE组大鼠心肌NADH水平显著升高(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌NADH水平均值分别降低13.65%、20.08%、20.07%,其中,MNE组和HNE组显著降低(P<0.05)。与C组相比,CE组大鼠心肌NAD~+/NADH水平显著降低(P<0.01);与CE组相比,LNE、MNE和HNE组大鼠心肌NAD~+/NADH比值的均值分别提高36.01%、59.92%和65.00%,其中MNE组和HNE组显著升高(P<0.01)。结果表明,NMN补充能增加急性大强度运动大鼠心肌NAD~+水平,减少大强度运动导致的NADH堆积,提高NAD~+/NADH比值,从而保证氧化还原反应的正常进行和下游信号通路的激活,中、高剂量效果较好。(6)NMN对急性大强度运动大鼠氧化应激通路Sirt1/Nrf2/HO-1的影响。免疫组织化学法可得,与C组相比,CE组大鼠心肌Sirt1水平显著下降(P<0.05);与CE组相比,MNE和HNE组其表达量显著升高(P<0.01);与LNE组相比,HNE组其表达量显著升高(P<0.05)。Western blot实验可得,与C组相比,CE组大鼠心肌Sirt1蛋白表达显著降低(P<0.05);与CE组相比,MNE和HNE组大鼠心肌Sirt1蛋白表达量显著升高(P<0.01);与LNE组相比,HNE组大鼠心肌Sirt1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与CE组相比,MNE组和HNE组大鼠的心肌细胞核Nrf2水平、心肌细胞HO-1水平均显著升高(P<0.05)。结果表明,NMN补充能激活急性大强度运动大鼠Sirt1/Nrf2/HO-1信号通路,其中,中、高剂量,尤其是高剂量效果较好。研究结论:4周NMN外源性补充能够降低急性大强度运动大鼠的ROS和MDA水平,并提高大鼠抗氧化酶SOD、CAT及GPx活性,减轻心肌氧化应激反应,从而对细胞肿胀、炎症、凋亡等相关心肌损伤产生保护作用,提高大鼠运动能力。其机制可能与NAD~+水平的提高及Sirt1/Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。中、高剂量的NMN补充效果较好。

为了探究鲜活鳜鱼宰后4 ℃冷藏24 h过程中肌肉代谢物的变化情况，借助超高效液相色谱-高分辨质谱技术，结合非靶向代谢组学方法进行不同组别（4 ℃，0、2、4、6、9、12、24 h）差异代谢物多元统计分析、代谢通路分析及相关风味计算。结果表明：鳜鱼冷藏24 h的过程中共有33种代谢物被鉴定为差异代谢物，包括3种有机酸Conus medullaris及衍生物（氨基酸、有机酸），8种有机杂环化合物（嘌呤和嘌呤衍生物、内酯等），7种核苷、核苷酸和类似物（嘌呤核苷及核苷酸、嘧啶核苷酸），9种有机氧化合物（碳水化合物及其结合物、少量醇类），4种脂质和类脂分子（脂肪醇、脂肪酸酯等），1种黄酮苷，1种生物碱及其衍生物；根据差异代谢物MetPA分析，得到9种关键差异代谢物分别为：琥珀酸、天冬氨酸、5′-AMP（AMP）、次黄嘌呤核苷、一磷酸腺苷琥珀酸、黄嘌呤、GMP、核糖-5-磷酸、次黄嘌呤；关键差异代谢产物参与的代谢通路主要为嘌呤代谢，其次是天冬氨酸、谷氨酸代谢和TCA循环；提出相对滋味强度值（telative taste actiRegorafenib细胞培养vity value，RTAV）和相对味精当量（relative equivalent umami concentration，REUC）的计算方法，根据计算结果：鲜鳜鱼的滋味主要由天冬氨酸等鲜味氨基酸与AMP和GMP协同产生，冷藏2～6 h，滋味的主要贡献物质是AMP和GMP，而9～24 h则主要是GMP的呈味作用，单从冷藏24 h的角度来看，鲜鳜鱼的滋味最好，冷藏后由于天冬氨酸含量下降导致鲜味损失，冷藏9～24 hCH-223191半抑制浓度主要因为GMP的累积使鳜鱼鲜味再次增加。

禽白血病J亚群病毒(ALV-J)在临床上会严重损害机体的免疫系统,可引起多种肿瘤疾病及持续性病毒血症,严重影响鸡的产蛋率、肉料比等多种生产性能,给世界家禽养殖业造成不可估量的损失。因此,禽白血病J亚群病毒的防治工作迫在眉睫。研究表明,锌指抗病毒蛋白(ZAP)通过在鸡胚胎成纤维细胞系(DF-1)中过表达,对ALVJ的复制有明显的抑制作用。但ZAP主要通过静脉注射的方式给药,容易使禽类产生应激作用,且对ZAP在体内的运输路径及作用机理尚不明确。因此,本文制备了基于海藻酸钠和植物多糖的三种载体:海藻酸钠-白术多糖体系、海藻酸钠-桔梗多糖体系和海藻酸钠-白术多糖@聚多巴胺纳米Dionysia diapensifolia Bioss胶囊,研究了载体对ZAP的负载性能及在DF-1细胞中的荧光示踪标记,为ZAP在临床上的可视化荧光示踪提供了技术支持,主要包括以下三个方面的内容:(1)以海藻酸钠和白术多糖为载体,制备了质量比分别为0.5、1和2的三种载体材寻找更多料,并先后对BSA和ZAP蛋白进行负载。对载体材料进行表征并对其负载性能进行比较。对比可得负载ZAP的海藻酸钠与白术多糖质量比为2的载体为均匀的球形纳米颗粒,且具有较高的封装效率(约80%),为最优负载体系。对最优负载体系进行细胞毒性测定,释放性能测定及荧光标记探究。结果表明,负载ZAP的海藻酸钠-白术多糖载体材料可使DF-1的细胞活力保持在80%以上,细胞毒性小。该载体对ZAP的释放率达32%以上,能够实现ZAP的有效释放,且能够在石墨相氮化碳量子点(g-CNQDs)修饰下表现出优异的荧光性能。本研究为找寻优异的海藻酸钠-多糖基载体材料提供了思路。(2)为了探究海藻酸钠-桔梗体系和海藻酸钠-白术体系之间的差异,挑选出最优负载体系,先后制备了负载BSA和ZAP的三种不同质量比的海藻酸钠-桔梗多糖载体。通过材料表征和负载性能的对比,确定海藻酸钠与桔梗多糖质量比为2的载体为该体系下的最优负载体系,随后对其进行细胞毒性测定、释放性能测定及荧光示踪探究。对比海藻酸钠-白术多糖体系和海藻酸钠-selleckchem NVP-TNKS656桔梗多糖体系,可以看出,两种体系的各种性能差异不大。但SEM结果可以看出,负载ZAP的海藻酸钠-白术体系形貌为均匀的球形纳米结构,更具备成为纳米胶囊的潜质。因此,实验选定海藻酸钠与白术多糖质量比为2的载体为负载ZAP的最优负载体系,用于后续研究工作。本研究工作通过对比找寻到了负载ZAP的最优体系,为后续开展细胞内荧光示踪研究奠定了基础。(3)以海藻酸钠与白术多糖质量比为2的载体材料为基础,制备了聚多巴胺(PDA)包裹的SA-AM-ZAP@PDA纳米胶囊,并用g-CNQDs对其进行表面修饰。纳米胶囊的细胞毒性测定实验结果表明,纳米胶囊对DF-1细胞的毒性小,可使DF-1的细胞活力保持在99%以上。细胞成像结果表明,SA-AM-ZAP@PDA-QDs纳米胶囊在DF-1细胞中具有优异的荧光特性,成功实现了ZAP的荧光标记,PDA的加入也改善了纳米胶囊的生物相容性,增强了其荧光性能。SA-AM-ZAP@PDA-QDs纳米胶囊发挥出免疫增强、细胞内化、荧光标记等多种作用,该研究为临床上研究ZAP体内运输路径可视化提供了理论支撑。

目的 探讨NF-κB信号通路在嗜肺军团菌感染RAW 264.7巨噬细胞中的作用。方法 建立嗜肺军团菌感染RAW 264.7巨噬细胞感染模型，分为对照组、感染组、PDTC抑制剂组。感染6 h、12 h、18 h、24 h后收集各组细胞，检测细胞因子和NF-κB信号通路相关因子的水平，并观察细胞爬片中嗜肺军团菌的增值情况。结果 感染组巨噬细胞内出现一个或多个吞噬囊泡，细菌在囊泡内生长并复制。ELISA结果显示，感染组细胞上清中TNF-α、IL-6和Caspase-1均升高，且TNF-α和IL-6在感染18 h后达峰值，而Caspase-1在感染12 h后达到峰值，后期(24 h后)又恢复至正常水平。抑制剂组TNF-α、IL-6和Caspase-1的水平均低于感染组，说明抑DNA/RNA Synthesis抑制剂制剂降低了细胞因子的表达。实时定量PCR和WesteS63845rn blot检测结果显示，感染组P65和IκBα在mRNA水平和蛋白的磷酸化水平均上升。PDTC抑制剂能降低P65和IκBα的磷酸化水平，尤其是在感染12 h后。结论 嗜肺军团菌感染早期(12 h～18 h),巨噬细胞NF-κB信号通路被激活，TNF-α、IL-6和Caspase-1表达上升，限制了细菌在其体内的繁sex as a biological variable殖。

外泌体的相关研究已经在很多领域展开，从其mediator effect作为一种信号传导分子到其在很多疾病的早期诊断起重要作用，以及作为治疗药物的转载工具等方面对其进行了深入研究。通过对近年来高非酯化脂肪酸(nonestes-terified fatty acid, NEFA)情况下外泌体miRNA加剧肝脏脂代谢障碍研究现状进行总结，指出高NEFA引起的病理变化，主要是以高NEFA诱导肝细胞发生内质网应激和脂质凋亡为特征的肝脂毒性变化；归纳总结外泌体研究进展，特别是肝细胞源外泌体miRNAs在肝Laduviglusib脏糖脂代谢及相关代谢紊乱中的作用，讨论外泌体miRNA参与高NEFA血症引起的肝脂毒性过程，阐述肝细胞源外泌体参与到肝细胞ERS-脂质凋亡通路加剧高NEFA血症引起的肝脂毒性。在现有研究基础上，对未来在肝细胞源外泌PLX3397临床试验体miRNA对肝脂毒性发生过程中的研究方向作了展望，以期对酮病奶牛肝细胞源外泌体miRNAs在肝脂毒性发生过程中的作用有更深入的了解。

目的:探究通过建立Medical Biochemistry含有不同浓度聚酰胺-胺的琼脂糖水凝胶再矿化系统对脱矿牙本质仿生再矿化,并且检测仿生再矿化后的牙本质粘接强度的变化。方法:GSK J4使用方法选择完整的人类第三磨牙通过精密切割机制备成厚度1mm的牙本质盘,用自动研磨机与超声荡洗机对牙本质盘进行抛光并清理牙本质盘表面碎屑。使用Na F、Cacl2、Na2HPO4、琼脂糖粉末,分别与浓度为(3mg/ml、5mg/ml、10mg/ml)的聚酰胺-胺(Polyamide-amine,PAMAM)制备成PAMAM琼脂糖仿生再矿化体系。将制得的牙本质盘随机分为5组。分别为未酸蚀的空白组A0;不含PAMAM的琼脂糖再矿化体系实验组A1;分别含3mg/ml、5mg/ml和10mg/ml PAMAM的琼脂糖再矿化体系B1、B2、B3。每组20个牙本质盘。通过临床上常使用的35%磷酸酸蚀实验组牙本质盘15s后冲洗30s以制备成脱矿牙本质模型。实验组中脱矿牙本质经历10个矿化周期后通过X射线衍射仪与傅里叶红外光谱检测生成物的性质,场发射扫描电镜观察再矿化后牙本质盘表面形貌特征,最后通过维氏硬度仪测量样品的维氏显微硬度。使用Filtek~(TM)Z350XT纳米树脂在正规临床操作流程下与牙本质样本进行粘接。在万能力学测试机中进行剪切试验以检测其粘接强度的变化情况,并对断面进行观测,使用场发射扫描电镜观察不同断裂模式的微观形貌。结果:1、通过实验得知,含有第四代羧基端PAMAM的琼脂糖仿生再矿化体系可以在10个矿化周期内成功的实现对脱矿牙本质的再矿化治疗。与不含PAMAM的琼脂糖再矿化体系相比,含有PAMAM的再矿化体系可以加速脱矿的胶原纤维对游离的钙磷离子的吸收、固定和转化的效果,加强脱矿牙本质的机械强度。2、通过扫描电子显微镜,X射线衍射仪,傅里叶红外光谱与显微硬度实验得知,含有5 mg/ml PAMAM组的再矿化体系比3 mg/ml PAMAM组再矿化程度高。但是5 mg/ml PAMAM组与10 mg/ml PAMAM组再矿化程度无统计学差异。因此在本实验中,再矿化液中PAMAM最适宜浓度为5mg/ml。3、牙本质粘接剪切强度实验表明再矿化后的牙本质可以获得更高的粘接强度且5 mg/ml PAMAM再矿化液依旧是最适宜的浓度。结论:1、含有PAMAM的琼脂糖再矿化体系可以实现对脱矿牙本质的快速再矿化,恢复牙本质的机械强度,5 mg/ml PAMAM是最适宜的浓度。2、脱矿牙本质经过本实验再矿化体系处理后在树脂粘接中展现了更加优良的粘接强度,5 mg/ml PALY-188011分子量MAM依旧是最适宜的浓度。