PI3K抑制剂

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种高异质性、高发病率和高死亡率的恶性肿瘤,基于HCC相关的分子特征建立分子分型方法,对改善患者预后具有重要意义。细胞焦亡和铁死亡作为两种新近发现的调节性细胞死亡方式,与HCC的发生、发展和治疗都密切相关,具有用于HCC分子分型的潜力。本文通过对大型肿瘤基因组数据库进行生物信息学分析,探究细胞焦亡和铁死亡用于HCC分子分型的潜力。具体如下:1、基于细胞焦亡的肝细胞癌分子分型生物信息学研究(1)基于与HCC相关的细胞焦亡基因的表达,我们将HCC患者分成了两个具有显著异质性的细胞焦亡分子亚型,Py High和Py Low,Py High亚型具有更高的细胞焦亡表达。(2)单因素和多因素Cox分析表明我们所建立的细胞焦亡分子分型方法是HCC的潜在独立预后指标,Py High亚型可能预示着患者的更差预后(单因素Cox:HR=1.668,P=0.011;多因素Cox:HR=1.633,P=0.02Taxus media0)。分层生存分析结果显示,该细胞焦亡分子分型方法还可用于TNM(III+IV)期和MYC非扩增型亚群患者的预后预测(Log-rank检验,P<0.01)。(3)基于癌症药物敏感性基因组学数据库的数据,我们为Py Low亚型和Py High亚型分别预测到了5个和31个不同的敏感化合物,其中分别有2个和13个已被文献报道有抗HCC活性,其中又有三个上市药物已有HCC相关临床实验,包括吉非替尼、吉西他滨和福瑞替尼(前者对Py Low亚型敏感,后两个对Py High亚型敏感),表明该分子分型方法有望助力HCC的敏感化合物合理选择。(4)机制分析表明细胞焦亡亚型在HCC中的预后和化合物敏感性异质性可能与肿瘤免疫,特别是细胞因子相关。Py High亚型具有更丰富的淋巴细胞浸润和更高水平的细胞因子相关基因表达。2、基于铁死亡的肝细胞癌分子分型生物信息学研究(1)基于结合前馈神经网络和Cox比例风险模型的深度神经网络模型所提取的与HCC预后相关的铁死亡特征,我们将HCC患者分成了两个具有显著异质性的铁死亡分子亚型,Fe High和Fe Low。Fe High亚型患者具有更高的铁代谢、ROS代谢和脂质代谢相关通路活性。(2)单因素和多因素Cox分析表明我们所建立的铁死亡分子分型方法是HCC具有潜力的独立预后指标,Fe Low亚型患者的预后可能更差(单因素Cox:HR=3.784,P<0.001;多因素Cox:HR=3.816,P<0.001)。分层生存分析结果显示,该铁死亡分子分型方法的预后预测能力具有广泛的人群适用范围。在TNM(I+II)期、TNM(III+IV)期、TP53野生型、TP53突变型、MYC非扩增型和MYC扩增型特定亚群患者中,它依旧能较好地区分高低风险人群(Log-rank检验,除MYC扩增型P=0.007外,其它均P<0.001)。(3)化合物敏感性分析显示两个铁死亡亚型的化合物敏感谱也具有异质性,Fe High亚型和Fe Low亚型分别被预测到了13个和Naporafenib使用方法7个不同的敏感化合物,其中分别有4个和3个已被文献报道具有抗HCC活性,其中吉非替尼(对Fe High亚型敏感)已有HCC相关临床实selleck抑制剂验,这提示该分子分型方法对HCC的化合物敏感性也具有一定预测价值。有趣的是,我们还发现Fe High亚型与Py Low亚型的化合物敏感谱相似,Fe Low亚型与Py High亚型的化合物敏感谱相似,表明铁死亡分子分型和细胞焦亡分子分型可潜在联合用于HCC的化合物敏感性预测。(4)机制分析表明铁死亡分子分型影响HCC的预后和化合物敏感性异质性可能与细胞色素P450代谢、细胞外基质-受体相互作用等通路相关。综上所述,本文基于细胞焦亡和铁死亡相关功能基因,初步建立了两种具有潜在临床应用价值的新型HCC分子分型方法。首先,它们均可用于HCC的预后预测,其中铁死亡分子分型方法具有广泛的人群适用范围,有望助力临床工作者对患者进行风险分层管理。其次,这两种方法可联合用于HCC的敏感化合物预测,进而可能筛选到更可靠的敏感化合物,为制定个性化用药方案提供潜在参考。

目的：观察雷珠单抗联合全视网膜激光光凝术（PRP）治疗重度非增生型糖尿病视网膜病变（NPDR）患者的效果。方法：选取2020年1月至2021年12月该院收治的86例（86眼）重度NPDR患者进行前瞻性研Liproxstatin-1说明书究，按随机数字表法将其分为对照组和观察组各43例。对照组采用PRP治疗，观察组采用玻璃体腔注射雷珠单抗联合PRP治疗。比较两组PRP术中激光功率、能量密度、光斑数、治疗前后视功能[最佳矫正视力（BCVA）、黄斑中心凹厚度（CMT）]、眼底新生血管指标[血管内皮生长因子（VEGF）、深层毛细血管丛（DCP）血流密度]及并发症发生率。结果：观察组PRP术中激光功率、能量密度均低于对照组，光斑数少于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后，观察组BCVA、DCP血流密度高于对照组，VEGF水平低于对照组，CMT小于对照组，差异均有统计学Diasporic medical tourism意义（P<0selleck合成.05）；两组并发症发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：雷珠单抗联合PRP治疗重度NPDR患者有利于降低血清VEGF水平，减小PRP手术难度，增加DCP血流密度，改善视功能，效果优于单用PRP。

研究目的:已有研究表明,运动后血液同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平升高,急性剧烈运动后Hcy升高更显著,经常训练的运动员群体血液中的Hcy水平显著超出正常水平,被称为运动导致的高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)。血液Hcy过高会引起血管内皮细胞损伤和功能障碍,是导致血管粥样硬化、脑卒中等心血管疾病的独立危险因素。维生素B9(叶酸)能够降低血液中同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平,减少血管炎症和卒中风险。人体自身无法合成叶酸,只能从食物中获取。已知基因型是影响叶酸吸收和Hcy降低的重要影响因素。MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRRA66G是最常见的三个单核苷酸多态性(SNP)位点,影响叶酸代谢酶的活性,进而影响血液中Hcy的降低。在我国汉族人群中,上述基因突变率显著高于西方人。因此,我国运动人群中应有更多人存在运动相关HHcy风险,危害他们的心脑血管健康。针对现在核酸检测普遍操作繁琐、需要专业实验室和专业操作人员的缺点,本研究利用全基成的微流控基因芯片技术,建立了无创伤、全自动、免人工操作、不需要专业人员的叶酸代谢基因型检测技术和系统,能够安装在体育场馆、学校、甚至运动现场附近,使运动人员能够方便、快速、准确地把握自身的叶酸代谢能力,进而开展精准的运动营养补充,防范运动相关HHcy风险和心血管疾病风险。研究方法:基于无创伤、全自动、免人工操作的基因检测系统,来实现叶酸代谢基因型的检测。主要技术内容包括:环介导的核酸恒温扩增(LAMP,Loop-mediated isothermal Amplification)技术,核酸扩增的可视化检测技术,全集成的微流控基因芯片技术。本基因检测系统由核酸提取模块、扩增模块和检测分析仪组成。核酸提取模块中样本细胞被裂Bafilomycin A1小鼠解,DNA被捕获并通过硅胶膜洗脱。在核酸扩增模块捕获的DNA与LAMP试剂进行混合,后注入检测芯片进行扩增反应。分析仪实现检测结果的自动判断,由三个模块组成:气路模块、加热模块和光学扫描模块。系统完全自动化操作,实现了”样本输入-应答-输出”的检测模式。目标基因序列由美国国家生物技术信息中心(NCBI)获得,使用SnpGene软件针对MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRRA66G位点设计LAMP引物,引物由生工生物(上海,中国)合成。采用口腔拭子获取检测样本。利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测多个基因位点,等温扩增检测反应程序为恒温65℃,45min。利用染料实现核酸扩增检测结果的可视化,反应室的颜色表示是否存在基因扩增,如果存在基因扩增,阳性反应后试剂的颜色从紫色变为绿色。通过对比反应前后试剂颜色进行SNP位点的判断。每个SNP位点需要两个反应腔进行检测,分别检测突变型和野生型,若两检测腔颜色都变为绿色,则说明该基因型为杂合子。使用PCR加一代测序技术作为金标方法开展对比测试,验证本系统的检测准确性。PCR检测体系为:缓冲液、引物、热启动酶(Hot start enzyme)、DNA模板和无核酸水。反应程序为:95℃进行5min,94℃进行30s,60℃进行30s,72℃进行1min。PCR产物测序由生工生物(上海,中国)完成。测序结果使用BioEdit软件进行分析。在体育高校招募受试者,要求具有一定的运动等级或经常进行体育活动,存在运动致HHcy的风险。采集受试者口腔拭子样本,使用建立的全自动基因检测系统进行MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRRA66G基因位点基因检测。统计基因型分布以及各基因突变率,分析潜在HHFc-mediated protective effectscy风险。研究结果:通过与基因测序结果对比,本研究搭建的全自动基因检测系统的灵敏度和特异性表现良好,并且基因芯片室间无交叉污染,SNP位点的分型检测的灵敏度达到300 copies/μl。完成26名运动人员的MTHFR MTRR全自动基因检测。26人成功检出,结果与基因测序结果一致。MTHFR C677T基因CC野生型4人,CT杂合型10人,TT突变型12人,C等位基因的频率为0.364,T等位基因的频率为0.654;MTHFR A1298C基因AA野生型21人,AC杂合型1人,CC突变型4人,A等位基因的频率为0.827,C等位基因的频率为0.173;MTRR A66G基因AA野生型24人,AG杂合型2人,无GG突变型,A等位基因的频率为0.962,G等位基因的频率为0.038。风险基因型MTHFR C677T位点TT型12人,MTHFR A1298C位点CC型4人,MTRR A66G位点AG型2人,只有一人同时有TT与AG基因型,其他个体均为单一位点突变风险。研究结论:利用全集成微流控基因芯片技术和可视化核酸简易检测技术,首次成功建立了对MTHFR、MTRR基因位点SNP的全自动基因检测体系,特异性好、灵敏Ferrostatin-1体内实验剂量度高。受试者基因突变率:MTHFR C677T>MTHFR A1298C>MTRR A66G。17名运动人员存在风险基因型,因此存在运动相关的HHcy风险以及心血管健康风险。上述人群的基因型特征表明,普通饮食已经无法满足需求,应在运动前服用叶酸补剂,来避免运动导致的血液中Hcy水平过高。本研究研发的叶酸代谢基因型全自动检测系统,实现了运动人员叶酸补充的精准化和个体化,在个性化精准运动营养领域,实现技术创新。

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨点击此处其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色Tumor biomarker多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血Z-IETD-FMK体内清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、pGSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,此作用与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

目的 探讨健脾清化化瘀汤治疗胃癌前病变的可能作用机制。方法 将90只健康清洁级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为6组，包括正常组、模型组、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)抑制剂组、健脾清化化瘀汤低剂量组、健脾清化化瘀汤中剂量组、健脾清化化瘀汤高剂量组。除正常组外，其Ipatasertib临床试验余5组大鼠均用1×10~(9 )CFU/mL幽门螺杆菌(helicobacter pylori, HP)菌液灌胃7次，平均2次/周。确认HP感染后，除正常组外，其余5组均予150μg/mL甲基-N-硝基-N亚硝基胍(MNNG)溶液灌胃，频率5次/周，同时予100μg/mL MNNG溶液自由饮用，配合0.03%雷尼替丁饲料喂养、饥饱失常法(2天足量饲料喂养，1天禁食),持续造模28周。造模成功后，健脾清化化瘀汤低、中、高剂量组分别给予相应剂量健脾清化化瘀汤灌胃，iNOS抑制剂组给予氨基胍溶液50 mg/(kg·d)剂量进行灌胃，SAG分子量正常组及模型组予以生理盐水进行灌胃，均1次/天，干预治疗10周。干预结束后，运用苏木精—伊红染色观察大鼠胃黏膜病理变化；运用免疫组化法检测胃组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)蛋白表达；运用RT-PCR法检测胃组织miR-21、PTEN mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜可见腺体萎缩、肠化、异型增生，健脾清化化瘀汤中、高剂量组及iNOS抑制剂组较模型组有不同程度的改善，健脾清化化瘀汤低剂量组改善不明显。各ventral intermediate nucleus组大鼠胃黏膜miR-21、PTEN mRNA、PTEN蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白组比较，模型组miR-21表达显著升高(P<0.01),PTEN mRNA、蛋白表达显著下调(P<0.01;P<0.01);与模型组比较，健脾清化化瘀汤中、高剂量组、iNOS抑制剂组miR-21表达下调(均P<0.01),PTEN mRNA、蛋白表达升高(P<0.05;P<0.01),健脾清化化瘀汤低剂量组miR-21、PTEN mRNA、蛋白表达较模型组差异均无统计学意义。结论 健脾清化化瘀汤可能通过下调胃黏膜miR-21的表达，解除miR-21对PTEN表达的抑制，进一步激活PTEN下游信号通路，从而缓解胃黏膜病变，阻断胃癌前病变向胃癌进展。

基于非受体酪氨酸激酶（sarcoma receptor coactivator，Src）/磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）信号通路探索草乌甲素改FG-4592善实验性类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）骨破坏的作用机制。通过GeneCards、PharmGKB和OMIM数据库收集RA骨破坏的关键靶点，利用SwissTargetPrediction和PharmMapper数据库收集草乌甲素的潜在靶点，借助Venny 2.1.0平台获得交集靶点，运用STRING数据库及Cytoscape 3.8.0进行蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网络构建及拓扑分析。在DAVID数据库进行基因功能注释（Gene Ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析，运用AutoDock Vina对草乌甲素与关键靶点进行分子对接和结合能力预测。最后建立NF-κB配体受体激活物（receptor activator of nuclear factor-κB，RANKL）诱导体外破骨细胞分化模型，采用定量实时聚合酶连锁反应法（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测相关靶点mRNA表达水平，免疫荧光法、蛋dental pathology白免疫印迹法检测关键靶点蛋白表达水平。结果发现，药物-疾病靶点共29个，Src为草乌甲素抗RA骨破坏的核心EPZ-6438靶点。KEGG富集分析发现草乌甲素可能通过调控Src/PI3K/Akt信号通路发挥抗RA骨破坏的作用。分子对接结果显示，草乌甲素与Src、磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶（phosphatidylinositol-4，5-diphosphate 3-kinase，PIK3CA）和AKT1均有较好的结合能力。实验验证结果显示，草乌甲素不仅剂量依赖性地抑制破骨细胞分化相关基因组织蛋白酶K（cathepsin K，CTSK）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）mRNA的表达（P<0.01），还显著降低体外破骨细胞中p-c-Src、PI3K及p-Akt的表达（P<0.01）。综上，草乌甲素可能通过调控Src/PI3K/Akt信号通路抑制RA骨破坏。该研究为草乌甲素改善RA骨破坏提供实验支撑，也将为草乌甲素的临床应用奠定基础。

目的：分析铁死亡相关基因DPP4在泛癌中selleck化学的表达及其在肿瘤免疫、预后等方面的作用，探讨DPP4在肿瘤免疫治疗及临床预后中的价值。方法：利用CCLE、TCGA及GTEx数据库对铁死亡相关基因DPP4进行泛癌的差异表达分析，并通过Kaplan-Meier及Cox回归分析DPP4与肿瘤预后的相关性；使用CIBERSORT算法评估TIMER数据库中肿瘤免疫细胞浸润情况，ESTIMATE算法评估肿瘤微环境，Spearman检验分析基因表达与免疫新抗原、肿瘤突变负荷及微卫星不稳定性的关联；GSEA软件研究DPP4在肿瘤中的表达与信号通路的相关性。结合人类蛋白质图谱数据库、TCGA数据库及GEO数据库对分析结果进行验证。结果：DPP4基因在多种肿瘤中的表达差异具有统计学意义，且与多种肿瘤的生存及预后密切相关，其中在嗜铬细胞瘤和副神经节瘤（PCPG）、胸腺癌（THYM）中可作为保护因素，对肿瘤预后有正向作用；DPP4与肿瘤的多种免疫细胞浸润及免疫微环境密切相关，最显著相关的3类肿瘤为膀胱尿路上皮癌（BLCA）、乳腺浸润癌（BRCA）、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤（PABT-199小鼠CPG）;DPPRodent bioassays4与免疫新抗原、肿瘤突变负荷与微卫星不稳定性显著相关；GSEA分析结果显示存在多个与DPP4在肿瘤中高低表达相关的生物学通路，主要集中于物质代谢及炎症反应等通路；人类蛋白质图谱和TCGA、GEO数据库证实DPP4在肺癌、乳腺癌、直肠癌和前列腺癌中表达存在差异。结论：铁死亡相关基因DPP4可作为肿瘤免疫治疗的生物靶点用于泛癌预后评估，对临床肿瘤诊断、治疗及预后具有重要意义。

目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种主要发生于中枢神经系统的自身免疫脱髓鞘性疾病。全球有超过两百万人罹患此病,患者主要为年轻女性。其典型病理特征是中枢神经系统局灶性脱髓鞘性斑块,轴突损伤和星形胶质细胞增生等。MS患者的临床表现多样,病因尚未完全明确。目前的治疗手段无法治愈MS,常用的治疗药物,如富马酸二甲酯等,被报道具有一定的副作用。炎性小体是一种多分子信号复合体,可以感受损伤和压力信号,促进促炎细胞因子的成熟和分泌。其中,NLRP3炎性小体是目前研究最为广泛的炎性小体。研究表明,NLRPImmune landscape3炎性小体参与多种免疫炎症性疾病,并且在中枢神经系统疾病中也有相关报道。炎性小体的激活可以介导焦亡发生,这是一种程序性细胞死亡,在MS中起到重要作用。作为脑内关键的免疫细胞,小胶质细胞在MS中也发挥着重要作用。大黄素是一种来源于大黄等草本植物的天然产物,具有抗炎和抗氧化等多种作用。目前的研究发现,大黄素对于中枢神经系统疾病具有神经保护作用。本研究采用实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型—一种经典的MS动物模型,初步探讨大黄素对于EAE的神经保护作用,以及在这一过程中涉及到的潜在作用机制。研究方法:一建立EAE大鼠模型及小胶质细胞炎症模型,探究大黄素对于EAE大鼠模型的神经保护作用,以及对小胶质细胞炎症的抑制作用1.建立EAE大鼠模型。从造模日开始,每日腹腔注射大黄素或相应溶剂,直到取材前一天。记录大鼠每日的体重及神经行为学评分;通过HE染色评价脑和脊髓内炎性细胞的浸润程度;通过LFB染色评价脊髓脱髓鞘的程度;q RT-PCR,NO检测和ELISA用于评价炎症相关因子的表达水平;通过免疫组织化NSC 127716说明书学染色评价脊髓内Iba-1和CD68的表达水平。2.建立小胶质细胞的炎症模型。通过CCK8法评价细胞的活力;通过NO检测和ELISA评价炎症相关因子的表达;通过荧光和流式实验检测ROS的水平。二探究大黄素对于EAE大鼠模型和小胶质细胞炎症模型中NLRP3炎性小体及焦亡的影响1.在体内实验中,通过Western blot检测NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过q RT-PCR和ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平。2.在体外实验中,通过Western blot检测NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平;通过Calcein-AM/PI染色评价细胞死亡程度。三大黄素影响NLRP3炎性小体和焦亡的机制研究1.通过网络药理学相关技术,预测大黄素影响MS的潜在作用靶点。2.通过分子对接,模拟大黄素与潜在作用靶点的结合;通过Western blot检测体内外实验中,潜在作用靶点的蛋白表达水平。3.在体外实验中,使用siRNA转染小胶质细胞,敲减潜在作用靶点(荧光,q RT-PCR及Western blot用于转染效率的验证);使用靶点抑制剂,抑制潜在靶点的蛋白表达(CCK8法和Western blot用于抑制效率的验证)。通过Western blot检测潜在作用靶点及其下游分子,NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平。4.在体外实验中,通过使用抑制剂来抑制潜在靶点的下游分子的蛋白表达(CCK8法和Western blot用于抑制效率的验证)。通过Western blot检测潜在作用靶点及其下游分子,NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平。结果:1.与正常对照组大鼠相比,疾病模型IACS-010759使用方法组大鼠的体重显著减少,神经行为学评分明显升高;脊髓内炎性细胞浸润和脱髓鞘的程度明显增加;脑内炎性细胞浸润的程度显著增加;脊髓组织及血清中炎症细胞因子的表达水平显著升高;脊髓组织内Iba-1和CD68的表达增加。与疾病模型组相比,在大黄素治疗组中,这些指标都有明显的改善。此外,与正常对照组相比,在大黄素对照组中这些指标无显著改变。2.与对照组的小胶质细胞相比,小胶质细胞炎症模型组中促炎因子表达增加,抗炎因子表达减少,ROS水平升高。而大黄素处理后可以显著抑制促炎因子的表达,增加抗炎因子的表达,并且降低ROS的水平。3.与正常对照组大鼠相比,疾病模型组大鼠的脊髓组织内NLRP3,ASC,cleaved-caspase-1和GSDMD-N的蛋白表达显著增加;脊髓组织内IL-1β和IL-18的m RNA的表达明显增加;血清中IL-1β,IL-18和LDH的水平显著升高。在大黄素治疗组中,这些指标的表达水平均显著降低。与正常对照组相比,在大黄素对照组中这些指标无明显改变。4.与对照组的小胶质细胞相比,小胶质细胞炎症模型组的NLRP3,ASC,cleaved-caspase-1和GSDMD-N的蛋白表达明显增加;细胞培养上清液中IL-1β,IL-18和LDH的表达明显增加;细胞死亡程度加重。大黄素处理后可以显著抑制这些指标的增加。5.结合网络药理学的结果和现有文献,SIRT1可能是大黄素影响MS的潜在作用靶点,PGC-1α是SIRT1的可能下游;分子对接结果表明,大黄素与SIRT1之间的结合可能性很大;Western blot的结果显示,在体内外模型组中,SIRT1和PGC-1α的表达水平下降,而大黄素处理之后可以增加它们的表达。6.在体外实验中,使用SIRT1的siRNA转染和抑制剂(EX527)可以显著抑制细胞内SIRT1的表达。与治疗组相比,转染后细胞内SIRT1和PGC-1α的表达水平明显降低,转染组细胞的NLRP3炎性小体和焦亡的相关指标表达显著增加,提示大黄素通过SIRT1调控NLRP3炎性小体活化和焦亡。然而,抑制剂组对于相关指标的影响并不显著。7.在体外实验中,使用PGC-1α抑制剂(SR-18292)可以明显降低细胞内PGC-1α的表达水平。与治疗组相比,抑制剂组细胞的PGC-1α的表达显著减少,但是SIRT1的表达水平并无明显改变,结合前面的结果,提示PGC-1α可能是SIRT1的下游因子;此外,抑制剂组细胞的NLRP3炎性小体和焦亡的相关指标表达显著增加,说明PGC-1α参与了大黄素对NLRP3炎性小体活化和焦亡的调控。因此,大黄素可能是通过SIRT1/PGC-1α途径调控NLRP3炎性小体活化和焦亡。结论:1.大黄素可以改善EAE大鼠模型的临床症状,抑制脊髓内炎性细胞浸润和脱髓鞘的程度,抑制脑内炎性细胞浸润的程度,减轻炎症水平,进而发挥神经保护作用;大黄素可以抑制小胶质细胞炎症模型的炎症水平。2.在EAE大鼠模型和小胶质细胞炎症模型中,大黄素可以抑制NLRP3炎性小体活化和焦亡的水平。3.大黄素通过SIRT1/PGC-1α途径调控NLRP3炎性小体活化和焦亡。

目的:本课题旨在研究六氨基乙酰丙酯(Hexylaminolaevulinate,HAL)介导的光动力疗法(Photo Dynamic Therapy,PDT)联合吡柔比星(Pirarubicin,THP)在体外对膀胱癌细胞系的杀伤作用及抑制侵袭和迁移作用,并阐明其机理。方法:将膀胱癌细胞株RT4和T24细胞分为空白对照组(Control组)、光动力治疗组(PDT组)、吡柔比星组(THP组)、光动力治疗联合吡柔比星组(PDT+THP组),利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用Hochest33342/PI双染检测各组细胞凋亡,Western blot检测各组耐药蛋白P-gp蛋白的变化,RT-q PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的变化;通过正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞构建3D共培养模型,利用细胞迁移实验与细胞侵袭实验检测各组对膀胱癌细胞侵袭与迁移的抑制作用;采用Western blot检测整合素integrinα3β1、上皮-间充质转变标记物E-cadherin、N-cadherin、基质蛋白MMP2和MMP9和Smad2/3蛋白的表达,研究可能参与的机制。研究还通过膀胱癌类器官进行验证,观察类器官的生长情况、形态结构的变化、HE染色情况以及整合素integrinα3β1、N-cadherin的表达。结果:1.膀胱癌细胞株RT4和T24细胞经PDT(12.500μg/ml,10 min)、THP(RT4:0.500μg/ml,T24:1.25μg/ml)以及PDT+THP处理24 h后,T24细胞PDT组、THP组、PDT+THCompound C分子式P组细胞存活率分别为65.79±6.33%、64.42±8.72%、27.52%±6.46,RT4细胞各组细胞存活率分别为52.38±2.39%、60.09±3.55%、17.72±4.23%。PDT+THP使膀胱癌细胞株RT4和T24细胞的P-gp蛋白表达下调、Bcl-2rapid immunochromatographic tests基因表达上调以及Bax基因表达下调。2.采取Transwell实验以及划痕实验检测各组对膀胱癌细胞株RT4和T24细胞侵袭和迁移能力的影响。膀胱癌细胞株RT4和T24细胞经PDT(12.500μg/ml,5 min)、THP(0.125μg/ml)以及PDT+THP处理24 h后,T24细胞Control组,PDT组、THP组、PDT+THP组OD值分别为1.24±2.65、0.74±1.98、0.87±0.93、0.25±2.32,RT4各组OD值分别为0.89±3.23、0.48±0.39、0.65±1.98、0.19±2.39;T24细胞Control组、PDT组、THP组和PDT+THP组伤口愈合率分别为60.54±2.32%、68.98±3.43%、13.87±4.32%,RT4各组伤口愈合率分别为45.92±5.34%、48.23±4.33%、10.23±3.49%。PDT+THP组使E-cadherin蛋白表达增加、integrinα3β1、N-cadherin、MMP2、MMP9表达减少,p-Smad2/3蛋白表达显著降低,Smad2/3转录因子在细胞核的荧光信号减弱。3.膀胱癌类器官经PDT(12.500μg/ml,10 min)、THP(RT4:0.500μg/ml,T24:1.250μg/ml)以及PDT+THP处理72 h后,Control组、PDT组、THP组和PDT+THP组膀胱癌类器官最大生长尺寸(n=5)分别为(95.76±2.11)nm、(73.83±3.21)nm、(70.22±3.98)nm、(36.77±3.21)nm;各组的膀胱癌类器官表面积(n=5)分别为(6.92±3.21)nm~2×1000、(4.12±2.11)nm~2×1000、(4.58±3.76)nm~2×1000、(2.32±2.78)nm~2×1000。联合治疗能够抑制类器官的生长、降低类器官最大尺寸和表面积,使类器官边缘毛糙selleckchem SB203580、缺损,使整合素integrinα3β1以及间充质标记物N-cadherin表达减少。结论:1.PDT+THP对膀胱癌细胞株RT4和T24细胞有协同杀伤作用,机制可能与联合治疗后膀胱癌细胞的P-gp蛋白下调、Bcl-2基因表达上调以及Bax基因表达下调,从而降低了癌细胞的耐药性以及促进了癌细胞的凋亡有关。2.低剂量的PDT+THP对膀胱癌细胞株RT4和T24细胞以及膀胱癌类器官迁移和侵袭能力有协同抑制作用,其机制可能与Smad2/3信号通路有关。

目的 探讨高危良性前列腺增生(BPH)经尿道前列腺剜除术(TUEP)与经尿道前列腺电切术(TURP)的安全性和近期效果。方法 前瞻性纳入2021-BYL719说明书03—2022-11于新乡医学院第一附属医院泌尿外科行手术治疗的高危BPH患者，根据手术方法分为TUEP组和TURP组。比较2组患者的基线资料、手术指标、手术前后的最大尿流率(Qmax)、残余尿量(RUV)、生活质量(QOL)评分，以及血清表皮生长因子(VEGF)、胰岛素生长因子-1(IGF-1selleck产品)水平。统计并发症发生率。结果 共纳入86例患者，每组43例，2组患者的基线资料差异无统计学意义(P>0.05)。TUEP组患者的手术时间、术中出血量、前列腺切除质量、膀胱冲洗时间，以及尿管留置时间等手术指标均优于TURP组，差异均有统计学意义(P<0.05)。术前2组患者的Qmax、RUV、QOL评分，以及血清VEGF、Bioclimatic architectureIGF-1水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3个月时，2组患者的上述指标均较术前显著改善，其中TUEP组患者的改善效果优于TURP组，差异均有统计学意义(P<0.05)。TUEP组患者的术后并发症发生率低于TURP组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 对于高危BPH患者，TUEP在优化手术指标，改善Qmax、RUV、QOL评分和血清VEGF、IGF-1水平，以及降低并发症发生率方面较TURP更具优势。