PI3K抑制剂

目的:探索PM_(2.5)暴露对心脏纤维化影响及铁自噬依赖性铁死亡的调控机制。方法:1.构建动物模型:随机将42只6周龄健康雄性C57BL/6J小鼠分为:洁净空气组(FA)、未过滤空气组(UA)和浓缩PM_(2.5)组(CA),洁净空气+铁抑制剂组(FAM)、洁净空气+二甲基亚砜组(FAD)、浓缩PM_(2.5)+铁抑制剂组(CAM)和浓缩PM_(2.5)+二甲基亚砜组(CAD),共7组,每组6只,持续暴露16周,每周7天,每天6小时(h)。在小鼠染毒期间,每周利用空气动力学粒径谱仪检测暴露仓内粒径分布,每天使用气溶胶探测器监测暴露仓内PM_(2.5)浓度,同时记录染毒仓内温湿度。2.PM_(2.5)采集与制备:暴露同期,使用高流量PM_(2.5)采样系统对颗粒物进行采集,采样器流速为1.05 m~3/min,每天采样12 h。通过超声和冷冻干燥法提取后制备成浓度为20 mg/m L的PM_(2.5)原液。3.构建细胞模型和重组细胞株:在37℃、5%CO_2条件下,采用含10%小牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified eagle media)培养基培养小鼠心肌细胞系HL-1细胞。取对数生长期Ceralasertib采购的细胞,PM_(2.5)(0、50、100和200μg/m L)处理24 h。采用si RNA转染HL-1细胞,构建NCOA4和YY1低表达细胞株。4.心脏超声检测小鼠心脏功能,HE和Masson染色检测小鼠心脏组织病理结构和胶原纤维沉积水平。5.Western blot检测小鼠心脏组织中纤维化标志物:α-SMA、Collagen I;小鼠心脏组织和HL-1细胞中促纤维化蛋白TGF-β;小鼠心脏组织和HL-1细胞中铁死亡标志物:TFRC、SLC40A1、SLC7A11/Xct和GPX4;小鼠心脏组织和HL-1细胞中铁自噬标志物:NCOA4和FHC,以及YY1的表达水平。6.BD Accuri?C6流式细胞仪(Becton,USA)检测小鼠心脏组织和HL-1细胞活性氧水平。将小鼠心脏组织制备成10%的匀浆,TBA法检测MDA水平。7.将小鼠心脏组织研磨、离心后取上清,比色法检测小鼠心脏组织中二价铁的含量。8.免疫荧光检测小鼠心脏组织中4-HNE的水平。免疫金标技术检测NCOA4和FHC在自噬溶酶体中的共定位情况。9.免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)实验检测HL-1细胞YY1和NCOA4的直接结合作用。结果:1.FA、UA、CA组平均暴露浓度分别为0、12.03和89.82μg/m~3。暴露期间,FA组未检测到颗粒物质,UA组暴露仓内粒径小于2.5μm颗粒物的检出率为94.78%,CA组暴露仓内粒径小于2.5μm颗粒物的检出率为99.82%。2.超声心动图结果显示,与FA组相比,UA组和CA组小鼠的每搏输出量(SV)、射血分数(EF)和短轴缩短分数(FS)明显降低(P<0.05),表明PM_(2.5)暴露后心功能明显降低。HE染色结果显示,CA组小鼠心脏出现明显病理改变:心肌纤维排列紊乱,有炎性细胞浸润。Masson染色结果显示,UA组和CA组小鼠心脏中胶原大量沉积。3.与FA组相比,UA和CA组小鼠心脏组织中α-SMA和Collagen I的水平明显增加(P<0.05);PM_(2.5)(50 ug/m L,100 ug/m L,200 ug/m L)梯度处理HL-1细胞24 h,TGF-β的水平随PM_(2.5)呈剂量依赖性增加(P<0.05)。4.体内外结果显示,PM_(2.5)处理后小鼠心脏组织和HL-1细胞铁死亡标志物TFRC水平显著增加,SLC7A11、SLC40A1和GPX4水平显著降低(P<0.05)。与FA组相比,UA组和CA组小鼠心脏组织中MDA、ROS和Fe~(2+)水平显著增加(P<0.05)。CA组小鼠心脏组织的4-HNE的水平明显高于FA组和UA组(P<0.05)。5.超声心动图结果显示,与CAD组相比,CAM组小鼠心脏的每搏输出量(SV)、射血分数(EF)和短轴缩短分数(FS)分别相对增加了1.27倍、1.24倍和1.12倍(P<0.05)。铁抑制剂(Fer-1)明显缓解PM_(2.5)暴露导致的心脏功能下降。HE染色结果显示,与CAD组小鼠相比,CAM组小鼠心脏组织的病理改变明显减轻。Masson染色显示,CAM组小鼠心脏胶原沉积明显减少。6.与CAD组相比,CAM组小鼠心脏的MDA和ROS水平分别降低55.7%和10.5%(P<0.05),铁抑制剂(Fer-1)处理减轻了PM_(2.5)诱导的Fe~(2+)的升高。免疫荧光结果显示,与CAD组相比,CAM组小鼠心脏中4-HNE水平降低54.7%(P<0.05)。Western Blot结果显示,与CAD组相比,CAM组小鼠心脏中TFRC水平降低26.8%(P<0.05);SLC7A11、SLC40A1和GPX4的水平分别升高2.2倍、2.04倍和2.15倍(P<0.05)。此外,与CAD组小鼠相比,CAM组小鼠心脏中Collagen I、α-SMA和TGF-β水平显著降低(P<0.05)。7.体内外结果显示,PM_(2.5)处理后小鼠心脏组织和HL-1细胞铁自噬标志物NCOA4水平呈剂量依赖性显著增加,而FHC水平呈剂Cell Cycle抑制剂量依赖性显著降低(P<0.05)。此外,免疫电镜结果显示,FA组小鼠心脏中FHC和NCOA4蛋白定位于胞质中。在CA组小鼠心脏组织的自噬小体中可以观察到FHC和NCOA4蛋白。PM_(2.5)处理后,si NCOA4组中TFRC水平较NC组下降56.68%(P<0.05);SLC7Medullary thymic epithelial cellsA11、SLC40A1和GPX4水平分别相对增加2.01倍、1.99倍和2.49倍(P<0.05)。8.与FA组小鼠相比,CA组小鼠心脏YY1水平明显升高(P<0.05)。在体外实验中,PM_(2.5)导致HL-1细胞中YY1水平以剂量依赖性的方式升高(P<0.05)。9.免疫共沉淀实验显示,YY1与NCOA4具有直接的相互作用。Western Blot结果显示,PM_(2.5)处理后,si YY1组NCOA4水平较NC组下降35.5%(P<0.05);si YY1组FHC水平比NC组增加了1.3倍(P<0.05)。结论:1.PM_(2.5)暴露诱导心脏纤维化。2.PM_(2.5)导致的心脏纤维化与铁死亡有关。3.PM_(2.5)可能通过激活YY1促进心肌细胞自噬依赖性铁死亡导致心脏纤维化。

为创制棉花耐旱种质资源，解决棉花耐旱资源贫乏以及提高水资源利用率，研究依据CRISPR/Cas9编辑原理，对课题组前期利用RT-PCR技MS-275体内术筛选耐旱相关基因GhNAC3(Gh＿D02G0790)的第一外显子区域设计2个20 bp的编辑靶点，并在陆地棉基因组数据库中比对分析靶点序列，排除非特异性编辑，将2个靶点核苷酸片段分别与gRNA-AtU6载体连接，通过2次PCR扩增，得到含特异性连接接头的AtU6-GhNAC3表达盒，再将表达盒连接到CRISPR/Cas9(pRGEB32-7)载体上，获得CRISPR-GhNAC3重组表达载体，利用农杆菌介导法转化陆地棉受体YZ-1,再生培养得到T_0代转基因幼苗，通过PCR检测Cas9蛋白基因获得阳性株系。对T_0代植株的靶点区域序列进行PCR扩增和测序分析，鉴定GhNAC3编辑类型。结果发现，CRISPR9-GhNAC3表达载体成功转化YZ-1Fer-1分子量,并获得40株转基因再生植株，经Cas9蛋白基因鉴定得到30株阳性株系，从阳性植株选择10株进行编辑类型测序分析，发现7plant synthetic biology株在靶点区域发生编辑，编辑类型主要为碱基片段缺失，缺失片段大小为3～28 bp, T_1代种植于大田，获得了同时出现黄化和矮化的突变体3株。

目的:核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)是氧化应激系统的关键因子。研究表明,Nrf2在多种肿瘤耐药过程中发挥重要作用。急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是骨髓和外周血中原始细胞和幼稚髓性细胞异常增生的血液系统恶性疾病。AML患者产生耐药是治疗失败的主要原因,是临床上治疗AML的主要挑战。AML患者化疗过程中容易引起DNA损伤,启动DNA修复途径,进而介导AML患者对化疗药物不敏感,从而产生耐药。然而,Nrf2是否通过影响DNA损伤修复途径促进AML耐药机制尚不清楚。本研究旨在探讨Nrf2对DNA损伤修复途径的影响,并探明其介导AML耐药的潜在分子机制。方法:1.收集正常健康供者、AML完全缓解及复发患者骨髓血。Ficoll分离液提取正常健康供者、AML完全缓解及复发患者骨髓单个核细胞,RIPA裂解液提取蛋白样品。Trizol提取总RNA,逆转录为c DNA。Western Blot、PT-PCR和免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)法分析Nrf2和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(8-oxgnanine DNA glycosylase,OGG1)在正常健康供者、AML完全缓解及复发患者中的表达情况。根据PT-PCR结果以Nrf2 m RNA表达量的中位数为截断值将AML临床样本分为Nrf2高表达(Nrf2-High)组和Nrf2低表达(Nrf2-Low)组。2.采用低浓度药物培养法诱导AML耐药细胞株,CCK-8法检测耐药细胞系和敏感细胞系的IC50值。同时采用免疫荧光(Immunofluorescence,IF)检测敏感和耐药细胞系中OGG1的表达情况。Western Blot和PT-PCR检测敏感和耐药细胞系中Nrf2的表达水平。3.慢病毒转染法构建过表达和沉默Nrf2的AML细胞系,免疫荧光显微镜观察慢病毒转染效率,同时使用Western Blot检测调控Nrf2后OGG1的表达情况。采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测调控Nrf2后AML细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的敏感性。同时检测Ara-C联合OGG1抑制剂共培养细胞24 h后AML细胞的凋亡率。4.采用染malaria-HIV coinfection色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,Ch IP)检测Nrf2和OGG1启动子之间是否存在相互作用。5.采用GEPIA数据库分析Nrf2和OGG1在配对正常样本和AML肿瘤样本中的表达水平,并用Gene Mania蛋白质数据库和Western Blot分析Nrf2、OGG1和AKT信号通路与AML耐药之间的关系。进一步用AKT信号通路抑制剂MK-2206(2μM)预处理细胞24 h后,Western Blot检测相关通路蛋白的表达水平。6.选取4-6周龄的非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency,NOD/SCID)雄性小鼠构建异种移植瘤模型。通过皮下注射AML细胞构建AML模型小鼠。每隔一天观察小鼠的生长状况,当小鼠肿瘤可触及时立即接受化疗药物Ara-C治疗。待小鼠牺牲后,取出皮下肿瘤,采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测瘤组织中Nrf2和OGG1的表达情况,并验证调控Nrf2后在体内对小鼠生存的影响。7.本研究采用SPSS 19.0软件进行数据统计和处理,Image J软件进行蛋白条带的灰度值和荧光强度的分析,图形的绘制最后采用Graph Pad Prism 7.0软件。两组间数据分析采用独立样本t检验,多组间数据分析采用单因素方差分析。实验数据以均数±标准差表示。P值的含义为:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。其中,P<0.05认为具有统计学意义。结果:1.在临床样本中,本研究发现Nrf2高表达与AML疾病复发密切相关。进一步研究表明,Nrf2高表达与DNA损伤修复通路中的碱基切除(Base excision repair,BER)通路密切相关。在临床样本中检测Nrf2-High和Nrf2-Low组中BER切除修复通路基因(OGG1LY2835219、APE1、POL-β、XRCC1)中的表达情况,结果发现,Nrf2-High组中OGG1表达显著升高。Western Blot结果显示,在Nrf2-High组中OGG1蛋白表达水平显著升高,而在Nrf2-Low组中OGG1蛋白水平显著降低。2.Nrf2和OGG1在耐药细胞系中表达均显著升高,且耐药细胞系对Ara-C的敏感性降低,具有更高的耐药倍数。3.慢病毒转染AML细胞后发现,在上调Nrf2组中OGG1蛋白表达升高,白血病细胞对化疗药物Ara-C的敏感性降低,在体外具有保护AML细胞的作用;而在下调Nrf2组中OGG1蛋白表达降selleck抑制剂低,导致白血病细胞对化疗药物Ara-C的敏感性增加,细胞凋亡显著增加。当使用OGG1抑制剂TH5487抑制OGG1的表达后,上调Nrf2组AML细胞对Ara-C的敏感性增加。Ch IP实验结果显示,Nrf2和OGG1启动子结合增强了Nrf2-OGG1轴的功能。4.在AML细胞中Nrf2过表达激活了AKT信号通路,促进OGG1蛋白的表达。当AKT信号通路抑制剂与AML细胞共培养24 h后发现在Nrf2过表达组中OGG1蛋白表达降低,同时Ch IP结果提示,使用AKT通路抑制剂后,Nrf2和OGG1启动子的结合显著降低。5.体内研究结果提示,下调Nrf2后AML模型小鼠瘤组织生长缓慢,生存期较长。同时在Nrf2下调组中OGG1表达降低,对异种移植瘤小鼠具有一定的保护作用。结论:过表达Nrf2促进OGG1表达降低AML细胞对Ara-C的敏感性。进一步研究发现Nrf2过表达激活了AKT信号通路促进OGG1表达介导了AML细胞对Ara-C耐药。

目的 探讨人皮下脂肪来源干细胞（human subcutaneous adipose-derived stem cells,hADSCs）局部移植对正畸源性牙根吸收（orthodontically induced root resorption,OIRR）的影响，为临床应用hADSCs抑制OIRR提供实验依据。方法 取40此网站只8周龄雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组，每组20只，建立大鼠右侧上颌第1磨牙近中牙正畸牙移动（orthodontic tooth movement,OTM）模型。实验组大鼠于建模第1、4、8、12天注射25μL含2.5×10~5个hADSCs的细胞悬液，对照组注射25μL PBS。在加力前及加力7、14 d后获取大鼠上颌模型，于加力7、14 d后两组各处死10只大鼠并取材。体式显微镜测量OTM距离，扫描电镜观察压力侧牙根形态及测定牙根吸收面积比，HE染色观察压力侧牙根吸收及牙周组织改建并计算牙根吸收指数，抗酒石酸酸性磷酸酶染色计数压力侧牙周组织破牙骨质细胞和破骨细胞数量。结果 两组OTM距离均随加力时间延长而增加（P<0.05）；加力7、14 d实验组和对照组比较OTM距离差异无统计学意义（P>0.05）。扫描电镜观察示加力7 d，实验组和对照组牙根表面见CX-5461小而浅的散在吸收陷窝，两组牙根吸收面积比差异无统计学意义（P>0.05）；加力14 d，两组牙根吸收陷窝加深变大，实验组牙根吸收面积比显著小于对照组（P<0.05）。实验组牙根吸收范围小于对照组、深度浅于对照组，加力14 d实验组牙根吸收指数显著小于对照组（P<0.05）。加力7、14 d实验组破牙骨质细胞计数均显著少于对照组（P<0.05）Infectivity in incubation period；加力14 d实验组破骨细胞计数显著少于对照组（P<0.05）。结论 hADSCs局部移植可能通过降低大鼠OTM过程中破牙骨质细胞和破骨细胞的数量来减小牙根吸收面积和深度，从而抑制OIRR。

传统的经肝动脉化疗栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization,TACE）是将化疗药和栓塞剂注入到肿瘤供血动脉，通过栓塞导致的缺血坏死和化疗药的细胞毒作用杀死肿瘤细胞。而近年来提出的肝动脉灌注化疗（hepatic arterial infusion chemotherapy,HAIC）药物奥沙利铂、亚叶酸钙和氟尿嘧啶（FOLFOX-HAIC）则不栓塞血管，而在药物剂量、灌注时间、治疗周期等方面加强了化疗方案。一项前瞻随机对照的Ⅲ期研究证明，与TACE相比，FOLFOX-HAIC显著改善≥Belumosudil核磁7 cm肝癌患者生存且转化切除率更高。已有共识认为TACE治疗超过upRapamycin IC50-to-seven标准的肝癌的Disease genetics效果欠佳，但TACE仍是up-to-seven标准内肝癌的首选治疗方案。针对超过up-to-seven标准的肝癌，FOLFOX-HAIC可能是首选治疗方法，待肿瘤缩小后再实施精细化TACE可进一步提高综合治疗的安全性和有效性。FOLFOX-HAIC+TACE可能是不可切除的大肝癌局部治疗/转化治疗的未来方向。

目的 探讨以降温急救护理为基础的综合护理模式对小儿上呼吸道感染致高热惊厥的干预效果。方法 方便选择2021年5月—2023年4月在厦门大学附属第一医院儿科急诊接受治疗的58例上呼吸道感染致高热惊厥患儿作为研究对象，依据随机数表法分为两组，29例患儿纳入对照组并给予常规护理；29例患儿纳入观察组，并在实行常规护理的基础上，给予以降温Pidnarulex化学结构急救护理为基础的综合护理。比较两组患者高热症状缓解时间、惊厥症状消失时间、住院时间以及不良反应发生率、惊厥复发率。结果 观察组退热时间（21.32±6.58）h、惊厥症状消失时间（3.89±1.24）d、住院时间（5.94±2.06）d均短于对照组的（26.77±7.46）h、（5.73±1.5PF-6463922试剂1）d、（8.86±2.85）d，差异有统计学意义（t=2.951、5.071、9.056,P<0.05）；观察组不良反应总发生率、惊厥复发率均为0，低于对照组的24.14%、20.69%，差异有统计学意义（χ~2=5.8Active infection49、4.647,P<0.05）。结论 以降温急救护理为基础的综合护理模式可缩短上呼吸道感染致高热惊厥患儿的退热时间、惊厥症状消失时间及住院时间，降低患儿再次发生惊厥的可能性，减少感染、舌咬伤等不良反应的发生。

目的:乳腺癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤,放疗是治疗乳腺癌的重要手段,可减少复发,延长生存时间,提高生命质量。许多患者因肿瘤对放疗的抗性而预后不良,因此放疗抵抗是需要解决的临床难题。近年来,分子靶向在恶性肿瘤治疗上取得了显著临床疗效,筛选参与调控乳腺癌细胞增殖、侵袭与治疗抵抗相关的基因是目前的探索和研究热点。本研究探索基于具有上述功能调控基因的角蛋白15(Keratin 15,KRT15)对乳腺癌的恶性增殖功能和对电离辐射敏感性的影响,发现并验证相关信号通路。方法:体外培养乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,建立KRT15敲减或过表达的细胞,用含有KRT15靶向sh RNA或c DNA的慢病毒载体转导乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞。用空载体转导的细胞作为阴性对照。使用q PCR和WTelaglenastat试剂estern blot对KRT15 m RNA和蛋白表达量进行检测。采用CCK-8实验和克隆形成实验观察KRT15基因敲减和过表达对MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力的影响;Annexin V-APC/PI双染法观察KRT15对MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell、划痕实验和Western blot观察KRT15对MDA-MB-231和MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot观察KRT15对MCF-7细胞铁死亡的影响。构建荷瘤小鼠模型验证KRT15的促癌功能。Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关分子和p53的表达情况。结果:使用CCK-8和克隆形成实验验证了KRT15的增殖活性,MDA-MB-231和MCF-7细胞的KRT15敲减株增殖能力均降低(抑制率为29.62%和29.38%,P<0.001),而过表达株增殖能力均升高(增殖率为10.06%和18.26%,P<0.001)。克隆形成实验显示相似的结果(P<0.01)。流式细胞分析显示过表达KRT15显著抑制细胞凋亡(P<0.05);而敲减KRT15却逆转了对凋亡的抑制作用(P<0.001)。为验证KRT15对电离辐射敏感性的作用,利用CCK-8和克隆形成实验MCF-7细胞接受4Gy电离辐射后的存活情况,结果显示KRT15过表达细胞存活率显著升高(P<0.01)。流式细胞分析显示,与Control+IR组相比,其凋亡率也明显减少(P<0.05)。Western blot显示KRT15促进电离辐射前后的EMT;Transwell和划痕实验显示KRT15过表达的乳腺癌细胞电离辐射前后的侵袭迁移能力显著增加(P<0.001)。Western blot显示,与对照组相比,KRT15过表达组电离辐射前后的GPX4、FTH1和SLC7A11的蛋白质水平明显升高,而DMT1蛋白质水平均明显降低;小鼠模型中电离辐射前后KRT15组肿瘤体积、重量均小于对照组;免疫组化显示Ki-67含量均高于对照组。Western blot显示,KRT15过表达可增强体内和体外Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF1、MMP7、CCND1Telemedicine education和c-Myc的蛋白质表达水平。本研究还表明在接受电离辐射前后,过表达KRT15的乳腺癌细胞p53蛋白表达降低。因此预测KRT15过表达可能通过负反馈调节抑制p53的表达或转录活性。结论:KRT15促进乳腺癌的增购买Baf-A1殖、迁移和侵袭,抑制凋亡和铁死亡,进而提高Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制放射治疗效果。

目的:乳腺癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤,放疗是治疗乳腺癌的重要手段,可减少复发,延长生存时间,提高生命质量。许多患者因肿瘤对放疗的抗性而预后不良,因此放疗抵抗是需要解决的临床难题。近年来,分子靶向在恶性肿瘤治疗上取得了显著临床疗效,筛选参与调控乳腺癌细胞增殖、侵袭与治疗抵抗相关的基因是目前的探索和研究热点。本研究探索基于具有上述功能调控基因的角蛋白15(Keratin 15,KRT15)对乳腺癌的恶性增殖功能和对电离辐射敏感性的影响,发现并验证相关信号通路。方法:体外培养乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,建立KRT15敲减或过表达的细胞,用含有KRT15靶向sh RNA或c DNA的慢病毒载体转导乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞。用空载体转导的细胞作为阴性对照。使用q PCR和WTelaglenastat试剂estern blot对KRT15 m RNA和蛋白表达量进行检测。采用CCK-8实验和克隆形成实验观察KRT15基因敲减和过表达对MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力的影响;Annexin V-APC/PI双染法观察KRT15对MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell、划痕实验和Western blot观察KRT15对MDA-MB-231和MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot观察KRT15对MCF-7细胞铁死亡的影响。构建荷瘤小鼠模型验证KRT15的促癌功能。Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关分子和p53的表达情况。结果:使用CCK-8和克隆形成实验验证了KRT15的增殖活性,MDA-MB-231和MCF-7细胞的KRT15敲减株增殖能力均降低(抑制率为29.62%和29.38%,P<0.001),而过表达株增殖能力均升高(增殖率为10.06%和18.26%,P<0.001)。克隆形成实验显示相似的结果(P<0.01)。流式细胞分析显示过表达KRT15显著抑制细胞凋亡(P<0.05);而敲减KRT15却逆转了对凋亡的抑制作用(P<0.001)。为验证KRT15对电离辐射敏感性的作用,利用CCK-8和克隆形成实验MCF-7细胞接受4Gy电离辐射后的存活情况,结果显示KRT15过表达细胞存活率显著升高(P<0.01)。流式细胞分析显示,与Control+IR组相比,其凋亡率也明显减少(P<0.05)。Western blot显示KRT15促进电离辐射前后的EMT;Transwell和划痕实验显示KRT15过表达的乳腺癌细胞电离辐射前后的侵袭迁移能力显著增加(P<0.001)。Western blot显示,与对照组相比,KRT15过表达组电离辐射前后的GPX4、FTH1和SLC7A11的蛋白质水平明显升高,而DMT1蛋白质水平均明显降低;小鼠模型中电离辐射前后KRT15组肿瘤体积、重量均小于对照组;免疫组化显示Ki-67含量均高于对照组。Western blot显示,KRT15过表达可增强体内和体外Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF1、MMP7、CCND1Telemedicine education和c-Myc的蛋白质表达水平。本研究还表明在接受电离辐射前后,过表达KRT15的乳腺癌细胞p53蛋白表达降低。因此预测KRT15过表达可能通过负反馈调节抑制p53的表达或转录活性。结论:KRT15促进乳腺癌的增购买Baf-A1殖、迁移和侵袭,抑制凋亡和铁死亡,进而提高Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制放射治疗效果。

背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,而三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)则是其中发病率高、恶性程度高、预后差的临床类型之一。手术切除仍然是乳腺癌的首选治疗方案,作为临床上围术期最常用的静脉麻醉药之一,丙泊酚对乳腺癌的影响及其潜在机制目前尚存在争议,而且研究大Average bioequivalence多局限在细胞凋亡领域;此外,只有少数研究探讨了丙泊酚对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响,更缺少针对TNBC的研究。铁死亡是近年来新发现的一种细胞程序性死亡方式,已被证实参与体内多种病理生理状态.因此,本研究旨在探索丙泊酚及其常用临床制剂是否通过调节细胞铁死亡来影响TNBC细胞的增殖及其对化疗药的敏感性。方法本C59价格研究采用TNBC细胞系MDA-MB-231,选择丙泊酚原料药、丙泊酚注射乳剂(Propofol injectable emulsion,PIE)以及磷丙泊酚钠三种丙泊酚制剂,将其单独或联合化疗药(多柔比星,紫杉醇)应用,处理细胞24 h后,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,采用流式细胞技术、免疫印迹试验(Western blot)、多重荧光免疫组化(Multiplex immunohistochemistry,mIHC)、透射电子显微镜来评估细胞的凋亡水平,采用相应试剂盒检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和Fe2+水平,采用透射电子显微镜观察细胞铁死亡特征性线粒体形态学变化,采用Western blot和mIHC 检测铁死亡相关调节蛋白(p53,SLC7A11,GPX4,FSP1,Ubiquinone,Ubiquinol)的表达水平。结果CCK-8细胞活力检测结果表明丙泊酚原料药可以显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,而PIE和磷丙泊酚钠的作用不明显;三种丙泊酚制剂均增强了多柔比星和紫杉醇对MDA-MB-231细胞的抑制作用。细胞凋亡的检测结果提示丙泊酚的确可以促进MDA-MB-231细胞的凋亡,但其对细胞增殖的抑制作用并不能完全由凋亡来解释。随后对于细胞内ROS水平、Fe2+水平的测定,以及线粒体形态学的观察和铁死亡相关调节蛋白的测定显示,无论是单独应用还是联合应用化疗药,三种不同制剂的丙泊酚可以诱发铁死亡相关改变,包括诱导线粒体发生相应的形态学改变,促进细胞内ROS和Fe2+蓄积,并且这种调节可能是通过p53-SLC7A11-GPX4通路实现的。结论丙泊酚可以通过促进细胞铁死亡从而抑制TNBC细胞的增殖并增强其对化疗药的敏感性,这种调节作用可能是通过p53-SLC7A11-GPX4通路实现的。背景肝脏缺血/再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)损伤是肝脏手术后常见的并发症,可导致预后不良、住院时间延长和住院费用增加。近年来的研究发现,铁死亡参与并促成肝脏I/R损伤,靶向抑制铁死亡可能成为改善肝脏I/R损伤的新策略。丙泊酚注射乳剂(Propofol injectable emulsion,PIE)是围术期最常用的静脉麻醉药之一,根据既往文献报道和我们前期的研究结果,我们推测PIE中的外源性脂质成分可能存在铁死亡抵抗和保护作用。因此,本研究以肝细胞I/R损伤模型为载体,探究PIE是否可以通过抑制肝细胞铁死亡而缓解其I/R损伤,希望为改善围术期肝脏I/R损伤、减少术后并发症提供新的靶点,为围术期器官保护提出新的管理策略。方法本研究采用正常大鼠肝细胞系IAR20进行实验,并对其进行缺氧/复氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)建模,模拟I/R损伤;另一方面我们将PIE拆购买INCB28060分成丙泊酚原料药和脂肪乳剂,同时比较丙泊酚原料药、PIE、脂肪乳剂注射液在IAR20细胞I/R损伤中的影响,从“PIE 对肝细胞I/R损伤的作用”、“PIE对肝细胞铁死亡的影响”、以及“PIE对肝细胞I/R损伤的作用是否通过铁死亡实现”这三部分进行探索。我们采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,采用透射电子显微镜观察细胞线粒体形态,采用线粒体膜电位检测试剂盒JC-1分析线粒体膜电位和功能,采用DCFDA/H2DCFDA和FerroOrange试剂盒分别测定细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和 Fe2+水平。结果我们的结果表明,首先,与丙泊酚原料药相比,PIE和脂肪乳剂注射液可以改善H/R损伤对IAR20细胞活力的抑制。其次,PIE和脂肪乳剂可以改善铁死亡诱导剂Erastin引起的IAR20细胞活力下降、铁死亡特征性线粒体形态改变、线粒体膜电位受损、以及细胞内ROS和Fe2+的堆积,即缓解Erastin诱导的IAR20细胞铁死亡,而丙泊酚原料药则未表现出此作用。第三,PIE和脂肪乳剂可以改善H/R损伤后导致的IAR20细胞活力下降、铁死亡特征性线粒体形态改变、线粒体膜电位受损、ROS和Fe2+堆积,且与铁死亡抑制剂Ferrostatin-1作用一致,而丙泊酚原料药却没有表现出类似的作用。结论PIE可以通过抑制细胞铁死亡对肝细胞I/R损伤起到保护作用,这种保护作用主要来自于PIE中的脂肪乳剂成分,而非丙泊酚药物成分,PIE中外源性的脂肪乳剂成分确实存在铁死亡抵抗作用。

目的 探讨circSLCO1B3在三阴乳腺癌（TNBC）脑转移中的作用及其可能的调控机制。方法 采用qRT-PCR实验检测circSLCO1B3在乳腺癌细胞系中的表达。采用过表达质粒上调TNBC子代脑转移细胞231Br中circSLCO1B3的表达，设为ciAG-221使用方法rcSLCOB3-OE组（转染对照质粒的为circCTR-OE组），采用Transwell侵袭实验检测circSLCO1B3对231Br细胞侵袭能力的影响。经小鼠左心室注射231Br细胞，构建体内脑转移模型，检测circSLCO1B3对TNBC脑转移能力的影响。通过Leech H medicinalisCircInteractome及TargetScan在线软件分别预测与circSLCO1B3结合的miRNA及miRNA下游靶基因，并使用双荧光素酶报告基因和qRT-PCR、Western blotting实验验证其调控关系。结果 相对正常乳腺上皮细胞，circSLCO1B3在TNBC细胞系中均显著下调，且在TNBC子代脑转移细胞231Br中下调最为显著（P<0.05）。与circCTR-OE组比较，circSLCOB3-OE组231Br细胞的侵袭能力、脑转移结节数目均显著降低（P均<0.05）。与细胞核比较，circSLCO1B3在细胞质中的相对含量高（P<0.05）。与野生型circSLCO1B3+miR-NC共转染组相比，野生型circSLCO1B3+miR-155组的相对荧光酶活性显著降低（P<0.05）；与circCTR-OE组相比，circSLCO1B3-OE组miR-155的相对表达量显著降低（P<0.05）。与野生型PTEN+miR-NC共转染组相比，野生型PTEN+miR-155组的相对荧光酶活性显著降低（P<0.05）。与转染miR-NC相比，转染miR-155细胞PTEN mRNA的相对表达量显著降低（P<0.05）。与circCTR-OE组比较，circSLCOB3-OE组PTEN mRNA的相对表达量及PTEN蛋白表达显著增加，而与circSLCOB3-OE组比较，circSLCOB3-OE+miR-155组PTEN的表达则显著降低（P均<0.05）。结论 circSLCO1B3通过吸附miR-155，上调PTEN蛋GDC-0068 IC50白的表达，进而抑制TNBC脑转移。