抗大口黑鲈虹彩病毒的中草药筛选及小檗碱的活性研究

大口黑鲈(Micropterus salmoides,Largemouth bass)是我国重要淡水养殖鱼类,其产量以年均9%的速度增长。随着大口黑鲈养殖规模化程度的增加,日益恶化的水体环境导致病害频发,造成重大经济损失。其中,大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)是种苗培育和商品鱼生产中危害最为严重的病原之一,一旦暴发,引起的大口黑鲈死亡率达60%以上。众所周知,免疫防控、药物防控和生态防控是水产养殖病害防控的三大手段,而目前,疫苗研究和应用在我国发展十分缓慢,尤其,LMBV疫苗更是如此,因此,药物防控成为该病害防控最直接、最有效的手段。中草药作为天然产物在自然界中大多易降解、对非靶标生物毒性低、具有抗病毒、抗菌和抗炎等多种药理活性,是抗病毒药物创新的重要药源库。本研究在黄柏、芸香、柴胡等88种中草药的抗LMBV活性筛选的基础上,对具有显著抗病毒活性的黄柏及其活性成分小檗碱(Berberine,BBR)进行了细胞和个体水平的抗LMBV效果评价;进一步采用流式细胞术、透射电镜和Western blot等检测技术初步探究小檗碱的抗病毒机制,以期为开发新型抗LMBV药物提供理论依据。本研究取得结果如下:1.中草药及活性成分抗LMBV活性研究以88种甲醇提取的中草药粗提物为研究对象,黑头软口鲦上皮瘤细胞系(Epithelioma papulosum cyprinid cells,EPC)为细胞筛选模型,通过RT-q PCR检测LMBV的增殖情况,体外筛选出黄柏、五加皮、知母、苍术、牵牛子、车前草、佩兰和芸香8种中草药对LMBV的抑制率超过90%,其中黄柏的抗LMBV活性最佳,抑制率达到99.9%。进一步采用RT-q PCR方法对黄柏主要成分的抗病毒活性分析发现:小檗碱活性最高,抑制率可达99.75%,其次是木兰花碱,抑制率仅34.28%,其中白藓碱、药根碱、吴茱萸碱和吴茱萸次碱对LMBV均无抑制作用;对小檗碱通过RT-q PCR、病毒滴度检测和细胞病变(Cytopathic effect,CPE)观察研究发现:小檗碱可显著降低病毒滴度并抑制LMBV诱导的细胞病变,其半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为11.29μM,表明小檗碱具有良好的体外抗LY2835219体外LMBV活性。2.小檗碱通过线粒体凋亡途径抑制LMBV增殖研究以小檗碱为研究对象,通过细胞荧光染色方法检测其对EPC细胞形态保护效果,发现LMBV感染细胞48h后,细胞大量死亡脱落,细胞膜溶解并伴有细胞核碎裂,而小檗碱处理后与对照组细胞膜形态无明显差异,但仍存在一定的细胞核碎裂现象,表明细胞凋亡在小檗碱抗病毒过程中可能具有重要作用。进一步通过流式细胞术对小檗碱处理的细胞凋亡程度进行检测,发现LMBV感染6 h后小檗碱处理组的细胞凋亡率相对病毒组升高了13.73%,表明小檗碱可以有效诱导LMBV感染EPC细胞的凋亡。利用透射电镜观察EPC细胞内部超微结构发现,小檗碱处理感染细胞6 snail medickh后,细胞内部相对于病毒组出现了明显的细胞凋亡特征,如染色质固缩、细胞骨架崩解、胞膜内陷形成小泡等,表明小檗碱在病毒感染早期诱导细胞凋亡,从而抑制LMBV的增殖。进一步采用RT-q PCR、滴度检测和细胞病变观察验证细胞凋亡对LMBV增殖的影响,发现星形孢菌素(Staurosporine)、依托泊苷(Etoposide)和Z-VAD-FMK均可显著抑制LMBV的增殖并减轻细胞形态的损伤,表明细胞凋亡的调控对LMBV增殖具有重要影响。线粒体膜电位检测结果表明,LMBV感染6 h后,小檗碱处理组EPC细胞的线粒体膜电位相对于病毒组显著降低。进一步通过Western blot检测线粒体凋亡途径关键效应蛋白caspase-9和caspase-3的活化,发现LMBV感染6 h后cleaved caspase-9和cleaved caspase-3表达水平与对照组无显著差异,而小檗碱处理感染细胞后cleaved caspase-9和cleaved caspase-3表达水平显著升高,表明小檗碱降低病毒感染细胞线粒体膜电位,激活线粒体凋亡途径。以上结果表明,小檗碱在LMBV感染过INCB018424分子式程中可能通过线粒体凋亡途径抑制LMBV的增殖。3.小檗碱在体抗LMBV活性研究以大口黑鲈为研究对象,通过注射方式研究LMBV感染量与大口黑鲈累计死亡率的相关性,选择10~3 TCID_(50) LMBV为病毒感染剂量。采用注射给药的方式验证小檗碱在体抗LMBV活性,发现3.93 mg/kg小檗碱治疗后大口黑鲈相对病毒组累计死亡率降低了15%,表明小檗碱可以有效提高LMBV感染后大口黑鲈的存活率。通过RT-q PCR方法检测大口黑鲈肝脏、脾脏和肾脏中LMBV的增殖情况,发现大口黑鲈在LMBV感染1 d和4 d时,小檗碱显著地降低肝脾肾组织中72.13-86.23%的病毒表达量,表明小檗碱可以在病毒感染复制高峰期有效抑制LMBV在大口黑鲈肝脾肾组织中的增殖。同时,小檗碱处理后大口黑鲈的病毒滴度相对于病毒感染组显著降低。以上结果表明,小檗碱有效提高了感染LMBV大口黑鲈的存活率并显著降低鱼体内病毒载量,表现出良好的抗病毒效果。综上所述,本研究发现小檗碱在体外和体内均能有效抑制LMBV增殖,降低感染病毒大口黑鲈的死亡率。同时,小檗碱可能通过线粒体凋亡途径抑制病毒增殖。因此,本研究对中草药抗LMBV活性的研究具有重要意义,为抗LMBV新型药物的研发提供了理论依据。

XFY豚鼠局部封闭涂皮试验

目的评价XFY是否对哺乳动物引起皮肤变态反应及其程度。材料和方法采用Mutation-specific pathology局部封闭涂皮法(BT)进行试验,选用普通级,Hartley豚鼠40只,雄性,体重范围为300 g~400 g,随机分为受试物组20只,阴性对照组用生理盐水10只和阳性对照组1-氯2,4-二硝基苯10只。诱导时受试物浓度为0.8 g/mL、阳性物浓度为0.7%的1-氯2,4-二硝基苯溶液。激发时受试selleckchem物浓度为0.6 g/mL、阳性物浓度为0.5%的1-氯2,4-二硝基苯。各组均给予0.2 mL。在进行诱导试验前24 h将豚鼠背部脊柱左侧的被毛去掉,进行激发试验前24 h将豚鼠背部脊柱右侧的被毛去掉,去毛范围约3 cm×3 cm。诱导接触:受试物组、阴性对照组及阳性对照组分别在去毛区皮肤上涂抹0.2 mL的受试物、生理盐水和1-氯2,4-二硝基苯溶液,用二层纱布和一层玻璃纸覆盖,再用无刺激胶布封闭固定6 h后将涂抹物洗去。第7天和第14天分别以同样方法重复一次诱导;激发接触:末次诱导后14天,受试物组、阴性对照组及阳性对照组分别在去毛区皮肤上涂抹0.2 mL的受试物、生理盐水和1-氯2,4-二硝基苯溶液,用二层纱布和一层玻璃纸覆盖,再用无刺激胶带封闭固定6 h后将敷贴的涂抹物洗去,于24 h和48 h后观察皮肤反应,并对其评分。结果在激发24 h和48 h后观察阴性对照组和受试物组豚鼠皮肤反应均未见红斑和水肿,致敏率均为0;在激发24 h后观察阳性对照组豚鼠皮肤反应出现红斑和水肿,在激发48 h后观察豚鼠皮肤反应仅出现红斑,致敏率均为100%;据致敏强度分级,受试物组及阴MRTX1133 NMR性对照组均为弱致敏性,对照组为极强致敏性。结论在本试验条件下,该XFY对哺乳动物皮肤致敏率为0,未引起皮肤变态反应。

连续负压供水对玉米氮素吸收、叶片硝酸还原酶活性及根际氮素供应的影响

【目的】分析连续负压供水下玉米的氮素吸收和叶片硝酸还原酶活性(NR)及根际土壤碱解氮和脲酶活性的影响,为提高负压供水效率提供理论依据。【方法】连续负压供水田间试验于2019和2020年在黑龙江八一农垦大学试验基地开展,供试玉米品种为‘先玉335’。以常规浇灌为对照(CK),设置3个负压供水压力处理:-5 kPa、-10 kPa、-15 kPa,分析了不同生育时期玉米根、茎、叶、苞叶、穗轴和籽粒氮吸收量、叶片硝态氮含量和NR活性、玉米生物量和产量,同时测定了土壤含水量、根际土壤碱解氮含量和脲酶活性。【结果】在玉米各生育期,-5 kPa处理与CK土壤含水量无显著差异,而-10 kPa和-15 kPa处palliative medical care理显著低于CK;在玉米成熟期,根系、地上部生物量和籽粒产量以-5 kPa处理最高,与CK相比,2019年分别提高了72.67%、24.81%和38.74%,2020年地上部生物量和籽粒产量分别提高了13.30%和16.21%,而-10 kPa和-15 kPa处理显著低于CK。与CK相比,-5 kPaBAY 73-4506处理促进了玉米对氮的吸收和利用,2019年根、茎、叶、穗轴和籽粒氮吸收量比CK分别提高了24.92%、24.86%、32.01%、18.07%和16.77%,2020年分别提高了8.27%、85.01%、30.13%、18.07Belumosudil IC50%和16.77%;而-10 kPa和-15 kPa处理降低了各部位和总氮吸收量。-5 kPa处理较CK显著提高了玉米叶片硝态氮含量和NR活性,而-10 kPa和-15 kPa处理显著降低了抽雄期和成熟期叶片硝态氮含量和NR活性。在-5 kPa处理下,根际土壤碱解氮含量在拔节期至大喇叭口期与CK无显著差异,2019年抽雄期至成熟期显著低于CK 10.08%和20.91%,2020年分别低25.88%和31.93%;而-10 kPa处理,特别是-15 kPa处理均显著高于CK。-5 kPa处理根际土脲酶活性整个玉米生育期均显著低于CK,2019年拔节期、大喇叭口期、抽雄期、成熟期分别降低了14.12%、20.44%、23.59%和15.53%,2020年大喇叭口期、抽雄期和成熟期分别降低了23.12%、32.01%和27.99%,而-10 kPa和-15 kPa处理始终高于或者与CK持平。【结论】连续负压供水-5 kPa可维持整个生育期与常规供水接近的土壤水分,显著提高玉米叶片硝态氮含量和硝酸还原酶活性,促进玉米根、茎、叶、穗轴和籽粒对氮的吸收和利用,提高总氮吸收量,降低根际土碱解氮含量和脲酶活性。而-10 kPa和-15 kPa不能满足玉米的水分供应,不利于玉米的生长和氮素吸收。

青蒿琥酯对微小病变肾病大鼠抗氧化功能的影响

目的 观察青蒿琥酯对阿霉素诱导的微小病变肾病大鼠肾脏组织和血清抗氧化功能的影响,为青蒿琥酯治疗微小病变肾病提供依据。方法 将实验用大鼠随机分成6组,正常组(NC group,n=10),模型组(M grouCD47-mediated endocytosisp,n=9),青蒿琥酯低剂MLN8237体内实验剂量量组(Art-L,n=9)、青蒿琥酯中剂量组(Art-M,n=9)、青蒿琥酯高剂量组(Art-H,n=9),强的松组(prednisone group,n=9)。M组、Art-L组、Art-M组、Art-H组和强的松组均采用一次性尾静脉注射阿霉素7.5 mg/kg,制备MCNS模型。造模3 w后,Art-L组、Art-M组、Art-H组和强的松组分别给灌胃25、50、100 mg/kg青蒿琥酯和6 mg/kg强的松,NC组和M组灌胃等体积的生理盐水,连续灌胃3 w。造模后1、2、4、6 w末检测24 h尿蛋白定量。6 w末腹主动脉采血,采血后分离肾组织,检测各组大鼠血清白蛋白(ALB)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)含量变化;使用试剂盒分别检测血清及肾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)的变化。光镜下观察肾脏组织病理学改变。结果 造模后4、6w,与NC相比,M组大鼠24 h尿蛋E-616452配制白显著增加(P<0.01),6 w后,M组大鼠血清及肾组织MDA含量均增高,SOD、GSH-Px、T-AOC水平均降低(P <0.05~0.01)。造模后4、6 w,与M组相比,Art-M、Art-H组和强的松组24 h尿蛋白定量均明显降低(P<0.01)。6 w后,Art-M、Art-H组和强的松组血清及肾组织中MDA含量均降低,SOD、GSH-Px、T-AOC水平均升高(P <0.05~0.01)。结论 青蒿琥酯有抗氧化作用,可延缓微小病变肾病的发展。[营养学报,2023,45(6):602-605,614]

O-糖基转移酶SlSEC和SlSPY参与番茄低温逆境应答与果实成熟调控的作用及机制

番茄(Solanum lycopersicum)是我国重要的蔬菜经济作物。然而,冬春季节频繁出现的低温冷害极大地限制了番茄植株的生长和果实成熟等生长发育过程,导致产量下降和品质变劣。因此,探究番茄低温抗性和果实成熟的调控机制,对于保障冬春季节番茄优质高产和可持续生产具有重要的意义。研究表明,O-糖基化修饰对维持植物的正常生长至关重要。本文以番茄为研究对象,探究了O-糖基化修饰在番茄逆境响应以及生长发育中的作用,并阐明了O-GlcNAc糖基转移酶SlSEC和O-岩藻糖基转移酶SlSPY在番茄抵御低温胁迫以及果实成熟过程中的调控机制。所得主要结果如下:1.鉴定了O-糖基转移酶SlSEC与SlSPMS-275试剂Y在不同生长发育时期以及在不同非生物胁迫条件下的表达水平以及突变体表型。SlSEC和SlSPY基因在不同组织各时期生长发育过程中的表达水平呈现动态的变化,且参与多种非生物胁迫的响应。此外,slsec1和slspy突变体表现出不同程度的缺陷,与野生型相比,slsec1突变体仅表现出轻微的生长缓慢,而slspy突变体表现出更为明显的生长缓慢和植株矮小。2.明确了SlSEC1通过提高低温负调控因子SlC3H39蛋白的稳定性,负调控番茄的低温抗性。通过酵母双杂交鉴定到SlSEC1与SlC3H39互作。SlC3H39基因在低温胁迫下表达上调,且SlSEC1通过对SlC3H39进行O-GlcNAc修饰提高了SlC3H39蛋白稳定性,进一步促进SlC3H39蛋白在低温下的积累。通过构建过表达等遗传材料,证明了SlC3H39负调控番茄低温抗性,且SlC3H39基因的突变部分VX-661供应商恢复了SlSEC1过表达材料的低温抗性。3.解析了CCCH串联锌指蛋白SlC3H39通过介导m RNA降解负调控低温抗性的机制。通过转录组分析表明,slc3h39突变体中抗性相关基因呈现上调趋势而生长发育相关基因呈现下调趋势。体内瞬时表达以及体外核酸结合试验明确了SlC3H39具有RNA结合能力并参与介导RNA的降解。通过将转录组与RNA免疫共沉淀结果相关联,鉴定到SlC3H39蛋白结合的靶标基因,发现SlC3H39通过结合低温响应基因的3’UTR介导其降解,从而负调控番茄的低温抗性。4.明确了SlSPY正调控番茄果实成熟。通过检测果实成熟指标类胡萝卜素积累和果实软化程度,发现SlSPY基因能够促进番茄果实的成熟进程。然而,SlSPY基因不影响果实中乙烯的合成。利用外源乙烯处理后,发现SlSPY基因促进番茄果实对乙烯的响应,正调控果实成熟。5.解析了SlSPY-SlEIN2模块通过促进乙烯信号转导正调控果实成熟的机制。通过酵母双杂交鉴定到番茄中的O-岩藻糖基转移酶SlSPY与乙烯信号通路中的重要组分SlEIN2互作,通过检测SlSPY过表达材料中SlEIN2蛋白在不同细胞组Biomass pretreatment分中的含量,发现SlSPY可以提高SlEIN2蛋白的稳定性,并促进其在细胞核内的积累,进而促进乙烯信号转导。综上,本文揭示了植物O-糖基转移酶SEC和SPY在逆境响应以及生长发育过程中的作用。鉴定了SlSEC1-SlC3H39通过转录后调控植物低温抗性的机制,并揭示了SlSPY-SlEIN2在果实成熟中的作用及机制,为番茄的生长发育调控以及高产优质生产提供理论支撑。

探索降低PRP中VEGF浓度的方法及不同活化方法制备的PRP在玫瑰痤疮小鼠模型治疗中的疗效对比

【目的】探索降低富血小板血浆(Platelet rich plasma,PRP)中的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的方法,对比不同活化方法制备的PRP治疗玫瑰痤疮小鼠的效果并研究其病理机制。【方法】1、收集健康成年男性全血于含柠檬酸葡萄糖抗凝剂A(Acid-citrate dextrose A,ACD-A)试管中,通过两步离心法制备PRP。使用全自动血液分析仪检测制备的PRP中的血小板数量,通过与全血中血小板数量对比,以确定制备的PRP质量。2、采用冻融活化法制备PRP。离心去掉破碎的血小板及少量的血细胞,取上清液用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测生长因子浓度。将剩下的富血小板血浆释放物通过免疫磁珠法去除VEGF-A,将产物通过ELISA试剂盒检测VEGF-A浓度,与免疫磁珠法处理前做对比。3、贝伐珠单抗去除冻融活化PRP中的VEGF-A,并用ELISA试剂盒检测贝伐珠单抗处理前后PRP中的VEGF-A浓度变化。4、通过ELISA试剂盒检测对比冻融活化的PRP和血浆中的VEGF-A浓度。5、将PRP储存在4℃、24℃及-80℃下。分别于0、3、7天检测VEGF、HGF、PDGF、EGF、FGF等生长因子浓度变化。6、对10%氯化钙(Calcium chloride,Ca Cl_2)活化的PRP、冻融活化的PRP、新鲜的PRP及血浆使用ELISA试剂盒检测血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)、VEGF、表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)、肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)等生长因子水平。7、取20只7周龄BALB/c雌鼠,通过皮内注射LL-37抗菌肽诱导小鼠皮肤产生红斑以制备玫瑰痤疮小鼠模型。采用HE染色及免疫组化检测CD31、F4/80、LY6G、IL17等指标,以评估造模结果。将造模成功的20只玫瑰痤疮模型小鼠通过随机分组分为四组,A组采用钙离子活化的PRP皮内注射治疗,B组采用冻融活化的PRP皮内注获悉更多射治疗,C组采用新鲜的PRP皮内注射治疗,D组采用生理盐水皮内注射作为阴性对照。通过连续的拍照记录,后期采用Imagej计算红斑面积变化并采用HE染色、Masson染色及免疫组化检测CD31、F4/80、LY6G、selleck化学IL17等指标以对比各组的治疗效果。Hepatocyte growth【结果】1、成功制备PRP,通过全自动血液分析仪检测制备的PRP中血小板数量是全血基线的3倍。2、免疫磁珠法去除制备PRP中的VEGF-A后,通过ELISA试剂盒检测发现免疫磁珠法处理前后的PRP中VEGF-A浓度差异不具有显著性(P>0.05)。3、贝伐珠单抗处理PRP前后通过ELISA试剂盒检测的VEGF-A浓度差异不具有显著性(P>0.05)。4、冻融活化的PRP产生的VEGF-A浓度比血浆中的浓度显著降低(P<0.05)5、PRP在不同温度下储存时,其中的各种生长因子随着时间推移浓度出现不一致地变化。6、通过Ca CL2活化的PRP各项检测的生长因子如EGF、FGF、PDGF、VEGF浓度高于其他组。其中HGF在各组中未表现出明显差异。冻融活化的PRP中VEGF浓度低于其他组。7、成功制备玫瑰痤疮小鼠模型,HE染色及免疫组化结果显示红斑处存在大量炎性细胞浸润以及大量异常增生的毛细血管。动物实验:A组小鼠在注射Ca Cl2活化的PRP后红斑面积明显增大并且出现皮肤坏死的症状。B组两次冻融活化的PRP皮内注射治疗后两天内红斑面积较D组(对照组)有所改善。C组治疗后出现了红斑面积反常增大。8、HE染色、免疫组化及Masson染色结果提示:HE染色中冻融活化的PRP组组织结构最接近正常皮肤,新鲜PRP组出现CD31阳性密度增高。CD31在钙离子活化的PRP组与生理盐水组无明显差异,冻融活化的PRP组在注射点中心区域附近表现出较低的阳性密度。F4/80在各组中无明显差异。各组中均能观察到IL37的阳性染色,其中钙离子活化PRP组相对阳性染色面积更高。Ly6G染色结果为无特异性阳性。Masson染色提示钙离子活化的PRP组产生了大量的红染组织,胶原纤维结构破坏,面积减少。冻融活化的PRP组与对照组相比真皮层胶原蛋白增生,皮肤附属器形态正常。新鲜PRP组同样出现大量红染组织,正常皮肤结构破坏,皮肤附属器破坏。【结论】1、钙离子活化的PRP易产生大量生长因子,且高浓度的钙离子可能引起局部皮肤产生严重的炎症反应,不建议在临床治疗中使用钙离子活化PRP。2、冻融活化的PRP可以降低VEGF的释放,有利于减少PRP治疗玫瑰痤疮的异常血管增生。3、PRP中的生长因子浓度随着储存温度、储存时间和活化方法的不同而变化。根据PRP的临床用途,选择适当的储存条件和活化方法可优化其效果。4、新鲜PRP中的VEGF在玫瑰痤疮治疗中有一定促进异常血管增生的作用,加重红斑症状等不良反应。

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建水稻OsABI5突变体

在水稻种植生产上,因其种子经常发芽率不齐,导致水稻直播困难,不仅影响水稻的生产成本还影响其产量,因此水稻直播的突出问题要保持优良的种子萌发力。ABA是种子萌发的抑制因子,它通过诱导ABI5的表达来抑制种子萌发,在种子正常萌发的过程中,随着种子吸胀和GA生物合成,ABA和ABI5的含量都迅速下Cell Cycle抑制剂降,促使种子萌发。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建OsABI5突变体,以期提高种子的萌发率和萌发速度。通过农杆菌介导法将构建好的OsABI5敲除质粒转化‘日本晴’水稻的愈伤组织,经PCR和Western Blot鉴定筛选得到两株OsABI5弱表达的阳性突变株系。通过对Inflammatory biomarkerosabi5-2突变体和‘日点击此处本晴’萌发表型的观察,发现osabi5-2突变体2 d发芽率显著高于‘日本晴’,二者4 d的萌发势也是osabi5-2突变体略高。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了OsABI5突变体,对研究水稻OsABI5调控种子萌发的分子机制具有重要意义。

牛诺如病毒和牛嵴病毒及牛环曲病毒三重RT-PCR检测方法的建立

为了解牛诺如病毒(BNoV)、牛嵴病毒(BKV)和牛环曲病毒(BToV)在国内的流行情况,本研究参考GenBank中登录的BNoV RdRp基因、BKV 3D基因和BToV N基因保守区域,设计3对特异性引物,成功建立了能够同时快速检测BNoV、BKV、BToV的三重RT-PCR方法。该方法特异性较强,仅对BNoV、BKV、BToV扩增出特异性条带,对其他5种常见引发犊牛腹泻的病毒均未扩增出条带;敏感性较高,针对pMD18-T-BNoV、pMD18-T-BKV和pMD18-T-BToV质粒标准品的最低检测限分别为2.73×10Aqueous medium~(4) copies/μL、2.87×10~(4) copies/μL、3.18×10~(3) copies/μL;重复性好,同批次样品的3次检测结果均一致。使用该方法对153份临床样品进行检测,结果显示,BNoV、BKV、BToV的阳性率分别为3-Methyladenine抑制剂11.11%、25.49%、38.56%,3种病毒混合感染率S63845采购为7.18%。与其他学者建立的单一RT-PCR检测方法相比,符合率分别为94.77%、93.46%、91.50%。上述结果表明,本试验建立的三重RT-PCR方法为犊牛上述国内新发病毒快速检测及流行病学调查提供了技术支撑。

3味山姜属中药黄酮类成分对大鼠环核苷酸水平及交感神经-肾上腺轴的影响

目的:观察高良姜、大高良姜、红豆蔻黄酮类成分对胃溃疡寒证大鼠环核苷酸水平及交感神经-肾上腺轴的影响,探讨3味山姜属中药温热药性的物质基础。方法:采用灌服冰知母水煎液与15%冰乙酸制备大鼠胃溃疡寒证模型,以干姜姜辣素为阳性对照,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定腺苷酸环化酶(AC)、磷酸二酯酶2(PDE2)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、促肾上腺皮质激素(AHistone Demethylase抑制剂CTH)、多巴胺β羟化酶(D-β-H)含量。结果:与空白组比较,胃溃疡寒证模型组大鼠胃组织AC、cAMP含量及cAMP/cGMP比值显著降低,PDE2含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,高良姜、大高良姜、红豆蔻高低剂量组大鼠胃组织AC含量升高;高良姜、大高良姜、红豆蔻高低剂量组malaria-HIV coinfection大鼠胃组织PDE2含量显著降低,cAMP含量、cAMP/cGMP比值显著升高(P<0.01或P<0.05)selleck Docetaxel。结论:3味山姜属中药黄酮类成分通过调节胃溃疡寒证大鼠环核苷酸水平从而促进交感神经-肾上腺轴功能活动的作用,也体现出黄酮类成分药性温热。

三叶鬼针草涂抹眼膜抗皱紧致功效评价

本研究考察含三叶鬼针草提取物的眼部产品的安全性与抗皱紧致功效。采用鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAM Test)评估三叶鬼针草提取物和三叶鬼针草涂抹眼膜的刺激性与安全性,CCK8法评估三叶鬼针草提取物的细胞毒性,采用斑马鱼模型评估三叶鬼针草涂抹眼膜的抗皱紧致功效,并采用封闭型斑贴试验和人体功效测试进行三叶鬼针草涂抹眼膜的安全性及抗皱紧致功效评估。结果表明三叶鬼针草提取物对眼部具有无/轻刺激性;角质形成细胞(HaCaT)和成纤维细胞(HSF)活性测定发现10~(-4)~10~(-1) g/L的三叶Nirmatrelvir分子式鬼针草提取物对HaCaT无细胞毒性,10~(-4)~10~(-1) g/L的三叶鬼针草提取物对HSF无细胞毒性;含三county genetics clinic叶鬼针草的涂抹眼膜确认细节可以显著地增加col1a1a、eln1基因相对表达量,对人体皮肤无不良反应,且有显著地降低皱纹面积、提高皮肤弹性紧致度、平滑度的效果,具有显著的抗皱紧致功效。