目的 探索局部枸橼酸钠联合低分子肝素治疗对行连续性肾脏替代治疗(CRRT)危重症患者抗凝效果的影响。方法INCB28060供应商 前瞻性选取2018年4月至2021年4月国药葛洲坝中心医院收治的80例行CRRT危重症患者作为研究对象，根据随机数字表法分为观察组(41例)和对照组(39例)。对照组采用局部枸橼酸钠抗凝，观Dibutyryl-cAMP研究购买察组采用局部枸橼酸钠联合低分子肝素抗凝。比较2组治疗前后凝血功能指标、血清电解质、pH值、血常规指标以及抗凝有效性和血滤器使用寿命。结果 治疗后24 h, 2组活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间均长于治疗前，且观察组均长于对照组[(51.7±4.7)s比(43.3±2.2)s、(18.96±1.24)s比(17.86±0.31)s、(20.5±2.6)s比(18.2±2.2)s](均P<0.05);2组血清氯离子、钙离子、钠离子、钾离子水平均低于治疗前，且观察组均低于对照组(均P<0.05);2组血小板Carcinoma hepatocellular计数、血红蛋白、白细胞计数均低于治疗前(均P<0.05),但组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后24 h,观察组抗凝有效性0级比例高于对照组，Ⅱ、Ⅲ级比例均低于对照组(均P<0.05)。观察组血滤器使用寿命长于对照组[(30±3)h比(28±4)h],但组间比较差异无统计学意义(t=1.918,P=0.059)。结论 局部枸橼酸钠联合低分子肝素用于行CRRT危重症患者中，能够延长血滤器使用寿命，维持机体电解质平衡。
基于羟自由基的生物荧光成像及药物释放
羟自由基(~·OH)具有活性高、寿命短、氧化性强的特点,其浓度波动与多种生理过程以及疾病的发生发展密切相关。利用高灵敏与高选择性的荧光探针分析研究~·OH在不同生理以及病程中的波动变化,对于探究疾病的分子机制与评价可能的治疗手段具有重要意义。为此,本研究首先设计合成了一种新型荧光探针NADHB用于~·OH的成像检测。该探针采用3,5-二羟基苄氧基作为~·OH特异性识别基团,能够与~·OH反应后脱除,从而释放出萘酰亚胺荧光团,导致荧光开启。NADHB具有高特异性、高灵敏度与良好的生物相容性,能够在细胞与活体水平实现~·OH的原位荧光成像。首先,利用NADHB探究了高浓度同型半胱氨酸(Hcy)对于神经细胞的影响以及相应的调控机制。结果显示,Hcy可使细胞内~·OH水平升高,且该过程受到N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和NADPH氧化酶的调控。Hcy激活NMDA受体启动下游信号通路,使NADPH氧化酶催化产生过量O_2~(·-),后者进一步通过Haber–Weiss反应与Fenton反应产生~·OH,导致谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达量降低,表明神经细胞发生铁死亡。此外,构建了高同型半胱氨酸血症小鼠模型,并通过行为学测试证明,高同型半胱氨酸血症诱导小鼠发生阿尔兹海默样痴呆。采用NADHB对小鼠脑内~·OH进行原位荧光成像,结果显示,相较于正常小鼠,高同型半胱氨酸血症小鼠脑内~·OH水平明显升高,而给selleck HPLC予叶酸处理的高同型半胱氨酸血症小鼠脑内~·OH水平明显降低。小鼠脑内的~·OH水平与阿尔兹海默样痴呆的严重程度呈正相关,表明~·OH是高同型半胱氨酸血症诱发阿尔兹海默样痴呆的关键致病因素。利用探针NADHB揭示了~·OH在阿尔兹海默样痴呆病变过程中所起的重要作用及相关的信号转导通路,提供了阿尔兹海默病预防与治疗的新视角。药物的时空可控释放对于提高用药安全性、实现疾病的精准治疗具有重要意义。阿霉素作为经典蒽环类抗肿瘤药物已被应用于临床治疗中,但是严重的心脏毒性限制了阿霉素的临床应用范围。实现阿霉素在肿瘤部位的可控释放将有望降低其心脏毒性,提高用药安全性。另一方面,超声波具有高时空可控、高组织穿透深度以及成本低廉等优点,已被广泛应用于临床诊断与治疗中。超声波可通过超声空化效应产生高浓度~·OH,可作为~·OH的安全来源。3,5-二羟基苄氧基与~·OH之间的特异性识别反应可用于实现~·OH介导的阿霉素可控释放。基于以上,我们将3,5-二羟基苄氧基与阿霉素的氨基相连,构建了超声激活型阿霉素前药DOXDHB。超声产生的~·OH能够与3,5-二羟基苄氧PUN30119说明书基反应使其脱除,从而释放阿霉素,实现抗肿瘤药物阿霉素的超声激活可控释放。研究结果表明,前药DOXDHB的细胞毒性与小鼠心脏毒性显著低于阿霉素,具有良好的生物安全性。DOXDHB可通过超声在肿瘤细胞内可控释放阿霉素,从而发挥抗肿瘤作用。采用~·OH介导的超声激活释放策略,实现了阿霉素的超声可控释放,有效降低其心脏毒性,为设计开发新型的激活释放型前药提供了新的思路。综上所述,基于3,5-二羟基苄氧基与~·OH之间的特异性识别反应,本论文构建了一种检测~·OH的荧光探针以及一种~·OH激活释放型前药。探针NADHB能够实现对细胞以及活体小鼠脑内~·OH的波动变化进行原位成像监测,并揭示了~·OH在高同型半胱氨酸血症诱导小鼠阿尔兹海默样痴呆过程中所起的关键性作用。前药DOXDHB能够被超声产生的~·OH特异性激Shoulder infection活,可控释放抗肿瘤药物阿霉素,在保持阿霉素抗肿瘤作用的同时,有效降低其心脏毒性。上述研究结果为~·OH相关的疾病机制研究以及药物的可控释放提供了新的思路。
白藜芦醇通过调节铁死亡通路抑制小鼠溃疡性结肠炎相关性结肠癌实验研究
目的medicines reconciliation:观察白藜芦醇(Res)是否可通过调节铁死亡通路抑制小鼠溃疡性结肠炎相关性结肠癌(UCACC)。方法:(1)将28只C57BL/6小鼠随机分为Control组、氧化偶氮甲烷(AOM)组、AOM+葡聚糖硫酸钠盐(DSS)组、AOM+DSS+Res组。造模实验周期为70 d。AOM组、AOM+DSS组和AOM+DSS+Res组第1天注射1次AOM。从造模第2周开始AOM+DSS组和AOM+DSS+Res组饮用含DSS水，第3周更换为无菌水，第4周换为含DSS水，以此循环到造模实验周期结束。Control组和AOM组饮用无菌水，AOM+DSS+Res组每周给予Res灌胃。造模结束后处死小鼠，取小鼠结肠组织，HE染色后观察小鼠结肠组织病理改变。分别采用免疫组织化学法(IHC)和Western blot检测小鼠结肠组织谷胱甘肽过氧化物酶4(GPXselleck Vorinostat4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、铁蛋白重链(FTH)、P53蛋白的表达。(2)将人结肠癌HCT 116细胞分为空白对照组及4、8、16μg/ml Res组。用不同浓度(4、8、16μg/ml)Res处理HCT 116细胞。收集处理的细胞后，采用CCK-8实验检测细胞增殖活性，采用Western blot检测细胞GPX4、ACSL4、FTH蛋白的表达。结果:(1)HE染色结果显示小鼠UCACC模型建模成功，Res可明显抑制AOM+DSS诱导的小鼠UCACC形成。IHC染色结果显示，与Control组比较，AOM组FTH蛋白表达下降；AOM+DSS组GPX4和FTH蛋白表达明显上升，ACSL4和P53蛋白表达明显下降(均P<0.05)。与AOM+DSS组比较，AOM+DSS+Res组GPX4和FTH蛋白表达下降，ACSL4和P53蛋白表达明显上升(均P<0.05)。Western blot检测结果显示，与Control组比较，AOM组GPX4、FTH蛋白表达下降，ACSL4表达上升；AOM+DSS组GPX4和FTH蛋白表达上升，ACSL4和P53蛋白表达下降(均P<0.05)。与AOM+DSS组比较，AOM+DSS+Res组GPX4和FTH蛋白表达下降，ACSL4和P53蛋白表达上升(均P<0.05)。(2)CCK-8实验结果显示，8、16μg/ml Res组细胞存活率低于空白对照组(均P<0.05)。Western b此网站lot检测结果显示，与空白对照组比较，4、8、16μg/ml Res组细胞GPX4和FTH蛋白表达下降，ACSL4蛋白表达上升(均P<0.05)。结论:Res可以通过调控细胞铁死亡通路抑制UCACC。
新发脂蛋白脂舫酶基因复合突变（M1?/L279Vfs*3和S63F/I221T）致Ⅰ型高脂蛋自血症的分子机制研究
研究背景:Ⅰ型高脂蛋白血症,也称为家族性乳糜微粒血症综合征(FCS)或家族性脂蛋白脂肪酶(LPL)缺乏症,是一种罕见的常染色体隐性遗传病。Ⅰ型高脂蛋白血症的患病率约为百万分之一,在法protective immunity国、加拿大、非洲等种族群体中,这种疾病的发病率会更高。Ⅰ型高脂蛋白血症的特点是由于乳糜微粒水解受损导致其大量积累,血浆中甘油三酯(TG)水平极高(>880 mg/dL或10 mmol/L)。该疾病的临床特征是反复发作的腹痛和胰腺炎、肝脾肿大、黄色瘤(特别多见于受压部位及伸肌表面)、视网膜质斑,多脂肪饮食可使血循环的乳糜微粒积聚从而使症状、体征加重。临床体征和症状通常出现在新生儿期/婴儿早期,包括发育不良、爆发性黄瘤、肝肿大、视网膜脂血症、严重和反复腹痛。其中,急性胰腺炎是该期最严重的临床表现。研究发现参与调节血浆脂质代谢的五个基因发生突变后会引起高甘油三酯血症,即脂蛋白脂肪酶基因(LPL)、载脂蛋白A-V基因(APOA5)、载脂蛋白C-Ⅱ基因(APOC2)、糖基磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1基因(GPIHBP1)、脂肪酶成熟因子1基因(LMF1)。LPL基因编码脂蛋白脂肪酶,脂蛋白脂肪酶催化富含TG的脂蛋白的水解;APOA5基因编码载脂蛋白A-V,载脂蛋白A-V可稳定脂蛋白-LPL复合物;APOC2基因编码载脂蛋白C-Ⅱ,载脂蛋白C-Ⅱ是LPL发挥作用必不可少的活化剂;GPIHBP1基因编码糖基磷脂酰肌醇锚定的高密度脂蛋白结合蛋白1,该蛋白可以介导LPL跨膜转运和结合;LMF1基因编码脂肪酶成熟因子1,脂肪酶成熟因子1参与LPL的折叠和表达。其中,LPL基因突变引起的高脂血症占所有I型高脂蛋白血症患者中报道的突变的大多数。人类LPL基因在8号染色体的短臂上,长度约30kb,由10个外显子组成,编码含有475个氨基酸的蛋白质LPL。LPL是一种具有甘油三酯脂肪酶活性的酶,它参与富含甘油三酯的脂蛋白颗粒中所含脂质的分配。活化后的LPL是一种非共价二聚体,具有由丝氨酸、天冬氨酸、组氨酸组成的催化三联体。LPL主要在心脏、骨骼肌和脂肪组织中合成,然后转运至血管内皮细胞的表面。细胞分泌后,二聚体的形成是LPL活性的关键步骤。到目前为止,已经报道的LPL基因突变已经超过200种,这些突变主要通过干扰分泌、与肝素结合或酶促活性来影响LPL的活性,但是目前的大多数研究主要通过软件预测基因突变的影响,仅对少数突变进行了导致高脂血症发病的机制评估。研究目的:本研究通过对两个I型高脂蛋白血症家系中先证者及其家系成员LPL基因突变的检测,进而进行体外功能实验探讨脂蛋白脂肪酶缺乏引起I型高脂蛋白血症的潜在分子学机制。研究方法:我们对两个患有I型高脂蛋白血症的家系进行了系统的临床特征和遗传学分析。在禁食过夜的情况下采集所有家系成员的肝素前血浆,然后静脉注射肝素(60IU/kg),10分钟后从对侧手臂采集肝素后血液。所有成员的肝素前血浆外周血标本通过提取基因组DNA进行全外显子基因测序,肝素后血浆用于LPL酶活性分析。将测序结果与基因组序列进行比较、分析,找出突变位点,构建包含LPL基因的野生型及突变型pcDNA3.1(+)质粒。然后,将野生型或突变型LPLpcDNA3.1(+)质粒瞬时转染人胚胎肾HEK-293T细胞进行体外研究:提取细胞裂解物和浓缩细胞培养基后,在细胞裂解物或培养基中分析LPL的产生量和酶活性。研究结果:1、家系资料:先证者1,女性,24岁时因“急性出血性坏死性胰腺炎”住院,在住院期间接受“手术”治疗,术后仍有间歇性腹痛,长期服用“胰酶”等药物治疗。25岁时,该患者初次发现其血清TG水平显著升高(约17 mmol/L),曾多次到多家医院就诊,在诊治过程中服用过多种降脂药物(包括非诺贝特、瑞舒伐他汀、中药等),但服药后TG水平均进一步升高。近年来,该患者停药后其TG 水平始终波动在13.63-33.94 mmol/L,血胆固醇(TC)水平波动在4.92-10.51mmol/L。该患者35岁时因“腹痛”住院,期间被诊断为糖尿病。糖尿病发病初期无明显高血糖症状(口干、烦渴、多尿等),该患者曾口服二甲双胍进行降血糖治疗,空腹血糖维持在5.2～8.9 mmol/L后自行停药。其49岁时出现明显高血糖症状,当时测空腹血糖15.22 mmol/L,口服中药汤剂后出现呕吐、腹泻。体格检查:腹胀,上腹部压痛,无反跳痛或墨菲征,双下肢无水肿。实验室检查:空腹血糖(11.81mmBemcentinib化学结构ol/L)和糖化血红蛋白(11.7%)高于正常参考范围;血尿淀粉酶在正常范围内;中性粒细胞计数(7.28×109/L)和红细胞沉降率(25mm/h)高于正常参考范围;TG(15.66mmol/L)和TC(7.45mmol/L)高于正常参考范围;高密度脂蛋白胆固醇(0.54mmol/L)、低密度脂蛋白胆固醇(0.72mmol/L)和载脂蛋白A(0.94g/L)高于正常参考范围。血管超声:颈动脉和下肢动脉动脉粥样硬化。腹部CT:胰腺形状不规则;肝脏形状和大小正常,实质未见异常密度影;肝内外胆管未见扩张;胆囊形状和大小正常,胆囊未见异常密度影;脾脏形状和大小正常;建议增强扫描(患者拒绝)。先证者1经皮下胰岛素泵降血糖(胰岛素剂量37u/d.kg 49.7 kg)治疗后,空腹和餐前血糖维持在4.7-6.1mmol/L,餐后2h血糖维持在6.4-11.7mmol/L,但 TG(31.85-33.57 mmol/L)和TC(9.18-10.14)水平仍升高。出院后,患者继续应用胰岛素和保肝药物治疗。两个月后,空腹和餐前血糖波动在4.8-6 mmol/L,餐后血糖在8 mmol/L左右,TG降至15.18mmol/L,TC降至5.47mmol/L,期间应用甘精胰岛素(晚上6u)皮下注射和赖脯胰岛素(早3u,中3u,晚3u)三餐前5-10分钟皮下注射控制血糖。此后,一直坚持低脂饮食,逐渐停止应用胰岛素和保肝药。2020年6月末次随访时,TG、TC、空腹血糖分别为15.37mmol/L、9.43mmol/L、6.01mmol/L。家族史:患者父母及姐姐均已去世,无法检测;姐姐曾患有复发性胰腺炎。先证者2在9个月大时因体检发现血样呈严重脂血症来我院就诊。入院第二天测TG 20.35mmol/L,TC 8.89mmol/L,经过低脂饮食和连续静脉输注小剂量胰岛素降低血脂3天后,TG 为 22.77mmol/L,TC 为 7.60mmol/L。7 天后 TG 为 12.32mmol/L,TC 为4.55mmol/L。10天后,TG为10.25mmol/L,TC为4.93mmol/L。先证者血脂明显好转后出院,出院后继续低脂饮食,没有特别不适。2020年6月末次随访,TG为3.35mmol/L,TC为2.72mmol/L,空腹血糖为5.60mmol/L。家族史:父母目前身体均健康。2、全外显子基因测序结果:经过测序和序列比对分析,发现先证者1携带一种新的LPL复合突变(c.3G>C和c.835_836delCT),这可能导致截断突变(p.M1?)和移码突变(p.L279Vfs*3)。其儿子和女儿携带p.M1?突变,但他们的血脂水平和其他表型均正常。先证者2也携带一种LPL的新型复合突变(c.188C>T和c.662T>C),分别导致编码蛋白质的第63个氨基酸从丝氨酸变为苯丙氨酸(p.Ser63Phe)和编码蛋白质的第221个氨基酸从异亮氨酸到苏氨酸(p.Ile221Thr)。先证者2的父母各携带一个突变,根据其父母携带突变情况可推测p.Ser63Phe突变来自父亲,p.Ile221Thr突变来自母亲,但到目前为止父母身体均健康。其他外显子测序未发现突变位点。3、生物信息学分析:四种新发突变所在位置在不同物种中蛋白质序列上的保守性,均为高度保守。致病性分析显示四种新发突变的致病性较强。4、致病机制研究结果:与对照组(1.6889 mU/mL)相比,患者1(0.4207mU/mL)和患者2(0.7213mU/mL)的肝素后LPL活性分别降低了75.09%和57.29%。先证者1的儿子和女儿、先证者2的父母的肝素后LPL活性和对照BAY 73-4506半抑制浓度组之间无显著差异。两种LPL的新型复合变体会引起患者血浆中LPL酶活性的变化,导致甘油三酯代谢缺陷,从而使血清甘油三酯极度升高。为了探索新鉴定的LPL突变在蛋白质水平上的影响,我们将野生型(pcDNA3.1-LPL-WT)和突变型(pcDNA3.1-LPL-MU)质粒瞬时转染到HEK293T/17细胞中。p.M1?转染组、p.L279Vfs*3转染组、p.M1?和p.L279Vfs*3共转染组细胞裂解物中几乎没有发现LPL蛋白质产生。与pcDNA3.1-LPL-WT质粒转染的细胞相比,p.S63F质粒或两种突变质粒(p.S63F和p.I221T)共转染的细胞LPL合成无显著差异,但p.I221T转染的细胞中LPL合成减少了 48.33±1.78%。HEK 293T/17培养基中的LPL活性:野生型LPL质粒转染的细胞培养基作为阳性对照,除了p.L279Vfs*3,转染pcDNA3.1-LPL-MU质粒的细胞培养基中LPL活性显著降低。具体来说,用p.M1?质粒或含两种变体(p.M1?和p.L279Vfs*3)质粒转染的细胞显示LPL酶活性分别减少55.93± 3.28%和59.84±4.47%,而LPL活性在用p.Ser63Phe或含两种变体(Ser63Phe+Ile221Thr)转染的HEK293T/17培养基中分别减少62.76±9.90%和63.25±10.55%。p.Ile221Thr质粒转染的细胞的培养基中显示了LPL活性的最大下降了81.56± 4.35%。结论:通过对两个Ⅰ型高脂蛋白血症家系中先证者及其家系成员LPL基因突变的检测,我们在国际上首次发现了两种新的LPL基因的复合突变(p.M1?/p.L279Vfs*3和p.S63F/p.I221T),两种突变均可导致患者LPL酶活性降低或者LPL蛋白表达量减少,从而导致LPL功能缺陷,引起Ⅰ型高脂蛋白血症。
β-葡聚糖对大肠杆菌攻毒仔猪肠道屏障的保护作用研究
β-葡聚糖(BGL)是由D-葡萄糖单体通过β-糖苷键连接而成的功能性多糖,具有抗炎、降血糖血脂、抗氧化等多种生物学活性。BGL广泛存在于细菌、真菌及谷物细胞壁中。此外,微生物发酵产生的次级代谢物也是BGL的重要来源。Agrobacterium sp.ZX09是一株分离于盐土的耐盐菌,能胞外分泌大量β-(1,3)-葡聚糖。目前有关其生物学活性及在动物生产上的应用却鲜有报道。本试验首先通过IPEC-J2细胞体外培养,研究Agrobacterium sp.ZX09来源的BGL对产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的IPEC-J2细胞损伤的保护效应;在此基础上进一步以ETEC攻毒仔猪为模型,研究BGL对仔猪生长性能、肠道炎症反应及屏障功能的影响,初步揭示其缓解仔猪肠道炎性损伤可能机制。体外试验采用2×2设计,设4个处理组,即:对照组(CON)、BGL组(50μg/m L BGL)、ETEC组(1×10~6CFU/m L ETEC)、EBGL组(50μg/m L BGL+1×10~6CFU/m L ETEC),BGL预处理细胞6 h后利用ETEC攻毒,2 h后收集细胞;体内试验则选取32头21日龄“杜洛克×长白×大白”三元杂交公猪,根据体重分为4组(n=8):对照组(基础饲粮,CON)、ETEC组(基础饲粮+ETEC)、BGL组(基础饲粮+500 mg/kg BGL)、EBGL组(基础饲粮+ETEC+500 mg/kg BGL),试验期28天。试验第26天,攻毒仔猪灌喂100 m L含ETEC的Luria-Bertani(LB)培养基(1×10~(10)CFU/m L),其余仔猪灌服等体积LB培养基。试验第29天早上,所有仔猪灌服D-木糖(0.1 g/kg BW),1小时后屠宰取样用于肠道组织形态、细胞凋亡等分析,结果如下:(1)ETEC攻毒增加IPEC-J2细胞总凋亡率(P<0.05),但BGL预处理可显著降低ETEC诱导的IPEC-J2细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率(P<0.05),下调凋亡关键分子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)和Caspase 9表达水平(P<0.05);此外,BGL显著下调攻毒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及炎症反应关键转录因子Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)基因表达水平(P<0.05)。(2)饲粮添加BGL对未攻毒仔猪平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和主要养分表观消化率无显著影响(P>0.05);ETEC攻毒降低仔猪ADG(P<0.05),但饲粮添加BGL有改善攻毒仔猪ADG的趋势(0.05
结芋期干旱胁迫对芋叶片生理特性及芋子品质产量的影响
【目的】芋是一种江西省优势特色作物，干旱是限制芋种植和芋子品质产量的重要因素之一，研究干旱胁迫对结芋期芋叶片生长生理指标和采收期芋子品质产量的影响，为芋高产优质栽培提供理论依据。【方法】以耐旱性弱芋品种‘赣芋2号’（T22）及其耐旱性强芋突变体‘赣芋4号’（T24）为试验材料，在结芋期对2种芋进行干旱胁迫处理，测定并分析叶片结构相关重要性状指标、细胞膜保护系统重要相关酶和次级代谢物质、根系特征、芋子产量和品质相关性状等。【结果】相较于对照组，处理组的叶片面积、叶片数量、植株高度、叶绿素含量和蜡质含量等重要性状指标均会下降，但仅有叶片表面蜡质含量的下降幅度在两种材料之间具有显著的差异，不同处理组T24的叶片表面蜡质含量、气孔密度大于T22，气孔张开程度小于T22;T24处理组的Mplant bioactivityDA和H2O2含量的上升幅度显著低于T22处理组，但Pro含量的上升幅度和SOD、CAT和GR等酶活性显著高于T22处理组；T24芋子平均单球重、单株芋子平均产量和根数量的下降幅度显著低于T22，但平均根长、根系直径、根长增长幅度高于T22，中度干旱处理提高了两种芋头中的纤维素、可溶性总糖、维生素C和可溶性蛋白质含量，但不同程度的干旱均显著减少了芋头的产量及其淀粉含量。【结论】蜡质含量的增加、气孔形态的改变、SOD、CAT和GR等酶的作用以及发达VEGFR抑制剂的根系均有助于提高突变体T24的耐旱性，Pro可能对T24的抗旱性存在积极作用，干旱胁迫对T22细胞膜的损害程度更大，结芋期干旱胁迫会导致芋减产，但适当的干旱有助E-616452分子式于提高芋头品质，该研究结果可为芋的高产优质栽培、抗旱性资源的筛选及遗传改良提供指导和科学依据。
生长素输入载体编码基因OsAUX1在水稻分蘖发育中的作用机理研究
水稻(Oryza sativa L.)分蘖是重要的农艺性状,是增加穗数提高收成的基础,也是判断稻株发育良好与否的重要标志之一,适当的增加分蘖数可以在一定程度上使水稻单株产量有效提高。影响水稻分蘖的因素很多,不仅受到来自外部的日照条件、营养物质、气候条件和水分等环境因素的影响,也受到植物激素、品种等种子自身根本原因的调控。目前,植物激素在调控水稻分蘖方面的作用,依旧是研究的重点,不断有新的证据指出不同激素在分蘖发育中的作用。其中,生长素是第一个被发现的植物激素,虽然生长素被广泛认为主要是通过植物顶端优势参与了对分蘖的抑制作用,但其具体机制仍旧不明确,缺乏系统及深入的研究。为进一步探索水稻分蘖发育的分子机理,从籼型水稻西大1B甲基磺酸乙酯(EMS)诱变库中,筛选鉴定出一个半矮化多蘖水稻突变体htsd1(high tillering and semi-dwarf 1),通过基因精细定位、表型鉴定、细胞学观察及一系列生物学实验分析,对突变基因在水稻分蘖发育中的作用机理进行了研究。得到主要研究成果如下:1.htsd1是一个半矮化多蘖突变体田间种植条件下,突变体htsd1与野生型相比表现出分蘖显著增多的特点,且htsd1分蘖数在全生育期呈持续增加的趋势。对分蘖芽进行石蜡切片观察,结果表明突变体htsd1并没有形成更多的分蘖芽,但是每一个分蘖芽均长于对应的野生型分蘖芽,证明突变体htsd1分蘖芽生长的抑制作用被解除,从而导致水稻植株分蘖数增多。突变体htsd1还表现出在全生育期植株均矮于野生型,通过统计数据发现,突变体htsd1穗长及各节间长度均显著缩短。石蜡切片及电镜扫描结果证实,突变体htsd1叶鞘细胞的宽度以及茎秆细胞长度和宽度均较之野生型缩短,说明突变体htsd1矮化是由Magnetic biosilica于细胞缩小变短导致的。突变体htsd1单株产量随有效穗增加而显著提高,是一个优良的水稻种质资源。2.HTSD1是一个新的OsAUX1等位突变基因利用丙烯酰胺凝胶电泳及全基因组测序技术对HTSD1Dibutyryl-cAMP采购进行精细定位,发现位于定位区间内注释基因LOCGSK1349572细胞培养＿Os01g63770/OsAUX1的第三外显子上,出现了一个由T到C的碱基替换,造成编码的氨基酸由WT中的酪氨酸(Tyr)变成了htsd1中的组氨酸(His)。进一步利用转基因技术,验证HTSD1是一个新的OsAUX1等位突变基因。通过生物信息学分析,发现水稻与拟南芥中AUX家族基因结构高度保守,且均含有一个Aa＿trans结构域,突变位点发生于该结构域内,这一结果暗示该基因功能的改变可能与该结构域的改变有关。3.OsAUX1在分蘖芽处有较高表达qRT-PCR结果显示,OsAUX1虽然在各处都有表达,但在根部及分蘖芽表达要高于其他部位。OsAUX1自身启动子+GUS转基因植株的GUS检测,同样证实在各植株组织部位能检测到GUS染色。利用原位杂交技术,发现在分蘖芽处OsAUX1表达较高。4.OsAUX1通过激素途径调控水稻分蘖芽生长与WT相比,突变体htsd1根部表现出明显的生长素缺乏所导致的特点。通过生长素处理,发现突变体htsd1需要更高浓度的生长素才能抑制其根部生长,这表明htsd1是一个生长素不敏感突变体。在突变体htsd1中,许多生长素相关基因的表达水平发生改变,外施生长素能抑制其分蘖发生。SL通路相关基因表达水平也发生了改变,且OsAUX1对独角金内酯的人工合成类似物rac-GR24信号和生长素信号有所响应。这些结果暗示,OsAUX1可能通过参与生长素途径,并与独角金内酯途径共同影响水稻分蘖。5.OsAUX1通过生长素作用于TB1调控水稻分蘖qRT-PCR和原位杂交结果发现TB1在水稻突变体htsd1分蘖芽处表达显著下降。利用CRISPR/Cas9技术创制TB1突变体Cas9~(TB1),其分蘖数极显著增多,外施生长素可以抑制其分蘖发生。此外,TB1同样可以响应IAA和rac-GR24,根据以上结果推测OsAUX1可能通过影响生长素作用于TB1,参与到对水稻分蘖调控的通路中。6.OsAUX1是SPL7的靶基因OsAUX1启动子上存在五个-GTAC-位点,是Squamosa启动子结合蛋白(SPL)结合DNA的核心位点。双荧光素酶实验及酵母单杂交实验证明SPL7可以与OsAUX1启动子区域上GTAC序列结合,并激活其表达。在突变体htsd1中,多个SPL家族成员表达水平降低,推测可能存在其他SPL家族成员与SPL7共同作用调控OsAUX1的表达。
抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的应用
目的 探究抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体在类风湿关节炎诊断中的应用价值。方法 选择2019年8月至2021年7月吉安市第一人民医院收治的80例类风湿关节炎患者纳入类风湿关节炎组，另选择同期吉安市第一人民医院收治的40例骨关selleckchem节炎患者纳入骨关节炎组。采集所有参检者的静脉血，应用酶联免疫吸附试验测定抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、抗类风湿关节炎（RA）33抗体、抗MCV抗体，应用速率散射比浊法测定类风湿因子（RF）。对比两组抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗MCV抗体、RF水平；比较两组抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗MCV抗体、RF单项及联合检测的阳性检出率；分析抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗MCV抗体、RF单项及联合检测在类风湿关节炎诊断中的MEM minimum essential medium诊断价值。结果 类风MG132研究购买湿关节炎组抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗MCV抗体、RF水平均高于骨关节炎组，差异有统计学意义（P<0.05）。类风湿关节炎组抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗MCV抗体、RF单项及联合检测的阳性检出率均高于骨关节炎组，差异有统计学意义（P<0.05）。联合检测的灵敏度高于抗CCP抗体、抗RA33抗体、RF单项检测，差异有统计学意义（P<0.05）；联合检测的特异度高于抗CCP抗体单项检测，低于抗RA33抗体及RF单项检测，差异有统计学意义（P<0.05）；联合检测的准确度高于抗CCP抗体、抗RA33抗体单项检测，差异有统计学意义（P<0.05）；抗MCV抗体单项检测与联合检测的灵敏度、特异度及准确度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 抗CCP抗体、抗RA33抗体、抗MCV抗体、RF单项及联合检测均可鉴别诊断类风湿关节炎，但抗MCV抗体的诊断价值与联合检测相当，在疾病判断中可将其作为特异性指标，为诊断类风湿关节炎提供有效参考，为临床进一步诊疗及评估病情等提供更加可靠的依据。
MicroRNA-204/-211敲除加重DMM小鼠骨关节炎滑膜增生和滑膜炎症
目的 观察microRNA-204/-211敲除对内侧半月板失稳术（destabilization of the medial meniscus,DMM）所致骨关节炎（osteoarthritis, OA）小鼠的影响。方法使用12只C57BL/6J(WT)小鼠和12只microRNA-204/-211Hp infection基因敲除（miR-204/-211-dKO）小鼠，WT小鼠随机分为假手术组和DMM组，即寻找更多WT-control组和WT+DMM组；miR-204/-211-dKO小鼠随机分为假手术组和DMM组，即dKO组和dKO+DMM组。WT+DMM组和dKO+DMM组行DMM。Von Frey法测定小鼠对疼痛的敏感性。3个月后取材，膝关节行微计算机断层扫描（Micro-CT）检测、组织染色以及免疫组化分析，RT-qPCR检测DRG组织中相关疼痛和炎症因子。结果与WT-control组小鼠相比，WT+DMM组小鼠出现骨赘形成、软骨下骨硬化、疼痛阈值下降等典型OA症状，软骨中Ⅱ型胶原的表达降低、MMP13的表达升高，GSI-IX体外DRG中炎症因子以及疼痛相关因子的表达明显升高。与此同时，miR-204/-211 dKO+DMM小鼠较WT+DMM小鼠OA症状更加明显，说明miR-204/-211敲除加重了DMM所致小鼠OA。值得注意的是，单纯DMM手术未造成WT小鼠明显的滑膜增生和滑膜炎症，无法完全模拟临床上OA患者的病理特征，而miR-204/-211敲除明显促进DMM小鼠膝关节的滑膜增生和滑膜炎症。结论 miR-204/-211敲除小鼠行DMM手术后，不仅出现典型OA特征，而且出现滑膜增生和滑膜炎症，能更好得模拟临床OA患者的病理特征，可作为新的OA模型和筛选抗OA药物的理想动物模型。
夹脊电针通过抑制Xc~-/GPX4通路促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复
目的：探讨夹脊电针对脊髓损伤大鼠铁死亡的影响，明确电针促进脊髓损伤修复的作用机制。方法：72只大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(SCI)、夹脊电针组(EA)和抑制剂组(Fer-1)4组，每组18只，再将每组按照不同的治疗时间分为3 d组、7 d组与14 d组3个亚组，每亚组各6只。分别治疗3 d、7 d与14 d进行BBB评分、斜板实验，之后对损伤节段脊髓组织进行HE染色、尼氏染色、Western Blot和Elisa检测，观察铁死亡通路相关因子GSH、GPX4的表达情况及神经元数量。结果：与Sham组比较，SCI组3 d、7 d与14 d的BBB评分与斜板角度降低，差异有统计学意义(P<0.01),脊髓前角神经元显著减少，差异有统计学意义(P<0.01),GSH、GPX4表达显著降低，差异有统计学意义(P<0.01);与SCI组比较，EA组3 d、7 d与14 d的BBB评分与斜板角度显著增加，差异有统计学意义(P<0.05),prebiotic chemistry脊髓前角神经元显著增加，差异有统计学意义(P<0.01),GSH表达显著增加，差异有统计学意义(P<0.01),GPX4表达在7 d、14 d显著增加，差异有统计学意义(P<0.01);与SCI组比较，Fer-1组3 d、7 d与14 d的BBB评分与斜板角度显著增加，差异有统计学意义(P<0.05),脊髓前角神经元显著增加，差异有统D-Lin-MC3-DMA MW计学意义(P<0.01),GSH、GPX4表达显著增加，差异有统计学意ICI 46474使用方法义(P<0.01);与Fer-1组比较，EA组BBB评分与斜板角度在14 d显著增加，差异有统计学意义(P<0.05),脊髓前角神经元无明显改变，差异无统计学意义(P>0.05),GSH、GPX4表达无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：脊髓损伤后铁死亡加剧，电针治疗能够有效抑制Xc~-/GPX4通路促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。