PI3K抑制剂

研究背景和意义视网膜是代谢高度活跃的组织,需要消耗大量的氧气和营养。这些氧气和营养由血管负责输送,因此,血管系统的正常发育对于构建具有视觉功能PUN30119体外的神经视网膜至关重要。视网膜血管网络的形成受到机体精细的调节,需要不同类型的细胞相互作用,其中,星形胶质细胞扮演着举足轻重的角色。血管内皮细胞在多种因子和信号途径的刺激下增殖并形成血管,这一过程在生理、病理条件下都十分重要。异常的血管生成会破坏氧气和营养的输送,导致代谢失衡以及神经视网膜功能损害,与多种视网膜新生血管性眼病有关,如早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)、增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)等。与视网膜内正常的血管不同,这些异常的新生血管不仅更加脆弱,也更容易出血、引起渗漏。在这类眼部疾病中,血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)水平会大幅度升高。既往研究证实,VEGFA是生理和病理状态下血管生成过程中的关键调节因子,而星形胶质细胞是视网膜生理、病理条件下VEGFA的主要来源。目前,以VEGFA为靶标的药物玻璃体腔注射已成为临床治疗上述视网膜新生血管性眼病的常用手段和一线疗法,并且取得了不错的治疗效果。然而,多次注射带来的经济压力、可能的严重并发症以及部分患者的低反应性也不容忽视。因此,了解视网膜生理和病理情况下血管的形成过程、寻找更佳的替代治疗策略仍是目前眼科学研究中的重要基础和临床课题。Irisin是2012年在骨骼肌细胞中被发现的一种肌动因子,在骨骼、脂肪等组织中通过与整合素受体结合发挥作用。早期研究发现,irisin具有诱导白色脂肪组织褐变以及调节能量、葡萄糖和脂肪酸等代谢的功能。随着研究的不断深入,irisin被发现在不同系统和脏器均有表达,并且在肝、肺、心脏、肠道等脏器缺血再灌注损伤时能发挥保护作用,主要通过减少氧化应激、抑制细胞凋亡、减轻炎症、维持内皮细胞间屏障等。而ROP、PDR等也被认为是由缺血引发视网膜内一系列反应,最终导致血管新生的一类眼病。近期研究中发现,PDR患者的玻璃体液和血清中irisin含量明显比非增殖性糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)患者Preformed Metal Crown和对照组低,提示irisin在视网膜病理性血管生成过程中可能有着一定的作用。然而,irisin在正常血管形成过程中是否有表达,血管生成异常时表达是否会发生变化,在病理性血管生成过程中有什么作用都尚不清楚,需要我们进行进一步的探索和明确。立足文献综述和调研,结合前期的工作基础,本课题从体内体外、动物细胞层面,采用视网膜铺片、免疫印迹、q RT-PCR、冰冻切片、免疫荧光等技术,选取不同天龄小鼠,构建氧诱导视网膜病变(oxygen induced retinopathy,OIR)和新生氧诱导视网膜病变(neonatal oxygen induced retinopathy,NOIR)两种小鼠模型,在观察视网膜血管发育过程和该过程中irisin表达变化的基础上,探究irisin在视网膜病理性新生血管形成过程中的变化、作用及机制,以期为视网膜新生血管性眼病的基础研究以及临床治疗提供新思路和可能的干预策略。目的:观察视网膜血管的发育过程以及该过程中irisin的表达变化,明确irisin在小鼠氧诱导视网膜病变中的表达和作用,探究irisin在病理性血管新生过程中的作用机制。方法:一、动物实验1.取出生后(postnatal,P)1、4、7、12、14、17天的C57BL/6小鼠,视网膜铺片观察血管和其生长骨架星形胶质细胞离心状迁移的变化;同样天龄的小鼠,做眼球冰冻切片,荧光染色观察血管在视网膜不同层间的生长情况。2.提取P1、P4、P7、P12、P14、P17的C57BL/6小鼠视网膜蛋白,western blot检测irisin的表达,并通过冰冻切片荧光染色观察其定位。3.建立C57BL/6小鼠OIR模型,western blot检测OIR小鼠模型P14、P17时视网膜中irisin和VEGFA表达变化,免疫荧光染色观察相应时间点irisin和VEGFA的定位。4.给OIR小鼠外源性补充irisin蛋白,P17时视网膜铺片IB4、CD31染色观察视网膜病理性血管新生情况;提取相应时间点的视网膜蛋白,western blot检测细胞增殖标志蛋白PCNA和VEGFA蛋白表达;视网膜冰冻切片,TUNEL染色观察细胞凋亡;提取相应时间点视网膜总RNA,检测血管和炎症相关因子TNF-α、IL-1β和MCP-1基因表达。5.建立C57BL/6小鼠NOIR模型,外源性补充irisin蛋白,P7时视网膜铺片IB4、PDGFRα染色观察视网膜血管和星形胶质细胞迁移情况,免疫荧光染色观察细胞增殖标志蛋白PH3表达,western blot检测PDGFRα、VEGFA蛋白表达。二、细胞实验1.原代培养视网膜星形胶质细胞,诱导化学缺氧损伤模型。ELISA检测缺氧损伤后培养基中VEGFA含量,q RT-PCR、western blot检测细胞中VEGFA表达。2.在缺氧损伤的星形胶质细胞中加入irisin作用24小时,ELISA检测培养基中VEGFA含量,q RT-PCR、western blot检测细胞中VEGFA表达。3.收集各组星形胶质细胞条件培养基,与新鲜培养基1:1混合后,用来处理人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells 1,HMECs-1),transwell、管腔形成实验观察各组星形胶质细胞条件培养基对HMECs-1迁移、血管生成能力的影响。4.在缺氧损伤的星形胶质细胞中分别加入PBS(溶剂)、irisin、irisin+整合素抑制剂、整合素抑制剂,ELISA检测培养基中VEGFA含量,western blot检测星形胶质细胞中VEGFA、HIF-1α和HIF-2α的蛋白表达。结果:一、动物实验1.在小鼠视网膜发育过程中,血管的发生开始于星形胶质细胞进入视网膜之后,从中心向周边视网膜迁移,在P7时几乎铺满视网膜。此时,形成的浅层血管丛分布于神经纤维层。Irisin的表达自出生后逐渐增多,在P7前仅定位于神经纤维层,在P14时表达量达峰值。2.P14、P17时OIR小鼠视网膜内irisin m RNA和蛋白水平与常氧组相比显著下降,VEGFA m RNA和蛋白水平与常氧组相比明显增多。3.外源性补充irisin蛋白,显著减少OIR小鼠视网膜新生血管区和无血管区面积。此外,irisin还可以抑制OIR小鼠视网膜神经元细胞凋亡,下调TNF-α、IL-1β和MCP-1基因表达;OIR小鼠视网膜中PCNA、VEGFA蛋白表达较对照生理盐水组显著下降。4.外源性补充irisin蛋白能显著减少NOIR小鼠视网膜血管Y-27632试剂化面积和单位面积内皮细胞增殖数目,降低血管密度和长度。二、细胞实验1.体外培养的视网膜星形胶质细胞化学缺氧损伤后,培养基中VEGFA含量显著升高,细胞中VEGFA m RNA和蛋白表达水平上调。2.Irisin抑制缺氧导致的视网膜星形胶质细胞VEGFA上调;同时,irisin处理后的星形胶质细胞条件培养基,相比对照组星形胶质细胞条件培养基,显著抑制HMECs-1的迁移和管腔形成,并且这一抑制作用可以被外源性补充VEGFA部分逆转。3.整合素抑制剂可以抑制irisin导致的视网膜星形胶质细胞中VEGFA、HIF-1α和HIF-2α蛋白水平下降。结论:本研究首次观察了irisin在小鼠视网膜血管发育过程中的表达及在OIR中的变化,证实irisin可以通过抑制星形胶质细胞VEGFA表达减轻小鼠视网膜病理性新生血管形成。在体实验检测了视网膜血管发育过程和OIR中irisin的变化,通过OIR和NOIR小鼠模型明确了irisin对病理性血管新生的负性调控作用,并且该作用可能与星形胶质细胞有关。继而,通过体外实验培养视网膜星形胶质细胞,重点观察irisin对缺氧损伤的视网膜星形胶质细胞VEGFA表达的影响,提出irisin通过整合素受体抑制HIF-1α、HIF-2α,下调VEGFA水平,从而抑制血管内皮细胞迁移和管腔形成。本研究不仅首次揭示了视网膜血管正常发育和异常生长时irisin的变化,而且探索了irisin在氧诱导视网膜病变中的作用和机制,深化了对irisin的分子功能以及视网膜新生血管性眼病的认识,并将为拓展此类疾病的临床治疗提供新思路和实验依据。

目的：探究急性脑梗死（ACI）患者CXC基序趋化因子配体12(CXCL12)、调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子（RANTES）、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的动态表达及与神经功能缺损程度和预后的相关性。方法：选取2021年7月—2022年7月赣州市第三人民医院收治的80例ACI患者作为ACI组，另选取同期脑神经功能正常VX-765溶解度的80例志愿者作为对照组。比较ACI组与对照组、不同神经功能缺损程度及预后情况患者的CXCL12、RANTES、MIP-1α水平；分析上述血清指标与神点击此处经功能缺损程度的相关性；绘制受试者操作特征（ROC）曲线分析各血清指标对ACI患者预后不良的预测价值。结果：ACI组CXCL12、RANTES、MIP-1α水平均高于对照组（P<0.05）。重度缺损组血清CXCL12、RANTES、MIP-1α水平高于轻、中度缺损组，且中度缺损组均高于轻度缺损组（P<0.05）。预后不良组血清CXCL12、RANTES、MIP-1α水平均高于预后良好组（P<0.05）。Kendall的tau-b相关性分析显示，ACI患者血清CXCL12、RAoral anticancer medicationNTES、MIP-1α水平与神经功能缺损程度均呈正相关（τ=0.566、0.678、0.752,P<0.001）。ROC曲线显示，血清CXCL12、RANTES、MIP-1α水平单一及联合检测预测ACI患者预后不良的曲线下面积（AUC）均>0.8，联合检测的价值更高。结论：ACI患者血清CXCL12、RANTES、MIP-1α水平均呈高表达，且水平越高，患者的神经功能缺损越严重、预后不良风险越高。

[目的]通过不同浓度白芨多糖干预内毒素激活后的小鼠RAW264.7巨噬细胞株，明确白芨多糖在细胞模型中对巨噬细胞TLR4信号通路中相关分子的干预作用。[方法]采用CCK-8法测定不同浓度白芨多糖溶液对Raw264.7巨噬细胞株的最大无毒浓度；采用ELISA法检测正常对照组，内毒素组，高、中、低浓度白芨多糖组，美沙拉嗪组促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-17的表达水平；采用RErastin抑制剂eal-time PCR法和Western blot法检测各组TLR4、MyD88、IRAK1、IKK-β、IRF3、IκB-α、NF-κB的mRNA和蛋白的表达情况。采用免疫荧光法检测各组TLR4和NF-κB的表达情况。[结果]内毒素组的各促炎细胞因子相较于正常对照组的促炎细胞因子明显升高，具有显著差异(P<0.05或0.01)。而白芨多糖作用于内毒素组巨噬细胞后，其促炎细胞因子、TLR4的mRNA表达量和蛋白含量及TLR4介导的下游MyD88,IKK-β,IκB-α和NF-κB分子mRNA表达量和蛋白含量均显著下降(P<0.05或0.01GSK1120212半抑制浓度)。[结论]白芨多pathologic Q wave糖可通过拮抗内毒素诱导的巨噬细胞TLR4/NF-κB通路的活化，而影响促炎细胞因子的表达。

中药质量是中医药临床疗效的根本保证,中药质量控制也一直是中药现代化、国际化的关键问题之一。现行的中药质控标准虽然已经逐渐由无指标、单一指标成分向多指标成分过渡,但是指标成分与临床疗效关联不强、难以真正反映内在质量一直都是掣肘中药质量控制的关键瓶颈问题。在此背景下,生物活性评价指标和方法因具有关联药效的优势和特色而被引入,生物质控已经逐渐成为中药质量标准化的重要方向。但目前的生物质控研究仍存在部分中药采用的生物活性指标与临床应用脱节、单一生物活性指标难以代表具多功用特点中药整体质量的问题。柴胡是临床常用中药,始载于《神农本草经》,位列上品,功效为解表退热、疏肝解郁、升举阳气。《中国药典》2020版中收录了伞形科柴胡Bupleurum chinense DC.(北柴胡)和狭叶柴胡B.scorzonerifolium Willd.(南柴胡或红柴胡)两个品种,对北柴胡作了化学质控规定(柴胡皂苷a和d的总含量≥0.30%),对南柴胡仅作了性状上的描述而没有定性、定量鉴别标准。本研究聚焦于MLN4924体内实验剂量柴胡治疗外感发热的临床应用,从抗巨噬细胞活化、抗肥大细胞活化、抗氧化应激及解热这四类与此疗效相关的体外模型中寻找评价柴胡质量的可靠灵敏指标,以综合评估其解表退热作用的优劣与强弱。通过对12项生物指标的遴选,最终LPS诱导RAW264.7巨噬细胞生成NO、总抗氧化能力、LPS刺激小鼠全血细胞生成TNF-α以及体外凝集素/替代途径补体活化四项指标入围,以进行柴胡解表退热质量的生物评价。考虑到柴胡之解表功效以退热为主要特征,本论文赋予了与发热直接相关的全血细胞TNF-α生成(0.5)及补体活化(0.2)这两项指标共占比0.7的权重;而LPS诱导RAW264.7巨噬细胞生成NO与总抗氧化能力这两项指标的权重占比分别为0.2和0.1,初步建立了关联解表退热功效的柴胡质量生物评价方法。采用此评价模式,我们对6个不同种质柴胡样品(1#～6#)进行了评估,综合得分从高到低依次为6#>3#>1#>5#>4#>2#。由此,我们选择得分排名第一的6#(陕西北柴胡)作为柴胡退热机制的研究对象。早在《神农本草经》中即称柴胡“(主)寒热邪气”,如果能阐明柴胡在感染性发热中的主要作用机制,对完善其解表退热的生物评价及明确其物质基础均有决定性意义。本研究采用临床煎药方式制备了 6#柴胡的水提醇沉(滤液部分)物(XBCE),对其解热作用特点及机制展开了研究。结果显示,在LPS(i.v)诱导的发热大鼠模型上,XBCE(i.g.)展现出了明确而温和的退热效果。我们进一步围绕发热的外周机制展开了研究,结果表明:XBCE对外周三种内生致热原中的TNF-α有确切的压制作用,具体表现为它不仅能显著抑制LPS刺激的大鼠全血细胞和单核细胞THP-1分泌致热因子TNF-α(体外),还能明显降低内毒素血症大、小鼠血清TNF-α的水平(体内);同时XBCE还可有效抑制LPS诱导的补体活化(体外与体内),此作用也助益于其对TNF-α的压制。在明确了柴胡外周退热机制(抑制外周TNF-α)的基础上,本论文对富含皂苷的北柴胡提取物(SRBC)进行了与退热作用相关的研究。结果显示,SRBC也能显著降低内毒素血症小鼠血清TNF-α水平,并缓解LPS诱导的大鼠发热,甚至展现出优于XBCE的解热作用。为了明确两个药典质控物(柴胡皂苷a和d)在其中的贡献,本研究将二者按它们在提取物中的比例进行混合,获得两个标准品的混合物(MAD)。意外地,MAD既不能抑制LPS诱导的THP-1细胞生成TNF-α,也不能降低内毒素血症小鼠血清中TNF-α的水平。这些结果提示SRBC的提取方式可能更有利于富集柴胡的解热物质,但柴胡皂苷a和d却可能不是其退热物质基础。基于柴胡的退热外周机制,结合单核细胞是全血细胞中分泌TNF-α的主要贡献者,本文将之前初步建立的关联其解表退热功效的生物评价方法做了进一步优化:1)采用人单核细胞株THP-1代替全血细胞来评价柴胡对内生致热原TNF-a的作用;2)将体外补体活化指标聚焦为替代途径补体活化模型。随后,我们利用此优化方法评价了 7个新的柴胡样品(4个北柴胡B-1#～B-4#和3个南柴胡N-5#～N-7#)在解表退热上的质量优劣,综合评分为B-1#>N-6#>N-7#>N-5#>B-3#>B-4#>B-2#。除了排名第一的B-1#正是之前选用的6#陕西北柴胡之外,其余3个南柴胡的表现均优于另外3个北柴胡mucosal immune(柴胡皂苷a和d均高于药典限量标准,且远高于南柴购买Y-27632胡中的含量)。相关性分析表明,7个样品中柴胡皂苷a和d的总含量与生物评价得分不相关(P>0.05),同样提示柴胡皂苷a和d应该不是柴胡的退热物质基础。综上,本研究从解表退热功效所涉病理生理与柴胡体外作用的实际所能出发,首次建立了以多个活性指标组成的柴胡质量生物评价模式和方法,并从6个不同种质柴胡的提取物中选取排名第一的陕西北柴胡开展了其解热作用特点及机制研究。当明确其退热的外周机制后,对之前的生物评价方法进行了优化,并对7个不同产地南北柴胡提取物的解表退热质量进行了评估。从7个样品在该方法中的综合得分与其柴胡皂苷a和d含量无相关性、以及MAD在体内外并不能抑制TNF-α的结果来看,柴胡皂苷a和d可能不是柴胡退热的物质基础。本研究在柴胡质量的生物评价与控制方面开展了有益的探索,可为其他中药质量的生物控制研究提供有价值的借鉴。

近年来我国大球盖菇产业迅速发展,产量逐年上升,呈现出良好的市场前景。作为一种新兴食用菌,大球盖菇主要用于鲜食或制成干菇,产品形式单一,公众对其认知度仍然较低。新鲜大球盖菇水分含量高、呼吸作用强,不耐贮藏,不便异地运PI3K/Akt/mTOR抑制剂输,这也限制了其市场的推广,降低了经济价值。大球盖菇主要由菌盖和菌柄组成,其菌盖肥美色艳、滋味鲜美,适宜直接烹饪处理;而菌柄色白粗壮,味道相对较淡、口感相对不足,适宜切片加工,以提升口感和附加值。在日常生活中,油炸类食品具有良好的市场竞争力,可为新产品的研发提供可靠的参考方向。基于以上几点Compound 3生产商,本课题以新鲜大球盖菇为原料,采用其菌柄研发了一款新型的油炸大球盖菇产品,深入研究了其加工过程中品质和挥发性风味物质的变化规律,并进一步探究了其贮藏期的品质变化规律,明确了货架期。主要研究内容和结果如下:(1)面糊是许多油炸食品的重要组成部分,对油炸食品的色泽、风味和口感具有重要影响。本课题通过混料设计和响应面模型的构建,结合熵权模糊数学感官评价方法,优化了油炸大球盖菇的面糊组成。结果表明,油炸大球盖菇面糊中四种淀粉或面粉的最佳配比为玉米淀粉:木薯淀粉:红薯淀粉:小麦面粉=30:14:29:27。在此基础上,固定面糊中添加0.4%的碳酸氢钠,研究得到葡萄糖酸–内酯、酒石酸和磷酸二氢钠这三种酸性膨松剂的最适添加量分别为0.21%、0.10%和0.17%。通过验证,发现这两个模型的相对误差均较小,模型可靠,说明该油炸大球盖菇的加工工艺具有可行性。(2)油炸大球盖菇主要由大球盖菇菌柄和面糊组成。在加工工艺研究的基础上,本课题以鲜菌柄和鲜面糊为对照,系统研究了该产品在加工过程中(预炸、复炸)的品质变化规律。结果表明,菌柄经过油炸后微观结构逐渐坍塌、边缘卷曲,其硬度、内聚性、胶粘性、咀嚼性和回复性等质构特性均显著降低,并且水分含量显著降低,而灰分、蛋白质、脂肪、碳水化合物含量和总能量均显著提高。面糊经过油炸后,其微观结构从颗粒分明状态逐渐变成具有坚硬质感的块状物,其他成分(水分、灰分、脂肪、碳水化合物、总能量)的变化趋势和菌柄基本一致。油炸大球盖菇加工过程中共检出17种游离氨基酸,包括7种必需氨基酸和10种非必需氨基酸。在各加工过程的样品中,菌柄均以甜味氨基酸为主,而面糊以甜味氨基酸和苦味氨基酸为主。此外,菌柄和面糊中游离氨基酸的滋味活性值、核苷酸含量以及等鲜浓度值均较低。油炸处理会在一定程度上导致菌柄和面糊中水解氨基酸的损失,但就营养评价来说,菌柄和面糊在加工过程中的E/T值(必需氨基酸与非必需氨基酸含量的百分比)均在30%左右,与FAO/WHO的标准蛋白模式的E/T值(36.35%)较接近,说明油炸大球盖菇在一定程度上可作为优质的蛋白来源。通过相关性分析可知,水分含量与灰分含量、脂肪含量呈显著负相关,与蛋白质含量的负相关性较大但不具有显著性(r=-0.78)。此外,水分含量对游离氨基酸的含量具有较大影响(r=0.71),但对水解氨基酸的含量影响较小(r=0.17),但均无显著性。(3)从油炸大球盖菇的菌柄和完整产品(菌柄+面糊)角度,采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱以及电子鼻技术,定性定量分析了油炸大球盖菇加工过程中挥发性风味物质的组成及变化规律。结果表明,油炸大球盖菇加工过程中共鉴定出166种挥发性风味物质。通过计算相对含量和气味活度值,发现未油炸样品的挥发性风味物质以genetic absence epilepsy醇类和酯类为主,风味贡献最大的物质是1-辛烯-3-酮;油炸后的样品醛类含量占比最大,(E)-2-壬烯醛是风味贡献最大的化合物。电子鼻可有效区分油炸前和油炸后样品的挥发性风味物质,其传感器响应值的表现与气相色谱-质谱的检测结果较一致。(4)研究了经过预炸定型的油炸大球盖菇半成品在贮藏期间的品质变化规律,明确了其在不同温度下(4℃、0℃、-3℃和-18℃)的货架期。结果表明,油炸大球盖菇初始的酸价、过氧化值和丙二醛含量均较低,安全性良好,并且在4℃、0℃和-3℃的贮藏条件下,即使抵达腐败点,均未超过国家标准规定的上限。随着贮藏时间的延长,油炸大球盖菇的黄度值b*和感官评分逐渐降低,且越接近腐败点,两者降低的速度越快。相关性分析表明,在各贮藏温度下,油炸大球盖菇的菌落总数、酸价和丙二醛含量均与感官综合评分呈极显著的负相关。以菌落总数为基准,通过实际检测或构建货架期模型,得到油炸大球盖菇在4℃、0℃、-3℃和-18℃中的贮藏期分别为20天、36天、58天和345天。

盐胁迫是影响大豆生长发育和产量的重要环境因素之一。NAC转录因子家族是植物响应盐胁迫的重要基因家族，但在大豆中其功能尚未被完全解析。为了挖掘控制大豆耐盐的新基因，本研究首先selleck利用全基因组分析和聚类分析，并结合盐胁迫下大豆植株的转录组数据，对大豆受盐胁迫诱导表达的NAC基因进行分析；其次，对在根中受盐胁迫诱导表达的NAC基因进行单倍型、耐盐指数和核酸多态性分析。结果显示：在大豆基因组中共鉴定出182个NAC基因，将其分成7个亚家族；18个NAC基因受盐胁迫诱导显著上调表达，其中有8个在根中表达水平较高，可能参与响应盐胁迫。我们鉴定到NAC23的一个优异单CCRG 81045细胞培养倍型Hap1,能够显著促进大豆对盐胁迫的耐性。同时，发现NAC23的Hap1单tunable biosensors倍型在栽培大豆品种中受到了强烈的人工选择。以上研究结果为更加深入地解析NAC家族基因与大豆耐盐性之间的关系提供了新的见解，为培育高效抗逆大豆新品种提供基因资源和新的思路。

目的 ：分析、评价孕期抑郁症的非药物干预效果，以期为改善孕期抑郁症护理实践提供参考依据。方法 ：检索中英文数据库中符合纳入标准的随机对照试验并溯源。检索时间为从建库至2023年9月。由2名课题组成员筛查文献、评价文献质量、提取相关数据selleck合成后，采用Stata 17.0和ReviewManager 5.3软件进行网状Meta分析。结果 ：共纳入34项研究，包含9种干预方式。网状Meta分析结果显示，与常规护理组相比，运动干预[SMD=-7.07,95%CI(-9.55,-4.60),P<0.001]、认知行为干预[SMD=-5.71,95%CI(-8.Fluorescent bioassay55,-2.87),P<0.001]、同伴支持干预[SMD=-5.31,95%CI(-11.64,-0.84),P<0.001]、音乐干预[SMD=-4.86,95%CI(-7.20,-2.52),P<0.001]对孕期抑郁症具有较好的效果。运动干预的SUCRA概率值最大，为91.7。结论 ：孕期抑郁症的最佳非药物干预方式为运动干预。在孕妇无运动禁忌证的情况下，推荐医护人员将运动作为干预孕期抑郁症的首选方案。医护人员须加强孕期运动的专业理论知识，根据不同孕期女性的身心特点，制定个性化的运动方案。结合多DS-3201化学结构种干预措施构建综合性干预方案效果可能更佳，但仍需要进一步补充验证。

研究背景:衰老不可避免,在个体衰老过程中,身体功能随着时间的推移而逐渐退化,人类的正常衰老与生理过程和解剖结构的稳定性丧失有关,并最终导致身体状态减退和死亡率增加。研究发现,衰老与组织中体细胞突变数量的累积有关。细胞复制在个体进程中广泛存在,个体造血干/祖细胞(Hemopoietic stem and progenitorcells,HSPCs)在复制过程中会出现突变,而这种突变的数量会随着年龄的增长而逐渐积累。其中一些基因突变可促进特定体细胞的克隆性竞争优势和扩张,当这些突变的变异等位基因频率(Variant allele frequency,VAF)≥2%且无严重的细胞减少症或其他血液学疾病时,即被定义为不确定潜能的克隆性造血(Clonal hematopoiesis of indefinite potential,CHIP)。CHIP相关基因如DNMT3a、TET2,均可编码调节DNA甲基化的酶,并在细胞分裂中发挥重要作用。因此,CHIP相关基因突变(以下简称为CHIP突变)会通过干扰DNA甲基化和相关蛋白质的合成过程来扰乱体细胞功能,这些突变的存在往往提示患者预后较差。虽然CHIP与突变相关,具有潜在的恶性转化的风险,但是由于细胞的恶性病变是一个漫长的过程,CHIP向恶性疾病转化需要较长的时间。所以,在大多数CHIP的携带者中,该状态对于机体的主要影响在于所引起的并发症。最近的研究表明,二代测序(Nextgeneration sequencing,NGS)检测到的突变谱证实了DNMT3a、ASXL-1、JAK2、TP53和TET2基因是CHIP最常见的突变基因,这些基因大多参与DNA甲基化和体细胞的增殖过程。急性髓系白血病(Acutemyeloidleukemia,AML)是HSPCs异常克隆性增殖导致的血液系统恶性肿瘤,临床表现及预后具有高度异质性,基因突变是导致其异质性的重要原因。CHIP突变在AML中也经常出现,例如DNMT3a、ASXL-1、JAK2均与AML的不良更多预后相关。目前AML患者常用的治疗方式包括靶向治疗、免疫治疗、化疗、造血干细胞移植等,其中化疗仍然是最主要的治疗方式。化疗药物尤其是蒽环类药物,可导致严重的心脏相关毒性,包括心肌损伤、射血分数下降等,其中心肌损伤也是抗肿瘤治疗较常见的心血管相关并发症。CHIP与心血管疾病也有较强联系,例如,CHIP可显著增加机体的炎症水平,在内皮损伤中发挥重要作用,还可以增加患者的冠状动脉钙化程度,加剧动脉粥样硬化斑块的进展,对于心力衰竭、主动脉瓣狭窄等疾病均密切相关,严重影响患者预后。综上所述,CHIP突变及AML的化疗均与心血管疾病有一定联系,因此我们提出假设:携带CHIP突变的AML患者在化疗过程中更容易导致心血管危险性增加,为了验证该假设,我们进行了本研究。研究目的:(1)探讨CHIP突变对于AML患者化疗期间心血管风险的预测作用;(2)明确合并CHIP突变AML患者化疗期间心血管风险的表现形式。研究方法:回顾性纳入2020年1月—2020年12月于山东大学齐鲁医院血液内科收治的定期接受化疗的AML患者,并在此期间至少有三次因本病住院化疗经历,根据CHIP突变的有无将患者分为两组,即CHIP组和对照组。采用倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM),按1:1 比例匹配CHIP组和对照组。最终统计入组AML患者CHIP组49例,对照组49例。根据患者规律化疗时间,将患者初次化疗时间作为入组时间,初次化疗后的3个月、6个月分别作为两次随访时间点,分别于3次时间点收集患者相关检查结果,比较匹配后两组患者的临床资料差异以及变化。具体如下:收集两组AML患者的年龄、性别、收缩压(Systolic blood pressure,SBP)、舒张压(Diastolic blood pressure,DBP)、心率(Heart rate,HR)、身体质量指数(Body mass index,BMI)、吸烟史、饮酒史、高血压(High blood pressure,HBP)、糖尿病(diabetes mellitus,DM)、冠心病(Coronary heart disease,CHD)病史。收集实验室检查指标,包括:前白蛋白(Prealbumin,PA)、白蛋白(Albumin,Alb)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterin,LDL-c)、载脂蛋白B(ApolipoproteinB,Apo-B)、脂蛋白a(Lipoprotein,Lp(a))、空腹血糖(Fasting blood-glucose,FPG)、N末端B型利钠肽原(N-terminal B-type natriuretic peptide,NT-proBNP)、肌钙蛋白I(Cardiac troponin 1,cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)、钾离子(K+)、镁离子(Mg2+)等指标。收集超声心动图结果,包括:舒张末期左室内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、室间隔厚度(Interventricular septal,IVS)、左室后壁厚度(Left ventricular posterior wall,LVPW)、Nirmatrelvir浓度左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、二尖瓣口舒张早期峰值血流速度E与二尖瓣环室间隔侧舒张早期运动速度e’的比值(E/e’)等。所获得的数据采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。研究结果:(1)两组AML患者的中位年龄为54岁,与对照组相比,CHIP组(53.94±14.47 vs 54.55±14.8,p>0.05)平均年龄较大,但两组患者年龄差异无统计学意义。与对照组相比,CHIP组的BMI(25.77±4.53vs24.12±3.48,p<0.05)较低,但是CHD患病率(2.04%vs 12.24%,p<0.05)、DM患病率(2.04%vs 16.33%,p<0.05)均较高,差异具有统计学意义。对照组与CHIP组患者在首次化疗时身高、体重、HBP病史、化疗药物种类与剂量、单位体表面积化疗药物浓度、SBP、DBP、HR、LVEDD、IVS、LVPW、LVEF、E/e'、NT-proBNP、cTnI、CK-MB、FPG、TC、LDL-c、Apo-B、Lp(a)、Alb、PA、K+、Mg2+、心脏相关用药情况均无统计学差异。(2)采用重复测量方差分析,分析两组患者临床检查指标随时间变化的差异。随着时间的推移,两组患者血清Alb浓度(p<0.01)与TC浓度(p<0.01)均逐渐升高,组间差异(p>0.05)无统计学意义。与对照组相比,CHIP组Mg2+浓度较低(p<0.01),且CHIP组患者血中Mg2+浓度随时间延长逐渐降低,对照组在初次化疗后3个月(T1)Mg2+浓度降低,在初次化疗后6个月(T2)Mg2+浓度升高,且CHIP组与对照组之间差异具有统计学意义(p<0.05)。(3)用T1时收集的临床指标数值减去T0时收集的临床指标数值,所得结果为相应指标的△值。以HBP、DM、CHD、BMI为协变量进行协变量方差分析,与对照组相比,CHIP组△CK-MB(-0.11±0.52vs.0.13±0.90,p<0.01)升高,差异具有统计学意义,且与HBP病史(p<0.01)、DM病史(p<0.01)、CHD病史(p<0.01)及BMI(p<0.01)均具有相关性。与对照组相比,CHIP组△K+(0.13±0.60vs.-0.28±0.53,p<0.01)变化量较大,差异具有统计学意义,与HBP病史(p<0.01)、DM病史(p<0.01)、CHD病史(p<0.01)及BMI(medical newsp<0.001)相关,且CHIP组△K+为负值。(4)以上述方法所获得的△值作为因变量,以T0时的检查结果作为自变量进行多元线性回归分析,所得结果如下。△LVEDD 多元线性回归方程如下:△LVEDD=0.322 × JAK2+0.250 ×LVEDD;△IVS 多元线性回归方程如下:△IVS=0.219×JAK2+0.436×E/e'+0.215×IVS-0.192×Apo-B;△LVPW 多元线性回归方程如下:△LVPW=0.296×JAK2+0.279×LVPW+0.502×E/e'+0.213 LVEF-0.226× Apo-B;△LVEF 多元线性回归方程如下:△LVEF=0.294 × E/e'+0.223 ×LVPW+0.213 ×LVEF+0.203 ×Apo-B-0.297 ×JAK2-0.218 ×NT-proBNP-0.014 ×蒽环类。△NT-proBNP 多元线性回归方程如下:△NT-proBNP=0.227 ×DNMT3a+0.536×NT-proBNP;△cTnI 多元线性回归方程如下:△cTnI=0.187×(ASXL-l)+0.357 ×CHD;△CK-MB 多元线性回归方程如下:△CK-MB=0.162 ×LVEDD+0.840×CK-MB+0.415×Lp(a)+0.641 ×cTnI-0.211 ×E/e'。△Alb 多元线性回归方程如下:△Alb=0.166 ×HR-0.151 ×E/e'-0.681 ×Alb-0.197×FPG;△TC 多元线性回归方程如下:△TC=0.185×JAK2-0.181 ×BMI-0.238×Alb-0.344×Apo-B;△Apo-B 多元线性回归方程如下:△Apo-B=0.175×吸烟史-0.339×CHD-0.329×Apo-B-0.245×Mg2+;△Lp(a)多元线性回归方程如下:△Lp(a)=0.231 ×TET2+0.337×CHD-0.243×Apo-B;△FPG 多元线性回归方程如下:△FPG=0.186×DM+0.898×FPG-0.121 ×LVEF-0.148×蒽环类;△K+多元线性回归方程如下:△K+=0.169×CHD-0.195×JAK2-0.174×E/e'-0.157×FPG-0.642×K+;△Mg2+多元线性回归方程如下:△Mg2+=0.187×K+-0.215×NT-proBNP-0.671 ×Mg2+。结论:(1)CHIP基因突变与AML患者化疗过程中的心血管危险因素升高相关,携带CHIP基因突变的AML患者化疗期间更容易增加心血管风险。CHIP基因突变可作为AML患者化疗期间心血管风险的早期预测因子。(2)合并CHIP基因突变的AML患者BMI较低,但更容易患冠心病和糖尿病,这可能成为其化疗期间的心血管危险因素。(3)JAK2突变更易导致AML患者化疗期间出现心肌肥厚和左室射血分数降低。(4)合并CHIP突变的AML患者更易出现白蛋白、血钾、血镁降低,但血脂升高,增加心血管风险。

目的：获取广西莪术的全长转录组信息，了解其转录组的整体水平，挖掘姜黄素类生物合成通路基因。方法：利用Pacbio Sequel测序平台对广西莪术根、茎selected prebiotic library、叶、花4个部位的混合样品进行全长转录组测序，结合生物信息学等方法进行功能注释、代谢通路分析、简单序列重复（SSR）分析。结果：共获得原始数据14.47 Gb，经纠错、过滤、去冗余得到高质量一致性序列151 218条。对所有转录本在非冗余蛋白（NR）、核苷酸序列（NT）、基因本体（GO）、真核生物相邻类的聚簇（KOG）、蛋白家NSC 127716浓度族（Pfam）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）和SwissProt七大功能数据库进行注释及分类，结果有128 414个基因被注释，占比84.92%。共有325个基因参与姜黄素的生物合成，编码4-香豆酸-辅酶A连接酶、苯丙氨酸解氨酶、姜黄素合成酶、二酮-辅酶A合成酶、肉桂酸-4-羟化酶和咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶6个关键酶。MISA分析共发现32 459个SSR位点，以单核苷酸重复数量最多，占全部重复类型的38.63%;1～3个核苷酸重复序列占主导位置，占总SSR位点的93.58%。结论：在高通量全长转录组水平对广西莪术进行研究，对姜黄素合成相PR-171采购关基因进行了挖掘，为后续阐明广西莪术姜黄素生物合成分子机制提供依据，为进一步研究广西莪术的分子标记和优良基因挖掘提供数据基础。

本论文以研究趋磁细菌的脱氮性能为核心目标,针对趋磁细菌在污水生物脱氮领域的研究空白,基于趋磁细菌Magnetospirillum gryphiswaldense MSR-1,结合其原本生存环境,从反硝化脱氮的角度切入,在确定培养方案的基础上,重点评估MSRhematology oncology-1在与实际污水相近环境条件下的脱氮能力,并针对脱氮基因进行修饰以期进一步提高MSR-1的脱氮效果,为扩展趋磁细菌的应用新途径提供理论参考,主要结论如下:(1)课题组是首次培养MSR-1,对培养方案进行调整:采用含铁源、巯基乙酸钠的培养基和纱布橡胶塞培养模式,在温度30°C、转速100 rpm、接种比10Ceralasertib研究购买%,实现了24 h稳定传代培养。(2)以我国城市生活污水低C/N的局限性为切入点,重点关注较低营养浓度条件,特别是低C/N条件下MSR-1的脱氮效果。研究发现MSR-1在低C/N范围和与污水生物处理系统相似的环境条件下表现出良好的反硝化性能,在C/N为3～7,初始p H为6.5～7.5,培养温度为25～35°C时,MSR-1可在24 h将84 mg N/L硝酸盐去除90%以上,且无亚硝酸盐积累。MSR-1可利用乳酸钠、乙酸、琥珀酸钠等有机酸(盐)进行脱氮,其中以乳酸钠最优,其对碳源的需求与其他水解酸化菌的代谢产物一致。此外乙酸作为污水处理厂外加碳源,可确保MSR-1稳定脱氮。硝酸盐是最佳氮源,其含量应大于3 m M,且与亚硝酸盐的比例应大于1。初始硝酸盐不足会减缓MSR-1生长,进而影响反硝化代谢。20～140μM的铁源有利于MSR-1保持活性而不产生抑制。这得益于MSR-1极高的铁耐受度和超量摄入铁的特性,同时也利于在实际应用中控制外加铁源对环境安全造成的不利影响。(3)利用响应面BBD和CCD实验对适宜脱氮条件进行优化,根据模型PD0325901分子量方差分析,可知p H和温度对MSR-1反硝化的影响比C/N更显著,即初始p H和培养温度的P值均小于0.05,而C/N的P值大于0.3。对比BBD和CCD模型进一步总结MSR-1反硝化过程的参数控制策略,即当p H约为7、培养温度约为30°C时,应严格控制培养温度以提高脱氮效率;而当p H偏移至6.5或7.5附近,应预防由p H偏离导致的反硝化活性降低。以CCD模型求解MSR-1最佳反硝化条件并进行验证,当C/N为5.13,初始p H为6.83,培养温度在30.3°C时,16 h硝酸盐去除率达89.10±1.76%,且在24 h同时实现较高的硝酸盐去除率和较低的亚硝酸盐剩余。(4)针对MSR-1反硝化代谢通路的Nap A和Nir S的基因,以p BBRMCS-2质粒构建T7过表达载体,利用细菌接合成功构建具备卡那霉素抗性的重组趋磁细菌MSR-1-nap A和MSR-1-nir S。将MSR-1-nap A以最佳反硝化条件培养并进行脱氮表型测试,发现MSR-1-nap A在氧气存在的条件表现出比野生型更高的硝酸盐利用速率。此外还总结了滤膜接合方式、混合菌落筛选、磁性单菌落培养等多项内容。