PI3K抑制剂

目的 探究吡柔比星膀胱黏膜下注射配合等离子针状电极行经尿道等离子膀胱肿瘤整块切除术的可行性及临床疗效。方法 选取2019年5月至2021年9月华润武钢总医院泌尿外科收治的37例膀胱肿瘤患者,应用等离子针状电极配合吡柔比星膀胱黏膜下注射,行经尿道膀此网站胱肿瘤整块除术。观察比较膀胱肿瘤标本切除的完整性、术中发生膀胱闭孔神经反射的频次及幅度、术后肿瘤复发等指标。结果 37例膀胱肿瘤患者共切除肿瘤65枚,每例患者分别有1～3枚瘤体,肿瘤直径0.5～3.1 cm,均有蒂,行吡柔比星膀胱黏膜下注射配合等离子针状电极经尿道膀胱肿瘤整块切除术。其中低度恶性潜能尿点击此处路上皮乳头状瘤3例,低级别乳头状瘤27例,高级别乳头状瘤7例。膀胱侧壁肿瘤16枚,术中发生4次闭孔神经反射,未发生膀胱穿孔等并发症。术后均随诊6～24个月,无一例出现肿瘤原位复发,有3例患者膀胱肿medicines management瘤异位再发。结论 应用吡柔比星膀胱黏膜下注射配合等离子针状电极行经尿道等离子膀胱肿瘤切除术符合肿瘤根治性切除原则,其疗效确切,安全可行,值得推广。

目的 探讨中药穴位敷贴联合中医情志护理对气阴两虚型阵发性房颤患者治疗依从性及预后的影响。方法 选取2020年1月—2023年1月溧阳市中医医院收治的80例气阴两虚型阵发性房颤患者为研究对象，应用随机数表法将其分为观察组与对照组，每组40例。对照组采取常规护理，观察组在常规护理基础上增加中药穴位敷贴联合中医情志护理，应用简明心境量表（Concise Mood Scale,POMS-SF）评价两组患者护理前后心理状态并进行比较selleck NMR，比较两组患者护理后的依从性，并采用房颤发作次数和心功能来评价预后情况。结果 护理前，两组患者困惑、活力、疲劳、抑郁、生气和紧张方面的POMS-SF评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）；护理后，两组患者困惑、活力、疲劳、抑郁、生气和紧张方面的POMS-SF评分明显降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组治疗依从率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。护理前，两组患者左心室射血分数（LVEF）、左心室收缩末期容积（LVESV）、左心室舒张head and neck oncology末期容积（LVEDV）相关心功能指标与房颤发作次数比较，差异selleck LGK-974无统计学意义（P>0.05）；护理后，两组患者LVEF均升高，LVESV、LVEDV均降低，差异有统计学意义（P<0.05），但两组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；护理后两组患者房颤发作次数均降低，观察组发作次数低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 中药穴位敷贴联合中医情志护理能够改善气阴两虚型阵发性房颤患者的负面心理状态，提升其治疗依从性和心功能，减少房颤发作次数，改善患者预后水平。

目的:在接受规范化糖皮质激素和(或)他克莫司、环磷酰胺、血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素受体拮抗剂、抗血小板及抗凝治疗基础上,探genetic regulation究特发性膜性肾病的患者应用舒洛地特支持治疗是否对减轻蛋白尿及降低血脂有效。方法:根据相应的纳入标准及排除标准,回顾分析自2020年9月至2022年11月间就诊于医大一院肾内科、经肾活检明确病理类型或检验抗磷脂酶A2受体抗体阳性的原发性膜性肾病患者,根据患者首次诊断时制定的治疗方案不同,将患者分为激素组、他克莫司组、激素联合他克莫司组。selleckchem AZD9291激素组与激素联合他克莫司组给予规范化的糖皮质激素和(或)他克莫司联合环磷酰胺治疗,三组患者均给予血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素受体拮抗剂、抗血小板及抗凝、降脂及降压治疗;每组中选取加用LY-188011舒洛地特软胶囊(250LSU,每日2次)口服的患者为实验组,其余患者为对照组,比较用药后实验组及对照组患者的24小时尿蛋白定量、肝功能、血脂、血红蛋白等指标。P<0.05为差异具有统计学意义。结果:用药前,三组患者的年龄、性别构成比、24小时蛋白尿定量、血清白蛋白水平之间的比较均无统计学差异。用药第1个月后,激素组患者中实验组患者24小时尿蛋白改善率较对照组相比有所改善;他克莫司组和激素联合他克莫司组中实验组及对照组的患者化验24小时尿蛋白均无显著异常。三组中实验组及对照组患者血清白蛋白均无显著统计学差异。用药第1个月、第2个月及第3个月后,激素组以及激素联合他克莫司组中实验组患者血低密度脂蛋白胆固醇水平较对照组相比有显著改善,而他克莫司组中则未观察到该效应。结论:特发性膜性肾病中,在接受规范的血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素受体拮抗剂、抗血小板及抗凝、降脂及降压治疗基础上,选用糖皮质激素联合环磷酰胺作为治疗方案的患者早期应用舒洛地特可一定程度上减轻蛋白尿,并可以有效降低血脂。

目的 通过观察骨科围手术期合并急慢性射血分数减低的心力衰竭(HFrEF)患者的综合治疗，为骨科患者争取手术条件及围手术期的安全性提供保障。方法 选择2019年1月至2020年12月郑州市骨科医院骨科围手术期Surgical antibiotic prophylaxis合并心力衰竭(HFrEF)患者48例作为研究对象，GW-572016使用方法回顾性分析其临床资料。通过静脉给予大剂量扩血管药减低心脏前后负荷，利尿剂静脉推注减低心脏前负荷，短期应用强心药物磷酸二酯酶抑制剂，根据患者心率情况决定是否应用洋地黄类强心药；口服血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)Compound C核磁/血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、醛固酮拮抗剂拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RASS)抗心衰以及合并病的综合治疗，进行术前干预，疗程5～14 d,平均10 d。结果 患者心衰症状得到显著改善，左室舒张末期内径减小，左室收缩功能改善，有效率达85.42%,左室收缩功能EF值提高10%以上者达31.25%。患者顺利接受手术，安全度过围手术期。结论 骨科围手术期合并心力衰竭(HFrEF)患者给予综合抗心衰治疗，能够达到快速、安全、有效改善心功能的目的，减少术后心血管不良事件发生率，手术安全性明显提高。

蒽醌类抗癌药物是目前广泛应用的一类高效化疗药物,临床上主要应用于genetic enhancer elements血液系统恶性肿瘤以及淋巴瘤、卵巢癌等实体瘤的治疗。已有的研究表明,蒽醌类抗癌药物中的由平面三环芳香蒽系统组成的刚性环结构可以嵌入DNA碱基对中,并具备与拓扑异构酶II(Topo II)中活性位点的结合能力,从而干扰DNA的正常复制转录,催化DNA双链断裂(DSB),达到杀灭肿瘤细胞的目的。然而在目前的临床应用中,传统蒽醌类药物的耐药性及心脏毒副作用问题大大限制了其应用前景,因此新型蒽醌类抗癌药物的设计与开发十分必要。在本项工作中,我们设计、筛选并合成了两种具有DNA嵌入和甲基化双重作用的两种新型咪唑四嗪-蒽醌衍生物C-1和C-9,并使用电化学、分子对接、电泳和光谱学方法研究了其作用机制。我们首先将可以对DNA产生烷基化损伤的咪唑四嗪结构引入蒽醌母核,设计了一系列的双功能抗肿瘤候选化合物,以达到在嵌入DNA催化DNA双链断裂的同时引入烷基化损伤的目的。随后利用MOE软件,以结合能作为评价标准,通过分子对接模拟候选化合物与DNA和Topo II的相互作用筛选出两种对DNA和Topo II具有高亲和性的小分子化合物C-1和C-9。然后合理设计了合成路线并成功合成了两种小分子化合物。通过循环伏安法(CV)、方波伏安法(SWV)、和差分脉冲伏安法(DPV)对其氧化还原机制进行了研究,发现selleck SAG二者在电极表面的还原过程均为扩散控制过程,且二者在电极表面的氧化还原过程类似,都涉及蒽醌环上可逆的氧化还原过程以及咪唑四嗪环上的不可逆的氧化过程和还原过程。然后通过分子对接建立了两种小分子化合物与DNA和Topo II的三维作用模型,发现两种化Epigenetics抑制剂合物不仅可以嵌入DNA碱基对中与DNA相结合,还能依靠与Topo II的氨基酸残基产生的氢键同Topo II产生相互作用。利用差分脉冲伏安法(DPV)在DNA溶液中对两种小分子化合物与DNA的相互作用进行了测试,发现二者可以嵌入到DNA链中并对DNA产生氧化损伤。利用DNA电化学生物传感器研究了两种小分子化合物同DNA的相互作用,其结果与DNA溶液中的相关测试基本一致。使用紫外-可见吸收滴定实验和荧光发射滴定实验对C-1和C-9与DNA的相互作用进行了进一步验证,证明二者与DNA的作用方式都为嵌入且是自发过程,结合常数分别为9.31×10~5 M~(-1)和12.74×10~5 M~(-1)。琼脂糖凝胶电泳研究结果显示,两种小分子化合物可以在微摩尔水平对DNA产生解旋与切割损伤。体外抗肿瘤活性实验结果表明,C-1和C-9对于人非小细胞肺癌细胞系(A549)和小鼠胶质母细胞瘤细胞系(GL261)具有较强的抗增殖作用。对于A549细胞系,两种化合物的IC_(50)值分别为6.31μM(C-1)和9.71μM(C-9)。对于GL261细胞系,两种化合物的IC_(50)值分别为7.40μM(C-1)和10.86μM(C-9)。该研究为新型蒽醌类抗癌药物的分子设计与开发提供了新的思路,也为先导化合物的前期研究提供了模板。

目的 观察滋阴潜阳方对自发性高血压大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法 将40只雄性自发性高血压大鼠随机分为模型组，依那普利组，滋阴潜阳方高、低剂量组，每组10只，另取10只Wistar雄性大鼠作为正常组。各给药组分别每日2次、连续灌胃6周给予相应药物；记录各组大鼠血压值，Masson染色观察大鼠心肌组织病理变化，Western blot法检测大鼠心肌组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-selleck EnasidenibSMA)表达水平，RT-PCR法检测大鼠心肌组织CTGF、Col-Ⅰ、α-SMA mRNA表达水平。结果 与模型组比较，滋阴潜阳方高、低剂量Gefitinib临床试验组及依那普利组大鼠收缩压均显著降低(P<0.05);滋阴潜speech pathology阳方高剂量组与依那普利组大鼠心肌组织蓝色心肌胶原纤维明显减少；滋阴潜阳方高剂量组和依那普利组大鼠心肌组织Col-Ⅰ、CTGF、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 滋阴潜阳方能够降低自发性高血压大鼠的血压并抑制其心肌纤维化，其作用机制可能与其抑制心肌成纤维细胞的增殖、转分化有关。

目的 探究白皮杉醇（PIC）调控微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/RUNT相关转录因子3(RUNX3)轴对宫颈癌（CC）细胞迁移及侵袭的影响。方法 使用不同浓度PIC(0、20、40、AZD1152-HQPA临床试验80和160μmol/L)培养液处理人CC Hela细胞，通过CCK-8法检测PIC对细胞增殖活力的影响，以确定PIC最佳使用浓度。将Hela细胞分为Control组、PIC组、PIC+NC mimics组、PIC+miR-106b-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor+siRNA组及miR-106b-5p更多 inhibitor+si-RUNX3组。实时荧光定量PCR检测各组Hela细胞miR-106b-5p表达水平；TransweGlycopeptide antibioticsll法检测各组Hela细胞迁移及侵袭能力；Western blot法检测各组Hela细胞中RUNX3、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白表达水平；双萤光素酶报告基因实验检测miR-106b-5p与RUNX3靶向关系。结果 Hela细胞增殖活力随着PIC处理浓度的增高而呈现降低趋势（P<0.05），其中80μmol/L PIC对Hela细胞的抑制作用接近半数抑制浓度（IC50），故选择80μmol/L为后续研究的PIC浓度。与Control组相比，PIC组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平均降低，迁移和侵袭细胞数量减少，RUNX3表达水平增加（P<0.05）；与PIC+NC mimics组相比，PIC+miR-106b-5p mimics组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加，迁移和侵袭细胞数量增多，RUNX3表达水平降低（P<0.05）。双萤光素酶报告基因实验证实RUNX3为miR-106b-5p的靶基因。与NC inhibitor组相比，miR-106b-5p inhibitor组RUNX3表达水平增加，miR-106b-5p、MMP2与MMP9表达水平降低，迁移和侵袭细胞数量减少（P<0.05）；与miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组相比，miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组RUNX3表达水平降低，miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加，迁移和侵袭细胞数量增多（P<0.05）。结论 PIC通过抑制miR-106b-5p表达、促进RUNX3表达来抑制CC细胞迁移及侵袭。

目的：研究红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖与凋亡的影响，并基于丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路探讨其可能的作用机制。方法：体外培养MKN-45细胞，分为对照组，红托竹荪多糖低、中及高剂量组，采用终浓度分别为0、4、6及8 mg/mL的红托竹荪多糖作用于细胞48 h后，采用细胞计数法检测红托竹荪多糖对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响；采用倒置显微镜观察不同浓度的红托竹荪多糖作用于人胃癌MKN-45细胞48 h后细胞形态学的变化。设立实验组的红托竹荪多糖终浓度为8 mg/mL,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色流式细胞技术检测细胞的凋亡率；采用流式细胞术检测细胞周期分布；采用蛋白质印迹法检测红托竹荪多糖作用胃癌细胞后p38蛋白激酶(p38)、磷酸化p38蛋白激酶(p-p38)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-EJNJ-42756493RK)、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、磷酸化C-JUN氨基末端激酶(p-JNK)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3 (cleaved Caspase-3)蛋白的表达，即与3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH)灰度值比值。结果：作用48 h后，不同浓度的红托竹荪多糖(4、6及8 mg/mL)对人胃癌MKN-45细胞增殖的抑制率分别为(8.27±5.99)%、(21.83±5.77)%和(56.95±5.21molecular pathobiology)%;在检Lapatinib配制测的浓度范围下，随着浓度的升高，红托竹荪多糖对MKN-45细胞增殖的抑制率逐渐升高。倒置显微镜下显示，经8 mg/mL的红托竹荪多糖作用48 h后，MKN-45细胞密度与对照组相比明显减少。流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，实验组人胃癌MKN-45细胞凋亡率显著升高(P<0.05);细胞周期结果显示，实验组G_1期细胞比例明显减少(P<0.05),G_2期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例明显减少(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示，与对照组相比，实验组MKN-45细胞中cleaved Caspase-3的表达有升高趋势(P<0.05),Bcl-2的表达有降低趋势(P<0.05),p-P38/P38比值、p-ERK/ERK比值与p-JNK/JNK比值均低于对照组(P<0.05),上述差异均有统计学意义。结论：红托竹荪多糖在体外能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖并诱导细胞凋亡，使肿瘤细胞阻滞在G_2/M期，其作用可能通过调控MAPK信号通路实现。

目的 研究CD28在初诊多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及其与肿瘤负荷、临床预后的相关性。方法 以回顾性分析为法，观察对象为2021年1月至2023年1月淮南市第一人民医院的89例初诊MM患者。所有患者均经流式细胞术对其骨髓标本予以免疫表型分析，参考CD28表达水平分为CD28~+(研究组，PCR Thermocyclersn=30)与CD28~-(对照组，n=59)。对比两组患者的实验室特征、CD28表达水平、遗传学异常发生率和近期疗效，分析CD28表达对无进展生存期(PFS)的影响。结果 两组患者的年龄、性别构成比、白蛋白、乳酸脱氢酶、肌酐、血红蛋白、钙水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05);研究组β2微球蛋白表达水平、克隆浆细胞比率、骨髓浆细胞(BMPC)比率、国际分期系统(ISS)-Ⅲ期患者比率分别为(6.61±1.14) mg/L、(21.68±5.82)%、(41.83±8.62)%、73.33%,均明显高于对照组[(5.68±1.07) mg/L、(10.97±4.12)%、(27.01±7.14)%、47.46%],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者1q21扩增发生率、≥2个遗传学异常的高危病例发生率分别为40.00%、26.67%,均明显高于对照组(18.64%、8.47%),差异均有统计学意义(P<0.05);两组13q14-、IgH重排、17p-发生率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。化疗4个周期之后，研究组患者的治疗总有效率为60.00%,明显低于对照组(88.14%),差异有统计学意义(P<0.05)。中位随访10个月，研究组患者中位PFS为(10.72±1.23)个月，明显低于对照组[(14.08±1.34)个月],差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示，CD28~+表达及≥2个遗传学异常、ISSⅢ期、血红蛋白<60 g/L、年龄≥60岁并非影响MM患者PFS的危险因素；多因素分析显示，影响MM患者PFS的独Berzosertib立危险因素为CD28~+表达、诱导效果BMS-354825化学结构与初诊MM患者临床特征、肿瘤负荷及预后有着密切联系，CD28~+可辅助评估初诊MM患者的预后。

第一部分GJ-4治疗大鼠血管性痴呆的作用及机制研究血管性痴呆(Vasculardementia,VD)是一种由脑血管病变致脑损伤而引起的以认知功能障碍为特征的综合征。除认知功能受损外,不同脑区损伤导致的伴随性症状各异,如性情改变、语言功能障碍等,除严重威胁患者身体健康外还会加重其心理压力,并给患者家属以及社会带来沉重的经济负担。栀子是传统中药,具有抗氧化、抗炎及抗感染的作用,也可减轻缺血导致的脑组织损伤。GJ-4是栀子果实的提取物,本实验室前期研究发现GJ-4可改善多种阿尔茨海默病selleck Bemcentinib(Alzheimer’s disease,AD)模型动物的学习记忆功能,但GJ-4对VD模型动物的作用以及作用机制仍未阐明,因此本实验主要探究GJ-4对永久性双侧颈总动脉结扎(Bilateral common carotid arteries occlusion,2-VO)诱导的VD大鼠的治疗作用,并以体内实验和体外实验相结合的方法来探讨GJ-4治疗VD的作用机制。在本实验中,我们首先采用2-VO建立了 VD大鼠模型,通过灌胃给予不同剂量GJ-4(10、25和50mg/kg)及阳性药多奈哌齐(5 mg/kg)、尼莫地平(10 mg/kg)和银杏叶提取物(50 mg/kg),持续30天。Morris水迷宫结果显示,GJ-4 50 mg/kg可明显缩短VD大鼠找到平台的潜伏期,增加大鼠穿越平台的次数,并延长大鼠在目标象限的停留时间。进一步的跳台实验发现GJ-4 50 mg/kg可显著延长大鼠在跳台上的停留时间,表明GJ-4具有改善VD大鼠学习记忆功能障碍的作用。多普勒脑血流量检测结果表明GJ-4 50 mg/kg可明显增加VD大鼠的脑血流量。尼氏染色结果表明GJ-450mg/kg可改善2-VO导致的大鼠海马CA1区尼氏小体排列扭曲,减轻脑血流量低灌注导致的神经元损伤。细胞凋亡在VD发病中起着重要的作用,Cleaved caspase-3是反映细胞凋亡的重要蛋白,免疫组化以及Western blot结果显示GJ-4可明显抑制Cleaved caspase-3的表达,表明GJ-4具有抑制神经元凋亡的作用。Iba-1免疫组化结果表明GJ-4可能具有抑制小胶质细胞激活的作用。内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)是由内质网腔内错误折叠/未折叠蛋白累积影响内质网正常功能而发生的应激状态,参与VD发病过程。错误折叠/未折叠蛋白会引发未折叠蛋白反应(Unfoldedprotein response,UPR)以恢复内质网中的蛋白质稳态以及内质网的功能。机制研究表明GJ-4可以显著降低VD大鼠脑中ERS相关蛋白质葡萄糖调节性蛋白质78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达水平,并通过抑 制调节 UPR 的PERKTravel medicine/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路的激活从而抑制细胞凋亡。进一步在SH-SY5Y细胞中采用糖氧剥夺(Oxygen glucose deprivation,OGD)模型模拟神经元在缺氧条件下的病变,结果与动物体内实验一致,发现ERS相关蛋白质GRP78的表达明显升高,同时PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路激活,而GJ-4主要代谢产物藏红花酸可以显著降低GRP78的表达水平,并抑制PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路的激活。上述结果表明GJ-4对2-VO所致VD大鼠模型具有较强的神经保护作用,可通过抑制PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路的激活缓解大鼠脑内ERS,减少神经元凋亡,改善大鼠的学习记忆障碍。血管新生是指新的血管从已有血管生成的过程,在缺血诱发的VD中促进血管新生是缓解VD症状的治疗方式之一。本研究进一步在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilic vein endothelial cells,HUVEC)中采用划痕实验、成管实验等方法研究藏红花酸对血管新生的影响,结果表明藏红花酸可显著增强HUVEC的迁移能力以及管腔形成能力。机制研究发现藏红花酸可能通过激动Sonic Hedgehog信号通路提高 HUVEC 中血管内皮生成因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)以及血管标记物血小板-内皮细胞黏附分子(Platelet endothelial adhesion molecule 1,CD31)的表达水平,从而起到促进血管新生的作用。综上所述,GJ-4可改善2-VO诱发的VD大鼠脑血流量降低,保护神经元,进而改善VD大鼠学习记忆障碍。机制研究表明GJ-4及其主要代谢产物藏红花酸的神经元保护作用可能与其抑制调控UPR的PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路的激活有密切关系。除了对ERS的抑制作用,藏红花酸还可通过激活Sonic Hedgehog信号通路来促进HUVEC的迁移及管腔形成,提高新血管生成的能力。本实验进一步证明GJ-4具有开发成为治疗VD新药的良好前景。第二部分TREM2通过调控小胶质细胞内吞功能参与神经炎症的作用及机制研究在中枢神经系统(Central nervous system,CNS)中,髓系细胞触发受体2(Triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)主要表达在小胶质细胞膜上,具有影响小胶质细胞存活、增殖、迁移以及吞噬的功能,还可调控小胶质细胞的神经炎症反应。研究表明神经炎症在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)等神经退行性疾病以及血管性痴呆(Vascular dementia,VD)、脑卒中、创伤性脑病等疾病的发病和病理进程中具有关键作用。在病理过程中,小胶质细胞会迁移至病灶处,吞噬β-淀粉样蛋白(β-Amyloid,Aβ)、α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)等致病物质,以减轻其诱发的神经炎症。然而TREM2调控神经炎症的作用和机制尚未完全阐明,因此本研究主要在脂多糖(Lipopolysaccharides.LPS)侧脑室注射致神经炎症模型小鼠、OGD刺激的BV2小胶质细胞,以及不同VD模型大鼠中探究TREM2通过调控小胶质细胞内吞功能介导神经炎症的作用及可能的机制。本研究发现LPS刺激导致小胶质细胞中TREM2表达下降。为进一步探究其作用机制,本研究采用蛋白质组学寻找使用小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)敲低BV2中TREM2后的差异性表达蛋白。结果表明TREM2表达水平降低时网格蛋白介导的内吞(Clathrin-mediated endocytosis,CME)相关蛋白适配体蛋白复合体 2 亚基 α2(Adaptor related protein complex 2 subunit Alpha 2,AP2A2)、适配体蛋白复合体 2 亚基μl(Adaptor Related Protein Complex 2 Subunit Mu 1,AP2M1)以及动力蛋白2(Dynamin 2.Dnm2)的表达也明显降低,Western blot实验进一步验证发现TREM2低表达可降低内吞相关蛋白AP2A2、Dnm2和 AP2M1 的表达。采用免疫共沉淀(Co-immunopreciselleck BIBW2992pitation,Co-IP)检测 TREM2及上述蛋白之间的相互作用,结果表明TREM2可与AP2A2和Dnm2结合并存在蛋白质相互作用,进一步表明TREM2可直接调控小胶质细胞的内吞功能。内吞实验发现敲低BV2细胞中的TREM2可抑制小胶质细胞的内吞功能,验证了 TREM2与小胶质细胞内吞功能的密切相关。小胶质细胞介导的神经炎症与内吞功能有密切的关系,为探究TREM2通过调控内吞功能影响神经炎症的作用及机制,本研究建立了 LPS侧脑室注射致神经炎症小鼠模型。结果显示LPS侧脑室注射小鼠皮层和中脑中TREM2的表达明显降低,且内吞相关蛋白AP2A2、AP2M1和Dnm2的表达也随之显著降低,而炎症因子的表达升高,表明LPS刺激后小胶质细胞内吞功能损伤,引发了神经炎症。神经炎症可损伤血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)从而提高BBB通透性,因此本研究采用Western blot检测了脑屏障相关蛋白Claudin-1和Occludin的表达,结果发现LPS刺激后屏障相关蛋白表达水平显著降低。而当用TREM2激动剂COG 1410提高TREM2活性时,内吞相关蛋白AP2A2、AP2M1和Dnm2的表达明显升高,炎症因子表达下降,屏障相关蛋白表达升高,表明激动TREM2改善了 LPS刺激对小胶质细胞内吞功能的损伤,炎症反应明显减弱,脑屏障功能改善。神经炎症在VD的病理变化中具有关键作用,因此本研究在BV2细胞中建立了糖氧剥夺(Oxygen glucose deprivation,OGD)模型观察TREM2调控内吞功能影响神经炎症的作用和机制。结果表明OGD明显降低了 TREM2及内吞相关蛋白表达水平,提高了炎症蛋白iNOS、COX-2的表达,表明OGD抑制了小胶质细胞的内吞功能并诱发了神经炎症。给予COG 1410提高TREM2的表达水平后,内吞相关蛋白的表达明显提高,OGD诱发的神经炎症明显减轻。然后本研究在双侧颈总动脉结扎(Bilateral carotid artery occlusion,2-VO)、急性局灶性脑缺血再灌注(Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)以及高脂饮食合并 2-VO(High fat diet+2-VO,HFD+2-VO)三种VD模型大鼠中进一步探索TREM2调控内吞功能对神经炎症的作用和机制。Western blot结果显示三种VD大鼠皮层中TREM2表达均显著降低,内吞相关蛋白的表达受到抑制,神经炎症反应加剧,脑屏障受损,表明TREM2通过调控内吞参与VD发病。综上所述,在小胶质细胞中TREM2可与内吞相关蛋白AP2A2和Dnm2相互作用,介导小胶质细胞内吞作用,参与神经炎症相关疾病的病理过程。在VD等存在神经炎症的疾病模型中,TREM2和内吞相关蛋白表达均降低,而激活TREM2可提高小胶质细胞的内吞功能,减轻炎症反应,改善脑屏障功能。以上结果进一步表明TREM2是调控神经炎症的重要分子靶点,可能具有开发为治疗VD等疾病靶点的潜力。