PI3K抑制剂

脊髓损伤是一种能对患者的感觉功能、运动功能以及自主神经功能造成极大影响的疾病，它不仅给患Sports biomechanics者本人带来严重身心伤害，还对社会造成巨大的经济负担。随着医疗技术的发展，对脊髓损伤内在机制的研究也在不断深入，脊髓损伤的治疗方法层出不穷，但其疗效欠佳，因此亟需进一步探索新的脊髓损伤治疗策略，拓展新的治疗思路。诸多研究表明，各种亚细胞结构与脊髓损伤后损伤部位神经再生及功能恢复密切相关，因此靶向线粒体、溶酶体/自噬体、内质网、胞内体和蛋白酶体等亚细胞结构治疗脊髓损伤可望在促进脊髓损伤后神经再生与修复中起重要作用。多种靶向亚细胞结构的治疗策略在脊髓损伤治疗中效果显著，其中又以靶向线粒体或内质网治疗脊髓损伤的研究为主。靶STM2457向线粒体治疗主要着重于维持损伤部位线粒体能量代谢水平，而靶向内质网治疗主要着重PD0325901 IC50于抑制内质网应激。该文就靶向亚细胞结构治疗在脊髓损伤修复中的应用研究进展作一综述，可望为开发脊髓损伤的新型靶向治疗策略、提高脊髓损伤治疗效果提供新思路。

麦冬Ophiopogon japonicus(L.f)KGSK J4价格er-Gawl.为百合科沿阶草属植物,是我国重点开发的中药大品种,含有黄酮、多糖、皂苷和氨基酸等成分,具有清肺止咳和养阴生津的功效。近年研究发现,麦冬须根中黄酮及皂苷类成分高于块根,多糖和氨基酸含量与块根相当,其应用逐渐引起重视。本文以麦冬须根与多味药食两用中药组方制备泡腾片,研究了多元麦冬须根泡腾片的提取工艺、加工工艺、质量和稳定性,并进行了功能评价。本研究以料液比、提取温度、提取时间和提取次数为考察因素,采用单因素结合响应面法,以总皂苷含量与出膏率为指标,优化提取工艺,经权重法得出最佳提取工艺为提取时间90 min,提取温度1selleckchem MRTX113300℃,料液比1﹕6,提取次数2次。继而以提取所得多元麦冬须根浸膏粉为原料,采用酸碱分开制粒法,以单因素结合正交试验法筛选泡腾片配方,筛选出最佳配方为浸膏粉占20%,填充剂糊精占40%,润滑剂PEG6000占6%,甜味剂阿斯巴甜占2%,矫味剂薄荷脑占1%,其余为崩解剂柠檬酸与碳酸氢钠(酸碱比0.9﹕1)。按《中国药典》2020年版相关规定对多元麦冬须根泡腾片进行质量检测。结果所制泡腾片呈浅褐色,水中完全崩解后液体澄清无杂质,味稍甜、微苦,具有麦冬须根清香气,平均片重0.989 g,崩解时限2 min 25 s,p H值6.4,脆碎度为0.32%。微生物及重金属检测结果表明,菌落数量、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等均低于要求水平,铅未检测出。GC-MS结果显示主要挥发性风味物质共52种,酯类和其他类风味物质种类丰富,醇类物质相对含量占比较大,构成泡腾片独特的香味。稳定性试验结果显示,多元麦冬须根泡腾片在高温高湿环境中稳定性较好,但在实际生产及运输过程中需对其环境进行严格控制。本研究采用小鼠酚红法考察祛痰作用,结果显示,高剂量组小鼠酚红排泌量为0.750±0.073μg/ml,其祛痰作用显著优于空白组及阳性对照组,中、低剂量组祛痰作用无显著性差异。采用二甲苯耳肿胀试验考察抗炎作用,结果显示,高、中、低剂量组耳肿胀度分别为0.074±0.021 mm、0.106±0.020 mm、0.132±0.019 mm,肿胀率均低于空白组,高剂量组抗炎作用最显著。试验结果表明多元麦冬须根泡腾片具有较好的祛痰抗炎作用。本论文通过对多元麦冬须根泡腾片制备工艺、质量、稳定性以及功能的研究,制得多元麦冬须根泡腾片,其质量均一presymptomatic infectors,符合《中国药典》2020年版的相关规定,稳定性良好,并具有较好的祛痰抗炎作用。

背景:耐药菌感染问题已成为医疗卫生领域所面临的最严峻的挑战。细菌产生耐药性致使越来越多的抗生素疗效降低甚至是无效,严重危害人类生命。在更谨慎使用抗生素防止细菌产生耐药性的同时,也需要尽快找到可以替代抗生素的抗菌剂。黄芩素是一种具有抗菌性能的多酚类化合物,但黄芩素的水溶性差,导致生物利用度低。多酚和铜、铁、锌、锰等多种金属离子配位螯合形成金属多酚网络,可以提高多酚的生物利用度。此外,过渡态金属离子,如Fe~(2+),可通过芬顿反应催化H_2O_2产生强毒性的羟自由基,可进一步增强多酚的生物功能。基于此,本课题将黄芩素-铁纳米材料进行抗菌研究,同时利用黄芩素-铁纳米材料的芬顿反应特性增强纳米材料的抗菌效果,实现高效抗菌。方法:通过抑菌圈法、平板涂布法、浊度法、MTT法、LDH检测法测定黄芩素-铁的体外抗菌特性。通过TMB显色法检测黄芩素-铁纳米材料的芬顿反应活性,通过平板涂布法、浊度法、ROS检测测定黄芩素-铁联合H_2O_2的体外抗菌特性。通过细胞毒性检测及溶血试验检验黄芩素-铁纳米材料的生物安全性。结果:(1)黄芩素-铁纳米材料表征黄芩素-铁纳米材料粒径为135 nm,多分散指数为0.001,表面带负电荷。通过傅里叶变换红外光谱结果显示,黄芩素的羟基与铁离子进行络合,形成了黄芩素-铁纳米材料。(2)黄芩素-铁纳米材料的体外抗菌研究黄芩素-铁纳米材料具备优异的抗以大肠杆菌为代表的革兰氏阴性菌敏感菌株特性,也具备优异的抗以耐氨苄青霉素大肠杆菌及耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌为代表的革兰氏阴性菌耐药菌株的特性,35μg/m L黄芩素-铁即可完全杀灭革兰氏阴性菌,呈浓度、时间依赖性。高达400μg/m L黄芩素-铁纳米材料对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌都没有抗菌特性。(3)黄芩素-铁联合H_2O_2的体外抗菌研究黄芩素-铁纳米材料联合Hhttps://www.selleck.cn/products/wnt-c59-c59.html_2O_2具备高效的抗革兰氏阴性菌特性。4μg/m L黄芩素-铁纳米材料可杀灭约15%大肠杆菌、耐氨苄青霉素大肠杆菌,8μg/m L黄芩素-铁纳米材料可杀灭约10%耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,H_2O_2的常用消毒剂量为0.5%-3%(147-882 mmol/L)。通过黄芩素-铁纳米材料联合H_2O_2发现,4μg/m L黄芩素-铁纳米材料联合100μmol/L H_2O_2即可完全杀灭大肠杆菌、耐氨苄青霉素大肠杆菌,8μg/m L黄芩素-铁纳米材料联合200μmol/L H_2O_2即可完全杀灭耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌。黄芩素-铁纳米材料联合H_2O_2具有优异的抗革兰氏阳性菌特性,30μg/m L黄芩素-铁纳米材料联合5 mmol/L H_2O_2即可完全杀灭金黄色葡萄球菌,40μg/m L黄芩素-铁纳米材料联合5 mselleck HPLCmol/L H_2O_2即可完全杀灭耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。抗菌机制为黄芩素-铁纳米材料的芬顿反应特性产生大量ROS,从而导致细菌死亡。(4)黄芩素-铁纳米材料的生物安全性探究使用远高于抗菌浓度的黄芩素-铁纳米材料处理L02细胞,通过MTT法检测纳米材料的细胞毒性,结果发现200μg/m L黄芩素-铁纳米材料组别对人正常肝细胞L02细胞未表现出明显的细胞毒性。使用超过抗菌浓度4倍的黄芩素-铁纳米材料作用于红细胞,160μg/m L黄芩素-铁纳米材料的溶血率为1%,低于5%的国际标准,表明黄芩素-铁纳米材料具有良好的血液相容性。结论:黄芩素-铁纳米材料能够有效杀灭革兰氏阴性菌,与H_2O_2联后对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌均具备Fe biofortification优异的抗菌效果。黄芩素-铁纳米材料无明显细胞毒性且血液相容性较好,在抗菌方面具有良好的应用前景。

目的：探讨乳酸菌素对幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H.pylori）感染胃炎小鼠炎症和肠道菌群的影响。方法：通过口服H.pylori混悬液制备H.pylori感染Urologic oncology小鼠模型。将H.pylori感染成功的小鼠随机分为模型组和乳酸菌素组，进行干预4周。革兰氏染色、Warthin-Starry银MLN8237染色和H.pylori免疫组化染色验证小鼠胃黏膜H.pylori的定植，HE染色观察小鼠胃黏膜组织病理学改变，免疫组化法测定小鼠胃黏膜iNOS、IL-1β和3-Nitrotyrosine的表达，16S rRNA测序分析肠道菌群结构。结果：造模组小鼠H.pylori定植成功；乳酸菌Puromycin分子式素能改善H.pylori感染性胃炎小鼠胃组织病理形态；抑制胃黏膜中iNOS、IL-1β和3-Nitrotyrosine的表达。相较于H.pylori感染组，乳酸菌素组小鼠的肠道菌群组成结构具有明显差异。乳酸菌素可通过调节厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidete）、放线菌门（Actinobacteriota）和疣微菌门（Verrucomicrobiota）的组成，增加肠道菌群的多样性。在属水平上，乳酸菌素可促进未分类的鼠杆菌科（g＿＿norank＿f＿＿Muribaculaceae）、阿克曼氏菌属（Akkermansia）和另枝菌属（Alistipes）等产生短链脂肪酸细菌的生长，抑制杜氏杆菌属（Dubosiella）等炎症相关细菌的增殖，改善肠道菌群组成结构。结论：乳酸菌素能够恢复由H.pylori感染破坏的肠道菌群结构，促进有益菌的增殖，降低炎症反应并缓解胃黏膜氧化损伤，对H.pylori感染性胃炎小鼠发挥保护作用。

目的1 评价祛湿通络方联合阿奇霉素治疗儿童肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)的有效性与安全性,探索其在因MPP导致的微循环障碍“肺络瘀血”中的调节作用。2 研究肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)感染人呼吸道上皮细胞(Beas-2b)上清液及细胞中炎症因子水平的影响及祛湿通络方对PI3K/AKT信号通路调节作用。3 初步探索祛湿通络方治疗MP感染小鼠的作用机制。方法1 第一部分:祛湿通络方联合阿奇霉素治疗MPP的临床疗效评价。临床试验:收集来自2021年02月至2022年12月之间的辽宁中医药大学附属医院与河南中医药大学第一附属医院的共96名确诊患儿。按照2:1的比例随机分组(治疗组64例、对照组32例),治疗组给予口服祛湿通络方配方颗粒联合静脉滴注阿奇霉素,对照组在静脉滴注阿奇霉素的基础上口服祛湿通络方配方模拟剂,治疗疗程为5天。治疗结束后分析主要疗效指标(疾病的总有效率、中医证候疗效)、次要疗效指标(完全退热时间、退热起效时间、咳嗽、咳痰、气喘起效时间)及凝血四项(凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)),并对本方的安全性及有效性进行评估。2 第二部分:祛湿通络方干预MP诱导的Beas-2b细胞的作用细胞实验:实验前期进行祛湿通络方有效活性成份鉴定、祛湿通络方与阿奇霉素干预浓度筛选等工作。将Beas-2b细胞分为7组,分别为空白组、模型组、中药组3个组(低、中、高剂量组)、阿奇霉素组、联合用药组(中药中剂量+阿奇霉素),造模干预结束后观察细胞形态改变,并收集细胞上清液与细胞。细胞上清液用于ELISA法检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,收集细胞并提取RNA用于实时荧光定量PCR法检测IL-6、IL-1β基因表达情况。3 第三部分:祛湿通络方对MP感染的BALB/c小鼠模型的作用机制3.1 祛湿通络方对MP感染的BALB/c小鼠模型的作用分组方法:将雌性BALB/c小鼠72只随机分为9组,每组8只,分别为空白组3组(第3天,简称K3组;第7天,简称K7组;第14天,简称K14组)、模型组3组(第3天,简称M3组;第7天,简称M7组;第14天,简称M14组)、联合用药组3组(阿奇霉素+祛湿通络方,第3天,简称L3组;第7天,简称L7组;第14天,简称L14组)。干预方法:MP造模3天后空白组、模型组分别给予生理盐水连续灌胃3天、7天、14天,200μL/天/只,联合用药组灌胃540mg/mL祛湿通络颗粒与9.01mg/mL阿奇霉素3天、7天、14天,200μL/天/只。观察指标:干预期间记录小鼠体重、进食量与行为学变化,如果出现小鼠精神萎靡、活动减少、竖毛无光泽、进食饮水量减endocrine genetics少、呼吸频率加快、体重减少等情况则视为模型建立成功。干预结束后收集肺组织进行HE染色、免疫组化、Western blot实验。3.2 祛湿通络方对MP感染的急性期BALB/c小鼠模型的作用机制研究分组方法:将雄性BALB/c小鼠72只随机分为8组,每组9只,分别为空白组、模型组、中药组(低、中、高剂量)、阿奇霉素组、联合用药组(中药中剂量+阿奇霉素)、抑制剂组。干预方法:MP造模3天后,所有组别连续灌胃3天,灌胃量200μL/次/只。其中,空白组与模型组,灌胃生理盐水;中药组,灌胃浓度分别为270mg/mL、540mg/mL、1080mg/mL;阿奇霉素组,灌胃浓度9.01mg/mL;联合用药组,灌胃中药中剂量与阿奇霉素;抑制剂组,静脉注射LY294002通路抑制剂,同时灌胃中药中剂量。观察指标:干预期间记录小鼠体重、进食量与行为学变化,干预结束后收集肺组织进行HE染色、免疫组化检测、Western blot实验,收集血浆检验活化部分凝血活酶时间(APTT)与凝血酶原时间(PT)。结果1.临床研究1.1 主要疗效指标对治疗组与对照组的疾病总有效率进行统计比较,差异有统计学意义(P=0.041<0.05),治疗组总有效率优于对照组。对两组的中医证候疗效进行统计比较,差异有统计学意义(P=0.039<0.05),治疗组的中医证候疗效优于对照组。1.2 次要疗效指标将两组的完全退热时间、退热、咳嗽、咳痰、气喘起效时间进行比较,完全退热时间(P=0.041<0.05)、退热起效时间(P=0.035<0.05)、咳嗽起效时间(P=0.030<0.05)、咳痰起效时间(P=0.048<0.05)、气喘起效时间(P=0.041<0.05),差异均具有统计学意义,治疗组完全退热时间、退热、咳嗽、咳痰、气喘起效时间少于对照组。1.3 凝血四项比较对治疗前后两组患儿PT、APTT、FIB、T-T水平进行比较,两组在治疗前PT、APTT、FIB、T-T水平差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。治疗后两组患儿PT、APTT、FIB、T-T水平差异仍无统计学意义(P>0.05),说明两组治疗后PT、APTT、FIB、T-T水平亦无明显差异。分别比较两组治疗前后PT、APTT、FIB、T-T水平的差异,均有统计学意义(P<0.05),说明两组患儿在治疗后PT、APTT水平均有明显升高,FIB、T-T水平在治疗后均有显著下降。对两组PT、APTT升高程度及FIB、T-T下降程度进行比较,P>0.05,提示治疗组与对照组在提高PT、APTT水平和降低FIB、T-T水平方面无统计学意义,说明祛湿通络方联合阿奇霉素与单独使用阿奇霉素均可提高PT、APTT水平,降低FIB、T-T水平。2.细胞实验研究2.1 祛湿通络方成份鉴定发现有效活性成份主要包柚皮苷(Naringin)、白藜芦醇(Resveratrol)、槲皮素(Quercetin)、白杨素(Chrysin)、山奈酚(Kaempferol)、香兰素(Vanillin)、异鼠李素(Isorhamnetin)、芦丁(Rutin)、6-O-甲基黄芩苷(6-O-Methylscutellarin)、木犀草素(Luteolin)、黄芩素(Wogonin)、芒柄花素(Formononetin)等。2.2 药物干预浓度筛选对祛湿通络方与阿奇霉素分别进行浓度筛选,最终选用祛湿通络方600ug/mL、300ug/mL、150ug/mL,阿奇霉素7.8ug/mL为本实验的药物干预浓度。2.3 细胞形态观察给药组与模型组进行对比,模型组出现大量漂浮死细胞,贴壁细胞约30%,细胞变形,挛缩,细胞核破裂,出现大量细胞碎片,给药组细胞形态基本正常,细胞贴壁50%以上,散在细胞碎片。说明祛湿通络方、阿奇霉素及联合用药组在细胞形态层面上有保护Beas-2b细胞的作用。2.4 Elisa法检测细胞上清液IL-6、TNF-α、IL-1β水平除中药低剂量组外(IL-6:P=0.7879,TNF-α:P=0.9886),中药中、高剂量组、阿奇霉素组与联合用药组均可降低细胞上清液中的IL-6、TNF-α水平(P<0.05);中药低、中、高剂量组、阿奇霉素组及联合用药组对细胞上清液中的IL-1β水平有降低作用,均有统计学差异(P<0.05)。此外还发现祛湿通络方联合阿奇霉素降低细胞上清液IL-6、TNF-α、IL-1β水平较单独用药效果更佳(P<0.05)。2.5 荧光定量PCR法检测细胞中IL-6、IL-1β基因表达情况中药低、中、高剂量组、阿奇霉素组及联合用药组对IL-6、IL-1β基因表达具有明显下调作用(P<0.0001),说明各组药物对MP感染后的Beas-2b细胞均有抗炎作用;联合用药组与单独用药组差异明显(P<0.05),说明中西医联合用药具有协同增效作用。3.动物实验研究3.1 祛湿通络方对MP感染的BALB/c小鼠模型的作用3.1.1 体重与进食量(1)空白组体重逐渐上升,并在16～17g左右稳定,其他六组小鼠在造模后第二天出现体重下降,模型组下降速度大于联合用药组。(2)M14、L14两组在8～10天时(给药后的5到7天)出现体重的回升,但模型组体重回升时间较联合用药组时间稍后,上升速度较慢,且体重变化易反复。(3)空白组三组小鼠,进食量稳定波动在14～16g之间。模型组与联合用药组在造模的第二天出现进食量骤然下降,并在第8天开始上升。M14与L14组相比,进食量在12天后趋于一致。3.1.2 行为学变化(1)空白组三组小鼠精神状态良好,毛发正常有光泽,活动良好,无呼吸急促,口鼻周无分泌物,大便正常。(2)模型组三组在造模第二天出现精神状态欠佳,嗜睡,而后逐渐萎靡,反应迟钝,活动量减少,竖毛无光泽,寒战,呼吸频率增快,口鼻周围出现分泌物,大便质粘,气味较空白组臭。(3)联合用药组造模第二天出现精神欠佳,嗜睡,竖毛无光泽,寒战,呼吸频率增快,口鼻周围出现分泌物,在给药第二天上述症状开始好转,但较空白组差,L14组在给药第7天精神状态好转,无嗜睡,毛发正常无竖毛,无寒战,给药第13selleck CL 318952天时上述症状完全好转,但体重较空白组低。3.1.3 肺组织病理学观察(1)K3与K7组肺泡结构清晰,上皮细胞排列整齐,各级支气管厚度一致,肺泡内无明显分泌物,气管周围未见明显巨噬细胞、嗜酸性粒细胞浸润;K14组肺泡间隔轻度增厚,上皮细胞轻度增生,管腔内未见明显分泌物,血管少量出血。(2)模型组三组较空白组,出现肺实变,肺泡消失,大量炎性细胞与嗜酸性粒细胞浸润,上皮细胞增生严重,M3组肺泡周围的炎性渗出较M7组严重,M3组出现大量血管出血,M14组较M3组与M7组相比炎性细胞减少,但气道上皮仍然增生。组织病变程度排序M3组>M7组>M14组。(3)联合用药组和模型组相比,未见明显大片肺实变,气道炎性细胞与嗜酸粒细胞明显减少,上皮细胞增生减轻,L7组与L3组相比,肺泡腔融合程度减轻,L14组与L3组、L7组比较肺泡结构较清晰。3.1.4 免疫组化检测IL-6、TNF-α(1)空白组与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.0001),模型组小鼠肺组织中IL-6显著增高;药物干预后,IL-6水平给药组较模型组明显下降(M3 vs L3P=0.001<0.05,M7vs L7P=0.0287<0.05,M14vs L14P=0.0215<0.05)。(2)在MP感染后小鼠肺组织中的TNF-α显著增高,差异有统计学意义(P<0.0001),药物干预后,模型组与联合用药组相比,TNF-α显著降低(M3 vs L3 P=0.001<0.05,M7 vs L7 P=0.0018<0.05,M14vs L14P=0.0085<0.05)。3.1.5 Western blot 测定 PI3K/AKT 通路蛋白PI3K/AKT通路蛋白在各组间表达有明显差异,造模后模型组与空白组相比,p-PI3K/PI3K蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.0001),p-AKT/AKT蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(K3vs M3 P=0.0021<0.05,K7vs M7P<0.0001,K14vs M14 P=0.0063<0.05)。药物干预后,PI3K/AKT通路蛋白显著上升,联合组与模型组相比差异有统计学意义(M3 vs L3 P= 0.0002<0.05,M7 vs L7 P=0.0002<0.05,M14 vs L14 P=0.0037<0.05),提示MP感染后可抑制PI3K/AKT通路的表达,祛湿通络方联合阿奇霉素可激活PI3K/AKT信号通路以达到治疗作用。3.2 祛湿通络方对MP感染的急性期BALB/c小鼠模型的作用机制研究3.2.1 体重与进食量(1)空白组体重平稳上升,达到19g左右时保持稳定;其余组在造模后体重缓慢上升,模型组上升速度最低,造模第二天后体重均降低。(2)空白组进食量保持稳定,均在30g左右,造模后除空白组外其余组进食量均下降,给药组在第三天时进食量有所恢复,模型组的平均进食量低于其他各组。3.2.2 行为学变化(1)空白组小鼠精神状态未见明显异常,毛发顺滑有光泽,活动灵活,未见呼吸急促、咳嗽,口鼻周围无异常分泌物,大便正常。(2)模型组与空白组对比,造模第二日开始出现精神状态欠佳,嗜睡萎靡,呼吸频率增快,咳嗽,竖毛无光泽,寒战,口鼻周分泌物,大便粘滞。(3)中药低、中、高剂量、阿奇霉素、联合用药组在造模第二日出现模型组上述症状,但程度介于模型组与空白组之间。3.2.3 肺组织病理学观察(1)空白组、模型组与3.1.3节中空白组、模型组相应肺组织结构类似。(2)中药低剂量组可见肺组织实变,肺泡融合成肺大泡,肺泡周围有炎性细胞和嗜酸性粒细胞渗出,但较模型组浸润程度低;中药中剂量组可见大范围肺组织实变,上皮细胞大量增生,中性粒细胞浸润较低剂量组程度低;中药高剂量组、阿奇霉素组与联合用药组肺组织实变程度低,可见上皮细胞轻度增生,血管内少量出血。(3)抑制剂组肺组织轻度实变,上皮细胞增生,肺泡周围可见炎症细胞和嗜酸性粒细胞浸润,血管内大量出血。3.2.4 免疫组化与Western blot检测(1)模型组较空白组VEGFA水平明显下降(P<0.05);治疗后药物干预各组较模型组比较,VEGFA水平差异具有统计学意义(P均<0.05),低剂量组、中剂量组、高剂量组、阿奇霉素组、联合用药组VEGFA水平均显著上升;应用PI3K通路抑制剂后,抑制剂组与中剂量组比较VEGFA水平下降(P<0.05)。(2)模型组较空白组LC3B水平明显升高(P<0.0001);治疗后药物干预各组与模型组比较,LC3B水平差异具有统计学意义(P<0.0001),用药各组LC3B水平显著下降;抑制剂组与中剂量组比较(P<0.05),LC3B水平显著升高。(3)空白组与模型组比较,Beclin1差异无统计学意义(P=0.8093>0.05);各给药组与模型组相比,Beclin1比较无明显差异(P均>0.05),提示Beclin1在本实验中MP感染小鼠及药物治疗后均无明显差异,猜测与本实验肺组织对Beclin1因子不敏感有关,有待后续实验验证。(4)PI3K/AKT通路在本实验第二部分第一节中发现有明显变化,本节在MPP急性期时进行PI3K/AKT通路抑制剂回复实验,以验证祛湿通络方联合阿奇霉素治疗MPP与本通路相关。空白组与模型组相比p-PI3K/PI3K蛋白与p-AKT/AKT蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.0001);各组药物干预后与模型组比较,p-PI3K/PI3K蛋白与p-AKT/AKT蛋白差异有统计学意义(P均<0.05),提示药物干预后PI3K/AKT通路被激活;应用PI3K抑制剂阻断PI3K/AKT通路,发现抑制剂组p-PI3K/PI3K蛋白与p-AKT/AKT蛋白明显下降,差异有统计学意义(P均<0.0001)。3.2.5 PT 与 APTT 比较模型组PT与APTT显著下降(P<0.0001),给药组较模型组PT与APTT升高(P<0.0001),说明MP感染小鼠后PT与APTT下降,机体呈高凝状态,当给药后PT与APTT升高,高凝状态缓解。结论1经RCT临床试验验证,祛湿通络方联合阿奇霉素相比单独应用阿奇霉素治疗MPP,有较高的临床治愈率,可缩短退热时间,降低退热、咳嗽、咳痰、气喘起效时间,减少MP对患儿肺组织的损伤,缓解MP感染引发的机体高凝状态,减少微循环障碍中“肺络瘀血”的发生。2祛湿通络方可调节PI3K/AKT信号通路,激活VEGFA蛋白,抑制自噬,降低IL-6、TNF-α、IL-1βPLX5622浓度等炎症因子,缓解微循环障碍,保护肺组织。

目的1.制备尿酸所致人肾小管上皮细胞(Human renal tubular epithelial cells,HK-2)损害模型。2.通过观察HK-2细胞抑制率和转化生长Cobimetinib因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、B-细胞淋巴瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的变化,探讨氯沙坦对尿酸所致HK-2损害是否具有保护作用,及其保护作用是否随氯沙坦浓度增加而增强。方法以HK-2为研究对象。1.制备尿酸所致HK-2损害模型并筛选实验所需氯沙坦浓度。分组:(1)空白组(加入完全培养基,无HK-2);(2)对照组(加入完全培养基);(3)尿酸A组(完全培养基中尿酸浓度为400umol/L);(4)尿酸B组(完全培养基中尿酸浓度为800umol/L);(5)尿酸C组(完全培养基中尿酸浓度为1600umol/L);(6)氯沙坦A组(完全培养基中氯沙坦浓度为1ng/ml);(7)氯沙坦B组(完全培养基中氯沙坦浓度为10ng/ml);(8)氯沙坦C组(完全培养基中氯沙坦浓度为100ng/ml);(9)氯沙坦D组(完全培养基中氯沙坦浓度为1000ng/ml)。每组设置6个复孔,实验重复3次取平均值。各组分别检测24h、48h、72h的细胞抑制率,用CCK8筛选药物浓度及作用时间。2.根据以上实验结果,选择尿酸浓度为800umol/L,氯沙坦浓度为1ng/ml、10ng/ml、100 ng/ml,细胞处理时间为48h,设置新的实验分组:(1)A组(尿酸组,完全培养基中尿酸浓度为800umol/L、氯沙坦浓度为0ng/ml);(2)B组(尿酸+氯沙坦1组,完全培养基中尿酸Biomphalaria alexandrina浓度为800umol/L、氯沙坦浓度为1ng/ml);(3)C组(尿酸+氯沙坦2组,完全培养基中尿酸浓度为800umol/L、氯沙坦浓度为10ng/ml);(4)D组(尿酸+氯沙坦3组,完全培养基中尿酸浓度为800umol/L、氯沙坦浓度为100ng/ml);(5)E组(对照组,完全培养基中尿酸浓度为0umol/L、氯沙坦浓度为0ng/ml)。CCK8实验每组设置6个复孔,实验重复3次取平均值检测各组细胞抑制率,PCR实验每组设置3个复孔,实验重复3次取平均值检测HK-2内TGF-β1和Bcl-2的表达。结果1.不同作用时间及不同浓度尿酸、氯沙坦处理的HK-2中,当尿酸浓度为400umol/L时,与对照组相比,HK-2在24h、48h、72h与对照组相比受到轻度抑制,差异有统计学意义(P<0.05);当尿酸浓度为1600umol/L时,HK-2与对照组相比在24h即受到明显抑制,72h细胞抑制率最高达93.78%;当尿酸浓度为800umol/L、作用时间为48h时,细胞抑制率最接近且不高于50%,因此选择该浓度及时间制备尿酸所致HK-2损害模型。氯沙坦在浓度为1ng/ml、10ng/ml和100ng/ml,作用时间为24h、48h、72h时,细胞与对照组相比未见明显抑制改变,差异无统计学意义(P>0.05);当氯沙坦浓度为1000ng/ml时,在24h、48h和72h与对照组相比均有明显抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),72h细胞抑制率最高达96.73%,因此在实验中排除此浓度。2.当HK-2在不同尿酸浓度条件下作用24h、48h、72h时,整体分析(双因素重复测量方差分析)发现,时间比较、浓度比较及时间与浓度的交互作用均有显著性意义(P<0.05),提示细胞抑制率在时间、尿酸浓度的变化很大,且随浓度的变化受时间影响。组间比较(单因素方差分析+多重比较):不同浓度尿酸处理后的各个时间处,3组的差异显著(P<0.05),随着尿酸浓度增加细胞抑制率也从低到高变化。组内比较(配对t检验):3组尿酸浓度所有时间点均有统计学意义(P<0.05),且细胞抑制率随着时间的增加而增加。3.同一浓度尿酸、不同浓度氯沙坦处理HK-2,在48h、尿酸浓度800umol/L的条件下细胞受到明显抑制,细胞在450nm处的吸光度随氯沙坦浓度的升高而升高、细胞抑制率随氯沙坦浓度的升高而降低,差异有统计学意义(P<0.05)。1ng/ml浓度的氯沙坦即可改善尿酸所致的HK-2细胞抑制情况,且细胞抑制改善效果在一定范围内随氯沙坦浓度的升高而升高。4.在48h、尿酸浓度800umol/L的条件下细胞内TGF-β1相对表达量较高、Bcl-2相对表达量较低。随着尿酸中氯沙坦浓度的升高,TGF-β1的相对表达量随之下降,而Bcl-2的相对表达量随之升高,差异有统计学AZD1152-HQPA意义(P<0.05)。低浓度氯沙坦即可改善尿酸引起的HK-2纤维化及凋亡,且这种改善作用在一定范围内随着氯沙坦浓度的升高而增强。结论1.当尿酸浓度为800umol/L、作用时间为48h时,细胞抑制率接近50%,可选择该浓度及时间制备尿酸所致HK-2损害模型。2.细胞抑制率随时间、尿酸浓度的变化很大,且随浓度的变化受时间影响。3.低浓度的氯沙坦即可改善尿酸所致的HK-2细胞抑制及纤维化和凋亡,且改善效果在一定范围内随氯沙坦浓度变化。

为探究小檗碱(berberine, Ber)对LPS诱导的神经元损伤及腺苷一磷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK)-mTOR-p70核糖体蛋白S6激酶(ribosomaiprotein S6 kinase, S6K)信号通路的影响，MTT法筛选最佳的Ber处理HT22神经元浓度。将HT22细胞分为NC组、LPS组、Ber+LPS组和AMPK抑制剂Compound C(Com.C)+Ber+LPS组。FACS检测HT22细胞凋亡率；qRT-PCR法检测HT22细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA相对表达量；DCFH-DA荧光探针检测HT22细胞中活性氧类(reactive oxygen species, ROS)含量；TBA法、比色法和WST-1法分别检测HT22细胞中丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的含量；Western blotting检测HT22细胞中B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma 2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein, BAX)、脑源性神经营养因子(brain-IDN-6556 IC50derived neurotrophic factor, BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(tropomyosin receptor kinase B, Trkmembrane photobioreactorB)、神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、磷酸化mTOR(p-mTOR)和磷酸化p70S6K(p-p70S6K)蛋白的表达水平。结果显示，与0μmol/L Ber比较，5μmol/L和10μmol/L Ber处理对HT22细胞增殖活力的影响差异无统计学意义(均P>0.05), 15μmol/L和20μmol/L Ber处理可显著降低HT22细胞的增殖活力(均P<0.05),因此选择10μm确认细节ol/L Ber用于后续研究。与NC组相比，LPS处理可增加HT22细胞的凋亡率(P<0.05),上调细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA相对表达水平(均P<0.05),上调ROS和MDA的含量以及BAX、p-mTOR和p-p70S6K蛋白的表达水平(均P<0.05),下调细胞中GSH-Px和SOD含量以及Bcl-2、BDNF、TrkB、NGF和p-AMPK蛋白表达水平(均P<0.05)。Ber干预显著减轻了LPS诱导的HT22细胞损伤(均P<0.05), Com.C预处理部分逆转了Ber处理对LPS诱导的HT22细胞的保护作用(均P<0.05)。由此，Ber可能通过调控HT22细胞中AMPK-mTOR-p70S6K信号通路缓解LPS诱导的神经元损伤。

研究背景:耐多药细菌感染对人类健康造成的威胁日益严重,抗微生物药物的发展却远远不能满足临床需求。发现和开发新的抗生素来对抗细菌耐药性是当务之急。抗菌肽由于其具备广谱的抗菌活性、独特的膜靶向机制,且不易产生耐药性的特点,因此有望成为传统抗生素的替代品。然而,抗菌肽还存在成本高昂、稳定性差和体内毒性较高等缺点,小分子抗菌拟肽比抗菌肽的结构更简单,细胞毒性更低、稳定性更好,具有更高的生物利用度,因此受到了越来越多的学者关注,目前,开发小分子拟肽抗菌剂是一种应对抗生素耐药性问题的有吸引力的策略。研究目的:选择价格低廉的分子骨架,采用简单的合成方法在其母核结构上引入不同的分子基团进行化学修饰,制备一系列小分子拟肽抗菌剂,筛选出一种高效杀菌、溶血活性低、细胞毒性低并且不产生耐药趋势的候选化合物,并且对其进行更深入的生物学评价,以期得到新型的快速杀菌的广谱抗菌药物,为克服耐药性的发展提供新的解决方案。方法:本研究受到抗菌肽的两亲性结构和功能的启发,拟使用市场上廉价的2-甲氧基吩噻嗪为起始原料,在吩噻嗪支架中引入含有脂肪胺或胍基的阳离子基团,同时引入不同的疏水链,通过模拟抗菌肽的两亲性化学结构和靶向于细胞膜的抗菌机制,设计和合成一系列基于吩噻嗪的膜活性抗菌剂,对抗菌剂进行构效关系研究和生物学评价,具体内容包括抗菌活性测定、溶血活性测定、细胞毒性测定、时间杀菌动力学研究、体外盐敏感性研究、抗菌机制研究、生物膜抑制和破坏实验、耐药性发展的趋势以及体内抗菌活Dolutegravir分子式性的验证。结果:本研究中一共设计并合成了25个新型的含疏水脂链和亲水阳离子基团的吩噻嗪类小分子拟肽抗菌剂。与传统抗菌肽复杂的结构相比,这一系列新型阳离子两亲性吩噻嗪衍生物是小分子的,易于通过改变阳离子基团和亲脂部分的变化进行合成修饰,用于结构-活性研究,最终筛选出了最优化合物P30,本研究开展的工作及其主要结果如下:(1)化合物P30对革兰阳性菌(MIC=1.56μg/m L)和革KPT-330分子式兰阴性菌(MICs=3.125-6.25μg/m L)均有较强的抗菌活性,溶血活性低(HC_(50)=281.4±1.6μg/m L),在浓度≤50μg/m L时对哺乳动物细胞具有较低的细胞毒性。它对细菌细胞膜的破坏能力强,膜选择性好,被认为是最优候选抗菌剂。(2)杀菌动力学研究证实了化合物P30对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有快速有效的杀菌能力。化合物P30在不同盐生理浓度下还表现出良好的稳定性,且20代后对金黄色葡萄球菌ATCC 29213和肺炎克雷伯菌ATCC 10031均不产生耐药性。(3)作用机制研究表明化合物P30可通过破坏细菌细胞膜引起细菌失活,同时具有抑制和破坏生物膜的能力。(4)化合物P30在金黄色葡萄球菌ATCC 29213和铜绿假单胞菌ATCC 9027感染的小鼠细菌性角膜炎模型中表现出较强的体内疗效(P<0.01)。结论:综上所述,本文一共合成了25个阳离子两亲性吩噻嗪类拟肽抗菌剂,并对其生物活性进行了评价。其中,结构优化后得到的综合性能最优化合物P30含有一个正庚基和两个精氨酸残基,它对革兰阳性菌和革兰阴性菌均表现出较强的杀菌活性,具有较低的细胞毒性。与传统抗生素万古霉素和环丙沙星相比,杀菌速度快且不易产生耐药性,在小鼠细菌性角膜炎中其体内疗效也得到验证。这表明疏水脂链和氨基酸的引入不仅可以提高吩噻嗪分子骨架抗菌活性,并且利于降低其细胞毒性。该设计策略为发现和开发基于吩RNA biology噻嗪类的广谱抗菌剂以对抗细菌耐药以及膜靶向抗菌剂的优化和改性提供了新的设计思路。

目的 优选复方连参抗炎栓的最佳水提工艺与干燥工艺参数。方Infection and disease risk assessment法 以水提方式、浸泡时间、加水量、煎煮时间为考察因素，选择水提液中盐酸小檗碱、没食子酸转移率及浸膏得率为综合评价指标，采用信息熵-正交试验设计优化该制剂中黄连、苦参、玫瑰花、没食子的Alpelisib体外提取方式及其工艺条件，并NVP-TNKS656作用考察其最佳干燥温度。结果 黄连与苦参、玫瑰花与没食子分别提取更有利于有效成分的浸出。黄连、苦参水提液中盐酸小檗碱提取转移率约为44%，没食子、玫瑰花水提液中没食子酸的提取转移率达84%。水提与干燥工艺的最佳条件为：黄连、苦参分别用10倍、8倍量水提取2次，提取时间分别为2.5、2.0 h，提取液经浓缩后于70℃减压干燥；没食子、玫瑰花分别用8倍、6倍量水提取两次，提取时间分别为2.5、2.0 h，提取液浓缩后于80℃减压干燥。结论 该研究结果可为确定复方连参抗炎栓合理的制备工艺提供实验依据。

目的：探讨干扰三元基序59(TRIM59)表达对慢性粒细胞白血病K562细胞柔红霉素（DNR）化疗敏感性的影响及相关分子机制。方法：采用RT-q PCR法检测慢性粒细胞白血病患immune sensing of nucleic acids者骨髓组织和K562细胞中TRIM59 m RNA表达水平。用脂质体转染法将TRIM59特异性小干扰RNA(si-TRIM59)转染至K562细胞，并用DNR处理细胞。CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测凋亡相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果：与初治时骨髓组织相比，化疗耐药时患者骨髓组织中TRIM59 m RNA表达水平升高（P<0.05）。与对照组比较，si-TRIM59组和DNR组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）；细胞中Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达量均显著升高，而Bcl-2、Wnt3α、GSK-3LY2835219半抑制浓度β蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin比值均显著降低（P<0.05）。与si-TRIM59组和DNR组比较，si-TRIM59+DNR组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）；细胞中Bax、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达量均显著升高，而Bcl-2、Wnt3α、GSK-3β蛋白表达量、p-β-catenin/β-catenin比值均显著降低（P<0.05）。结论：干扰TRIM59表达可增强K562细胞对DNR的化疗敏感性，其作Etoposide配制用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。