PI3K抑制剂

目的 基于非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路探究丹参多酚酸对抑郁症模型大鼠海马神经元细胞及单胺类神经递质的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、丹参多酚酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、丹参多酚酸高剂量组(40 mg·kg~(-1))、JAK2抑制药组(pacritinib, 10 mg·kg~(-1)),每组8只。除对照组外，其他各组采用慢性温和应激法建立抑郁症模型，再按剂量腹腔注射给药。用免疫组化法检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和成纤维细胞生长因子(FGF)表达，用酶联免疫吸附法检测海马组织白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平，用蛋白质印迹法检测海马组织JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 对照组、模型组、丹参多酚酸低、高剂量组、pacritinib组海马组织GFAP表达分别为35.68±3.28、8.32±2.25、12.36±3.54、16.52±3.13和20.57±4.12;FGF表达分别为48.55±5.22、9.24±1.07、11.29±2.28、19.46±3.83和23.49±4.65;IL-6含量分别为(12.48±2.24)、(39.35±4.32)、(36.68±6.47)、(24.17±5.81)和(21.60±5.29)ng·mL~(-1);IL-1β含量分别为(17.42±3.14)、(52.78±6.82)、(48.63±5.71)、(33.25±6.34)和(29.92±4.65)ng·mL~(-1);TNF-α含量分别为(24.67±3.51)、(65.81±9.47)、(61.25±7.38)、(41.72±5.63)和(37.79±5.46)ng·mL~(-1);5-HT含量分别为(28.75±2.54)、(19.16±3.61)、(21.72±2.98)、(24.91±3.23)和(26.37±3.74)ng·mL~(-1);DA含量分别为(269.78±22.34)、(205.41±17.66)、(212.36±19.42)和(245.52±26.73)、(251.75±29.95)ng·mL~(-1);NE含量分别为(32.47±2.36)、(Cloning and Expression22.68±3.14),(25.13±3.50)、(27.89±3.27)和(28.95±2.57)ng·mL~(-1);p-JAK2/JAK2分别为0.92±0.09、1.44±0.12、1.38±0.13、1AY-22989.13±0.11和1.08±0.15;p-STAT3/STAT3分别为0.94±0.07、1.62±0.18、1.57±0.20、1.11±0.15和1.04±0.12。上述指标，对照组与模型组比较，模型组与丹参多酚酸高剂量组、pacritinib组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 丹参多酚酸能有效改善大鼠抑郁样行为，可能通过抑制JAK2/STATDibutyryl-cAMP体内3信号通路，减轻神经炎症，调节单胺类神经递质水平，改善星形胶质细胞功能途径实现。

研究背景:曲霉属丝状真菌是引起人类浅表和侵袭性感染以及过敏反应的重要病原体,特别是由曲霉菌属引起的侵袭性真菌病,尽管已经取得了一些进展,但对于真菌感染的诊断仍然很困难。目前抗真菌药物的耐药率不断增加,因此迫切需要找到快速准确的诊断方法以及预防措施。目前免疫蛋白质组学技术的应用为曲霉疾病的诊断、治疗和疫苗研发提供了新的靶点,是未来研究的主要方向。目的:(1)探讨2020年11月至2021年3月肺部感染患者曲霉菌属感染的情况,比较不同检测方法对曲霉菌属检测的灵敏度和特异性。(2)本研究对Cal A和更多Cal B的免疫反应性及免疫原性进行评估,以评价其作为病原菌感染诊断标志和疫苗候选抗原的可行性。材料及方法:(1)收集2020年11月至2021年3月的肺泡灌洗液,通过分子诊断学技术,从162个肺泡灌洗液中鉴定出12个曲霉菌属感染,结合真菌培养和MALDI-TOF MS全自动生物质谱鉴定系统、显微镜检查、GM及BDG试验分析其诊断方法的灵敏度和特异性。(2)采用大肠埃希菌表达系统表达重组Cal A和Cal B蛋白后,将NPF-03084014 molecular weighti-NTA琼脂糖亲和柱纯化后的蛋白对小鼠进行免疫。通过酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测25例烟曲霉感染的患者和一组免疫小鼠血清中Cal A和Cal B特异性的Ig G抗体其Ig G亚型的水平、Cal A和Cal B免疫后小鼠脾细胞的抗原特异性免疫应答及FACS技术检测小鼠外周血/脾脏淋巴细胞亚群和Th1/Th2型细胞因子模式来探究Cal A和Cal B的抗原反应性和免疫原性。biomass pellets结果:(1)曲霉菌属感染的患者主要为男性,年龄>65岁居多。(2)对比之下,培养方法的灵敏度和特异性较高,抗原方法特异性较低,镜检方法灵敏度最低。(3)分子诊断学方法具有较高的灵敏度。(4)烟曲霉感染的患者体内有特异性Cal A和Cal B抗体,在经Cal A和Cal B免疫的小鼠中,Ig G1是主要的Ig G亚型。(5)Cal A和Cal B免疫的小鼠体内Th1、Th2和Th17型的细胞因子均有分泌。结论:体外实验及动物实验结果表明:Cal A和Cal B其具有良好的抗原反应性及免疫原性,可诱导Th1、Th2、Th17型细胞因子应答和高水平Ig G1抗体的产生,表明Cal A和Cal B具有成为烟曲霉诊断标志物和候选疫苗的潜力。

随着全球经济的快速发展和人民生活水平的不断提高,能源危机以及环保问题也日益加重,发展高能量密度且清洁可再生的新能源已迫在眉睫。氢气具有热值高、燃烧产物无污染等优点,被认为是最有前途的清洁能源之一。电催化分解水制氢是高效、低耗能的制氢技术之一,具有大规模工业应用的潜力。但是,电解水制氢面临电化学能垒高的问题,需要引入催化剂降低反应的势垒,商用的铂基、Ir O_2/Ru O_2催化剂分别具有高的析氢反应(Hydrogen evolution reaction,HER)和析氧反应(Oxygen evolution reaction,OER)催化活性,但高成本和稀缺性制约了其推广应用。因此,开发廉价、高效、稳定的替代电催化剂对电解水制氢技术具有重要意义。类普鲁士蓝(Prussian blue analogues,PBAs)作为一种廉价金属有机框架(Metal-organic Frameworks,MOF)材料,具有结构多样、化学成分可调、活性位点丰富的特点,在电催化分解水领域得到广泛关注。本文首先使用电沉积法在碳纤维纸(Carbon fiber paGalunisertib抑制剂per,CFP)上原位生长了Ni Co-PBA前驱体,结合低温硒化反应合成了二元复相金属电催化剂,进一步基于共沉淀法分别制备了Ni Co和Ni Co Fe-PBA粉体,采用相同的硒化工艺得到多金属硒化物电催化剂,系统研究了微观结构设计和成分调控对电催化剂分解水性能的影响,探寻了以类普鲁士蓝为前驱体提升多金属硒化物电催化剂性能的有效途径。(1)以CFP为基底,使用循环伏安法,在含有Ni~(2+)、[Co(CN)_6]~(3-)溶液中进行快速电沉积,通过调整溶液浓度、p H值等参数在CFP上原位生长了具有立方形貌的Ni Co-PBA前驱体。然后,使用化学气相沉积工艺,通过调节硒化温度和升温速率得到具有多孔互连结构的Ni Co-Se/CFP纳米材料,产物保持了前驱体的立方形貌特征。在p H=14的碱性环境中,Ni Co-Se/CFP仅需216 m V的HER过电位和308 m V的OER过电位即可驱动10 m A cm~(-2)的电流密度,性能明显优于单金属Co-Se/CFP电极和Ni Co-PBA/CFP前驱体。同时,Ni Co-Se/CFP电催化剂在碱性环境中表现出优异的耐久性。Ni Co-Se/CFP良好的催化活性得益于其独特的3D多孔互连结构,有利于暴露更多的活性位点,促进反应过程中物质的传输;Ni、Co复相硒化物产生的协同效应增强了电子转移动力学,提高了本征催化活性。(2)基于共沉淀法,合理设计溶液中Ni~(2+)Tibiocalcaneal arthrodesis/Co~(2+)的摩尔比,通过成分调控得到不同Ni~(2+)/Co~(2+)摩尔比的三金属Ni Co Fe-PBA前驱体,使寻找更多用相同的化学气相沉积工艺得到成分可控的Ni Co Fe-Se粉体。在相同的导电基底CFP上测试电催化性能,当Ni~(2+)/Co~(2+)=1:3时,Ni Co Fe-Se表现出最佳的电催化性能,驱动10 m A cm~(-2)的电流密度仅需194 m V的HER过电位和238 m V的OER过电位,对应的Tafel斜率分别低至36.9和57.1 m V dec~(-1),其性能远优于对应的双金属Ni Co-Se粉体催化剂,Ni Co Fe-Se性能的显著提升可归因于多相硒化物的协同效应,这说明合理的成分调控能进一步提高以PBAs为前驱体得到的金属硒化物电催化剂的性能,揭示了过渡金属基硒化物作为高效水分解电催化剂的潜力。

细菌性青枯病是由青枯劳尔氏菌（Ralstonia solanacearum）（以下简称“青枯菌”）引起的一种典型的维管束病害，发病后Alpelisib纯度严重影响作物产量与品质。选育抗病品种是从根本上解决青枯病危害的最有效措施，而了Mobile social media解植物免疫反应的分子机制是抗病育种的基础。越来越多的研究表明，维管束免疫具有细胞类型特异性。植物识别青枯菌后，通过信号传导诱导维管束细胞壁木质化，形成植物抵御青枯菌扩散的主要屏障。木质素的合成受到精细的调控，其关键合成酶基因在转录、翻译、时空特异性表达等不同方面受到调控。本文综述了植物对青枯菌的识别和信号传导机制，以及诱导维管束木质化调控青枯病抗性的研究进展AG-221细胞培养，包括诱导木质素合成基因表达、木质素单体转运和聚合、不同木质素类型产生等分子机制，以期为利用维管束木质化改性技术进行青枯病的抗性育种提供理论依据。

越来越多被广泛应用于消费品中的有机化合物被列为新污染物,引起了环境领域的广泛关注。三氯卡班Imidazole ketone erastin(TCC)是一种高效、广谱的抗菌试剂,广泛应用于沐浴用品、洗护用品、医用消毒剂等生活用品和医药用品的原料。TCC的抗生物降解性、高持久性和在环境的普遍性导致其具有潜在的生态风险。在新型冠状病毒肺炎疫情的影响下,大量药物和消毒剂的使用和积累导致TCC给生态、环境系统和人类健康带来更大的风险。已有研究表明,TCC易于从水体迁移到土壤环境中,可通过食物链生物累积。同时TCC在土壤环境中半衰期较长,并可诱导土壤动物(如蚯蚓)产生各类毒性效应。然而,氧化应激作为研究污染物毒性效应的重要指标,TCC的氧化应激效应目前并未得到广泛关注。现关于TCC的毒性效应仅停留在在个体水平上的剂量依赖性研究,以及少量氧化应激损伤的报道,而TCC在细胞和分子水平上诱导蚯蚓体腔细胞内氧化应激效应Alpelisib与抗氧化相关酶活性功能抑制的机制尚未阐明。为了更深入地了解TCC的氧化应激效应,并丰富研究层次,更好地分析TCC的综合毒性机制。基于上述研究进展,本研究在细胞和分子层面上选取了蚯蚓体腔细胞、两种典型抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)以及间接抗氧化酶溶菌酶(LZM)作为研究对象,揭示了 TCC的氧化应激效应机制,研究内容主要包括以下五个部分:第1章论述了环境中TCC的来源以及毒理学研究背景,介绍了 TCC的氧化应激毒性研究报道,并针对目前TCC目前广泛应用领域进行了总结,提出其对生态系统和人类健康的潜在危害仍值得关注。根据目前TCC毒性效应的研究进展,提出了研究领域亟待解决的关键科学问题,介绍了本研究的主要内容和研究价值。第2章在细胞水平构建了体外实验模型,以蚯蚓体腔细胞作为研究对象,检测不同剂量TCC暴露后蚯蚓体腔细胞内多项氧化损伤指标。TCC处理组体腔细胞活力下降至初始水平的77.3%,细胞内ROS、GSH、MDA水平均有不同程度的提高,证实了 TCC诱导蚯蚓体腔细胞产生氧化损伤。通过抗氧化实验,证实TCC能够显著抑制细胞内SOD(80.8%)和CAT(81.5%)活性。然而,我们发现抗氧化剂褪黑素能够削弱TCC对SOD和CAT活性的抑制作用,这一现象表明,TCC通过调节氧化应激效应影响SOD/CAT活性是一个潜在的机制。第3章在细胞实验研究的基础上,构建了 TCC与SOD和CAT直接结合的分子模型。在分子水平上,与TCC结合后,体外SOD活性受到抑制,CAT活性增强。结果证实,TCC影响SOD和CAT活性功能的另一个关键机制是TCC的直接结合作用。为了深入探讨TCC与SOD和CAT相互作用对其结构和功能的影响机制,进行了多光谱学、等温量热滴定法(ITC)和分子模拟技术综合研究。TCC的直接结合作用能够导致SOD/CAT蛋白骨架松动和多肽链扩展,破坏其二级结构。同时TCC与SOD和CAT的相互作用能够改变其聚集行为并形成了粒径更大的聚合体,以及破坏芳香族氨基酸的微环境。ITC实验表明,TCC通过相对温和的静电作用与SOD结合,而TCC通过更强亲和力的范德华力和氢键与CAT结合。TCC可以占据SOD的天然底物结合位点,导致SOD活性受到抑制。His 74、Asn 147和Tyr 357三种氨基酸残基均存在于CAT活性中心周围的结合口袋中,表明CAT活性的增强与其在血红素基团中结构的改变密切相关。研究结果全面揭示了 SOD/CAT在TCC诱导的氧化应激调控中的效应机制,并阐明了主要抗氧化酶SOD/CAT与TCC之间的相互作用机制。第4章在蛋白质分子水平上以溶菌酶(LZM)为研究对象,利用多光谱学技术探究了 TCC对LZM结构和构象的影响。TCC对活性中心附近的LZM残基有影响,使其氨基酸残基在较弱的极性微环境中重新定位。同时,TCAir Media MethodC与LZM的相互作用诱导产生了少量LZM的α-Helix结构,并改变了局部酰胺键(C=O)周围微环境,表明暴露于TCC后LZM的二级结构被破坏。α-Helix含量的增加促进了 LZM与TCC结合,LZM形成粒径较大的聚合体,表明蛋白骨架和多肽链被拉伸。此外,TCC可以通过分子间的相互作用,主要包括范德华力和氢键,以相对高的亲和力自发地与LZM结合,这是一种放热反应。进一步的分子对接结果表明,TCC结合位点位于LZM活性中心附近,与 Ala 107、Arg 112、Asn 59、Gln 57、Ile 98、Trp 108、Val109 和 Asp 52等多种残基相互作用。TCC与LZM和底物的结合位点发生相互作用,抑制了核心残基(Asp 52)对LZM活性的影响,从而表现出对天然底物的拮抗作用,导致LZM活性下降。这些结构变化会影响活性位点周围的构象和微环境,从而导致分子活性的抑制。本研究揭示了 TCC与LZM在结构和功能上相互作用的响应机制,并建立了 LZM与TCC结合的分子模型。第5章总结了本论文的主要实验内容,总结了创新点,提出了论文的不足之处并对下一步研究方向进行展望。在细胞层面,本研究探索了 TCC诱导蚯蚓体腔细胞产生的氧化应激相关毒性机制,通过抗氧化实验证实了 TCC能够诱导氧化损伤抑制抗氧化酶活性。通过模拟TCC与SOD和CAT的直接结合模型探究了 TCC影响SOD和CAT酶活性的分子机制,并对其结构和功能影响进行深入探讨。最后通过研究TCC与LZM的相互作用机制,从分子水平探究了 TCC对于间接抗氧化酶LZM活性和构象的影响,从而建立TCC与SOD、CAT和LZM三种抗氧化酶相互作用的结合模型。本论文在细胞和分子两个层面综合评价了 TCC的氧化应激毒性,为TCC毒性效应的研究提供了科学的参考依据

展青霉素(patulin, PAT)作为一种对人类和动物有致畸、致癌等多种危害的真菌毒素,极易污染水果、蔬菜和谷物及其制品等。鉴于PAT污染范围广、超标检出多等问题,针对该毒素的即时检测对保障食品安全至关重要。免疫分析是快速检测真菌毒素污染的有效手段之一。MC3生产商但是,尚未有灵敏性好、实用价值高的PAT单克隆抗体和基因工程抗体报道。本文综述了PAT免疫学检测方法研究现状,并通过梳理其免疫学检测发展历程,提出高效特异性PAT单克隆抗体制备的阻碍主要包selleck产品括PAT存在较大的极性、非免疫原性、在动物体内易被降解的特性及抗体制备选用的类似物结构偏差过大等。因此,本文认为筛选或制备结构稳定且更接近PAT的类似化合物可能是特异性PAT抗体制备的关键。另一方面,随着新型材料和技术(如电化学传感器)的发展,应用性能优良的抗体替代物建立新型免疫学或非免疫学检测方法的前景非常广阔,本hepatocyte transplantation文为PAT快速免疫检测方法的建立和应用提供理论依据和参考。

胃腺是胃消化功能中的重要内分泌腺体。为明确鳜(Siniperca chuatsi)个体发育中胃腺结构和功能发育特征,采用石蜡切片、荧光定量PCR和酶联免疫反应技术(ELISA)对孵化后0～45 d (0～45 dph, days post hatching)鳜胃腺发育过程进行了组织学观察,并测定了胃蛋白酶原(PG A1, A2, A-like, C)和胃质子泵(HK-α, HK-β)基因表达、胃蛋白酶原(PG A和PG C)含量、总胃蛋白酶(Pep)活性的变化趋势。结果显示, 4 dph,鳜胃腔形成; 8 dph,胃黏膜层褶皱增多,柱状上皮细胞出现;10dph,胃壁结构明显,泌酸胃酶细胞出现;13dph,胃腺出现;后期,随着胃体发育,胃壁黏膜层厚度增加,胃腺长度、宽度增加,泌酸胃Adavosertib化学结构酶细胞数目、大小均呈现递增趋势。PG A1、PG A2、PG A-like、PG C和HK-α、HK-β基因相对表达量均随着胃结构发育呈上升趋势; 8 dph, 4个胃蛋白酶原基因均开始表达,随后各基因表达水平呈不同水平级上升,相对表达水平大小次序为:PG A1>PG A2>PG C>PG A-like; HK-β于6 dph表达,HK-α于8dph表达,与胃蛋白酶原基因表达开始时间一致。4dph,胃蛋白酶原(PGA和PGC)含量随胃发育均呈上升趋势, PG A含量极显著高于PG C (P<0.01)。总胃蛋白酶活性于4 dph就可检测,随胃发育呈上升趋势。综上,鳜泌酸胃酶细胞Biogas yield10 dph出现,胃腺13 dph出现;胃蛋白酶原和HK-α基因Dorsomorphin供应商8 dph表达; PG A、PG C含量和总胃蛋白酶活性4 dph出现;胃消化生理功能出现早于胃腺形态发生。研究结果为鳜胃消化生理功能发育研究提供了重要基础资料。

活性氧(ROS)作为细胞内氧化还原代谢的产物,其在生命进程中扮演着“双刃剑”的角色。一方面,适量的ROS作为信号分子通过调控蛋白质的功能和活性以及转录因子的活性进而调节基因表达、表观遗传修饰并最终控制细胞功能。另一方面,过量的ROS会导致生物大分子如DNA、脂质和蛋白质的永久损伤并最终对细胞的死亡以及潜在的疾病发展造成深远影响。针对肿瘤细胞相较于正常细胞对能够刺激细胞内ROS生成的药物更敏感这一特征,药物诱导氧化应激进而杀死肿瘤细胞是目前主要的肿瘤治疗策略之一。硫氧还蛋白(Trx)系统作为细胞内重要的氧化还原调控系统,该系统对于维持肿瘤表型和支持肿瘤生长和转移是必须的,并且与肿瘤耐药性相关。因此Trx系统是一个很有开发潜力的肿瘤治疗药物靶点。本论文主要通过以下两点开展工作:1)通过化学修饰发现有潜力的硫氧还蛋白还原酶(Trx R)选择性抑制剂;2)通过与其它调控ROS的治疗手段联用探究Trx系统在其中的作用机制及对治疗效果的影响。主要内容如下:第一章绪论部分概述了细胞内氧化还原代谢及其在肿瘤治疗和发展中的作用。简述Trx/Trx R系统并归纳总结了其对下游相关氧化还原蛋白的调控机制以及部分经典的Trx R抑制剂。简单介绍了光动力治疗(PDT)并对铱(Ш)光敏剂发展进行综述。点击此处第二章以具有丰富生物活性胡椒碱为母体化合物,设计合成了一系列胡椒碱衍生物并评估了其生物活性。经过筛选实验,选出了相较母体化合物细胞毒性提高约4倍的类似物P-B5。进一步研究其生物活性,发现P-B5可以选择性抑制Trx R活性,导致细胞内出现氧化应激并最终诱导肿瘤细胞凋亡。P-B5的合成及其生物活性的研究为胡椒碱类似物作为Trx R抑制剂的进一步改性和应用研究提供了指导。第三章设计和合成了一系列含磺酰胺骨架的潜在的Trx R抑制剂。评价了它们对不同类型肿瘤细胞的细胞毒性及体外对Trx R的抑制作用。所筛选的A3化合物对He La细胞具有较大的细胞毒性,auto-immune response并对selleck HPLCTrx R的抑制具有特异性。进一步机制研究显示,其通过靶向Sec选择性抑制Trx R,并诱导细胞内出现氧化应激最终导致肿瘤细胞凋亡。此外,化合物A3在对肿瘤细胞迁移和侵袭方面也表现出明显的抑制,同时,也能够抑制小鼠体内肿瘤生长。第四章评估了一批课题组前期合成的铱(Ш)配合物作为光敏剂在光动力治疗中的活性。通过最初的细胞毒性筛选,选择光毒性指数最高的复合物PC9,之后进一步研究了PC9在细胞中的生物活性。实验发现,当PC9暴露于光下时,He La细胞会产生大量的活性氧。PC9作为光敏剂能有效靶向线粒体,破坏细胞内氧化还原调节机制,最终导致细胞凋亡。铱(Ш)复合物作为光敏剂可以强烈靶向细胞器,并通过损害细胞内氧化还原调节机制使PDT效应更敏感,这种光敏剂研究思路是本文第一次报道的,为未来设计和开发有效的新型光敏剂提供了新的视角。第五章研究发现了一个新的受到Trx调控的下游蛋白Bmi1。Bmi1的巯基易被氧化,氧化处理后蛋白分子量发生变化,而这一变化能够被Trx系统恢复。此外,联合使用Trx系统和Bmi1的抑制剂能够协同抑制细胞增殖,这提出了一种新的抗肿瘤治疗策略。第六章对全文工作进行总结并对课题后续发展提出展望,主要围绕后续光敏剂的开发及Bmi1氧化还原调控机制作出展望。

活性氧(ROS)作为细胞内氧化还原代谢的产物,其在生命进程中扮演着“双刃剑”的角色。一方面,适量的ROS作为信号分子通过调控蛋白质的功能和活性以及转录因子的活性进而调节基因表达、表观遗传修饰并最终控制细胞功能。另一方面,过量的ROS会导致生物大分子如DNA、脂质和蛋白质的永久损伤并最终对细胞的死亡以及潜在的疾病发展造成深远影响。针对肿瘤细胞相较于正常细胞对能够刺激细胞内ROS生成的药物更敏感这一特征,药物诱导氧化应激进而杀死肿瘤细胞是目前主要的肿瘤治疗策略之一。硫氧还蛋白(Trx)系统作为细胞内重要的氧化还原调控系统,该系统对于维持肿瘤表型和支持肿瘤生长和转移是必须的,并且与肿瘤耐药性相关。因此Trx系统是一个很有开发潜力的肿瘤治疗药物靶点。本论文主要通过以下两点开展工作:1)通过化学修饰发现有潜力的硫氧还蛋白还原酶(Trx R)选择性抑制剂;2)通过与其它调控ROS的治疗手段联用探究Trx系统在其中的作用机制及对治疗效果的影响。主要内容如下:第一章绪论部分概述了细胞内氧化还原代谢及其在肿瘤治疗和发展中的作用。简述Trx/Trx R系统并归纳总结了其对下游相关氧化还原蛋白的调控机制以及部分经典的Trx R抑制剂。简单介绍了光动力治疗(PDT)并对铱(Ш)光敏剂发展进行综述。点击此处第二章以具有丰富生物活性胡椒碱为母体化合物,设计合成了一系列胡椒碱衍生物并评估了其生物活性。经过筛选实验,选出了相较母体化合物细胞毒性提高约4倍的类似物P-B5。进一步研究其生物活性,发现P-B5可以选择性抑制Trx R活性,导致细胞内出现氧化应激并最终诱导肿瘤细胞凋亡。P-B5的合成及其生物活性的研究为胡椒碱类似物作为Trx R抑制剂的进一步改性和应用研究提供了指导。第三章设计和合成了一系列含磺酰胺骨架的潜在的Trx R抑制剂。评价了它们对不同类型肿瘤细胞的细胞毒性及体外对Trx R的抑制作用。所筛选的A3化合物对He La细胞具有较大的细胞毒性,auto-immune response并对selleck HPLCTrx R的抑制具有特异性。进一步机制研究显示,其通过靶向Sec选择性抑制Trx R,并诱导细胞内出现氧化应激最终导致肿瘤细胞凋亡。此外,化合物A3在对肿瘤细胞迁移和侵袭方面也表现出明显的抑制,同时,也能够抑制小鼠体内肿瘤生长。第四章评估了一批课题组前期合成的铱(Ш)配合物作为光敏剂在光动力治疗中的活性。通过最初的细胞毒性筛选,选择光毒性指数最高的复合物PC9,之后进一步研究了PC9在细胞中的生物活性。实验发现,当PC9暴露于光下时,He La细胞会产生大量的活性氧。PC9作为光敏剂能有效靶向线粒体,破坏细胞内氧化还原调节机制,最终导致细胞凋亡。铱(Ш)复合物作为光敏剂可以强烈靶向细胞器,并通过损害细胞内氧化还原调节机制使PDT效应更敏感,这种光敏剂研究思路是本文第一次报道的,为未来设计和开发有效的新型光敏剂提供了新的视角。第五章研究发现了一个新的受到Trx调控的下游蛋白Bmi1。Bmi1的巯基易被氧化,氧化处理后蛋白分子量发生变化,而这一变化能够被Trx系统恢复。此外,联合使用Trx系统和Bmi1的抑制剂能够协同抑制细胞增殖,这提出了一种新的抗肿瘤治疗策略。第六章对全文工作进行总结并对课题后续发展提出展望,主要围绕后续光敏剂的开发及Bmi1氧化还原调控机制作出展望。

目的:探究异硫氰酸苄酯(Benzyl isothiocyanate,BITC)对烟曲霉菌的抗菌机制和在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中治疗作用。方法:通过CCK-8实验检测永生化人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCECs)、小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)细胞活性及Draize眼毒性试验获得BITC体内及体外验安全浓度。在体外,采用最低抑菌浓度法、钙荧光白染色法、时间—杀菌曲线评估BITC对烟曲霉菌的抑菌活性;通过碘化丙啶摄取法、活性氧(ROS)检测试剂盒、黏附实验和结晶紫染色法检测BITC对烟曲霉菌细胞膜完整性的破坏、烟曲霉菌细胞内ROS积累量、对烟曲霉菌孢子粘附抑制作用以及对真菌生物膜破坏情况。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,使用BITC或者DMSO结膜下注射处理小鼠角膜,分别在感染后第3天和第5天在裂隙灯下观察、拍照并进行临床评分,通过临床评分和平板计数评估BITC对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的疗效。对感染后第3天和第5天角膜进行苏木精-伊红(HE)染色评价BITC对炎症细胞浸润的影响;通过髓过氧化物酶(MPO)试剂盒对小鼠感染后3天角膜的中性粒细胞进行定量。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western Blot和ELISA评估感染后第3天和第5天角膜中IL-1β、TNF-α、IL-6以及Mincle的m RNA和蛋白表达情况。BITC预处理2小时后,加入灭活的烟曲霉菌菌丝刺激RAW264.7细胞,用qRT-PCR、ELISA和Western Blot分别检测烟曲霉菌刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α、IL-6和M iTumor microbiomencle的m RNA和蛋白表达情况。使用BITC预处理2小时,随后加入Trehalose-6,6-dibehenate(TDB)刺激RAW264.7细胞,通过qRT-PCR和ELISA分别检测刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α和IL-6的m RNA和蛋白水平表达情况,Western Bl ot和免疫荧光检测TDB刺激24小时后的Mincle蛋白的表达水平。结果:1.0-100μg/m L BITC对HCECs的细胞活性无影响,0-6μg/m L BITC对RAW264.7的细胞活性无影响;Draize眼毒性试验结果显示浓度为400μg/m L BITC对小鼠角膜无毒性。2.在体外实验中,BITC在25μg/m L以上具有抗真菌作用,对烟曲霉菌的抗菌作用具有浓度和时间依赖性。BITC损伤烟曲霉菌细胞膜完整性、线粒体形态及功能,抑制烟曲霉菌对HCECs黏附作用以及破坏生物膜。3.在小鼠真菌性角膜炎模型中,与DMSO相比,200μg/m L BITC处理组临床评分显著降低,感染角膜的真菌负荷明显减少,角膜中的炎症细胞浸润和中性粒细胞数量明显减少。qRT-PCR、Western Blot和ELISA实验结果表明,BITC组感染角膜中的炎症因子IL-1β、TNF-α及IL-6以及模式识别受体Mincle的m RNA及蛋白表达较DMSO处理组显GSI-IX著减少。4.qRT-PCR、Western Blot、ELISA以及免疫荧光实验结果表明,在灭活菌丝或TDB刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞,3μg/m L BITC显著下调了Mincle以及IL-1β、TNF-α和IL-6的m RNA及蛋白表达。结论:BITC能破坏烟曲霉菌的细胞膜、线粒体、真菌粘附和生物膜的形成,对烟曲霉菌具有杀菌活性。BITC改善了烟曲霉菌性角膜炎的炎症评分,减少了感染角膜的真菌负荷,减少了PEG300核磁角膜中炎性细胞的浸润和促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平,在烟曲霉菌性角膜炎中发挥保护作用。BITC可能通过下调模式识别受体Mincle来发挥抗炎作用。