PI3K抑制剂

目的 研究姜黄素对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法 采用噻唑蓝(MTT)检测姜黄素对成纤维细胞活性影响。氧自由基(ROS)检测试剂盒检测姜黄素对过氧化氢诱导的成纤维细胞中ROS的清除效果。qRT-PCR检测姜黄素对脂多糖诱导RAW 264.7巨噬细胞炎症因子(CD86、IL-6、CD206及ARG1)mRNA表达影响。腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病创面模型。苏木精-伊红(HE)、马松(Masson)染色评估创面愈合与组织形态学变化，免疫荧光染色法测定皮肤组织α-平滑肌肌动蛋白、CD86、CD206表达。结果 姜黄素在浓度<20 mol·L~(thermal disinfection-1)对成纤维细胞活性没有显著影响，并可清除过氧化氢诱导的成纤维细胞内的ROS;姜黄素降低脂多糖诱导的RAW 264.7巨噬细胞CD86、IL-6 mRNA表达量，同时增加CD206、ARGselleck化学1 mRNA表达量。体内给药后，与对照组比较，姜黄素(15、30 mg·mLselleck NMR~(-1))组伤口闭合率加快(P<0.01),肉芽组织明显增加，胶原蛋白的沉积明显增多，CD206的表达明显增高(P<0.01),CD86的表达明显减少(P<0.01),且姜黄素(30 mg·mL~(-1))组伤口中平滑肌α-肌动蛋白表达量较小剂量姜黄素组明显增加(P<0.01)。结论 姜黄素通过抗炎、抗氧化作用，促进糖尿病小鼠皮肤创面的肉芽组织增生和胶原沉积，进而加快糖尿病创面的愈合。

目的:益气养阴通络(YQYY)方在类风湿关节炎(RA)患者的临床使用中取得良好的效果,本研究目的是为了探究YQYY方对胶原诱导的关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)大鼠的作用机制。方法:通过生物信息学、网络药理学,对YQYY方治疗RATezacaftor纯度的靶点及可能起作用的信号通路进行预测;采用ELISA、qPCR、Western bProbiotic bacterialot法验证YQYY方治疗RA的作用机制。结果:FABP4、MMP9和PTGS2是预测的共同治疗靶点。病理和CT结果显示YQYY方能改善CIA大鼠踝关节肿胀程度、滑膜炎及骨侵蚀。与模型组相比,YQYY组、YQYY+甲氨蝶呤(MTX)组可显著减轻CIA大鼠血清中C反应蛋白(CRP)、TNF-α、IL-1β、FABP4的分泌(P<0.05或P<0.01),并且使滑膜组织中FABP4、IKKα、p65的mRNA表达降低(P<0.01),PPARγ升高(P<0.01)。蛋白电泳结果显示,YQYY方治疗能明显降低FABP4、IKKα、pp65蛋白在滑膜中的表达,抑制NF-κB信号通路的激活。结论:FABP4、MMP9和PTGS2可能是YQYY方治疗RA的靶点;YQYY方能够缓解CIA大鼠滑膜炎,并通过抑制FABP4/PPARγ/NFLY-188011半抑制浓度-κB通路调控炎症反应,从而发挥治疗RA的作用;YQYY方联合应用MTX的疗效更为突出。该研究为临床实践中单独或联合使用YQYY方疗效的有效性提供了实验依据。

目的：探讨妊娠期糖尿病(GDM)合并妊娠期高确认细节血压疾病患者血清过氧化物氧化还原酶1(PRDX1)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)水平与胰岛素抵抗(IR)关系。方法：选择2020年3月-2022年3月本院妇产科治疗的GDM合并妊娠期高血压疾病孕妇103例作为合并症组，单纯GDM孕妇110例作为GDM组，血压血糖均正常孕妇118例作为对照组。酶联免疫吸附法检测血清PRDX1、AOPP水平，计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMAGenetic susceptibility-β)。采用Pearson相关分析GDM合并妊娠期高血压疾病患者血清PRDX1、AOPP与IR关系，受试者工作特性曲线(ROC)评估血清PRDX1、AOPP对GDM合并妊娠期高血压疾病的预测价值。结果：对照组、GDM组、合并症组血清PRDX1、AOPP、FPG、FINS、HOMA-IR水平依次升高，HOMA-β依次降低(均P<0.05)。Pearson相关分析，GDM合并妊娠期高血压疾病孕妇血清PRDX1、AOPP与HOMA-IR均呈正相关，与HOMA-β均呈负相关(均P<0.05)。ROC曲线分析，预测GDM合并妊娠期高血压疾病，血清PRDX1的曲线下面积(AUC)为0.778,截断值36.25ng/L,敏感度92.6%、特异度56.5%;血清AOPP AUC为0.862,截断值13.24g/L,敏感度92.6%、特异度66.2%,二者联合的AUC为0.901,敏感度87.7%、特异度8selleckchem6.5%。结论：GDM合并妊娠期高血压疾病患者血清PRDX1、AOPP水平异常升高，二者水平与IR相关，且可作为预测GDM孕妇合并妊娠期高血压疾病的有效指标。

第一部分:PLA2R相关膜性肾病预后模型的构建与评价研究背景与目的:膜性肾病(membranous nephropathy,MN)是病因、病程和预后均具有较强异质性的一类疾病,其中M型磷脂酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor,PLA2R)相关MN是其中患者占比最多的亚型。尽管如此,至今却鲜有直接针对PLA2R相关MN预后进行的研究,临床上预判这类患者肾脏结局时常使用2021版全球肾脏病预后改善组织(kidney disease:improving global outcomes,KDIGO)指南中的MN大体危险分层,不过该分层既没有利用患者的肾脏病理信息又并非特异性地针对PLA2R相关MN。为了填补此空缺,本课题组面向PLA2R相关MN患者的肾脏终点事件构建了临床病理多因素预后模型并绘制模型列线图。研究方法:对在本中心接受自体肾穿刺检查的262名PLA2R相关MN初治患者开展回顾性队列研究。设置终点事件为肾功能进展,即估算肾小球滤过率(estimate glomerular filtration rate,e GFR)较基线水平下降≥30%和/或进展为终末期肾脏病。随访时间不少于12个月。收集患者基线时期的人口学特征、实验室检查、肾脏病理,并统计预后信息。评估上述因素,尤其是肾脏病理损伤与终点事件的关系。通过二元logistic回归构建临床病理多因素预后模型1并与从2021版KDIGO指南中MN危险分层衍生而来的模型进行多维度比较。最后绘制临床病理模型1的列线图。研究结果:经过中位时间为24.5个月的随访,在262名PLA2R相关MN患者中共有22人(8.4%)发生了终点事件。校正潜在的混杂因素后发现,反应肾组织慢性病变程度的总肾脏慢性病变评分(total renal chronicity score,TRCS)中的I-III级病变是终点事件发生的独立危险因素(优势比:3.170,95%置信区间:1.040-9.659,P=0.042)。针对终点事件构建的临床病理模型1共包含4个预测变量,分别是年龄≥60岁、糖尿病病史、血清抗PLA2R抗体(serum anti-PLA2R antibodies,s PLA2Rab)>50 RU/ml和I-III级TRCS。对临床病理模型1与KDIGO模型进行比较后发现,在本课题队列中前一个模型在整体情况、准确性、预测的一致性和临床应用价值等方面具有明显的优势。结论:I-III级TRCS与PLA2R相关MN患者发生较差的肾脏预后事件独立相关。相对于KDIGO指南中MN的大体危险分层,临床病理模型1可以更好地协助医生对PLA2R相关MN患者的终点事件进行预判。第二部分:PLA2R相关膜性肾病预后模型的优化与评价研究背景与目的:在第一部分研究的基础上引入更多的预测变量以进一步优化临床病理模型、达到更好的预测效果。研究方法:研究方法大体同第一部分。设置主要终点事件为肾功能进展(定义同上),次要终点acute genital gonococcal infection事件为蛋白尿不缓解、e GFR快速下降。寻找可以预测其他疾病发展但既往较少用于PLA2R相关MN的变量作为目标变量,评价目标变量与终点事件的关系。将Canagliflozin IC50被证明是主要终点事件独立危险因素的目标变量作为自变量逐个引入二元logistic回归,构建出新的预后模型,并与前期构建的模型进行多维度比较得到最优模型。绘制各个临床病理模型的列线图。研究结果:依据统计分析、文献证据和临床意义进行变量筛选,计划引入的目标变量为非高密度脂蛋白胆固醇(non-high-density lipoprotein cholesterol,n HDL-C)≥7.065 mmol/L、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)≥5.66 g/L、中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-tolymphocyte ratio,NLR)≥2.984。校正潜在混杂因素后发现,n HDL-C≥7.065 mmol/L、FIB≥5.66 g/L、NL购买AG-221R≥2.984是主要终点事件发生的独立危险因素(优势比分别为3.381、4.671、2.931,95%置信区间分别为1.295-8.826、1.663-13.117、1.054-8.151,P值分别为0.013、0.004、0.039)。在引入上述变量后所构建的临床病理模型2-4中,临床病理模型4的预测效能最好,其共纳入了6个预测变量,分别是年龄≥60岁、s PLA2Rab>50 RU/ml、NLR≥2.984、n HDL-C≥7.065 mmol/L、FIB≥5.66 g/L、I-III级TRCS。结论:在引入新的预测变量后,PLA2R相关MN的临床病理多因素预后模型得到了明显优化,其中临床病理模型4具有最佳的预测效能,可以更好地为临床实践服务。

目的:基于肾图比值所得单肾双血浆法肾小球滤过率(double plasma methodGFR,dGFR),分析核素肾动态显像肾图聚集段多参数与其相关性,同时基于各项参数与Gates原理探索反映肾脏摄取率的最佳时间段,并评估各项参数对单肾功能的判别效能。方法:回顾性收集我院核医学科同日行核素肾动态显像及双血浆法测定GFR的患者,利用SPECT(Symbia T16)“Renal Gates GFR Processes”程序,重新勾画肾脏及本底感兴趣区,得到双肾肾图及Gates法测定的GFR(gGFR),筛选出肾图功能期可见单肾或双肾显像剂集聚高峰的患者共计553人,总计肾图977例。记录每位患者满针与空针剂量,并将注射剂量统一以4mci标准化。在肾图曲线中分别记录肾图聚集段三个时间点横坐标:峰时、峰时前1min、峰时前2min,及其分别对应的三个计数率纵坐标:峰值计数率、峰值前1min计数率、峰时前2min计数率,并统计峰时前1min至峰时的斜率及峰时前2min至峰时的斜率(简称为斜率1和斜率2)。基于肾动态显像肾图的分肾比值,得到单肾dGFR值,以此将患者分为4个等级:0级(肾功能较好):单肾dGFR≥40 ml·min~(-1)·1.73m~(-2);Ⅰ级(肾功能轻度受损):40>单肾dGFR≥30 ml·min~(-1)·1.73m~(-2);Ⅱ级(肾功中度受损):30>单肾dGFR≥20ml·min~(-1)·1.73m~(-2);Ⅲ级(肾功能重度及极重度受损):hepatic dysfunction20 ml·min~(-1)·1.73m~(-2)>单肾dGFR。将上述肾动态显像肾图聚集段参数分别与单肾dGFR值进行相关性分析;以单肾dGFR分级为参考标准,寻找各项参数MLN8237对应的最佳分级截断值,判断其与单肾dGFR分级的一致性。采用单因素方差分析、Pearson相关性分析、ROC曲线分析及Kappa一致性检验分析数据。结果:1、单肾dGFR值与峰值计数率、峰前1min计数率、峰前2min计数率、峰时前1min至峰时斜率、峰时前2min至峰时斜率均呈显著的线性关系(P<0.001),两者间pearson相关系数r分别为0.803、0.789、0.788、0.639、0.660。2、以单肾dGFR分级为标准,上述五项参数ROC分析得出具有最佳判别单肾功能的分级:(1)单肾峰值计数率:0级(≥175)、Ⅰ级(≥169,<175)为、Ⅱ级(≥91,<169)、Ⅲ级(<91),最佳分级截点对应约登指数分别为0.341、0.323、0.594;(2)单肾峰前1min计数率:0级(≥169)、Ⅰ级(≥121,<169)、Ⅱ级(≥85,<121)为、Ⅲ级(<85),最佳分级截点对应约登指数分别为0.323、0.434、0.578;(3)单肾峰前2min计数率:0级(≥184)、Ⅰ级(≥133,<184)、Ⅱ级(≥79,<133)为、Ⅲ级(<79),最佳截断值对应约登指数分别为0.245、0.438、0.545;(4)峰时前1min至峰时斜率:0级(≥9)、Ⅰ级(≥6,<9NN2211使用方法)、Ⅱ级(≥4,<6)为、Ⅲ级(<4),最佳截断值对应约登指数分别为0.272、0.474、0.464;(5)峰时前2min至峰时斜率:0级(≥14)、Ⅰ级(≥10,<14)、Ⅱ级(≥5,<10)为、Ⅲ级(<5),最佳截断值对应约登指数分别为0.23、0.418、0.504。3、上述五项参数预测单肾功能分级与单肾dGFR分级一致性指数Kappa值分别为0.628、0.616、0.584、0.558、0.538结论:1、肾动态显像肾图聚集段峰值计数率、峰前1min计数率、峰前2min计数率、峰时前1min至峰时斜率、峰时前2min至峰时斜率五项指标均与单肾dGFR值有较好的相关性,其中峰值计数率相关性最高。2、基于Gates公式,肾动态显像肾图聚集段峰时前1min这一时间段可作为肾脏摄取率的最佳时间段,可以优化gGFR准确性。3、肾动态显像肾图聚集段峰值计数率、峰前1min计数率与单肾dGFR判别肾功能有较好一致性,峰前2min计数率、峰时前1min至峰时斜率、峰时前2min至峰时斜率与单肾dGFR判别肾功能一致性中等。五项参数在单肾功能分级加重趋势下,判别准确性随之升高。

研究不同促根剂对移栽后烟苗生长、根系发育和根系氮代谢的影响，确定利于烟苗生长和根系发育的促根剂。以烤烟品种云烟87为试验材料，采用盆栽试验，设置对照、黄腐酸钾、生物炭、高碳基肥4个处理，分析不同促根剂对移栽后烟苗和根系的生长发育、根系氮代谢相关酶的影响，通过实时定量PCR研究不同促根剂处理下烤烟根系氮代谢相关基因的表达模式。比较分析不同促根剂的烟苗长势、根系参数和活力发现，生物炭的促苗生根效果最好，高碳基肥次之，黄腐酸钾效果最差；测定根系中硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、亚硝酸还原酶(购买Q-VD-OphNiR)和谷氨酸脱氢酶(GDH)的活性，4种酶活性排序为生物炭>高碳基肥>黄腐酸钾>对照。根系氮代Superior tibiofibular joint谢相关基因表达模式的分析表明，NR、GS、NIR3这3个基因的表达模式与上述的表型和氮代谢酶活性变化趋势相同；根系氮代谢关键酶活性与相应基因表达量的相关性分析表明，NR、GS、NIR3这3个基因分别是调控NR活性、GS活性和NiR活性的关键基因，这些基因的表达水平与对应酶活性存在正相关性。生物炭对促进移栽后烟苗的生长发育FUT-175核磁效果最好，高碳基肥效果次之，NR、GS、NIR3是调控根系氮代谢酶活性的关键基因。

目的 探讨心理健康教育多元家庭治疗（The psychoeducational multiple family group,PMFG）对抑郁regulatory bioanalysis障碍患者的疗效及家庭功能的影响。方法 从张家港市第四人民医院门诊中选取60名抑郁障碍患者随机分为研究组和对照组，两组研究对象均采用抗抑郁药物治疗，研究组使用PMFG模式治疗，对照组使用门诊随访及社区支持性治疗；采用汉密尔顿抑郁量表（Hamilton Depression Scale,HAMD）、汉密尔顿焦虑量表（Hamilton Anxiety Scale,HAMA）、家庭功能评定量表（Family Function Rating Scale,FAD）对两组患者治疗前后进行HAMD、HAMA、FAZD9291体外AD评分Entinostat体内实验剂量比较。结果 干预后研究组HAMD和HAMA评分均低于对照组（t=6.749,P<0.01;t=5.165,P<0.01）;FAD评分低于对照组（P<0.01）；差异均有统计学意义。结论 心理健康教育多元家庭治疗能减轻抑郁障碍患者的临床症状，并有助于提高患者的家庭功能。

研究鳖甲煎丸对Forensic Toxicology非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）小鼠肝脂质代谢的影响，探讨鳖甲煎丸调控NASColforsin体外H小鼠脂质代谢和炎症反应的作用机制。通过高脂高胆固醇饲料喂养C57BL/6小鼠建立NASH模型，给予鳖甲煎丸干预，通过血清和肝脏生化指标及肝脏组织病理学检测评价鳖甲煎丸对NASH小鼠的治疗效果，应用UPLC-Q-TOF-MS技术检测肝脏的脂质代谢物，结合偏最小二乘法判别分析、t检验和受试者工作特征曲线分析筛选差异脂质和主要生物标志物；结合生物标志物结果，利用Western bloselleckchem Empagliflozint和qPCR检测脂质代谢及炎性相关分子。结果表明，鳖甲煎丸能显著降低NASH小鼠血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）水平和肝组织中甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）含量，抑制肝脏脂滴堆积、肝细胞气球样变和纤维化病变；脂质代谢组学结果显示，鳖甲煎丸可调控磷脂酰胆碱（phosphatidyl choline，PC）、磷脂酰乙醇胺（phosphatidyl ethanolamine，PE）、鞘磷脂（sphingomyelin，SM）、神经酰胺（ceramide，Cer）等NASH相关11种脂质标志物；Western blot和qPCR结果显示，鳖甲煎丸可调控固醇调节元件结合蛋白-1（sterol regulatory element-binding protein 1，SREBP1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARγ）和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phospho-AMP-activated protein kinase，p-AMPK）等脂质代谢相关蛋白的表达，及脂肪酸转位酶36（fatty acid translocase，Cd36）、Pparγ、心磷脂合酶1（cardiolipin synthase 1，Crls1）和磷脂酶Cβ2（phospholipase Cβ2，Plcβ2）mRNA水平；抑制磷酸化p38 MAPK（phospho-p38 MAPK，p-p38 MAPK）、磷酸化ERK1/2（phospho-ERK1/2，p-ERK1/2）和促炎因子Il-6、Il-1β、Tnf-α mRNA表达。综上所述，鳖甲煎丸可调节PC、PE、SM、Cer等脂类代谢，调控p-AMPK、SREBP1、PPARγ和Cd36、Crls1、Plcβ2等脂质调控因子表达，改善脂质代谢紊乱，同时还能抑制MAPK信号通路和促炎因子mRNA水平，缓解炎症反应，发挥治疗NASH的作用。

发酵肉是天然生物活性肽良好来源,有学者已在发酵肉中发现抗氧化和降血压活性肽。目前关于发酵肉中生物活性肽的研究主要集中在直接从产品中分离提取、活性评价以及结构的鉴定,但关于发酵剂在发酵肉中富集生物活性肽以及形成机制尚不清楚。针对该问题,本研究首先从传统发酵肉中筛选出高蛋白酶活性发酵剂-凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negative staphylococci,CNS),旨在获得富集抗氧化和抗炎多肽的肉品发酵剂,然后对其进行全基因测序,从基因组层面揭示发酵剂水解蛋白质的遗传基础;其次以香肠为发酵肉模型,探究发酵剂在香肠发酵过程中富集抗氧化和抗炎多肽形成的机制,并通过体外模拟胃肠道消化追踪抗氧化和抗炎活性的稳定性;最后以血管内皮细胞EA.hy926为氧化应激和炎症模型,研究多肽对血管内皮细胞氧化应激和炎症的保护作用,为实现发酵剂调控发酵肉中特定活性肽的生成提供理论支持,为高生物活性发酵肉制品的开发提供菌种资源。主要研究内容及结果如下:(1)为获得高蛋白酶活且具有产肽潜力的肉品发酵剂,以蛋白水解能力以及肉品发酵剂标准为评价指标从贵州传统的发酵肉中筛选出9株具有蛋白水解能力的菌株,包括QB7、WH17、QB15、KF2、ZF4、KX8、QB11、ZF17、KX19。其中,菌株QB7蛋白水解能力最强;通过VITEK 2 Compact及其配套CBC鉴定卡和16S r DNA鉴定其为模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans,S.simulans QB7),具有耐受6.5%的Na Cl和150 mg/kg的Na NO_2、无毒力基因、不溶血、无脱羧酶、无脱氧核糖核酸酶活性和无生物膜形成能力等特点。S.simulans QB7发酵猪肉蛋白显著增加蛋白水解度(Degree of hydrolysis,DH)、多肽的浓度、清除2,2-二苯基-1-苦基肼(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的能力和还原力(p<0.05),增加对血小板活化因子-乙酰水解酶(Platelet-ac-tivating factor-acetylhydrolase,PAF-AH)的抑制率。表明S.simulans QB7是一株优良的、符合肉品发酵剂标准并且具有产肽潜力的肉品发酵剂。(2)为在基因组层面阐明发酵剂水解蛋白的遗传基础,对S.simulans QB7进行全基因测序,通过Sigana P信号肽预测胞外蛋白酶的种类多样性,并通过基因注释预测胞外蛋白酶的功能多样性。结果表明,S.simulans QB7的全基因组由一个环状染色体和5个质粒组成。GC含量为36.04%,编码基因2487个,编码基因总长度为2318760 bp。S.simulans QB7基因编码4种不同类型的蛋白酶,包括82种金属蛋白酶、28种丝氨酸蛋白酶、10种半胱氨酸蛋白酶和10种天冬氨酸蛋白酶,蛋白酶主要分布在11个金属蛋白酶家族、4个丝氨酸蛋白酶家族和2个天冬氨酸蛋白酶家族。S.simulGSK126说明书ans QB7基因编码18种具有信号肽的蛋白酶,包括3种金属蛋白酶(M15家族)、10种丝氨酸蛋白酶(S11家族)和5种半胱氨酸蛋白酶(C15家族)。(3)为探究S.simulans QB7能否适应发酵肉基质发挥最大的蛋白酶活降解蛋白生成活性肽,首先优化S.simulans QB7产酶条件,然后对S.simulans QB7主要的胞外蛋白酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果表明,最优产酶条件为:接种量10%,初始pH为6.5,发酵温度32℃,培养时间36 h,转速160 rpm。胞外蛋白酶在温度20～60℃、pH为3～8条件下酶活性较为稳定,金属离子Na~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)和Zn~(2+)在5和10mmol/L浓度下均显著增加蛋白酶活性(p<0.05)。其中,Ca~(2+)对酶活性影响最明显,而Cu~(2+)、Co~(2+)、Fe~(2+)、Ba~(2+)和Fe~(3+)离子的存在,导致蛋白酶活性受到显著抑制(p<0.05)。Na~+在5和10 mmol/L浓度下,蛋白酶活性分别提高到141.60%和159.36%。金属蛋白酶特异性抑制剂(o-phenanthroline,o-P)导致蛋白酶失去约75%的活性,而丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂(Phenylmethylsulfonyl fluoridSchmidtea mediterraneae,PMSF)导致蛋白酶失去约60%的活性;经LC-MS/MS鉴定S.simulans QB7胞外蛋白酶为金属蛋白酶。(4)为进一步探究发酵肉中抗氧化和抗炎多肽的形成与S.simulans QB7的关系,解析S.simulans QB7水解蛋白产生活性肽的切割位点,以香肠为发酵肉模型,接种S.simulans QB7发酵香肠,通过体外化学法结合细胞法评估S.simulans QB7发酵对香肠中多肽抗氧化和抗炎活性的影响,并探究接种后香肠中微生物群落、氨基酸和脂肪酸含量的变化。结果表明,与未接菌组相比,接种S.simulans QB7显著增加肽浓度、清除DPPH自由基的能力和还原力(p<0.05)。此外,随着成熟时间的延长,多肽活性先增加后减少,在第16 d时,抗氧化和抗炎活性最强。对活性较高的样品进一步通过EA.hy926细胞模型评价抗氧化和抗炎活性,接种S.simulans QB7显著降低肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNFα)诱导EA.hy926细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物的水平(p<0.05),以及显著抑制炎症因子环氧合酶2(Cyclooxygen-ase 2,COX2)和血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达(p<0.05)。肽谱分析结果表明S.simulans QB7水解蛋白产生抗氧化和抗炎多肽优先水解K、L、G和R氨基酸与其他氨基酸形成的肽键。同时,接种S.simulans QB7显著抑制有害细菌(p<0.05),显著增加乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)、葡萄球菌数和氨基酸含量(p<0.05)。此外,S.simulans QB7有利于风味氨基酸(Ala、Glu、Try和Lys)的形成,并促进饱和脂肪酸的降解。(5)为分析S.simulans QB7发酵香肠产生的抗氧化和抗炎多肽抵抗胃肠道消化能力,对活性较高的样品进行体外模拟胃肠道消化研究,以血管内皮确认细节细胞EA.hy926为氧化应激和炎症模型研究其对血管内皮细胞抗氧化和抗炎活性的影响。经胃肠道消化后,氨基酸Arg、Ser和Glu含量不变;氨基酸Thr、Tyr和Met的含量显著增加(p<0.05)。对TNFα诱导EA.hy926细胞中MDA和超氧化物的影响效果显著低于未消化之前的样品(p<0.05),而消化前后样品均显著抑制TNFα诱导EA.hy926细胞中COX2和VCAM-1蛋白的表达(p<0.05),并且对VCAM-1蛋白的表达在经胃肠道消化后抑制作用明显增强(p<0.05),但对COX2的表达与未消化之前相比无显著变化(p>0.05)。

目的 小核仁RNA宿主基因(SNHG)14对H_2O_2诱导的人脑微血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及作用机制。方法 体外培养人脑微血管内皮细胞BB19,100μmol/L H_2O_2诱导分别作用于转染SNHG14小干扰RNA、miR-181b模拟物及共转染SNHG14小干扰RNA与miR-181b抑Etoposide化学结构制剂的BB19细胞后，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中SNHG14和miR-181b mRNA表达，CCK-8和流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡，Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达，试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平。双荧光素酶报告实验验证SNHG14与miR-181b调控关系。结果 干扰SNHG14表达或过表达miR-181b后，H_2O_2诱导的BB19细胞增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显升高，细胞凋亡率、Bax表达和MDA水平明显降低(P<0.05)。SNHG14靶向负调控miR-181b表达。而与仅干扰SNHG14表达的细胞比较，同时干扰miR-181b和SNHG14表达的BB19细胞经H_2O_2诱导后增殖活性、Bcl-2表达及SOD和CAT活性明显降低，细胞凋亡率、Bax表达和MDA水periprosthetic joint infection平明显升高https://www.selleck.cn/products/lgk-974.html(P<0.05)。结论 干扰SNHG14表达可能靶向负调控miR-181b抑制H_2O_2诱导的人脑微血管内皮细胞凋亡和氧化应激。