目的:继乳腺癌后,宫颈癌(Cervical cancer,CC)已成为20至39岁女性癌症死亡的第二大原因,与高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)的持续感染密切相关。NFX1(Nuclear transcription factor,X-box binding 1)是一种MHC Ⅱ类基因的转录抑制因子,人NFX1-123是NFX1的亚型之一,在HPV阳性的原发性宫颈癌中高表达,推测NFX1-123可能在宫颈癌发生发展中发挥重要作用,可能与细胞端粒酶活性及细胞衰老等机制相关。本研究旨在:1.构建并验证NFX1-123基因真核表达质粒;2.初探NFX1-123与HPV16 E6的细胞定位关系和可能作用机制;3.阐明NFX1-123对过表达HPV E6的细胞端粒酶活性和细胞衰老的作用是否受高低危型HPV影响;4.探索上述E6-NFX1-123通路与E6-E6AP-p53/p21通路之间的相关性。方法:1.获取NFX1-123基因片段,将其插入真核表达载体,构建并鉴定重组表达质粒;2.通过免疫共沉淀方法对NFX1-123和HPV16 E6的相互作用进行验证,选用免疫荧光方法对两者的细胞定位关系进行研究;3.采用SA-β-Gal染色检测HEK 293T细胞的衰老情况;4.采用Western blot检测p53、p21、NFX1-123等蛋白的表达水平。结果:1.酶切鉴定和测序确认了重组表达质粒nHA-NFX1-123/pRK5构建成功,HA-NFX1-123蛋白可在HEK 293T细胞中正常表达且主要表达在细胞质中;2.通过免疫共沉淀法验证了 NFX1-123和HPV16 E6蛋白结合。通过免疫荧光实验观察到与HPV16 E6共表达时,NFX1-123从HEK 293T细胞的细胞质迁移至细胞核并与细胞核中的HPV16 E6发生共定位;Video bio-logging3.共同过表达高危型HPV16 E6和NFX1-123显著提高HEK 293T细胞的端粒酶活性,而过表达低危型HPV6 E6和NFX1-123对细胞的端粒酶活性无影响;4.过表达NFX1-123显著增强高危型HPV16 E6对HEK 293T细胞的细胞衰老的抑制作用,对过表达低危型HPV6 E6的细www.selleck.cn/products/Cisplatin胞无此增强作用;5.单纯过表达NFX1-123对p53和p21的蛋白表达没有明显影响,而当HPV16 E6和NFX1-123共同过表达时,HPV16 E6对p53和p21的降解明显增强,E6-NFX1-123通路协同增强E6-E6AP-p53通路。结论:NFX1-123可在高危型HPV16 E6的诱导下发生细胞定位改变并与E6结合,进而促使宿主蛋白NFX1-123的生物学功能发生改变,并且发现NFX1-123可显著提高过表达HPV16 E6的细胞的端粒酶活性、协同增强E6-E6AP-P53通路所介导的细胞衰老抑制。低危型HPV6 E6无法诱导宿主蛋白NFX1-123发生上述Nirmatrelvir改变,高危型HPV与低危型HPV感染的宫颈上皮组织的结局走向迥然不同可能与此机制相关。