Nampt及高糖高胰岛素微环境对人顺铂耐药肺癌细胞株增殖和转移的影响

目的:探究烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)及高糖高胰岛素(HG+HI)微环境Crizotinib化学结构对人顺铂耐药肺癌细胞增殖和转移的影响。方法:将人顺铂耐药细胞株A549/DDP分为6组(n=6):对照组(control)、高糖高胰岛素干预组(HH,使用添加30 mmol/L的葡萄糖和500 m U/L的胰岛素的培养基培养72 h)、分别转染sh-NC和sh-Nampt组(sh-NC和sh-Nampt,使用Lipofectamine 2000将sh-NC和sh-Nampt分别转染到细胞中,转染时间为48 h)、HH干预sh-NC和sh-Nampt组(HH+sh-NC和HH+sh-Nampt)。每组6个重复样本。qRT-PCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测Nampt m RNA,Western blot检测Nampt、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果:与selleck化学对照组和sh-NC组比较,sh-Nampt组的Nampt m RNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低,而细胞凋亡率升高,Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表genetic reversal达水平降低,Bax蛋白表达水平升高(P<0.005)。与对照组和sh-NC组比较,HH组和HH+sh-NC组的Nampt m RNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高,Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平升高,Bax蛋白表达水平降低(P<0.005)。与HH组和HH+sh-NC组比较,HH+sh-Nampt组的Nampt m RNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高(P<0.005)。结论:高糖高胰岛素微环境可能通过上调Nampt/PI3K/AKT信号通路诱导人顺铂耐药肺癌细胞的增殖和转移。