miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨微小RNA-92a-3p (micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p)靶向调控PTEN对神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至SH-SY5Y细胞, 根据实验需要分为miR-92a-3p过表达组、NC过表达组、miR-92a-3p抑制组、NC抑制组, 采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRTselleck-PCR)检测转染后细胞内miR-92a-3p的表达水平;采用CCK-8检测实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测miR-92a-3p对细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化;采用基因软件预测miR-92a-3p的靶基因并用双荧光素酶报告体系进行验证social media;最后采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-92a-3p和抑制miR-92a-3p后对PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达情况。结果 qRT-PCR结果显示miR-92a-3p过表达组的表达含量(65.73±20.07)比miR-92a-3p抑制组的表达含量(0.33±0.02)显著增高, 且差异有统计学意义(t=5.64, P=0.005)。CCK-8检测实验显示, miR-92a-3p过表达组能促进SH-SY5Y细胞的增殖活性(P均0.001 ), miR- 92a-3p抑制组则能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性(P=0.031, P=0.012, P0.001, P0.001)。细胞克隆形成实验结果显示, miR-92a-3p过表达组的细胞克隆数为(210±19)个, 高于NC过表达组的细胞克隆数(144±5)个, 组间比较差异有统计学意义(P=0.005);miR-92a-3p抑制组的细胞克隆数为(83±6)个, 低于NC抑制组的细胞克隆数(137±13)个, 组间比较差异有统计学意义(P=0.003)。细胞划痕实验及细胞侵袭Colforsin抑制剂实验结果显示, miR-92a-3p过表达组细胞迁移愈合率为(90.37±0.67)%, 高于miR-92a-3p抑制组(41.03±0.56)%, 组间比较差异有统计学意义(P0.001);miR-92a-3p过表达组细胞穿膜数量为(106.80±9.28)个, 高于miR-92a-3p抑制组(33.40±7.56)个, 组间比较差异有统计学意义(P0.001)。qRT-PCR和蛋白质印迹法结果显示, 与NC过表达组相比, miR-92a-3p过表达组PTEN的mRNA表达量(0.43±0.02)和蛋白水平明显降低, 而PI3K mRNA表达量(2.00±0.10)、AKT mRNA表达量(1.41±0.19)和各自蛋白水平明显升高, 且差异均有统计学意义(P0.001、P 0.001和P=0.028);miRNA-92a-3p抑制组可逆转上述作用, 且差异均有统计学意义(P=0.043、P= 0.046和P0.001)。结论 PTEN基因是miR-92a-3p的靶基因, miR-92a-3p可能通过促进NB细胞增殖、促进NB细胞侵袭、促进NB细胞迁移和抑制PTEN mRNA表达引发PTEN蛋白水平的降低。