目的:乳腺癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤,放疗是治疗乳腺癌的重要手段,可减少复发,延长生存时间,提高生命质量。许多患者因肿瘤对放疗的抗性而预后不良,因此放疗抵抗是需要解决的临床难题。近年来,分子靶向在恶性肿瘤治疗上取得了显著临床疗效,筛选参与调控乳腺癌细胞增殖、侵袭与治疗抵抗相关的基因是目前的探索和研究热点。本研究探索基于具有上述功能调控基因的角蛋白15(Keratin 15,KRT15)对乳腺癌的恶性增殖功能和对电离辐射敏感性的影响,发现并验证相关信号通路。方法:体外培养乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,建立KRT15敲减或过表达的细胞,用含有KRT15靶向sh RNA或c DNA的慢病毒载体转导乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞。用空载体转导的细胞作为阴性对照。使用q PCR和WTelaglenastat试剂estern blot对KRT15 m RNA和蛋白表达量进行检测。采用CCK-8实验和克隆形成实验观察KRT15基因敲减和过表达对MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力的影响;Annexin V-APC/PI双染法观察KRT15对MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell、划痕实验和Western blot观察KRT15对MDA-MB-231和MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot观察KRT15对MCF-7细胞铁死亡的影响。构建荷瘤小鼠模型验证KRT15的促癌功能。Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关分子和p53的表达情况。结果:使用CCK-8和克隆形成实验验证了KRT15的增殖活性,MDA-MB-231和MCF-7细胞的KRT15敲减株增殖能力均降低(抑制率为29.62%和29.38%,P<0.001),而过表达株增殖能力均升高(增殖率为10.06%和18.26%,P<0.001)。克隆形成实验显示相似的结果(P<0.01)。流式细胞分析显示过表达KRT15显著抑制细胞凋亡(P<0.05);而敲减KRT15却逆转了对凋亡的抑制作用(P<0.001)。为验证KRT15对电离辐射敏感性的作用,利用CCK-8和克隆形成实验MCF-7细胞接受4Gy电离辐射后的存活情况,结果显示KRT15过表达细胞存活率显著升高(P<0.01)。流式细胞分析显示,与Control+IR组相比,其凋亡率也明显减少(P<0.05)。Western blot显示KRT15促进电离辐射前后的EMT;Transwell和划痕实验显示KRT15过表达的乳腺癌细胞电离辐射前后的侵袭迁移能力显著增加(P<0.001)。Western blot显示,与对照组相比,KRT15过表达组电离辐射前后的GPX4、FTH1和SLC7A11的蛋白质水平明显升高,而DMT1蛋白质水平均明显降低;小鼠模型中电离辐射前后KRT15组肿瘤体积、重量均小于对照组;免疫组化显示Ki-67含量均高于对照组。Western blot显示,KRT15过表达可增强体内和体外Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF1、MMP7、CCND1Telemedicine education和c-Myc的蛋白质表达水平。本研究还表明在接受电离辐射前后,过表达KRT15的乳腺癌细胞p53蛋白表达降低。因此预测KRT15过表达可能通过负反馈调节抑制p53的表达或转录活性。结论:KRT15促进乳腺癌的增购买Baf-A1殖、迁移和侵袭,抑制凋亡和铁死亡,进而提高Wnt/β-catenin信号通路活性,抑制放射治疗效果。