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本研究探讨黄芩素(Baicalein,Bai)在心肌损伤情况下的逆转作用,激活核因子E2相关因子2(Nuclear factor rythroid-2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)信号通路介导心肌铁死亡(Ferroptosis)来探讨Bai改善心肌损伤的分子机理,为心脏损伤的发病机制的认识拓宽思维,并为临床研究提供新的方向、新途径。目的:利用腹腔注射异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)建立心肌肥厚模型,通过腹腔注射Bai进行干预治疗,探讨Bai对心肌肥厚模型下心功能、炎症反应、纤维化的作用以及Bai通过Nrf2/HO-1信号通路调控心肌铁死亡影响心脏损伤的作用。方法:1、将小鼠随机分in vitro bioactivity为4组(n=6),Con组(Con)、模型组(ISO)、Bai低剂量组(ISO+Bai-25)、Bai高剂量组(ISO+Bai-50),黄芩素干预治疗后,对小鼠进行超声心动图评估小鼠心功能;利用病理染色及MDA、CK-MB、LDH试剂盒评估心肌损伤情况及纤维化程度;运用WB检测肥大、纤维化、炎症相关蛋白的表达水平情况。2、将小鼠随机分为4组(n=6),Con组(Con)、黄芩素组(Con+Bai-50)、模型组(ISO)、Bai高剂量组(ISO+Bai-50)。黄芩素干预治疗后,对小鼠进行超声心动图评估小鼠心功能;利用病理染色及MDA、CK-MB、LDH试剂盒评估心肌损伤情况及纤维化程度;运用WB检测心肌肥大、纤维化、抗氧化、炎症以及铁死亡相关蛋白的表达水平情况。3、小鼠随机分为5组(n=6),Con组(Con)、模型组(ISO)、Bai高剂量组(ISO+Bai)、Nrf2抑制剂组(ISO+Bai+ML385)、铁死亡激活剂组(ISO+Bai+Erastin)。按上述方法评估小鼠心脏功能、炎症变化、纤维化情况,另利用铁离子试剂盒检测心肌组织中铁离子的含量;免疫荧光评估Nrf2入核情况;Elisa检测心肌组织中MDA、GSH、ROS的含量;WB检测Nrf2、HO-1信号通路蛋白及铁死亡相关蛋白。结果:1、HE/Masson染色显示,与ISO相比,Bai组可以显著改善心肌损伤及心肌纤维的变化;心超显示,与ISO相比,Bai组HW/BW、IVSd、LVPWd、LVIDd有所改善;ISO组小鼠CK-MB、LDH含量显著升高,Bai组呈剂量依赖性下降;ISO组小鼠GSH活性显著下降,MDA含量增多,Bai组GSH呈浓度依赖升高,MDA含量降低。WB结果显示,与Con组相比,ISO组、Bai组SOD1、CAT表达下调,NF-κB、TNF-α、IL-6、p-Smad2、Collagen I、BNP表达上调(P<0.05);与ISO组相比,Bai组SOD1、CAT蛋白表达呈剂量依赖性上调(P<0.05)。2、(1)通过超声心动图检测,ISO组小鼠LVIDd值明显低于Con组,而ISO组小鼠心脏的LVSd和LVPWd明显高于对照组(P<0.05);心脏取材结果发现:ISO组小鼠心脏质量、心重/体重的比值明显高于对照组,ISO+Bai-50组的小鼠心脏质量、心重/体重的比值明显低于ISO组(P<0.05);WB分析得出:ISO组心肌肥厚相关蛋白B型利钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达水平明显高于对照组,ISO+Bai-50组的心肌肥厚相关蛋白BNP、β-MHC表达水平低于ISO组(P<0.05)。(2)Masson染色显示:ISO组小鼠血管周围及间质纤维化严重程度明显高于对照组,ISO+Bai-50组小鼠纤维化程度有所减轻;WB分析结果:ISO组小鼠纤维化标志物:I型胶原纤维(Collagen I)、纤维连接蛋白(Fib)、转换化生长因子(TGF-β)及Smad2转录因子的蛋白表达水平明显高于对照组,ISO+Bai-50组小鼠Collagen I、Fib、TGF-β、Smad2蛋白表达水平明显低于ISO组(P<0.05)。(3)心肌损伤标志物检测显示:诱导组小鼠CK-MB、LDH的活性明显高于对照组,而ISO+Bai-50组小鼠CK-MB、LDH的活性明显低于ISO组(P<0.05)。(4)氧化应激指标WB分析结果显示:ISO组核因子-κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的蛋白表达水平明显高于对照组,ISO+Bai-50组小鼠NF-κB、IL-6及TNF-α蛋selleckchem Etoposide白表达水平明显低于ISO组(P<0.05);ISO组超氧化物歧化酶(SOD1)、过氧化氢酶(CAT)、的蛋白表达水平明显低于对照组,ISO+Bai-50组小鼠SOD1、CAT蛋白表达水平明显高于ISO组(P<0.05)。3、Nrf2抑制剂(ML385)、铁死亡激活剂Erastin与Bai共同干预小鼠,结果显示加重Bai对心肌损伤的改善。与ISO+Bai组相比,ML385、Erastin组超声心动图、纤维化、炎症反应及心肌损伤指标有所上升趋势。(1)铁离子试剂盒检测得出:ISO组铁离子浓度均Pevonedistat分子量高于对照组,ISO+Bai组小鼠铁离子浓度明显低于ISO组,而ML385组、铁死亡激活剂Erastin组铁离子浓度高于明显ISO+Bai组(P<0.05)。(2)MDA、ROS、GSH试剂盒检测得出:与对照组相比,ISO组小鼠MDA、ROS含量明显增加,GSH含量下降;与ISO组相比,ISO+Bai组小鼠MDA、ROS含量明显下降,GSH含量增加;与ISO+Bai组相比,ML385组、铁死亡激活剂Erastin小鼠MDA、ROS含量有所增加,GSH含量下降。(3)WB分析得出:使用ML385、Erastin后,心肌组织中的Nrf2、HO-1、NOQ1蛋白表达水平均被显著抑制;GPX4、FTH1蛋白表达下调,而PTGS2蛋白表达上调;抗氧化蛋白SOD1、CAT表达均下调。结论:Bai通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制心肌铁死亡改善心脏损伤的作用。

目的：比较经尿道钬激光前列腺剜除术（HoLEP）与经尿道前列腺等离子剜除术（PKEP）治疗良性前列腺增生（BPH患者的效果。方法：回顾性分析2020年4月至2022年6月该院收治的90例BPH患者的临床资料，按手术方案不同将其分为对照组和研究组各45例。对照组行PKEP治疗，研究组行HoLEP治疗。比较两组手术相关指标（手术时间、术中出血量、术后膀胱冲洗时间、导尿管留置时间及住院时间）水平，手术前后排尿功能[国际前列腺症状评分（IPSS）、最大尿流率（Qmax）]、残余尿量、生命质量评分，以及并发症发生率。结果：研究组手术时间、术后膀胱冲洗时间、导尿管留置时间和住院时间均短于对照组，术中出血量少于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；术后，两组IPSS评分均低于术前，Qmax均高于术前、残余尿量均少于术前，且研究组优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；术后，两组生命质量评分均低于术前，且研究组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组并发症发生率为2.22%(1/45)，低于对照组的17.78%(8/45)，差异有统计学意义（P<Baricitinib IC500.05）eye drop medication。结论：HoLEP治疗BPH患者可有效缩短手术时间、术后膀胱冲洗时间、导尿管留置时间及住院时间，减少术中出血量，提高术后排尿功能和生命质量，降低并发症发生率，效果优于PKEP治selleck合成疗。

目的:利用体内和体外模型探讨氨酰4-羟化酶A2 (P4HA2)对肾间质纤维化的作用及其机制。方法:采用输尿管结扎模型构建动物肾纤维化,使用免疫组化技术检测P4HA2表达水平;采用不同梯度浓度TGF-β刺激HK2细胞构建细胞肾纤维化模型,利用免疫印迹和细胞免疫荧光检测P4HA2蛋白表达变Liraglutide临床试验化水平;利用腺病毒转染HK2细胞,使用免疫印迹和酶联免疫吸附试验技术探索P4HA2在细胞水平对炎症信号通路NF-κB信号通路和下游炎症因子的影响。结果:与假手术组小鼠比较,模型组小鼠P4HA2表达量显著增加,且集中于肾小管细胞胞质与胞核中。使用50 ng/mL TGF-β刺激HK-2细胞24 h后P4HA2表达水平显著升高,且细胞形态由鹅卵Panobinostat体内石形变成针尖样长梭形;与转染对照组(scramble)比较,sh-P4HA2抑制NF-κB信号通路相关蛋白表达量,减少下游炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平。结论:P4HA2可能调控NF-κB信号通路,抑制机体炎症反应,缓解肾间质animal pathology纤维化发展。

目的:观察刺血拔罐疗法治疗肿瘤化疗相关性血小板减少症的临床疗效并评价其安全性,进一步探讨刺血拔罐疗法治疗肿瘤化疗相关性血小板减少症的作用机制。方法:本课题纳入PLX4032半抑制浓度经病理或细胞学诊断证实确诊为恶性实体瘤,并应用吉西他滨、铂类化疗方案后出现化疗相关性血小板减少症的患者60例。根据随机数字表法分为试验组、对照组,两组各30例。试验组患者采用咖啡酸片加刺血拔罐,对照组患者服用咖啡酸片,连续治疗14天。观察并记录两组患者在接受治疗前、治疗中、治疗后的血小板计数、升血小板治疗有效率、血小板恢复时间、白细胞、红细胞、血红蛋白计数、中医证候积分、KPS评分及肝肾功能等数据,采用IBMSPSS26.0软件进行数据统计分析。结果:1.基线比较:两组患者的性别、年龄、癌种分布、化疗药物使用、治疗前疾病资料(中医证候积分、KPS评分、CIT分级)等方面经检验均无统计学差异(P>0.05),具有可比性。2.疗效比较:(1)血小板改变:试验组在治疗后第7天血小板计数高于对照组(P<0.05),治疗后第14天血小板显著高于对照组(P<0.01),且试验组在升血小板疗效、血小板恢复时间方面均优于对照组(P<0.05)。(2)白细胞、红细胞、血红蛋白:试验组治疗前后外周血中的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)及血红蛋白(HGB)计数(P>0.05),差异无统计学意义,未发现PLX5622刺血拔罐对白细胞、红细胞、血红蛋白有治疗效果。(3)中医证候积分:试验组在治疗后面色、疲倦乏力、头晕眼花、紫斑、出血、舌象、脉象均有所好转(P<0.05),试验组心悸、恶心呕吐、食欲不振症状积分下降无统计学差异(P>0.05);对照组紫斑、出血症状有所改善(P<0.05),对照组面色、疲倦乏力、心悸、头晕眼花、食欲不振、恶心呕吐、舌象、脉象症状积分下降无统计学差异(P>0.05)。(4)KPS评分:试验组与对照组卡氏评分改善情况差异明显,试验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。3.安全性比较:(1)肝肾功:两组患者治疗前、治疗后肝肾功Tissue Culture对比无明显差异(P>0.05)。(2)不良反应:试验组、对照组患者中各出现1例皮肤局部小块瘀血症状,经对症处理后,可自行消退。对照组出现1例小水泡患者,无需特殊处理,可自行吸收。患者未见晕针、晕罐、局部皮肤破溃、感染、糜烂等不良反应。结论:1.刺血拔罐疗法治疗肿瘤化疗相关性血小板症疗效确切,能快速有效提升血小板计数,缩短血小板恢复时间,疗效优于单纯服用咖啡酸片。2.刺血拔罐疗法能有效改善肿瘤化疗相关性血小板减少症患者的面色、疲倦乏力、头晕眼花、紫斑、出血、舌象、脉象等症状,于肝俞、脾俞刺血拔罐具有补虚泻实双向调节作用,能够改善肿瘤患者生活质量。3.刺血拔罐疗法具有良好的临床应用安全性。

背景及目的:原发性胃淋巴上皮瘤样癌是胃癌的一种罕见病理组织类型,其发病率低,占胃癌的1-7%,目前有不少研究对它的临床病理特征及预后做了分析,但关于其治疗方案目前尚无统一共识,不同辅助化疗方案的疗效分析也未见报道。本研究旨在通过回顾性分析评估胃淋巴上皮瘤样癌患者的临床病理特征,探讨胃淋巴上皮瘤样癌有无辅助化疗时的生存结局,及不同辅助化疗方案用于胃淋巴上皮瘤样癌患者的疗效,并分析影响其预后的因素。方法:根据纳排标准回顾性收集南昌大学第一附属医院2012年1月至2021年12月经手术切除的原发性胃淋巴上皮瘤样癌患者的临床病理资料、辅助化疗方案及生存结局,主要的评价指标包括无病生存期(DFS)和总生存期(OS)。使用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线。使用COX回归进行单因素和多因素生存分析,p值<0.05具有统计学意义。结果:共纳入63例患者,中位年龄为62岁,男性患者居多(90.5%),96.8%的患者EBV编码的小RNA(EBV-encoded small RNA,EBER)呈阳性,肿瘤部位以胃体(41例,65.1%)多见,病理分期主要以II期(28例,44.4%)和III期(19例,30.2%)为主。根据有无应用辅助化疗方案将患者分成两组(无辅助化疗组28例,辅助化疗组35例),T分期(P=0.049)、N分期(P=0.001)、肿瘤分期(P=0.001)、神经侵犯(P=0.023)、CA125(P=0.024)、PD-L1(P=0.014)在两组患者中具有bioheat transfer统计学差异;生存分析结果显示,无辅助化疗组和辅助化疗组患者的2年DFS率(91.7%vs.84.4%)、2年OS率(95.2%vs.94.0selleck产品%)差异均无统计学意义,两组患者的DFS和OS无统计学差异(p=0.198、p=0.423);进一步分析了II期、III期、II/III期、I/II/III期患者在有无辅助化疗时的生存时间差异,结果未发现生存时间存在统计学差异(p=0.407,p=0.949,p=0.631,p=0.760)。接着分析了I/II期与III/IV期患者的DFS和OS,以及有无脉管癌栓对患者DFS的影响,结果示I/II期与III/IV期患者的DFS、OS无统计学差异(p=0.128、p=0.210);脉管无癌栓较脉管可见癌栓的患者具有更好的DFS(p=0.038)。在单因素和多因素模型中未观察到影响DFS的有统计学意义的预后因素,也未观察到影响OS的预后因素。在35例予以辅助化疗的患者中,以铂类化疗药物为基础的有23例、以紫杉醇类化疗药物为基础的有9例,将应用铂类化疗药物和紫杉醇类化疗药物的患者进行比较,生存分析未发现两组患者在DFS和OS方面存在统计学差异(p=0.189,p=0.134);两组患者的2年DFS率分别为89.8%、75.0%,差异未见统计学意义(p>0.10),2年OS率分别为87.5%、88.9%,也无统计学差异(p>0.50)。单因素和多因素PF-6463922说明书分析均未发现影响辅助化疗患者DFS和OS的预后因素。结论:GLELC具有独特的临床病理特征:在中老年、男性患者中多见;肿瘤位置多位于近端;分期以II、III期多见;淋巴结转移率低;在总人群中,生存分析在有无应用辅助化疗组中无统计学差异,脉管无癌栓较脉管可见癌栓的患者具有更好的DFS,预后分析中未观察到影响患者DFS和OS的预后因素;在辅助化疗人群中,辅助化疗方案对DFS和OS均无统计学差异,也未观察影响辅助化疗患者DFS和OS的预后因素。

一、研究背景淹溺是意外伤害导致死亡的第三位原因。在过去的十年中,淹溺导致了超过250万人死亡。不同国家和地区海水淹溺的比例存在差异,而且随着滨海旅游、海上作业等活动的增加,以及海洋国防事业的需求,海水淹溺人数可能会继续增加。肺脏是海水淹溺时容易受损的靶器官,1/3的非致命性淹溺患者会出现急性肺损伤(acute lung injury,ALI)或者急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的诊断标准,这也被称为海水吸入诱导急性肺损伤(seawater aspiration induced acute lung injury,SW-ALI)。ALI/ARDS一种严重威胁生命的临床综合征,其特点是顽固性低氧性呼吸衰竭和胸部影像学上的双肺弥散性渗出。在ALI/ARDS进程中,肺泡上皮-血管内皮屏障功能的破坏,最终导致富含蛋白质的液体渗出到肺泡腔和肺泡间隙中。目前,尚无针对ALI/ARDS的有效药物治疗方案,主要采取机械通气、俯卧位、体外膜肺氧合(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)、糖皮质激素等支持治疗。基于间充质干细胞的疗法是治疗ALI/ARDS有前景的疗法。临床前研究表明,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)可以有效减轻动物模型的肺损伤。但是,MSC的致瘤性、免疫原性、低移植率等问题限制了其应用。间充质干细胞来源的外泌体(MSC derived exosome,MSC-Exo)是由MSC分泌的一种细胞囊泡,继承了MSC的功能,而且具有更要的药代动力学。可能通过传递生物活性物质,发挥调节炎症信号通路、促进组织修复再生、抗微生物的作用。坏死性凋亡由刺激因素级联激活RIPK1、RIPK3、MLKL导致细胞出现受调控的死亡。坏死性凋亡诱发因素与凋亡类似,是细胞凋亡受阻时的备选死亡方式,形态学上与坏死表现相似,体现为细胞器肿胀、质膜破裂。越来越多的研究表明,坏死性凋亡在ALI/ARDS的进程中起着重要作用。而且最新的研究显示高渗应激、高血糖均可导致细胞出现坏死性凋亡。活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)转录因子家族由五个亚型组成(NFAT1–NFAT5),调节T细胞的激活和分化,而且还调节细胞周期、死亡等的重要基因。通过生物信息学分析发现NFATc2为受体相互作用丝氨酸苏氨酸激酶1(receptor interacting serine threonine kinase 1,RIPK1)上游的转录因子,NFATc2可致使RIPK1的表达上调。由此我们推测,UMSC-Exo是否能通过影响NFATc2的表达从而减轻海水诱导的肺损伤呢?二、研究目的(一)优化海水诱导肺损伤的细胞模型条件,分离纯化脐带间充质干细胞来源的外泌体(UMSC derived exosome,UMSC-Exo),并在细胞模型中验证UMSCExo是否能减轻海水诱导肺损伤;(二)探讨UMSC-Exo减轻海水诱导肺损伤细胞模型可能的机制;(三)在体实验验证UMSC-Exo是否能减轻海水诱导小鼠肺损伤。三、研究方法(一)优化海水诱导肺损伤的细胞模型、鉴定所提取外泌体、研究UMSCExo对海水诱导肺损伤的作用首先通过CCK8(Cell Counting Kit-8)试剂检测不同海水量和刺激时间对细胞活力的影响,确定海水诱导肺损伤细胞模型的构建条件。收集使用无外泌体血清培养的UMSC上清液,采用标准的差速离心法分离、纯化外泌体。采用Western Blot检测外泌体表达的标志蛋白、透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析外泌体粒径。使用含海水的培养基诱导后,更换新的正常培养基并加入UMSCExo,采用PKH-67染色检测UMSC-Exo能否被BEAS-2B细胞所摄取。通过CCK8检测细胞活力、JC-1试剂盒对线粒体膜电位染色、碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色检测细胞膜完整性、Annexin V试剂盒检测细胞死亡情况,研究UMSC-Exo对海水诱导细胞损伤的作用。(二)UMSC-Exo减轻海水诱导肺损伤细胞模型的机制研究首先,筛选海水诱导BEAS-2B细胞损伤中主要细胞死亡方式和关键调控基因。基于海水诱导肺损伤的细胞模型以及最佳治疗浓度UMSC-Exo减轻海水诱导肺损伤进行转录组测序。基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)查找海水诱导后富集的细胞死亡方式而在UMSC-Exo治疗后受到抑制的细胞死亡方式为坏死性凋亡;通过WB检测海水诱导肺损伤中坏死性凋亡执行蛋白pMLKL、MLKL、p-RIPK3、RIPK1、RIPK3的及凋亡标志性蛋白Caspase-8的表达水平进一步验证。查找海水诱导后表达上调而UMSC-Exo治疗后表达下调的差异基因,通过生物信息学分析,发现可以靶向调控坏死性凋亡的转录因子,两者对比确定影响坏死性凋亡的关键基因NFATc2。通过WB和qPCR验证NFATc2在USMC-Exo减轻海水诱导BEAS-2B细胞损伤中的变化情况。通过荧光素酶试验的方法验证转录因子NFATc2对RIPK1的靶向调控作用。si-NFATc2转染BEAS-2B后,通过CCK8、JC-1染色、PI染色、流式细胞及WB验证NFATc2在海水诱导坏死性凋亡中的RAD001半抑制浓度作用。其次,筛选UMSC-Exo中能够靶向NFATc2的miRNA。从GEO数据库中查找脐带间充质干细胞外泌体的miRNA测序数据集,选取表达量排名前100的miRNA取交集;从数据库中(Target Scan、miRDB、miRWalk、mir DIP、miRTar Base)筛选能够调控NFATc2的miRNA,并与UMSC-Exo表达的miRNA进行比对,筛选出可以靶向调控NFATc2的候选miRNA,并与正常BEAS-2B细胞中候选miRNA表达量对比。设计构建候选miRNA的模拟物,通过WB和qPCR的方法验证可以靶向NFATc2的miRNA模拟物,进一步通过双荧光素酶的试验方法进行验证miRNA对NFATc2的靶向调控作用。使用CCK8、JC-1染色、PI染色、流式细胞和WB验证目的miRNA模拟物在海水诱导细胞损伤中对NFATc2表达的影响及对坏死性凋亡的影响。(三)UMSC-Exo抑制坏死性凋亡减轻海水诱导小鼠急性肺损伤的验证研究采用经口气管插管缓慢注入海水的方法建立小鼠SW-ALI模型,治疗组注入海水6小时后给予USMC-Exo治疗。使用HE染色观察小鼠肺组织病理变化,通过量化肺组织损伤评分评估肺损伤的严重程度。通过腹主动脉采血进行血气分析评估气体交换障碍情况。通过小鼠肺组织称湿/干质量比评估肺水肿情况。使用胸部X线评估双肺渗出情况。检测肺泡灌洗液炎症因子评估炎症情况。对小鼠肺组织切片目的基因即坏死性凋亡相关进行免疫组织化学分析、免疫荧光染色。最后用Western Blot检测NFATc2和坏死性凋亡相关蛋白,验证在体实验结果是否同细胞实验结果一致。四、研究结果(一)制定海水诱导肺损伤细胞模型的条件、提取外泌体符合标准、UMSCExo减轻海水诱导细胞BEAS-2B损伤海水含量为20%的培养基刺激6h可以诱导BEAS-2B细胞活力下降达50%,并以此作为海水诱导肺损伤细胞模型的条件。Western Blot结果显示UMSC-Exo表达CD9、CD63、Alix,但不表达Calnexin。透射电镜下显示外泌体具有单层膜结构、一侧凹陷的半球形。粒径分析显示提取的UMSC-Exo直径集中在60-120nm之间。示踪实验表明UMSC-Exo能够被BEAS-2B细胞所摄取。相较于海水诱导组,加入UMSC-Exo治疗后细胞活力恢复,JC-1染色显示绿色荧光减弱、红色荧光增强,PI染色红色荧光减弱,死亡细胞数量减少。UMSC-Exo的治疗效果随着剂量的增加而增强,其最佳治Serologic biomarkers疗浓度为50μg/ml。(二)UMSC-Exo来源的miR143-3p通过靶向调控NFATc2减轻海水诱导细胞坏死性凋亡实验一:NFATc2是调控海水诱导坏死性凋亡中的关键基因1、UMSC-Exo通过抑制坏死性凋亡减轻海水诱导的细胞损伤GSEA显示BEAS-2B受到海水刺激时出现的细胞死亡方式而在UMSC-Exo治疗后受到抑制的细胞死亡方式为坏死性凋亡显著(P<0.05)。WB结果显示,海水诱导后坏死性凋亡执行蛋白p-MLKL、p-RIPK3、RIPK1的表达增加,RIPK3表达有所降低,抑制坏死性凋亡的Caspase-8表达下降,MLKL表达变化不明显。而加入UMSC-Exo后p-MLKL、p-RIPK3、RIPK1的表达下降,RIPK3表达增加,Caspase-8表达增加,MLKL表达变化不明显。2、转录组测序筛选海水诱导BEAS-2B细胞损伤中的差异表达基因海水诱导后表达上调,在UMSC-Exo治疗后表达下调的基因有26个,其中包括4个转录因子:NFATc2、LTF、MAFF、NR4A3。热图显示差异显著性排名前50基因中所含的转录因子:NFATc2、LTF、MAFF。火山图中差异显著性最大的基因为:NFATc2。3、生信分析可能靶向坏死性凋亡的转录因子及验证PROMO数据库找RIPK1的预测转录因子,与转录测序筛选的有差异的四个转录因子进行对比,预测转录因子NFATc2可能是调控坏死性凋亡的关键基因。JASPAR网站中查找NFATc2能够在RIPK1启动子的结合位点序列并设计结合位点突变序列。荧光素酶实验结果显示,NFATc2质粒能够与野生型RIPK1启动子序列结合、荧光增强。4、NFATc2在UMSC-Exo治疗海水诱导肺损伤细胞模型中的表达验证WB和qPCR检测发现海水诱导后NFATc2的m RNA和蛋白表达水平均增加,UMSC-Exo治疗后NFATc2的m RNA和蛋白表达水平均将低。5、NFATc2在si RNA转染的BEAS-2B细胞中与坏死性凋亡关系通过CCK8、JC-1染色、PI染色、流式细胞及WB验证NFATc2在海水诱导坏死性凋亡中的作用。(1)si-NFATc2转染的细胞NFATc2的m RNA和蛋白表达水平下降;(2)si-AZD9291NFATc2转染后的细胞减少海水诱导的细胞活力下降;(3)si-NFATc2转染后的细胞降低海水诱导的线粒体膜电位下降;(4)si-NFATc2转染后的细胞降低海水诱导的细胞膜破坏;(5)si-NFATc2转染后的细胞减少海水诱导的细胞死亡;(6)si-NFATc2转染后的细胞海水诱导后p-MLKL、p-RIPK3、RIPK1的表达下降,RIPK3表达增加,Caspase-8表达增加。上述结果提示si-NFATc2转染细胞后NFATc2表达下调,坏死性凋亡相关蛋白的表达受到负性调节,抑制了坏死性凋亡的发生。实验二:UMSC-Exo通过miR143-3p靶向调控NFATc21、UMSC-Exo中靶向调控NFATc2的miRNA筛选结果GSE159814和GSE69909数据集中表达量排前100的miRNA共有51个;Target Scan、miRDB、miRWalk、mir DIP、miRTar Base数据库预测可能结合到NFATc2基因3’UTR的miRNA共6个,两者再次取交集获得候选miRNA共4个:miR-7-5p、miR-143-3p、miR-221-3p、miR-222-3p。4个候选miRNA在正常BEAS-2B中的表达量均在较低水平。2、UMSC-Exo中靶向调控NFATc2的候选miRNA的验证4个候选miRNA模拟物转染细胞后,miR-143-3p的模拟物使NFATc2的m RNA和蛋白水平表达下降。查找miR-143-3p在NFATc2基因m RNA上3’UTR的结合位点序列,设计构建野生型、突变型结合位点载体,荧光素酶实验表明,miR-143-3p模拟物使野生型3’UTR荧光强度明显减弱,说明miR-143-3p能够与NFATc2的3’UTR靶向结合。3、miR-143-3p对海水诱导BEAS-2B细胞坏死性凋亡的影响(1)与UMSC-Exo效果相似,miR-143-3p模拟物转然后可以减轻海水诱导的细胞活力下降;(2)与UMSC-Exo效果相似,miR-143-3p模拟物转染后可以使海水诱导的细胞线粒体膜电位增加;(3)与UMSC-Exo效果相似,miR-143-3p模拟物转染后可以减少海水诱导细胞膜质膜破坏;(4)与UMSC-Exo效果相似,miR-143-3p模拟物转染后可以减少海水诱导细胞死亡;(5)与UMSC-Exo效果相似,海水诱导细胞坏死性凋亡增加,miR-143-3p模拟物转染后可以抑制海水诱导细胞死亡。(三)UMSC-Exo抑制坏死性凋亡减轻海水诱导小鼠急性肺损伤中的在体验证研究1、小鼠动脉血气的变化海水诱导小鼠肺损伤可导致pH、pO2、SaO2出现明显的下降,pCO2、乳酸HCO3-升高。UMSC-Exo治疗后,pH、pO2、SaO2有所上升,pCO2、乳酸HCO3-下降。2、小鼠胸部X线改变海水诱导后小鼠胸部X线出现双肺弥漫性渗出,经UMSC-Exo治疗后小鼠双肺渗出有所减少。3、小鼠肺脏病理改变及肺组织损伤评分海水诱导后小鼠肺组织出现明显的中性粒细胞浸润、肺泡间隔增厚、肺泡塌陷、肺泡腔和间质出血增加;UMSC-Exo治疗后,中性粒细胞浸润减少、肺泡间隔厚度减少,肺泡腔和间质出血。海水诱导后小鼠肺组织的肺损伤评分增加,UMSC-Exo治疗后肺损伤评分降低。4、小鼠肺组织湿/干质量比海水诱导后小鼠肺组织湿/干质量比增加,UMSC-Exo治疗后,湿/干质量比降低。5、小鼠肺泡灌洗液炎症因子检测海水诱导后小鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α明显增高,给予UMSC-Exo治疗后可明显下降。6、肺组织NFATc2、p-MLKL、RIPK1免疫组织化学海水诱导小鼠肺组织中NFATc2、p-MLKL、RIPK1的表达增加。UMSC-Exo治疗后NFATc2、p-MLKL、RIPK1的表达下降。7、肺组织NFATc2、p-MLKL、RIPK1免疫荧光海水诱导小鼠肺组织中NFATc2、p-MLKL、RIPK1的荧光增强、表达增多。UMSC-Exo治疗后NFATc2、p-MLKL、RIPK1的荧光减弱、表达减少。8、肺组织NFATc2、p-MLKL、p-RIPK3、MLKL、RIPK3、RIPK1、Caspase-8的蛋白印迹检测海水诱导小鼠肺组织中NFATc2、p-MLKL、p-RIPK3、RIPK1的表达增加,RIPK3、Caspase-8是下降的。外泌体治疗后NFATc2、p-MLKL、p-RIPK3、RIPK1表达有所降低,RIPK3、Caspase-8有所升高。五、研究结论(一)UMSC-Exo可以减轻海水诱导BEAS-2B细胞损伤;(二)UMSC-Exo通过miR-143-3p靶向调控NFATc2抑制坏死性凋亡减轻海水BEAS-2B细胞损伤;(三)在体实验中UMSC-Exo减轻海水诱导小鼠急性肺损伤,NFATc2及坏死性凋亡相关蛋白表达与离体细胞实验结果一致。

目的 观察依达拉奉右莰醇联合血管介入术治疗急性脑梗死(ACI)的疗效，并探讨其对患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2 [Lp-PLA＿(2)]、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平和血小板功能的影响。方法 选取2021年1月至2022年2月宝鸡市第三医院与宝鸡市高新医院收治的105例ACI患者作为研究对象，采用分层区组随机化方法，按各医院分层，按照1∶1比例将患者分为对照组52例和观察组53例，两组患者均行常规治疗和血管介入手术治疗，此外，对照组给予依达拉奉注射液，观察组给予依达拉奉右莰醇注射用浓溶液，两组患者均治疗14 d。比较两组患者治疗后的临床疗效，以及治疗前后的血清Lp-PLA＿(2)、NSE水平、血小板功能和并发症发生情况。结果 观察组患者的治疗总有效率为94.34%，明显高于对照组的80.77%，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后，观察组患者的血清Lp-PLA＿(2)、NSE分别为(169.46±1Brazillian biodiversity4.68) mg/L、(7.96±0.82) mg/L，明VX-765溶解度显低于对照组的(192.36±16.04) mg/L、(9.78±0.58) mg/L，差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后，观察组患者的血小板黏附率、血小板聚集率、CD62pC59采购和选择素分别为(35.89±3.56)%、(29.10±3.46)%、(2.83±0.50)%、(10.88±2.17) mg/L，明显低于对照组的(39.68±3.48)%、(31.57±3.66)%、(3.17±0.49)%、(12.03±2.09) mg/L，差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后，观察组患者的并发症总发生率为3.77%，略低于对照组的7.69%，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 依达拉奉右莰醇联合血管介入术治疗急性脑梗死的疗效较好，其可降低患者血清Lp-PLA＿(2)、NSE水平，改善血小板功能。

目的 系统评价急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke,AIS）患者静脉溶栓（intraveno点击此处us thrombolysis,IVT）治疗前后平均血小板体积（mean platelet volume,MPV）、血小板体积分布宽度（platelet distribution width,PDW）、血小板与淋巴细胞比值（platelet to lymphocyte ratio,PLselleck IpatasertibR）、血小板与中性粒细胞比值（platelet to neutrophil ratio,PNR）与远期预后的关系。方法 通过计算机检索中国知网、万方数据、重庆维普、PubMed、Web of Science数据库中关于MPV、PDW、PLR、PNR与AIS患者IVT治疗后远期预后相关性的研究文献，检索时间从建库至Laboratory biomarkers2023年2月，使用改良Rankin量表评估患者远期预后。使用Newcastle-Ottawa量表对文献质量进行评价，使用RevMan 5.4软件对数据进行处理。结果共14篇文献、3645例患者纳入研究。Meta分析显示：AIS患者基线MPV升高与IVT后远期预后不良呈正相关（OR=1.80,95%CI:1.27～2.53,P=0.0009），基线PDW(OR=1.16,95%CI:0.81～1.66,P=0.42)、基线PLR(OR=1.00,95%CI:0.99～1.01,P=0.91)与IVT后远期预后不良无明显相关性。IVT后24h内PLR升高（OR=1.01,95%CI:1.00～1.01,P=0.004）与远期预后不良呈正相关，PNR升高（OR=0.96,95%CI:0.94～0.97,P<0.00001）与远期预后不良呈负相关；IVT后24h内MPV(OR=0.82,95%CI:0.46～1.49,P=0.52)和PDW(OR=0.87,95%CI:0.64～1.16,P=0.34)均与远期预后不良无明显相关性。结论 基线MPV升高及IVT后24h内PLR升高、PNR降低可能是AIS患者IVT后远期预后不良的预测标志物。

目的 分析血小板输注无效（PTR）患者的HLA-I类抗体分布特征，探讨供者特异性抗体（DSA）回避策略对血小板输注疗效的影响。方法 选取2020年4月至2022年5月复旦大学附属儿科医院（安徽省儿童医院）、中国科学技术大学附属第一医院（安徽省立医院）等送检的血小板输注无效患者223例，采用固相凝集法对PTR患者进行血小板抗体筛查，并对确定为HLA-I类抗体阳性患者采用HLA单抗原特异性抗体检测技术进行HLA-I类抗体高分检测，通过DSA回避策略，选择抗体对应抗原阴性的供者血小板进行配合性输注，根据患者24 h血小板计数增加值（CCI）评价血小板输注效果。结果 在223例PTR患者抗体筛查中发现130例患者抗体筛查为阳性，并对确定为HLA-I类抗体的42例患者进行HLA-I类特异性抗体鉴定，HLA-I类特异性抗体阳性率为32.31%(42/130)，其中HLA-I类抗体强阳性者21例、中阳性者37例、弱阳性者41例，抗体强弱检出率分别为50%(21/42)、88.10%(37/42)和97.62%(41/42)。统计发现37例PTR患者HLA-I类特异性抗体（Raw Value>4 000）共检出97种，检出率最高的抗体Vorinostat作用分别是抗-B*57:01、抗-A*23:01、selleckchem Dibutyryl-cAMP抗-B*40:01、抗-B*27:08、抗-B*27:03、抗-B*58:01、抗-B*13:02、抗-A*24:02、抗-A*24:03、抗-B*07:02、抗-B*81:01。其中13例患者先后申请了21次配型实验，供者数合计为210人次，交叉配合结果不合为141人次，交叉配合结果相合为69人次，6例进行了输注后首次校准血小板计数增加值（CCI）计算，24 h CCI值分别为：4 850、32 650、17 336、21 318、7 265、16 335，均显示输注有效，有效率为100%(6/6)。结论 了解了部分PTR患者体内HLA-I类抗体的分布特征。对产生HLA-I类抗体的免疫性PTR患者，采取DSA回Organic bioelectronics避策略可提高HLA-I类抗体的免疫性PTR患者患者的输注疗效。

目的:氧化应激参与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发病机制,与AD发病期间神经毒性中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化有关。主要的抗氧化反应元件核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)在AD脑中的作用已被证实,但Nrf2调节AD中星形胶质细胞铁死亡的机制仍不明LY2835219浓度确。所以在本研究中,我们将AD患者和APP/PS1/tau三转基因AD模型(3×Tg)小鼠及小鼠星形胶质细胞作为研究对象,探讨沉默Nrf2在星形胶质细胞氧化损伤过程中对铁死亡关键蛋白的调控机制,旨在为深入理解阿尔茨海默疾病的发病机制提供依据。方法:以AD患者和3×Tg小鼠脑切片为研究对象,通过免疫荧光共定位染色,检测Nrf2与NADPH氧化酶4(NADPH Oxidase 4,NOX4)在星形胶质细胞中表达的改变。利用慢病毒感染小鼠星形胶质细胞实Entinostat现体外靶向沉默Nrf2的表达,通过免疫印迹实验检测沉默Nrf2后小鼠星形胶质细胞中血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运系统的轻链亚基(x CT)蛋白的表达变化,通过流式细胞术检测沉默Nrf2后小鼠星形胶质细胞中ROS的改变,通过免疫荧光染色检测沉默Nrf2后小鼠星形胶质细胞中线粒体结构、脂质过氧化程度、DNA损伤程度和酪氨酸硝化程度的改变。结果:AD患者和3×Tg小鼠大脑星形胶质细胞中Nrf2蛋白水平显著降低,氧化应激诱导的ROS标记物NADPH氧化酶4(NADPH Oxidase 4,NOX4)的水平也显著升高。慢病毒靶向沉默小鼠星形胶质细胞中Nrf2的表达后,能够降低HO-1和GPX4的水平,同时升高x CT的水平。沉默Nrf2还增加了小鼠星形胶质细胞ROS的生成和线粒体的碎片化,以及脂质过氧化、DNA氧化损伤及酪氨酸的硝化程度。结论:我们的研究表明,在AD患flamed corn straw者和3×Tg AD小鼠模型中,Nrf2水平在受损的星形胶质细胞中显著降低。在AD患者和3×Tg AD小鼠受损星形胶质细胞中,NOX4水平明显升高。我们发现抑制Nrf2的表达可促进星形胶质细胞氧化应激诱导的ROS产生,线粒体损伤和脂质过氧化。此外在小鼠星形胶质细胞中抑制Nrf2的表达能够抑制调控铁死亡的关键蛋白GPX4的表达。我们的研究结果支持Nrf2在星形胶质细胞的氧化应激中起着关键的作用,介于氧化应激在AD的发生发展中扮演着重要的角色,通过靶向星形胶质细胞中Nrf2的激活或许能为AD的治疗提供一个新的思路。