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为深入探究NF-κB信号通路对CyHV-2感染过程的影响,在CyHV-2感染的GiCF细implant-related infections胞中加入NF-κB激动剂,通过RT-qPCR和Western Blot分析在感染24、72、96 h后CyHV-2编码基因在转录和翻译水平的表达情况。结果显示,在加入NF-κB激动剂后的72、96 PD-0332991h,CyHV-2编码基因转录和翻译水平均明显高于对照组,提示NF-κB促进CyHV-2编码基因的Empagliflozin molecular weight转录及翻译。为进一步阐明NF-κB如何影响CyHV-2的转录和翻译,利用生物信息学软件预测CyHV-2部分编码基因的启动子序列中和NF-κB的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验分析NF-κB对启动子活性的影响。结果表明,NF-κB过表达提高了病毒基因启动子活性,提示NF-κB可以通过促进CyHV-2基因的启动子活性来增强病毒复制水平。研究结果有助深入探究CyHV-2基因的表达翻译机制,也为开发基于NF-κB信号通路靶点的新的抗病毒抑制剂提供理论支撑。

透明细胞肾细胞癌(ccRCC)是肾癌中最常见的组织学亚型。根治性肾切除术则是局限性肾透明细胞癌的主要治疗方式。然而据报道,每年仍有许多肾癌患者死于癌症的转移与复发。尽管目前已有多种靶向药物相继问世,但其治疗效果同样有限。因此我们针对ccRCC的研究仍需进行。肾透明细胞癌是一种免疫原性肿瘤。其肿瘤微环境中存在着大量的免疫细胞。其中由肿瘤抗原的呈递所募集的T细胞则会诱使抗肿瘤免疫反应的发生。然而免疫细胞表面的免疫检查点却可抑制抗肿瘤免疫并促进癌症进展。基于这一特点,免疫检查点抑制治疗应运而生,并成为ccRCC的主要治疗方式之一。然而,ccRCC也是一种高度异质性的肿瘤。其复杂的免疫微环境为免疫逃逸的发生提供了许多机会。这也导致了 ccRCC对免疫治疗的反应各异。因此,研究ccRCC免疫微环境的特征以及发现更多能够影响或反映肿瘤免疫的分子变得更加重要。细胞死亡是机体稳态调节的一种重要的生物学过程。生物体内每天都会有大量的细胞发生死亡。而这种生物学过程同样也广泛发生在炎症和肿瘤当中,并在其中发挥着不容忽视的作用。不同于细胞坏死,程序性细胞死亡是一种可受调控的主动的细胞死亡形式。随着研究的进展,越来越多的程序性细胞死亡类型逐渐被人们发现,其中就包括细胞凋亡、焦亡、坏死性凋亡、铁死亡和泛凋亡等。这些细胞死亡类型均有着其各自的分子机制及形态学特点。其中的泛凋亡就是一种新定义的强免疫原性的程序性细胞死亡类型。泛凋亡的发生涉及到细胞凋亡、焦亡和坏死性凋亡这三种细胞死亡形式的相互串扰与共同激活。目前针对泛凋亡及其相关生物分子的研究主要集中在感染性疾病和自身免疫性疾病上,而其在肿瘤中的作用,尤其是在被定义为免疫原性肿瘤的肾透明细胞癌中的作用仍不清楚。本研究旨在探寻泛凋亡相关的长链非编码RNA(lncRNA)在ccRCC中的临床和生物学价值。我们blood biochemical首先从与泛凋亡密切关联的三种程序性细胞死亡入手,分别探究这三种细胞死亡相关lncRNA在ccRCC中的作用。之后我们进一步挖掘了泛凋亡相关lncRNA在ccRCC中的临床价值。最后我们挑选了一个最具代表性的泛凋亡相关lncRNA并探讨了其在ccRCC中的生物学特性。总体上我们的研究可以分为以下三个部分:第一部分细胞凋亡/焦亡/坏死性凋亡相关的lncRNA与ccRCC进展、预后及免疫浸润的相关性的探索。目的:分别探讨凋亡相关lncRNA、焦亡相关lncRNA以及坏死性凋亡相关lncRNA与肾透明细胞癌进展、预后及免疫浸润之间的相关性。方法:1.我们从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中获得611例ccRCC患者样本的基因表达数据与临床数据。2.从先前的研究中分别获得细胞凋亡、焦亡以及坏死性凋亡相关基因并探索这些基因在ccRCC样本中的表达情况。3.通过相关性分析分别获得与这三种细胞死亡类型显著相关的lncRNA并通过单因素COX回归分析筛选出其中具有显著预后价值的lncRNA。4.分别基于这三种细胞死亡相关lncRNA对ccRCC样本进行一致性聚类,并探寻不同聚类间ccRCC的临床病理因素以及预后的差异。5.进一步探讨不同聚类之间肿瘤免疫微环境评分、免疫检查点基因表达以及免疫细胞浸润水平的差异。结果:1.通过分析我们共获得了具有显著预后价值的细胞凋亡相关lncRNA、焦亡相关lncRNA以及坏死性凋亡相关lncRNA分别有54个、147个和39个。2.聚类分析的结果显示三种聚类方式所获得的聚类之间,ccRCC患者的生存率和临床分期均存在显著差异。3.不同聚类之间,六种常见免疫检查点基因的表达均存在显著差异。4.不同聚类之间,免疫细胞的浸润水平及肿瘤微环境的免疫评分均存在显著差异。小结:细胞凋亡/焦亡/坏死性凋亡相关lncRNA与ccRCC的进展和预后有关;细胞凋亡/焦亡/坏死性凋亡相关lncRNA与ccRCC的免疫细胞浸润和免疫微环境有关。第二部分免疫相关泛凋亡(细胞凋亡、焦亡及坏死性凋亡)lncRNA在ccRCC中作用的综合分析目的:综合分析免疫相关泛凋亡lncRNA在ccRCC中的作用并构建一个新的免疫相关泛凋亡lncRNA风险模型。方法:1.通过相关性分析获得与凋亡基因、焦亡基因和坏死性凋亡基因均显著相关的基因(泛凋亡相关基因)。2.我们将表达模式相似的泛凋亡相关基因聚类为不同的基因模块。随后我们探寻这些基因模块与各种免疫细胞浸润之间的相关性并选取其中一个基因模块用于后续分析。3.从选取的模块基因中提取lncRNA(免疫相关泛凋亡lncRNA),并通过单因素COX回归分析进一步筛选其中最具预后价值的lncRNA。4.根据获得的lncRNA进行一致性聚类并分析不同聚类间患者预后、临床病理参数、功能富集和肿瘤免疫的差异。5.使用Lasso回归分析构建一个基于免疫相关泛凋亡lncRNA的风险模型。6.分析比较不同风险ccRCC样本间功能富集和免疫浸润的差异。7.分析比较不同风险ccRCC样本间免疫疗效及药物敏感性的差异。8.收集www.selleck.cn/products/gdc-0068临床中行手术治疗的ccRCC患者60例,利用qRT-PCR检测模型相关lncRNA的表达水平并根据模型公式计算每个患者的风险评分,分析不同风险评分患者的临床特征及预后差异。结果:1.免疫共表达网络分析的结果显示泛凋亡相关的基因模块与各种免疫细胞浸润之间存在着或强或弱的关联。2.筛选出的预后免疫相关的泛凋亡lncRNA均在ccRCC肿瘤组织中高表达,并与较差的预后有关。3.一致性聚类分析结果显示,不同聚类间ccRCC的病理分级、临床分期以及总生存率均存在显著差异。聚类间的差异主要与细胞因子活性、T细胞受体信号通路、抗原处理和呈递等免疫相关功能和信号通路有关。相比于聚类1,聚类2中样本的免疫细胞浸润水平更高,肿瘤纯度更低,免疫检查点基因和抗原呈递相关基因的表达也更高。4.我们基于5个免疫相关泛凋亡lncRNA构建一个全新的风险模型。该模型能够很好的将ccRCC患者分为临床预后显著不同的两组并具有较高的预测准确性。单因素和多因素COX回归分析结果表明通过该模型所计算的风险评分是ccRCC的独立预后因素。结合另外两个独立预后因素,我们构建了一个可预测患者生存率并具有较好预测效能的列线图。此外,主成分分析及生存分析表明我们的风险模型具有良好的样本划分能力以及适用性。在临床肾癌患者队列中对该模型的验证则证明了该风险模型的临床应用价值。5.肾癌患者的风险评分与肿瘤微环境的免疫细胞浸润,免疫相关功能的富集以及免疫相关通路的广泛激活显著相关。6.高风险的ccRCC样本的免疫检查点基因的表达以及TCIA评分也更高。此外。我们还获得了几种适合不同风险分层患者的治疗药物。小结:免疫相关泛凋亡lncRNA与ccRCC的进展、预后、微环境免疫浸润、抗原呈递以及免疫治疗反应有关;我们基于免疫相关泛凋亡lncRNA构建了一个可以用于预测ccRCC患者预后和评估免疫治疗疗效的风险模型。第三部分免疫相关泛凋亡lncRNA LINC00944的生物学价值的探索目的:探索免疫相关泛凋亡lncRNA LINC00944在ccRCC中的生物学价值。方法:1.我们首先分析了 LINC00944在611个TCGA-ccRCC肿瘤样本和正常样本中的表达差异。之后我们通过qRT-PCR检测了 LINC00944在ccRCC临床样本及细胞系中的表达。2.我们在TCGA患者队列和收集到的60例临床样本中探索了 LINC00944表达与各种临床病理特征的相关性。3.我们在TCGA队列及临床样本中探索了 LINC00944的预后及临床诊断价值。4.我们通过划痕实验和Transwell实验检测LINC00944过表达和敲低后肾癌细胞系迁移和侵袭能力的变化。5.通过富集分析获得LINC00944相关信号通路。通过western blot实验检测LINC00944过表达和敲低后JAK-STAT通路蛋白的表达变化。6.利用JAK通路抑制剂AG490抑制JAK-STAT通路活性。利用western blot检测AG490干扰LINC00944调控JAK通路的情况。设计功能回复实验,验证LINC00944是否可通过JAK-STAT通路影响ccRCC的迁移和侵袭。7.进行基因集富集分析和免疫相关性分析。分析LINC00944表达与免疫细胞浸润、免疫评分、免疫检查点基因表达、抗原呈递基因表达以及TCIA评分的相关性。8.在单细胞水平探索LINC00944的表达特点,通过免疫组化验证LINC00944与T细胞浸润的相关性。结果:1.LINC00944在ccRCC肿瘤组织和细胞中均显著高表达。2.在TCGA患者队列中,LINC00944的高表达与患者的年龄更大,临床分期更晚以及病理分级更高显著相关。在60例临床病例中,LINC00944的高表达与患者的T分期和M分期更晚显著相关。3.在TCGA患者队列中,LINC00944高表达的患者的总生存率和无进展生存率更差,且LINC00944具有很高的临床诊断价值。在60例临床病例中,LINC00944高表达的患者的总生存率更低,然而差异却并无显著性。LINC00944同样表现出很高的诊断价值。4.过表达LINC00944可促进肾癌细胞的迁移和侵袭,而敲低LINC00944则可抑制肾癌细胞的迁移和侵袭。5.通路富集分析显示LINC00944与JAK-STAT通路激活有关。western blot结果显示敲低LINC00944后p-JAK和p-STAT3蛋白表达降低,而过表达LINC00944后p-JAK和p-STAT3蛋白表达增加。6.过表达LINC00944增加了 p-STAT3蛋白表达,而加入AG490后则逆转了 LINC00944对p-STAT3蛋白表达的调控。过表达LINC00944增加了肾癌细胞的迁移和侵袭能力,而加入AG490后则部分挽回了 LINC00944对肾癌细胞迁移和侵袭的影响。7.免疫相关性分析的结果表明LINC00944的表达与T细胞浸润有关。LINC00944高表达的肾癌样本的“肿瘤内异质性”和“CTA评分”等免疫评分以及TCIA评分更高。LINC00944表达与抗原呈递基因和免疫检查点基因的表达显著正相关。8.单细胞分析表明LINC00944在上皮细胞和T细胞中显著高表达。LINC00944在肿瘤上皮细胞中的表达显著高于正常上皮细胞。LINC00944高表达的上皮细胞的凋亡/焦亡/坏死性凋亡基因集富集评分也普遍更高。细胞通讯分析的结果显示T细胞主要接受来自上皮细胞和内皮细胞的信号。上皮细胞与T细胞间相互作用的主要信号通路为MIF信号通路。免疫组化结果显示LINC00944高表达的ccRCC临床标本中的T细胞阳性率更高。小结:LINC00944在ccRCC组织和细胞中显著高表达;LINC00944与ccRCC的进展和预后有关,并具有很高的诊断价值;LINC00944可通过JAK-STAT通路影响肾癌细胞的迁移和侵袭;LINC00944的表达与ccRCC患者对免疫治疗的反应有关;LINC00944表达与ccRCC微环境中T细胞的浸润显著相关。结论:1.细胞凋亡/焦亡/坏死性凋亡相关lncRNA与ccRCC的进展、预后和微环境免疫浸润有关。2.免疫相关泛凋亡(凋亡、焦亡、坏死性凋亡)lncRNA与ccRCC的进展、预后、免疫细胞浸润和免疫治疗反应显著相关。3.基于免疫相关泛凋亡lncRNA构建了一个新的风险模型。4.LINC00944在ccRCC组织和细胞中显著高表达并与ccRCC的进展有关。LINC00944具有重要的预后和临床诊断Lorlatinib生产商价值。5.高表达的LINC00944可促进ccRCC细胞的迁移和侵袭;敲低LINC00944则可抑制ccRCC细胞的迁移和侵袭。6.LINC00944可通过调节JAK-STAT通路活性影响ccRCC细胞的侵袭和迁移。7.LINC00944与ccRCC患者对免疫治疗的反应有关。LINC00944的高表达与ccRCC微环境中T细胞的高度浸润显著相关。

研究目的为了评估和优化食管低级别上皮内瘤变及非异型增生人群的内镜监测管理策略,本研究依托一项在我国农村地区构建的食管癌高危人群内镜筛查队列,综合探索食管病变的人群分布特征及长期食管癌发病和死亡风险、评估食管低级别上皮内瘤变人群的疾病转归特征及内镜监测效果,并在此基础上探讨经济有效的内镜监测管理策略。材料与方法1.食管癌高危人群的食管病变分布特征研究(分布研究):以2007～2016年江苏省、安徽省、山东省和河南省13个筛查现场参加内镜筛查的40～69岁食管癌高危人群为研究对象,计算食管非异型增生、轻度不典型增生、中度不典型增生、重度不典型增生/原位癌、食管癌的构成比。采用广义线性模型及线性回归模型,评估影响食管重度不典型增生及以上病变(食管重度不典型增生/原位癌及食管癌,SDA)检出率的因素。2.食管低级别上皮内瘤变及非异型增生的长期进展风险研究(进展研究):以2007～2012年基线病理确诊的食管非异型增生、轻度不典型增生和中度不典型增生为研究对象,前瞻性随访至2021年12月31日。采用累积发病率函数估算食管癌累积发病率和死亡率。采用部分分布比例风险回归模型计算与食管非异型增生相比,轻度不典型增生和中度不典型增生的食管癌发病和死亡风险比(HR)及95%置信区间(CI)。以2010年我国农村人群食管癌发病率和死亡率为基准,评估食管非异型增生在0～5年和5.1～10年的食管癌标准化发病比(SIR)和标准化死亡比(SMR)。3.食管低级别上皮内瘤变疾病转归特征研究(转归研究):以2010～2016年基线病理确诊的食管低级别上皮内瘤变(LGIN)且在随访期间(2021年12月31日)至少接受一次内镜复查者为研究对象,评估食管LGIN的疾病转归(进展为食管SDA、保持食管LGIN状态和逆转为食管非异型增生)特征,采用Kaplan-Meier方法计算累积发病率。4.食管低级别上皮内瘤变内镜监测效果评价研究(效果评价研究):以2007～2016年基线病理确诊的食管LGIN为研究对象,根据随访期间(截至2021年12月31日)接受内镜复查的实际情况,将人群分为接受内镜复查组和拒绝内镜复查组,分析比较两组人群食管鳞癌发病率、肿瘤分期和治疗率及治疗方式的差异。采用Cox 比例回归模型计算与拒绝内镜复查组相比,接受内镜复查组的食管鳞癌发病HR及95%CI。5.食管低级别上皮内瘤变及非异型增生内镜监测的卫生经济学评价研究(经济学研究):从医疗卫生体系角度开展基于Markov模型的成本效用分析,以不监测为对照方案,基于食管非异型增生(不监测/10年)、轻度不典型增生selleck抑制剂(1～5年)和中度不典型增生(1～5年)不同监测间隔形成30种内镜监测方案,计算各种监测方案的增量成本效果比(ICER)。核心评价指标为每挽救一个质量调整生命年(QALY)的增加成本,支付意愿(WTP)的阈值标准为2021年我国人均GDP(12,551美元),采用单因素和概率敏感性分析评估模型结果的稳定性。研究结果1.分布研究:2007～2016年13个研究现场120,759名内镜筛查人群中,男性和女性分别有51,495人(42.64%)和69,264人(57.36%),平均年龄为54.67岁。内镜筛查人群中,食管非异型增生(n=115,785)、轻度不典型增生(n=3669)、中度不典型增生(n=640)、重度不典型增生/原位癌(n=423)和食管癌(n=242)构成比依次降低,分别为95.88%、3.04%、0.53%、0.35%和0.20%。男性、高龄、低社会经济水平、吸烟、有消化道系统疾病史和有食管癌家族史人群的食管SDA检出率更高,筛查地区的人群食管癌发病水平与食管SDA检出水平成正相关。2.进展研究:本部分共计纳入40,977例食管非异型增生、1562例轻度不典型增生和288例中度不典型增生,共计随访453555.75人年,中位随访时间为10.62年(IQR:9.36～11.62)。随访期间,共计发现268例食管癌新发病例和128例食管癌死亡病例,食管癌发病率和死亡率分别为59.09/10万人年和28.18/10万人年。食管非异型增生、轻度不典型增生和中度不典型增生的食管癌发病率(46.54/10万人年、234.69/10万人年、919.50/10万人年)和死亡率(24.17/10万人年、89.51/10万人年、261.52/10万人年)依次升高。与食管非异型增生人群相比,轻度不典型增生和中度不典型增生具有更高的食管癌发病风险和食管癌死亡风险,发病HR分别是 3.52(95%CI:2.47～5.00)和 13.18(95%CI:8.60～20.17),死亡 HR 分别是2.43(95%CI:1.40～4.22)和 6.46(95%CI:3.09～13.51)。在随访 0～5 年和5.1～10年内,食管非异型增生人群的食管癌发病和死亡风险均低于我国农村人群,SIR 分别为 0.44(95%CI:0.32～0.60)和 0.74(95%CI:0.58～0.93),SMR 分别为 0.24(95%CI:0.15～0.36)和 0.68(95%CI:0.53～0.86)。3.转归研究:本部分纳入1183例食管LGIN(包括976例轻度不典型增生和207例中度不典型增生),共计随访8427.08人年,中位随访时间为6.95年(IQR:5.79～8.30)。随访期间,88例LGIN进展为食管SDA,总体进展率为7.44%,发病率为10.44/1000人年,病变进展的中位时间是2.39年(IQR:1.58～4.32)。随访期间,214例(18.09%)保持LGIN状态,881例LGIN转归为食管非异型增生状态,总体转归率为74.47%。与轻度不典型增生相比,中度不典型增生的病变进展风险更高且病变进展时间更短,轻度不典型增生和中度不典型增生的食管SDA 5年累积发病率分别为4.03-MA使用方法1%和15.47%(P<0.0001),病变进展的中位时间分别是3.03年(IQR:1.88～3.67)和 1.86年(IQR:1.27～2.87)。4.效果评价研究:本部分纳入3258例食管LGIN,其中接受内镜复查组1378例(42.30%),拒绝内镜复查组1880例(57.70%)。在随访期间(中位随访时间:7.96年)共计发现170例食管鳞癌新发病例,发病率为6.28/1000人年,其中拒绝内镜复查组食管鳞癌发病率(7.07/1000人年)高于接受内镜复查组(5.14/1000人年)。与拒绝内镜复查组相比,接受内镜复查组的食管鳞癌早诊率(80.77%vs.40.12%)更高,内镜粘膜下剥离术/内镜下粘膜切除术治疗率更高(44.44%vs.14.29%)。与拒绝内镜复查组相比,接受内镜复查组LGIN的食管鳞癌发病风险降低31%(HR=0.69,95%CI:0.50～0.95),且在遵照项目推荐方案规范性参加内镜复查的人群中效果更佳(HR=0.62,95%CI:0.42～0.92)。5.经济学研究:与食管LGIN及非异型增生不监测相比,40岁年龄组人群30种内镜监测方案的ICER范围是1607～109,875美元/QALY,其中26种方案的ICER低于我国人均GDP,是经济有效的监测方案。在50和60岁人群中30种内镜监测方案的ICER均低于我国人均GDP,且仅对LGIN进行监测的15种方案既可以增加QALYs,还可以减少成本,相应的ICER<0,是节约成本的监测方案。当WTP阈值设定为2021年全国1倍人均GDP时,40～49岁食管非异型增生、轻度不典型增生和中度不典型增生的最佳内镜监测间隔分别是10年、5年和3年,50～59岁食管非异型增生、轻度不典型增生和中度不典型增生的最佳内镜监测间隔分别是10年、5年和1年,60～69岁食管非异型增生、轻度不典型增生和中度不典型增生的最佳内镜监测间隔分别是不监测、4年和1年,且该方案敏感性分析结果稳定。研究结论我国农村食管癌高危人群中,食管SDA不足1%,绝大多数为食管非异型增生(95.9%)和LGIN(3.6%)。与食管非异型增生相比,LGIN具有更高的食管癌发病和死亡风险;食管LGIN进展为SDA的年平均进展率约为1.04%,且规范性参加内镜监测可以有效降低食管癌发病风险,提高早诊早治率。食管非异型增生人群10年内食管癌发病和死亡conductive biomaterials风险低于我国农村人群的平均水平。在我国农村人群中,针对筛查发现的食管LGIN和非异型增生人群进行内镜监测的策略经济有效。推荐40～59岁的食管LGIN和非异型增生人群进行内镜监测,60～69岁仅推荐LGIN进行内镜监测;各年龄组(40～49岁,50～59岁和60～69岁)非异型增生的内镜监测间隔为10年、10年、不监测,轻度不典型增生的内镜监测间隔为5年、5年和4年,中度不典型增生的内镜监测间隔为3年、1年和1年。

背景:KRAS突变的晚期肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者仍然是一个缺乏足够有效治疗方法的群体。核因子κB受体激活物的配体(receptor activator of nuclear factor карра-B ligand,RANKL)已经被证明可以驱动 LUAD 的恶性表型。然而,它在KRAS突变的LUAD中所发挥的作用尚未完全阐明。目的:探索RANKL分子在KRAS突变的LUAD中所发挥的作用,进而尝试为KRAS突变LUAD这一群体提供新的治疗思路。方法:联合使用TCGA数据库、GTEx数据库和来自中国科学院科学院肿瘤医院的组织标本和临床数据探索、评估RANKL分子的表达水平及与预后的关联。使用CCK-8测定、Transwell试验和划痕试验评估细胞的增殖、侵袭和迁移能力。通过Lasso回归法建立预测模型。结果:相对于晚期KRAS野生型LUAD,RANKL在晚期KRAS突变型LUAD中的表达显著上调,并且RANKL的高表达与不良预后紧密相关。本院的组织标本同样证实了 在晚期KRAS突变型LUAD中的富集表达。此外,本院临床队列数据(n=57)提示,晚期KRAS突变型LUAD患者中接受RANKL抑制剂地舒单抗治疗者的中位无进展生存期比未接受者的更长(300 vs 133天,p=0.210),然而在KRAS野生型患者中并非如此(208 vs 250天,p=0.334),尽管以上差异均未观察到统计学意义。后续的细胞功能试验提示,当RANKL被敲降时,KRAS突变型LUAD细胞系的增殖、侵袭和迁移能力均较KRAS野生型LUAD细胞系下降明显。进一步基因富集分析表明,RANKL在KRAS突变型和KRAS野生型LUAD中发挥着截然不同的作用,其中与细胞粘附相关的分子在KRAS突变型LUAD中明显富集。最后,我们根据四个相关的关键基因(BCAM、ICAM5、ITGA3和LAMA3)建立了KRAS突变LUAD的总生存期预测模型,且该模型在预测一致性方面表现良好。结论:RANKL是晚期KRAS突变型LUAD患者的不良预后生物标志物。应用RANKL抑制剂可能是这部分患者的一个可行治疗策略。背景:晚期骨转移的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的预后不佳。既往体内研究显示,免疫检查点抑制剂(immune checkpoints inhibitors,ICIs)与RANKL抑制剂地舒单抗之间存在协同改善免疫微环境的机制。此外,回顾性研究提示,两者联合使用时似乎能够为晚期肿瘤患者带来更大的生存获益。然而,这种联合治疗方案在晚期骨转移的NSCLC中的临床疗效和安全性尚未得到充分的评估。selleckchem目的:通过合理设置参照队列,以较大样本量回顾性地评估ICIs和地舒单抗联合治疗骨转移的NSCLC的临床疗效和安全性。方法:在2020年12月31日至2021年12月31日期间,我们对在我院就诊的晚期骨转移的NSCLC患者的病历资料进行连续审查,并纳入规律接受骨靶向治疗(bone targeted therapy,BTT)的患者作为研究队列。整个研究队列被分为一个实验组(地舒单抗+ICI[DI])和三个对照组(地舒单抗+非ICI[DnJ],磷酸盐+ICI[PI],以及磷酸盐+非ICI[PnI])。我们比较了各组的治疗客观反应率(objective response rates,ORRs)、mPFS、骨相关不良事件(skeleton-related events,SREs)和治疗不良事件(adverse events,AEs)。结果:总的来说,共171/410(41.7%)名骨转移的晚期NSCLC患者规律接受BTT并被纳入研究队列。根据预设分组,研究队列被进一步划分为DI组(n=40)、PI组(n=74)、DnI组(n=15)和PnI组(n=42)。疗效分析提示,虽然四组间的疗效差异无统计学意义,但DI组显示出较好的获益趋势(ORRs:47.5%、43.2%、33.3%和 40.5%,p=0.799;mPFS:378、190、170 和 172 天,p=0.115;SREs:5%、10.8%、13.3%和 11.9%,p=0.733)。进一步对 NON-DRIVER亚队列的分析显示,DI组较对照组具有统计学意义上的生存获益(p=0.045)。此外,多因素回归分析显示,DI联合治疗在整个研究队列中是PFS的独立预后因素。安全性分析提示,DI组immediate hypersensitivity的AEs与PI、DnI和PnI组的AEs无明显差异(AEs:27.5%、39.2%、26.7%和28.6%,p=0.742)。亚组分析显示,在DI组内,不同的突变亚组之间没有观察到获益差异(p=0.814)。然而,单部位骨转移和程序性死亡配体-1(programmed cell death ligand-1,PD-L1)高表达的患者似乎受益更多,尽管没有显示出统计学差异(p值分别为0.319和0.100)。结论:在晚期骨转移的NSCLC患者中,地舒单抗与ICIs联合使用时显示出协同抗肿瘤的功效,而没有增加毒性。背景:晚期KRAS突变的NSCLC患者一线治疗仍遵照驱动基因阴性患者的诊治原则进行,并以免疫治疗为主。目前,KRAS突变NSCLC患者仍旧缺乏足够、有效的治疗手段,对临床医生的治疗形成巨大挑战。研究显示,RANKL/RANK通路可抑制免疫微环境,而RANKL抑制剂和PD-1抑制剂的联合可通过互补增强机制扩大NSCLC免疫受益人群,特别是对于KRAS突变这一群体。然而,目前并没有针对KRAS突变NSCLC患者行RANKL抑制剂联合PD-1抑制剂治疗的前瞻性研究开展。目的:该研究旨在评价地舒单抗联合PD-1抑制剂用于晚期KRAS突变的NSCLC患者一线免疫治疗后维持治疗的疗效和安全性。方法:前瞻性纳入一线免疫治疗后拟行维持治疗的KRAS突变的晚期NSCLC患者,所纳入患者均接受地舒单抗(120 mg,q4w)联合PD-1单抗(q3w)的维持治疗方案。本研究的主要研究终点是PFS(PFS1定义为一线治疗起始至进展,PFS2定义为维持治疗起始至进展)。本研究的次要研究终点包括ORR,OS和安全性。疗效评价每3个周期进行一次,并根据RECIST v1.1标准判读。不良反应根据CTCAE v5.0标准判读。同时回顾性纳入历史对照队列进行对照比较。结果:在2021年7月1日至2023年3月30日期间,本项单臂Ⅱ期临床试验共于我院前瞻性纳入患者20例。前瞻性队列中位随访时间为479.0天(95%CI,263.4-694.6天)。共13例(65%)受试者mPFS1超过预设值达到9.2个月,总体mPFS1 达到 329.0 天(95%CI,277.3-380.7 天),mPFS2 达到 196.0 天(95%CI,145.0-247.0 天)。mOS 未达到,1 年 OS 率为 100%,2 年 OS 率为 92.3%。在VP-16临床试验 2019年1月1日至2022年12月31日期间,历史队列共纳入患者50例,包括3种维持治疗方式:单独PD-1抑制剂维持(n=18),PD-1抑制剂+化疗维持(n=22),和PD-1抑制剂+化疗+Bevacizumab维持(n=10)。整体中位随访时间为361.0天(95%CI,291.8-430.2天)。生存分析提示,PD-1抑制剂+地舒单抗组的mPFS1和mPFS2均不劣于PD-1抑制剂+化疗组和PD-1抑制剂+化疗+Bevacizumab组(p=0.419;p=0.397)。分层分析提示对于PD-L1 TPS<1%以及KRASG12D的患者,PD-1抑制剂+地舒单抗的维持治疗使PFS1显著延长(365.0 vs 189.0 vs 225.0 vs 260.0 天,p=0.026;189.0 vs 229.0 vs NR vs 319.0 天,p=0.017)。安全性分析提示单药PD-1抑制剂维持组的AEs发生率最低,为22.2%。其次为PD-1抑制剂+地舒单抗组,为55%,并以牙齿相关的AEs为主。PD-1抑制剂联合化疗维持治疗组以及三药维持治疗组的AEs均较高,分别为81.8%及80%,以肝肾功能损伤、免疫性甲状腺功能异常为主。结论:RANKL抑制剂地舒单抗联合PD-1抑制剂在用于晚期KRAS突变NSCLC患者一线免疫治疗后维持治疗时表现出一定的抗肿瘤活性,并具有较好的安全性。这为治疗晚期KRAS突变的NSCLC患者提供了新思路。

硝基氮氧自由基(NN)作为一种稳定的自由基,其单电子离域在O-N-C-N-O五个原子上。在双自由基分子中受耦合单元桥的影响,使其可以在固态下表现出有趣的磁性质。螺二芴类化合物由于其特殊的螺共轭效应常被用于设计各种有机光电材料和磁性材料。特定的螺旋共轭结构使得自旋-自旋相互作用在整个分子骨架内的耦合传导成为可能,并且这种特殊的螺共轭效应和两个独立正交π体系将会共同调控双自由基分子内耦合磁性。本论文主要围绕螺二芴类化合物介导氮氧双自由基展开讨论,研究工作主要包括以下二个部分:一、为了研究这种螺旋共轭磁性行为的机制,我们设计并合成了三个双自由基22’SBF-NN、44’SBFNN和27SBF-NN。它们是螺二芴为中心桥联硝基氮氧双自由基的结构。通过超导量子干涉仪(SQUID)和电子顺磁共振(EPR)零场分裂数据分析,22’SBF-NN和27SBF-NN双自由基表现出分子内、明显的反铁磁(AF)耦合,分别给出耦合常数为2J_((22’SBF NN))/k _B=-5.86 K和2J_((27SBFNN))/k _B=-24.6 K。其中22’SBF-NN的分子内反铁磁作用与基于自旋密度交替规则所预测的相反。另外说明这种螺旋共轭比传统的平面共轭non-medical products较弱,通常会导致螺共轭结构双自由基分子内较弱的自旋-自旋耦合。44’SBF-NN二自由基的EPR光谱显示出一个变形的九线曲线,表明分子内有交换耦合作用。结合DFT和VT-EPR表征给出了一个非常弱的耦合常数,为2J_(calc)/k _B=0.06 K,以铁磁的(FM)耦合相互作LY-188011配制用,这与自旋极化预测一致。这表明在44’位自由基中确实存在极弱的铁磁相互作用。我们进行了44’SBF-NN的几何优化结构分析,在NN部分和相邻苯环平面有近45°的二面角,如此大的扭转角阻碍了自旋密度离域Q-VD-Oph IC50,导致更加倾向于空间上弱的铁磁耦合相互作用。结合对分子轨道计算结果的分析,进一步解释了22’SBF-NN的异常分子内反铁磁性耦合机理。二、尽管中性的14主族自由基正在逐渐确立,但在这一领域仍有许多重要挑战尚未实现。[R?-?R](E=Si,Ge和Sn)物种在稳定主族自由基方面取得了显着进展,但由于合成挑战,到目前为止还没有分离出中性硅和锗自由基。在本文中,我们报告了基于螺偶联9,9′-螺[9H-9-硅芴]和螺锗芴硝基氮氧二自由基1和2。由于不同的中心螺原子所形成的结构在整体的性能有着很大的差距,其中以碳主族为例随着原子序数增加,螺原子形成的螺共轭效应在减弱。因此在讨论分别以碳、硅和锗为中心螺原子的螺芴二自由基耦合时,预期也会获得同样的递减趋势。为了探究不同螺原子中心的螺共轭化合物介导硝基氮氧双自由基磁性耦合的差别,分别设计了以碳、硅和锗为中心螺效应的双自由基,利用EPR和DFT模拟计算讨论三种自由基耦合趋势和作用方式。图[43]表[12]参[99]

研究背景及目的:念珠菌是一类常见的条件致病真菌,可以导致皮肤、黏膜、深部器官及血液等多处感染,这些疾病被统称为“念珠菌病”。目前,白念珠菌仍是临床检出率最高的念珠菌病病原体,正持续威胁着人们的健康。白念珠菌通常以酵母态定植于黏膜和皮肤表面,在一定条件下可以通过由酵母到菌丝的形态转换来提高自身毒力,加强对宿主的侵袭。与此同时,宿主免疫随之启动,用以清除感染。中性粒细胞是机体固有免疫的重要成员之一,能够通过吞噬、脱颗粒、产生活性氧、形成中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)等多种方式实现AZD9291半抑制浓度对白念珠菌的杀伤。然而,既往研究发现了一种奇怪的现象:在阴道白念珠菌感染中,高中性粒细胞水平仅仅对应了更显著的局部炎症,而未能降低真菌负荷。对此,研究人员建立了白念珠菌阴道黏膜感染小鼠模型并进行了一系列实验,最终发现局部环境中一定水平的硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)能够抑制中性粒细胞对菌体的识别及杀伤。截至目前,上述实验结果尚未在人中性粒细胞与白念珠菌的相互作用中得到检验。HS是一种线性多糖,通常以硫酸乙ABT-263酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG)的形式广泛分布于细胞表面和细胞外基质(extracellular matrix,ECM),其中也包括了阴道局部环境。鉴于菌丝是白念珠菌致病的关键形态,要想控制感染必先保证对菌丝的有效杀伤,故而我们将关注点放在了白念珠菌菌丝、人中性粒细胞与HS三者之间。近年来多项研究证实,与能够被中性粒细胞吞噬杀灭的酵母不同,菌丝由于体积过大无法被吞噬,NETs介导的胞外杀伤是中性粒细胞将其清除的主要方式。因此,HS对中性粒细胞杀伤白念珠菌菌丝的影响或与NETs有关。为明确人体局部环境中genetic test中性粒细胞无法有效控制白念珠菌感染的原因,我们设计体外实验对HS在中性粒细胞杀伤白念珠菌菌丝中的影响及潜在机制进行探究。本课题拟提取健康人外周血中性粒细胞,检验该细胞对白念珠菌菌丝的体外杀伤活性,并评估HS干预对此的影响;同时体外诱导中性粒细胞释放NETs,检测NETs对白念珠菌菌丝的胞外杀伤,分别分析HS干预对NETs形成以及NETs胞外杀伤菌丝的影响,从而形成对其内在机制的初步探索。实验研究主要包括以下两个部分:第一部分 硫酸乙酰肝素对中性粒细胞体外杀伤白念珠菌菌丝的影响方法:1.抽取健康人外周血,以密度梯度离心法从中提取中性粒细胞。获得细胞悬液后,行瑞氏-吉姆萨染色以鉴别细胞类型,行台盼蓝染色进行活性分析,行流式细胞术检测进行纯度分析。2.将白念珠菌酵母诱导为菌丝态,以不同的比例关系与中性粒细胞进行共孵育,借助平板菌落计数法评估中性粒细胞对白念珠菌菌丝的杀伤活性,并选取适宜的MOI。3.在适宜MOI条件下的共孵育环境中,施加硫酸乙酰肝素这一干预,检验其对人外周血中性粒细胞体外杀伤白念珠菌菌丝的影响。结果:1.成功提取人外周血中性粒细胞,细胞活性良好,流式检测显示其纯度达99%以上。2.人外周血中性粒细胞在体外具有对白念珠菌菌丝的杀伤活性;当MOI=0.1时,其杀伤作用较为显著,故而该数值可作为适宜MOI在后续实验中选用。3.硫酸乙酰肝素对人外周血中性粒细胞体外杀伤白念珠菌菌丝具有抑制作用。第二部分 硫酸乙酰肝素通过抑制NETs形成从而减弱中性粒细胞对白念珠菌菌丝的体外杀伤方法:1.使用SYTOX Green染料对中性粒细胞与白念珠菌菌丝共孵育样本进行荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察其中的NETs结构,并通过扫描电子显微镜技术加以验证,明确以上NETs检测方法的可行性。2.分别以佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)与白念珠菌菌丝为刺激因素诱导中性粒细胞释放NETs,设置不加刺激因素的对照组,同时在各组内设置加HS与不加HS两个亚组,分别进行组内比较和组间比较,分析HS对NETs释放过程产生的影响。3.以PMA为诱导剂刺激中性粒细胞释放NETs,加入适量的白念珠菌菌丝,借助平板菌落计数法比较加HS与不加HS两组间的菌量差异,分析HS对已释放至胞外的NETs发挥菌丝杀伤作用的影响。结果:1.白念珠菌菌丝可在体外诱导人外周血中性粒细胞释放NETs;单一使用SYTOX Green染料进行荧光染色即可实现对NETs结构的定位。2.相同条件下作用3h后,白念珠菌菌丝与PMA的NETs诱导能力基本相当;HS可抑制菌丝诱导下的NETs形成,但对PMA的NETs诱导能力无影响。3.HS对已释放至胞外的NETs发挥菌丝杀伤作用无影响。结论:硫酸乙酰肝素通过抑制白念珠菌菌丝诱导下的NETs形成,从而削弱了人外周血中性粒细胞对菌丝的体外杀伤活性。

目的:分析铁死亡过程中几个关键指标与2型糖尿病肾脏疾病的关联,并探讨其对糖尿病肾脏疾病的预测价值。方法:从2021年4月至2021年12月,纳入就诊于吉林大学第二医院内分泌科的2型糖尿病患者118例,根据尿白蛋白肌酐比值(Urinary Albumin to Creatinine Ratio,UACR)将纳入患者分为正常蛋白尿组(UACR<30mg/g)、微量蛋白尿组(UACR为30-300mg/g)、大量蛋白尿组(UACR>300mg/g)。收集患者的身高、体重、病程等一般临床资料和一般生化指标,包括空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FPG)、糖化血红蛋白(Glycated Hemoglobin A_1C,HbA_1C)、甘油三脂(Triglycerides,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum Creatinine,Scr)、胱抑素C(Cystatin C,Cys C)、肾小球滤过率(estimated Glomerular Filtration Rate,e GFR)及血清铁代谢相关指标:血清铁、铁蛋白、转铁蛋白。留尿检测UACR,α1微球蛋白(α1-Microglobulin,α1-MG)、β2微球蛋白(β2-Microglobulin,β2-MG)、N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-Acetyl-β-D-Glucosidase,NAG)。采静脉血2ml离心,收集上层血清,铁死亡相关指标谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(Acyl Coenzyme A Synthetase Long Chain Member 4,ACSL4)、活性氧簇(Reactive Oxygen Species,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的水平使用酶联免疫吸附试剂法检测。三组间一般临床资料比较采用ANOVA和Kruskal-Wallis H检验分析,铁死亡相关指标与余临床指标的相关性采用Pearson和Spearman相关分析法。使用Logistic回归模型分析影响因素,采用受试者工作曲线(Receiver-operating Characteristic Curve,ROC)评估铁死亡相关指标对DKD的预测价值。结果:(1)三组患者病程、HbA_1C、ALT、CysC、eGFR、α1-MG、β2-MG、血清铁、铁蛋白、转铁蛋白、GPX4、ACSL4、MDA、ROS分布差异有统计学意义(均P<0.05)。其中,病程、HbA_1C、ALT、Cys C、α1-MG水平在正常蛋白尿组低于大量蛋白尿组;β2-MG、ACSL4、MDA、ROS水平在大量蛋白尿组高于其他两组;e GFR、血清铁水平在大量蛋白尿组低于其他两组;铁蛋白、转铁蛋白、GPX4水平在三组之间的差异均有统计学意义。其余临床指标未发现有统计学差异(均P>0.05)。(2)GPX4与FPG、HbA_1C、UACR、α1-MG、β2-MG、铁蛋白呈负相关(r=-0.205;r=-0.290;r=-0.463;r=-0.253;r=-0.270;Liproxstatin-1使用方法r=-0.348,P<0.05),与转铁蛋白呈正相关(r=0.366,P<0.001);ACSL4与HbA_1C、UACR、α1-MG、铁蛋白呈正相关(r=0.207;r=0.359;r=0.184;r=0.269,P<0.05),与血清铁、转铁蛋白呈负相关(r=-0.262;r=-0.184;P<0.05);MDA与UACR呈正相关(r=0.364,P<0.001),与转铁蛋白呈负相关(r=-0.417,P<0.001);ROS与HbA_1C、BUN呈正相关(r=0.206;r=0.196,P<0.05),与转铁蛋白呈负相关(r=-0.235,P<0.05);GPX4、ACSL4、MDA、ROS与其余临床指标无明显相关性(均P>0.05)。(3)单因素Logistic回归分析发现病程、HbA_1C、血清铁、铁蛋白、转铁蛋白、GPX4、ACSL4、MDA、ROS对于糖尿病肾脏疾病发生大量蛋白尿的影响有统计学意义;多因素回归分析发现病程Medulla oblongata、铁蛋白、血清铁、转铁蛋白、GPX4均是影响糖尿病肾脏疾病患者发生大量蛋白尿的独立风险因素,具有统计学意义(均P<0.05)。(4)铁死亡相关指标GPX4、ACSL4、MDA、ROS对2型糖尿病患者发生肾脏疾病均有一定的预测价值(AUC=0.761;AUC=0.674;AUC=0.660;AUC=0.607;P<0.05Canagliflozin生产商),其中GPX4的预测价值较好,GPX4小于167.50为最佳参考界限,此时敏感度为88%,特异度为58%。GPX4、ACSL4、MDA、ROS四种指标联合预测糖尿病肾脏疾病价值更好,ROC曲线下面积为0.804(P<0.001)。结论:(1)铁死亡相关指标GPX4、ACSL4、MDA、ROS与2型糖尿病肾脏疾病存在关联。(2)GPX4与糖尿病肾脏疾病蛋白尿的程度具有负相关关系;ACSL4、MDA与糖尿病肾脏疾病蛋白尿的程度具有正相关关系,GPX4与病程、糖化血红蛋白同是糖尿病肾脏疾病患者大量蛋白尿的独立危险因素。(3)GPX4对2型糖尿病肾脏疾病的发生有一定的预测价值,GPX4联合ACSL4、MDA、ROS预测价值更佳。

目的 探讨宏基因组二代测序（mNGS）在儿童内脏利什曼病（VL）相关噬血淋巴组织细胞增生症（HLH）的临床价值。方法 回顾性分析2016年1月1日至2022年6月30日确诊的VL-HLH患儿的临床资料。结果 共纳入6例VL-HLH患儿，男4例、Immune trypanolysis女2例，中位年龄20.0(9.8～27.0)月；3例省外输入，3例本省病例。6例临床表现均有发热、脾大、血细胞减少、铁蛋白增高，5例MRTX849体内合并高三酰甘油血症或低纤维蛋白原血症，4例NK细胞活性下降，3例sCD 25升高，2例骨髓穿刺见吞噬细胞。通过骨髓穿刺确诊2例，发病至确诊时间分别为62天和90天；通过mNGS确诊4例，从发病至确诊的时间为34.0(16.0～39.0)天。因延迟诊断接受激素治疗5例，化疗药物治疗3例，合并感染3例；2例早期行mNGS确诊VL-HLH患儿，避Aurora Kinase抑制剂免应用化疗药物，且未合并感染。6例患儿均痊愈。结论 VL-HLH临床表现缺乏特异性，在非利什曼原虫流行地区早期确诊困难，mNGS可为VL-HLH的早期诊断提供依据，及时给予精准治疗。

目的：探讨替格瑞洛在冠心病并高血压经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后的疗效及安全性。方法：选取2020年10月至2021年1月在周口市第一人民医院就诊的110例冠心病合并高血压患者，按随机对照原则分为对照组与研究组，各55例。两组均实施PCI治疗，对照组在术后使用氢氯吡格雷治疗，研究组术后使用替格瑞洛治疗，维持剂量治疗12个月，并随访3个月。对比两组治疗前及治疗12个月后心肌损伤指标、血小板聚集率（PAR）、微循环指标、治疗期间出血情况及心血管不良事件发生情况。结果：治疗12个月后研究组血清脑钠肽（BCCRG 81045使用方法NP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、缺血修饰白蛋白（IMA）水平均低于对照组（P<0.05）；治疗12个月后研究组冠状动脉血流储备（CFR）水平高于对照组SAG核磁，血小板聚集率（PAR）、微循环阻力指数（IBiotic indicesMR）水平比均低于对照组（P<0.05）；研究组出血率、心血管不良事件发生率与对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：相较于氢氯吡格雷，将替格瑞洛用于冠心病并高血压患者PCI术后可更好地减轻心肌损伤程度，降低PAR，改善微循环。

本研究探讨黄芩素(Baicalein,Bai)在心肌损伤情况下的逆转作用,激活核因子E2相关因子2(Nuclear factor rythroid-2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)信号通路介导心肌铁死亡(Ferroptosis)来探讨Bai改善心肌损伤的分子机理,为心脏损伤的发病机制的认识拓宽思维,并为临床研究提供新的方向、新途径。目的:利用腹腔注射异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)建立心肌肥厚模型,通过腹腔注射Bai进行干预治疗,探讨Bai对心肌肥厚模型下心功能、炎症反应、纤维化的作用以及Bai通过Nrf2/HO-1信号通路调控心肌铁死亡影响心脏损伤的作用。方法:1、将小鼠随机分in vitro bioactivity为4组(n=6),Con组(Con)、模型组(ISO)、Bai低剂量组(ISO+Bai-25)、Bai高剂量组(ISO+Bai-50),黄芩素干预治疗后,对小鼠进行超声心动图评估小鼠心功能;利用病理染色及MDA、CK-MB、LDH试剂盒评估心肌损伤情况及纤维化程度;运用WB检测肥大、纤维化、炎症相关蛋白的表达水平情况。2、将小鼠随机分为4组(n=6),Con组(Con)、黄芩素组(Con+Bai-50)、模型组(ISO)、Bai高剂量组(ISO+Bai-50)。黄芩素干预治疗后,对小鼠进行超声心动图评估小鼠心功能;利用病理染色及MDA、CK-MB、LDH试剂盒评估心肌损伤情况及纤维化程度;运用WB检测心肌肥大、纤维化、抗氧化、炎症以及铁死亡相关蛋白的表达水平情况。3、小鼠随机分为5组(n=6),Con组(Con)、模型组(ISO)、Bai高剂量组(ISO+Bai)、Nrf2抑制剂组(ISO+Bai+ML385)、铁死亡激活剂组(ISO+Bai+Erastin)。按上述方法评估小鼠心脏功能、炎症变化、纤维化情况,另利用铁离子试剂盒检测心肌组织中铁离子的含量;免疫荧光评估Nrf2入核情况;Elisa检测心肌组织中MDA、GSH、ROS的含量;WB检测Nrf2、HO-1信号通路蛋白及铁死亡相关蛋白。结果:1、HE/Masson染色显示,与ISO相比,Bai组可以显著改善心肌损伤及心肌纤维的变化;心超显示,与ISO相比,Bai组HW/BW、IVSd、LVPWd、LVIDd有所改善;ISO组小鼠CK-MB、LDH含量显著升高,Bai组呈剂量依赖性下降;ISO组小鼠GSH活性显著下降,MDA含量增多,Bai组GSH呈浓度依赖升高,MDA含量降低。WB结果显示,与Con组相比,ISO组、Bai组SOD1、CAT表达下调,NF-κB、TNF-α、IL-6、p-Smad2、Collagen I、BNP表达上调(P<0.05);与ISO组相比,Bai组SOD1、CAT蛋白表达呈剂量依赖性上调(P<0.05)。2、(1)通过超声心动图检测,ISO组小鼠LVIDd值明显低于Con组,而ISO组小鼠心脏的LVSd和LVPWd明显高于对照组(P<0.05);心脏取材结果发现:ISO组小鼠心脏质量、心重/体重的比值明显高于对照组,ISO+Bai-50组的小鼠心脏质量、心重/体重的比值明显低于ISO组(P<0.05);WB分析得出:ISO组心肌肥厚相关蛋白B型利钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达水平明显高于对照组,ISO+Bai-50组的心肌肥厚相关蛋白BNP、β-MHC表达水平低于ISO组(P<0.05)。(2)Masson染色显示:ISO组小鼠血管周围及间质纤维化严重程度明显高于对照组,ISO+Bai-50组小鼠纤维化程度有所减轻;WB分析结果:ISO组小鼠纤维化标志物:I型胶原纤维(Collagen I)、纤维连接蛋白(Fib)、转换化生长因子(TGF-β)及Smad2转录因子的蛋白表达水平明显高于对照组,ISO+Bai-50组小鼠Collagen I、Fib、TGF-β、Smad2蛋白表达水平明显低于ISO组(P<0.05)。(3)心肌损伤标志物检测显示:诱导组小鼠CK-MB、LDH的活性明显高于对照组,而ISO+Bai-50组小鼠CK-MB、LDH的活性明显低于ISO组(P<0.05)。(4)氧化应激指标WB分析结果显示:ISO组核因子-κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的蛋白表达水平明显高于对照组,ISO+Bai-50组小鼠NF-κB、IL-6及TNF-α蛋selleckchem Etoposide白表达水平明显低于ISO组(P<0.05);ISO组超氧化物歧化酶(SOD1)、过氧化氢酶(CAT)、的蛋白表达水平明显低于对照组,ISO+Bai-50组小鼠SOD1、CAT蛋白表达水平明显高于ISO组(P<0.05)。3、Nrf2抑制剂(ML385)、铁死亡激活剂Erastin与Bai共同干预小鼠,结果显示加重Bai对心肌损伤的改善。与ISO+Bai组相比,ML385、Erastin组超声心动图、纤维化、炎症反应及心肌损伤指标有所上升趋势。(1)铁离子试剂盒检测得出:ISO组铁离子浓度均Pevonedistat分子量高于对照组,ISO+Bai组小鼠铁离子浓度明显低于ISO组,而ML385组、铁死亡激活剂Erastin组铁离子浓度高于明显ISO+Bai组(P<0.05)。(2)MDA、ROS、GSH试剂盒检测得出:与对照组相比,ISO组小鼠MDA、ROS含量明显增加,GSH含量下降;与ISO组相比,ISO+Bai组小鼠MDA、ROS含量明显下降,GSH含量增加;与ISO+Bai组相比,ML385组、铁死亡激活剂Erastin小鼠MDA、ROS含量有所增加,GSH含量下降。(3)WB分析得出:使用ML385、Erastin后,心肌组织中的Nrf2、HO-1、NOQ1蛋白表达水平均被显著抑制;GPX4、FTH1蛋白表达下调,而PTGS2蛋白表达上调;抗氧化蛋白SOD1、CAT表达均下调。结论:Bai通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制心肌铁死亡改善心脏损伤的作用。