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以甲基磺酸乙酯（Ethyl methane sulfonate,EMS）为诱变剂，分别采用浸种法和滴苗法处理西瓜种质M08的种子和幼苗Baf-A1，对M_1和M_2代群体单株叶、花、茎、果实等主要农艺性状进行观察、拍照、记录。在浸种法获得的749株M_1代单株中共发现叶片黄化、叶片畸形、雄花簇生、点击此处瓜胎形状变异等15种突变类型，总突变率达到20.56%；通过滴苗法共成活689株M_1代单株，包含10种变异类型，总变异率为19.30%。M_2代genetic sequencing种子库共收获443份材料，随机选取其中的132个家系进行表型观测，共得到叶片黄化、子叶连结、叶片畸形、叶缘内卷、茎并生、果皮条带变异、植株生长发育迟缓等13种变异类型，总突变率为5.21%。对叶色黄化转绿突变体M_1-5家系的M_2代群体单株进行表型观测及光合特性分析得出，在转绿前，光合色素含量较低，叶片呈黄色；在转绿后，光合色素含量大幅度提高，叶色由黄转绿，但仍低于正常M08叶片，随着光合色素的累积，黄化转绿突变体的光合能力得以恢复，可正常生长。

随着社会发展和生产力水平的提高,但是食品的生物性安全问题仍时有发生,每年造成巨大的经济损失并存在极大健康隐患。人们通过摄食受污染的植物性食物(谷物)或动物性食物(肉、奶和蛋)摄入真菌毒素,而对人体健康带来危害。食物过敏是一些特殊人群暴露于某些含有过敏原的食物后所免疫系统的异常反应,其发生率也在逐年上升,严重影响患者的健康与生活质量。鸡蛋、牛奶及花生等食物含有主要的食物过敏原,同时也容易被真菌毒素污染,2种食品安全风险因子都具有免疫毒性,也在这些食物上具有重合性。因此,食品真菌毒素污染对食物过敏发生的影响值得进一步研究,有助于进一步科学评估食物过敏的风险因素。本论文分别从整体动物模型和体外细胞实验研究黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)暴露对卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏小鼠主要免疫指标的影响。根据致敏小鼠血清中特异性抗体、肥大细胞蛋白酶、脾细胞分泌细胞因子及空肠中食物过敏相关基因表达等多个理化指标,评估AFB_1暴露对OVA致敏小鼠产生的影响;并通过对小鼠肠道切片影响的观察及其肠道内容物菌群的分析,评估AFB_1暴露对OVA致敏小鼠的肠道黏膜免疫及肠道菌群的影响。通过构建OVA激发KU812细胞脱颗粒模型,评估AFB_1暴露对OVA激发KU812细胞脱颗粒的影响,进一步从细胞水平阐述AFB_1暴露对食物过敏的影响。论文研究主要方法、内容和结果如下:(1)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测OVA致敏小鼠血清中特异性抗体Ig E、Ig G、Ig G1及Ig G2a的含量及其肥大细胞蛋白酶的水平;采用ELISA商用试剂盒检测OVA致敏小鼠脾脏上清液中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ的水平;采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测相关基因表达;流式细胞术检测Th1/Th2/Treg细胞的数量。结果表明,OVA致敏小鼠血清中特异性Ig E、m MCP-1水平及Th2细胞产生的细胞因子(IL-4、IL-5及IL-1selleck产品3)水平显著升高,OVA致敏模型构建成功。低剂量AFB_1使OVA致敏小鼠的特异性Ig E水平、IL-4及IL-13水平显著提升,分别提升68%、41%及75%;中剂量AFB_1使OVA致敏小鼠的m MCP-1和IL-13的水平显著提升;中剂量AFB_1使OVA致敏小鼠的m MCP-1和IL-5的水平显著提升,分别提高107%和22%;持续高剂量AFB_1对各项过敏指标LY2157299没有显著改变。在4组AFB_1暴露的致敏小鼠体内,与Th1相关细胞因子(IFN-γ)的水平均有所下降,但无统计学意义。这些结果也Q-PCR和流式细胞分析得到进一步验证。(2)通过HE染色法对OVA致敏及其AFB_1暴露的BALB/c小鼠空肠组织空肠进行病理分析,并利用Illumina Mi Seq高通量测序平台对不同实验组小鼠盲肠内容物中的细菌16S r RNA V3—V4区的扩增子进行PCR扩增,然后采用生物信息学手段分析AFB_1暴露对OVA致敏小鼠的肠道菌群的结构、多样性及差异物种的影响。结果表明,OVA会导致小鼠肠道绒毛断裂以及肠腺体间距明显增宽;高剂量和持续高剂量AFB_1暴露对OVA致敏小鼠肠道屏障造成的损伤更严重。OTUs聚类分析(物种累积曲线、RANK分析、花瓣图)结果显示,各组小鼠的OTUs数目范围为514～521,OTUs数目共有率为94.6%,AFB_1对小鼠肠道菌群OTUs数目和均匀度影响较小。Alpha多样性分析表明,AFB_1暴露并未对小鼠肠道菌群的多样性和丰富度产生较大影响。Beta多样性分析表明,AFB_1使OVA致敏小鼠肠道菌群的结构发生重大变化,OVA组与中/高剂量AFB_1暴露组小鼠肠道菌群间Beta多样性距离有显著性差异。在门水平上,OVA致敏小鼠肠道厚壁菌门相对丰度显著下降,拟杆菌门和变形菌门相对丰度显著上升。AFB_1使OVA致敏小鼠肠道厚壁菌门相对丰度下降,拟杆菌门和变形菌门相对丰度上升,并以高剂量AFB_1影响最为显著。(3)采用ELISA法检测AFB_1对其释放生物活性介质β-氨基己糖苷酶(β-HEX)与组胺,以及细胞因子(IL-4、IL-6及IL-1β)释放量的影响;然后,采用Q-PCR分析对IL-4和IL-6的m RNA表达水平的影响。结果表明,AFB_1genetic evaluation对OVA刺激KU812细胞脱颗粒释放β-HEX和组胺的影响较小,但能够促进其分泌细胞因子IL-4、IL-6以及IL-1β,释放量分别提高59%、30%及84%。同时,IL-4和IL-6的m RNA基因的表达水平也被提高,分别提高60%和23%。综上所述,从整体动物模型、肠道菌群分析结果及体外细胞实验结果都证明AFB_1暴露会加重OVA致敏性。

目的 探讨局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗疗效的影响因素并建立预测模型。方法 回顾性分析2021年8月—2023年6月在徐州医科大学附属徐州市妇幼保健院接Medical expenditure受治疗的136例局部晚期宫颈癌患者的临床资料，根据新辅助化疗疗效分为有效组（96例）和无效组（40例）。比较两组患者的临床资料。多因素逐步Logistic回归分析局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗疗效的影响因素；绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗疗效预测模型预测新辅助化疗疗效的价值。结果 有效组鳞癌、病灶大小≤6 cm、化疗疗程2～3周期、无贫血、淋巴结转移阴性、血流丰富占比高于无效组（P <0.05）。多因素逐步Logistic回归分析结果显示：鳞癌[■=2.044(95%CI:1.211,3.450)]、病灶大小≤6 cm [■=2.563(95%CI:1.305,5.034)]、化疗疗程2～3周期[■=1.845(95%CI:1.118,3.045)]、无贫血[■=1.229(95%CI:1.003,1.506)]、淋巴结转移阴性[■=3.174(95%CI:1.678,6.004)]、血流丰富[■=2.306(95%CI:1.242,4.282)]均是局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗有效的影响因素（P <0.05）。根据多因素逐步Logistic回归分析结果建立局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗疗效的预测模型，Logit(P)=-32.167+0.715×病理类型+0.941×病灶大小+0.612×化疗疗程+0.206×贫血+1.155×淋巴Fer-1细胞培养结转移+0.Lapatinib纯度836×血流情况。ROC曲线分析结果表明，该模型预测新辅助化疗疗效的曲线下面积为0.952(95%CI:0.906,0.997)，敏感性为89.6%(95%CI:0.843,0.956)，特异性为85.0%(95%CI:0.812,0.906)。结论 局部晚期宫颈癌患者新辅助化疗疗效受病理类型、病灶大小、化疗疗程、贫血、淋巴结转移、血流情况等因素的影响，建立预测模型更有利于新辅助化疗疗效的评估。

目的 分析福建省高血压人群中7个高血压药物相关基因的多态性分布特征。方法 收集2020年11月至2022年9月在福建医科大学附属第一医院就诊的高血压患者540例，采用PCR-熔解曲线法检测7个高血压药物相关基因的多态性，统计其基因型频率和等位基因频率的分布情况，并进一步判断预期疗效和不良反应。结果 高血压患者540例β_1-肾上腺素受体(ADRB1)1165G>C、细胞色素P450(CYP)2D6~*10(CYP2D6~*10)、CYP3A5~*3基因的突变频率较高，分别为73.24%、56.85%、71.39%;心房钠尿肽前体A(NPPA)2238T>C、CYP2C9~*3、血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1) 1166A>C、血管紧张素转换酶(ACE)I/D基因的突变频率较低，分别为0.74%、3.1KPT-330分子量5%、4.72%、32.78%。此外，分别有54.07%、15.56%、98.15%、100%、1.48%的患者对血管紧张素转换酶抑制药(ACEI)、血管紧张素受体阻滞药(ARB)、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂(CCB)、利尿剂的预期疗效在人群中属于较好及以上；分别有11.48%、57.23%、51.30%的患者对ACEI、β受体阻滞剂、CCB类药物发生不良反应的概率超过一般LY2157299研究购买人群，但应用利尿剂、ARB类药物发生不良反应的风险较低。7个高血压药物相关基因的突变率在男性(354例)和女性(186例)高血压患者中差异无统计学意义；不同性别患者对同类高血压药物的预期疗效和预期不良反应差异亦无统计学意义(均P>0.05)。结论 福建省高血压患者选用β受体阻滞剂和CCB类药物疗效较好，但发生不良反应的概率也相应增加；选用利尿剂、ARB类药物疗效一般，anti-tumor immune response但发生不良反应的风险较低。

目的 探讨经尿道前列腺钬激光剜除术(HoLEP)治疗对前列腺增生症(BPH)患者尿控恢复及血清前列腺特异性抗原(PSA)和前列腺素E_Erastin溶解度2(PGE_2)水平的影响。方法 选取2019年5月至2020年9月来该院就诊的88例BPH患者作为研究对象，采用随机数字表法分为观察组和对照组，每组44例。对照组患者实施经尿道前列腺电切术，观察组患者实施HoLEP,比较两组患者术前及术后残余尿量(PVR)、最大尿流量(Q_(max))和前列腺症状(IPSS)评分；对两组患者术后尿控恢复进行评价；比较两组患者术前及术后血清PSA和PGE_2水平；记录两组患者术后并发症发生情况。结果 两组患者术后3个月PVR、IPSS评分均明显低于术前，且观察组明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者术后3个月Q_(max)明显高于术前，且观察组明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。术后12个月内随访，观察组患者术后1、3个月尿控恢复与对照组比较明显改善，差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后3个月血清PSA、PGE_2水平均明显低于术前，且观MLN8237体内实验剂量察组明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者术后膀胱损伤、膀胱痉挛、尿潴留、尿路感染、短暂性压力尿失禁和尿道口狭窄等总并发症发生率明显低于对照Nucleic Acid Modification组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HoLEP治疗BPH患者术后早期尿控恢复快，可降低患者血清PSA和PGE_2水平，促进患者康复，安全性较高。

颅骨的发育依赖于颅缝（cranial suture）正常的骨供给，期间颅缝的间充质干细胞经历系统地增殖和成骨分化以selleck化学保证骨的正常生长。遗传因素或外界干扰则可能引起干细胞的过度成骨分化，导致颅骨的过早闭合，称为颅缝早闭。颅缝细胞与细胞外基质、骨膜以及脑膜共同构成颅缝微环境（nicheMLN8237体内实验剂量）。它们相互调节以保证颅缝的正常发育。临床研究发现，绝大多数颅缝早闭（craniosynostosis）患者都伴有硬脑膜和细胞外基质（extracellular matrixc，ECM）的异常。许多研究也发现，作用于颅缝的异常外界机械刺激也可能导致颅缝发育的异常。考虑到颅缝发育受多方面因素影响，本篇综述将介绍近年来有关颅缝微环境异常，以及机械力在调控颅缝发育中的研究进展，总结颅缝早闭发生的分子机制和目前研究方Transmission of infection向，旨在为该病的诊断治疗提供新的思路。

为探讨自然发酵酸鱼中微生物群落与理化性质的关系，对自然发酵酸鱼的主要理化性质进行测定，并采用高通量测序技术研究酸鱼中的微生物多样性，根据Spearman相关系数探究优势微生物与理化指标的相关性。结果显示，自然发酵酸鱼的pH值、总酸、氨基酸态氮、挥发性盐基氮和丙二醛的含量分别为4.28～4.38、3.37%～3.86%、0.62 g/100 g～0.69 g/100 g、30.51 mg/100 g～37.10 mg/100 g和1.81 mg/kg～2.72 mg/kg；检测出苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺和酪胺5种生物胺。微生物多样性结果显示乳杆菌属和梭菌属是主要的细菌属；哈萨克斯坦酵母属是主要的真菌属。相关性分析显示乳杆菌属genetically edited food、哈萨克斯坦酵母属与氨基酸态氮呈正相关，而与挥发性盐基氮、丙二醛、组胺和尸胺均呈负相关。该研究揭示乳杆菌属和哈萨克斯坦酵母属在酸鱼品获悉更多质GW4869形成中发挥着重要作用，为进一步筛选功能性微生物用于酸鱼发酵提供理论基础。

为探讨双孢蘑菇凝集素对兔耳创面愈合增生性瘢痕的影响，文章选取12只新西兰大白兔，在每个Sulfonamide antibiotic兔耳腹制作4个创面，待创面上皮化瘢痕形成后随机分为4组，治疗组局部分别注射高、中、低剂量的双孢蘑菇凝集素进行治疗，在治疗28 d后测量瘢痕厚度及瘢痕增生指数（HI），切取瘢痕组织制作组织切片并行苏木精和伊红（HE）染色，免疫组染色检测增殖细胞核抗原蛋白（PCNA）及CD34蛋白表达情况。结果表明与空白组对比，治疗28 d，治疗组瘢痕变软，色素变淡，硬块变小；HE染色显示治疗组瘢痕组织鳞状上VX-765皮下成纤维细胞排列较疏松，密度降低，炎症细胞及毛细血管数量减少；治疗组PBerzosertib化学结构CNA及CD34蛋白表达水平明显降低，与双孢蘑菇凝集素浓度负相关。因此，双孢蘑菇凝集素能抑制兔耳创面愈合增生性瘢痕组织的增生，可能与下调PCNA及CD34的蛋白表达相关联。

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,对女性健康构成极大威胁。现代医学已经发展出多种有效的治疗手段,如手术、放疗、化疗以及生物治疗等。阿霉素(Adriamycin,简称为ADR,又被称作多柔比星Doxorubicin,简写为Dox)是乳腺癌治疗中常用的化疗药物之一,但耐药性的出现显著限制了其临床应用。因此,深入了解乳腺癌的耐药机制,寻找新的治疗靶点,提高乳腺癌的治疗效果具有重要的临床价值。本研究采用药理工具药和基因干预技术,以耐阿霉素的MCF-7helicopter emergency medical service/ADR细胞为模型,系统地研究了FABP5在乳腺癌对阿霉素耐药中的作用及机制,为改善乳腺癌的治疗提供新的治疗靶点和策略。第一部分MCF-7/ADR细胞耐药属性鉴定目的:收集MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞,观察两种细胞的差异,并对MCF-7/ADR细胞的耐药属性进行鉴定。方法:1.细胞耐药属性鉴定:采用光学及电子显微镜观察MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞(简称ADR细胞)的形态,分别用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK8)检测Dox对两种细胞的抑制率,结果用半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值来表示,采用计算法求出MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药指数。运用Western Blot(WB)技术检测两种细胞耐药相关蛋白、多药耐药相关蛋白(Multi-drug resistant associate protein,MRP1)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-GP)的表达水平,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内药物的积累量。2.ADR细胞和MCF-7细胞的糖脂水平差异:运用透射电子显微镜观察细胞的超细微结构,分别采用糖原周期性酸-希夫(Periodic Acid-Schiff stain,PAS)染色法和油红O染色法观察两种细胞的糖原含量及脂滴情况。结果:1.ADR细胞确为耐药细胞:MCF-7和ADR细胞存在形态差异。MCF-7细胞呈椭圆形,形状均匀;ADR细胞呈多边形,大小不一。Dox对MCF-7细胞及ADR细胞作用的IC_(50)分别是4.5μM和213.2μM,ADR细胞的耐药指数为47.4。WB结果显示,相较于MCF-7细胞,ADR细胞MRP1和P-GP呈高水平表达(P<0.05)。同时显微镜观察到,给予相同剂量5μM的Dox 24 h,相较于MCF-7细胞,ADR细胞内药物积累较少(P<0.05)。2.ADR细胞和MCF-7细胞的糖脂水平差异:透射电子显微镜观察发现,MCF-7细胞存在大量糖原,ADR细胞内含量甚微。PAS法染色进一步证实MCF-7细胞存在大量糖原,而油红O染色法发现ADR细胞内存在大量脂滴。小结:1.ADR细胞确实是MCF-7细胞的耐阿霉素细胞株。2.MCF-7细胞和ADR细胞存在糖脂差异。第二部分ADR细胞的耐药机制初步分析目的:比较MCF-7及ADR细胞FABP5、钙/钙调蛋白依赖激酶II(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase typeⅡ,Ca MKII)、活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)和细胞内钙离子浓度的差异,为其机制分析打下基础。方法:1.MCF-7细胞和ADR细胞FABP家族的表达差异:运用q RT-PCR技术和生物信息学技术,分析MCF-7细胞和ADR细胞FABPs和Ca MKIIs的表达,筛选出表达差异大的目标m RNA分子进行WB实验。通过免疫组化技术检测耐药乳腺癌患者和敏感乳腺癌患者的组织中FABP5和p-Ca MKII的表达情况。2.MCF-7细胞和ADR细胞脂质过氧化的差异:运用流式细胞术检测给予铁抑素-1(Ferrostatin-1,Fer-1)前后细胞内ROS水平、细胞内钙离子浓度、线粒体膜电位及脂质过氧化水平的变化情况。WB实验检测细胞间的谷胱甘肽过氧化酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)的蛋白表达情况。3.细胞内钙浓度对ADR细胞存活力的影响:运用CCK-8技术,检测BAPTA-AM和Dox联合应用对ADR细胞的存活率,并和给药前相比较。结果:1.q RT-PCR和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库的结果显示,与MCF-7细胞相比,ADR细胞的FABP5和Ca MKII高表达,且均具有显著性差异(P<0.05)。WB实验进一步证实FABP5和Ca MKII在ADR细胞中高表达(P<0.05)。临床乳腺癌患者的组织样本免疫组化结果显示,和敏感患者相比,耐药患者FABP5和p-Ca MKII的表达显著增加。2.流式细胞术的结果显示,与MCF-7细胞相比,ADR细胞ROS及细胞内钙离子浓度较高(P<0.05)。JC-1染色结果显示,两种细胞的红色荧光没有显著性差异,ADR细胞绿色荧光弱于MCF-7细胞,即ADR细胞的线粒体膜电位高于MCF-7细胞。WB实验结果显示,与MCF-7细胞相比,ADR细胞内的GPX4表达较少(P<0.05)。给予Fer-1后,ADR细胞的ROS含量、线粒体膜电位及细胞膜脂质过氧化均没有显著性差异,即铁死亡不影响ADR细胞的线粒体膜电位,且与ADR细胞的耐药无关。3.CCK-8结果显示,相较于单独给予Dox,BAPTA-AM和Dox联合应用后,ADR细胞的存活率降低,ADR细胞对阿霉素的耐药性降低(P<0.05)。小结:ADR细胞内的FABP5、Ca MKII、ROS和细胞内钙离子浓度均高于MCF-7细胞,提示其可能与耐药性存在联系。第三部分FABP5调节ADR细胞耐阿霉素的作用机制目的:采用si RNA技术敲低ADR细胞的FABP5表达,探讨其与阿霉素耐药性的关系和其可能的作用机制。方法:1.FABP5低表达后细胞的改变:采用si RNA技术敲低ADR细胞的FABP5表达,通过q RT-PCR和WB技术验证si FBAP5的敲低效果,运用CCK-8技术检测ADR细胞的IC_(50)值,采用克隆形成实验观察细胞增殖和耐药情况,采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度和ROS的变化,通过WB技术检测PPARγ、p-Ca MKII、LC3ⅡPD0325901供应商/Ⅰ和P62等蛋白的变化。采用同样的方法,观察SBFI-26(FABP5的抑制剂)对ADR细胞的影响。2.Dox与不同蛋白的结合力分析:运用分子对接技术,对P-GP和FABP5和Dox的结合力进行分析。结果:1.q RT-PCR和WB结果显示,与si NC相比,siFABP5确实降低了FABP5的表达。FABP5被抑制后,ADR细胞的药物敏感性急剧上升,IC_(50)值从304.5μM下降到187.3μM。菌落形成实验显示,与单独使用Dox相比,抑制FABP5表达和Dox组,ADR细胞的集落形成能力大幅降低。另外,siFABP5后,细胞中钙的积累明显减少。与si NC组相比,siFABP5会使PPARγ、p-Ca MKII的表达急剧下降,用SBFI-26也观察到类似的结果。与si NC相比,siFABP5减少了LC3II/Ⅰ,但P62没有差异。与单独使用Dox相比,SBFI-SAG化学结构26和Dox的联合应用增加了LC3II/Ⅰ和P62。另外,流式结果发现,与对照组相比,siFABP5并没有减少ROS的水平,但是,SBFI-26组却有不同的结果。2.分子对接结果显示,Dox与FABP5(对接分数从-6.00到-8.78千卡/摩尔)的结合能量大于与P-GP(对接分数从-1.47到-3.01千卡/摩尔)。小结:1.siFABP5可以降低ADR细胞对Dox的耐药性,这一作用可能和其减少PPARγ、p-Ca MKII的表达,减少自噬有关。2.FABP5和Dox的结合力比P-GP的结合力更强。结论:FABP5可以调节ADR细胞对Dox的耐药性,这一作用可能和其减少PPARγ和p-Ca MKII的表达、减少自噬及细胞内钙蓄积有关。该研究结果为临床乳腺癌的预防和治疗策略提供了新的治疗靶点。

目的:甲状腺乳头状癌是甲状腺癌中最常见的病理亚型,占总发病率的85%～90%。普遍认为甲状腺乳头状癌具有良好的预后效果,但是部分甲状腺乳头状癌可转变为更具侵袭性的表型,转移到淋巴结或远处组织,并去分化为致命的甲状腺癌。随着甲状腺癌发病率和复发率的快速增长,寻找新的治疗靶点和探索甲状腺癌发生发展的新机制迫在眉睫。γ-谷氨酰胺环化转移酶(GGCT)是一种参与谷胱甘肽(GSH)代谢循环的酶,GSH代谢异常多与细胞铁死亡发生相关。越来越多的研究表明GGCT在肿瘤中高度表达,并且GGCT的表达水平与肿瘤恶性程度相关。本研究主要探究GGCT在甲状腺乳头状癌中是否参与细胞铁死亡的过程,进一步的探究GGCT的上游及下游的调控机制,为甲状腺乳头状癌的发生发展机制探究提供理论支撑,同时为GGCT作为甲状腺乳头状癌诊断和治疗靶点提供理论基础。方法:利用免疫组织化学(IHC),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞和组织中目的基因的m RNA或蛋白表达水平;利用酶联免疫吸附法(ELISA)分析甲状腺乳头状癌患者手术根治术前或手术根治术后血清中GGCT的含量;利用免疫沉淀(IP)联合液相色谱-串联质谱技术(LCMS/MS)筛选与GGCT相互作用的蛋白;利用蛋白免疫共沉淀(Co-microbiome stabilityIP)实验和石蜡切片免疫荧光同源双标实验分析两蛋白之间的相互作用;利用双荧光素酶报告实验验证miRNA与靶基因的结合;利用慢病毒包装技术构建稳定敲降或过表达目的基因的细胞系;利用细胞活力试剂盒-8(CCK-8)、细胞克隆形成实验分析细胞的增殖能力;利用细胞伤口愈合实验和transwell实验分析细胞的迁移和侵袭能力;利用谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒检测细胞或组织中GSH水平;利用C11BODIPY 581/591探针结合流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测细胞中脂质活性氧(Lipid ROS)水平;利用丙二醛(MDA)脂质氧化水平检测试剂盒检测细胞或组织中MDA水平;利用透射电子显微镜观察线粒体的形态;利用裸鼠移植瘤模型研究目的基因对肿瘤细胞成瘤能力的影响;利用裸鼠肺转移模型评估目的基因对肿瘤细胞迁移和侵袭能Ferrostatin-1力的影响;利用H&E染色分析裸鼠肺部组织形成的肿瘤结节。结果:(1)GGCT负向调控甲状腺乳头状癌铁死亡的研究:GGCT在甲状腺乳头状癌组织及细胞系中高表达,甲状腺乳头状癌患者手术根治术24 h后血清中GGCT的含量显著降低。敲降GGCT在体内和体外抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力。铁死亡抑制剂可以逆转敲降GGCT引起的细胞活力下降,进一步的实验结果表明敲降GGCT抑制细胞内GSH的合成,促进MDA和ROS的积累,进而促进甲状腺乳头状癌细胞的铁死亡。(2)GGCT调控甲状腺乳头状癌细胞铁死亡的分子机制研究:IP联合LCMS/MS实验结果表明GGCT与RPS15A之间存在相互作用,RPS15A在甲状腺乳头状癌的组织及细胞中高度表达并且与GGCT的表达水平呈现正相关。敲降RPS15A后促进p53的表达,进而抑制SLC7A11的表达引起细胞铁死亡。过表达RPS15A逆转敲降GGCT引起的细胞铁死亡。(3)GGCT的上游调控机制研究:miR-205-5p在甲状腺乳头状癌中低表达,过表达miR-205-5p抑制GSH的合成,促进MDA和ROS的积累,促进细胞铁死亡。miR-205-5p通过靶向GGCT的3’UTR抑制GGCT的蛋白表达,过表达miR-205-5p在体内抑制GGCT介导的肿瘤生长和肺转移能力。结论:本研究发现GGCT在甲状腺乳头状癌中高表达,敲降GGCT促进细胞铁死亡进而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力。机制上,GGCT与RPS15A之间存在相互作用,两者表达水平呈正相关。敲降RPSselleckchem15A促进p53的表达,抑制SLC7A11的表达,进而抑制GSH的合成。对GGCT调控的上游机制研究发现miR-205-5p在甲状腺乳头状癌中低表达,miR-205-5p通过靶向结合GGCT的3’UTR结合抑制GGCT的蛋白表达。过表达miR-205-5p在体内抑制GGCT介导的肿瘤生长和肺转移能力。