Author: admin

目的 DsbC蛋白与丙型肝炎病毒(HCV)优势抗原表位原核融合表达并纯化，获得一种特异优良的Hepatic lipaseHCV血清抗体诊断抗原。方法 通过生物信息学软件，筛选我国HCV主要流行株优势抗原片段并进行串联融合形成组合肽命名为P367,将P367与DsbC蛋白进行融合后在原核系统内可溶性表达并纯化获得重组抗原DsbC-P367,建立HCV-IgG血清学检测方法，通过对HCV阴阳性血清的检测，评价DsbC-P367与P367在血清学诊断差异，获得一种新型HCV-IgG血清学诊断抗原制作方法。结果 通过信息学软件筛选获得的优势抗原表位来源于不同基因型，全长367个氨基酸。通过原核表达系统发现，DsbC-P367以可Z-IETD-FMK配制溶性表达形式存在，亲和纯化后其相对分子质量为63×10~3,纯度为92%,Western blot实验初步证实重组DsbC-P367与P367蛋白均具有抗原性；对100份明确HCV阴阳性血清进行检测，DsbC-P367与P367灵敏度分别为96%、90%,特异度均为100%,与“金标准”比较，McNemer检验显示均P=1.00,Kappa分Rapamycin别为0.95、0.87,提示DsbC-P367相对于P367具有更优的灵敏度。结论 重组获得的DsbC-P367融合肽在HCV血清学抗体检测中具有良好的灵敏度和特异度，可开发为HCV-IgG体外诊断试剂盒用于HCV感染的实验室诊断。

卵巢癌在妇科恶性肿瘤中致死率高居第一位。卵巢癌起病隐匿,早期临床症状不明显,很难早期确诊,大部分患者在诊断时病情已进展至晚期。而晚期卵巢癌的五年生存率非常低。由于缺乏可靠的生物标志物,卵巢癌的早期诊断和预后都是亟待解决的临床难题。此外,虽然卵巢癌的放化疗以及靶向治疗不断发展,但由于低应答率、毒副反应以及耐药性等问题,仍有相当一部分卵巢癌患者难以从现有的治疗中获益。因此,寻找卵巢癌早期诊断生物标志物和预测患者预后情况的生物标志物,以及潜在的卵巢癌治疗靶点蛋白分子,成为卵巢癌诊断和治疗领域迫切需要解决的问题。最近几年,定量蛋白组学成为发现生物标志物应用最广泛的方法之一。定量蛋白组学通常用于癌症、心血管疾病及其它疾病新型生物标志物的发掘。通过患者尿液的研究,科学家已经发现了一个可区分良性与恶性卵巢肿瘤的蛋白质分子模块(包含WFDC2、PTMA、PVRL4、FIBA与PVRL2等五种蛋白质)。在本课题中,采用TMT蛋白组学方法,我们比较早期卵巢癌患者与晚期卵巢癌患者手术标本蛋白组学差异。分析结果显示,晚期卵巢癌相较于早期卵巢癌,差异表达的蛋白质分子一共有544个,其中455个蛋白质分子表达升高,89个蛋白质分子表达下降。差异蛋白最明显的生物进程主要包括MAPK信号通路、先天免疫反应、Ⅰ型干扰素信号通路、针对抗原刺激的炎症反应以及细胞增殖的调控通路等。差异蛋白KEGG通路主要集中在NF-kappa B信号通路、Focal adhesion信号通路、癌症转录调节异常与代谢通路等。我们筛选出前40个差异明显的蛋白质分子,利用生物信息学分析的方法,寻找到一个具有潜力的靶点蛋白分子LIMD2。通过GEPIA网站分析发现,LIMD2 m RNA在健康卵巢组织中低表达,而在卵巢癌病理组织中高表达。我们收集了60例卵巢组织石蜡切片,其中健康卵巢组织13例,卵巢癌Ⅰ期16例,Ⅱ期15例,Ⅲ期15例,Ⅳ期1例。我们对这60例组织切片进行针对LIMD2蛋白的免疫组化检测。结果显示,在健康卵巢组织中LIMD2呈阴性,在卵巢癌组织中LIMD2蛋白呈阳性。然后,我们通过蛋白质印迹实验与RT-PCR实验发现,五种人类卵巢癌细胞株(A2780、HO8910PM、SKOV-3、HO8910、OVCAR-3)均表达LIMD2蛋白分子与LIMD2 m RNA,并且各细胞株中LIMD2蛋白与LIMD2 m RNA含量不同。利用免疫荧光与细胞免疫组化技术,我们发现LIMD2大部分表达在细胞质中,少部分表达在细胞膜上。接下来,本课题组对LIMD2的功能及机制进行探索。首selleck Mirdametinib先,我们将卵巢癌细胞株中的LIMD2基因进行干扰与过表达,利用CCK-8实验、Transwell迁移实验及细胞划痕实验等进行体外生物学功能研究。结果显示,相对于对照组卵巢癌细胞株,LIMD2沉默的细胞株增殖与迁移能力降低;而LIMD2过表达的卵巢癌细胞株增殖与迁移能力增强。同时,卵巢癌裸鼠模型实验结果显示,LIMD2沉默的卵巢癌细胞皮下成瘤能力下降,生长速度较慢;同时在腹腔内转移能力也下降,生长出的肿瘤数量较少并且质量较小。相应地,过表达LIMD2的卵巢癌细胞株皮下成瘤能力增强,增殖速度较快;在裸鼠腹腔内更容易转移与生长,裸鼠腹腔内往往形成大量腹水,生长出的肿瘤数量较多并且质量较大。这些研究表明,LIMD2基因沉默能有效抑制卵巢癌细胞在裸鼠体内的增殖与迁移,LIMD2基因过表达能有效促进卵巢癌细胞在裸鼠体内的增殖与迁移。为了进一步研究LIMD2促进卵巢癌恶化的作用机制,我们将LIMD2沉默的细胞株与对照组细胞株进行转录组测序。分析结果表明,Focal adhesion通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、细胞外基质-受体相互反应通路与细胞凋亡等都受到了LIMD2沉默的影响。结合前面蛋白组学的结果,Focal adhesion通路、MAPK信号通路等均在卵巢癌恶化的进程中发挥作用。这从侧面证明,LIMD2基因可能与卵巢癌的恶化相关。我们随后研究LIMD2蛋白与Focal adhesion通路的关系。Western-blot检测结果表明,与对照组卵巢癌细胞株相比,LIMD2沉默的细胞株FAK、P-FAK、RAC1、Tensin2等表达均明显降低。利用FAK抑制剂Y15处理天然卵巢癌细胞株,FAK、P-FAK、RAC1等表达也受到了抑制。相应地,过表达LIMD2的卵巢癌细胞中,LIMD2、FAK、RAC1、Tensin2、ɑ-Actinin、Vinculin等蛋白的表达量增加,而且,除了Focal adhesion信号通路相关蛋白外,MMP9与MMP2等与肿瘤转移相关的蛋白的表达量也增加。这说明LIMD2可能通过Focal adhesion信号通路影响卵巢癌细胞的恶化进程。随后,我们利用免疫共沉淀,对附带有FLAG标签且过表达LIMD2的卵巢癌细胞株进行研究。结果显示,LIMD2与CISD2有着直接相互作用,并且两者之间BLZ945试剂有着一定的结合力。通过生物信息学分析发现,CISD2与LIMD2的表达存在正相关性,且CISD2在卵巢癌组织中过表达,与较差的预后相关。Western blot检测结果表明,过表达LIMD2时,CISD2与FAK均表达升高。而在过表达LIMD2的细胞株中利用RNA干扰技术使CISD2基因沉默时,FAK的表达也得到了抑制。研究说明,LIMD2的过表达促进CISD2的高表达,进而促进FAK蛋白表达量的升高。当抑制CISD2基因表达时,FAK基因也受到了抑制。结果表明,LIMD2能够促进FAK基因的表达,但是CISD2的沉默能够抑制这个过程。为了研究LIMD2在临床检验中的应用潜力,本课题组进一步制备了LIMD2的单克隆抗体与多克隆抗体。首先,我们将经过优化的编码LIMD2的DNA序列克隆进PSMART载体质粒中,然后将质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3),利用0.1m M的IPTG诱导大肠杆菌表达LIMD2蛋白。经过STarm Streptactin Beads与镍柱两次纯化,我们得到纯度超过90%的LIMD2蛋白。接着,我们用经过纯化的LIMD2蛋白分别免疫小鼠与家兔,分别得到5种LIMD2的单克隆抗体(4F3B12、3E5C7、3F4B3、3F4C1与4F5F12)与1种多克隆抗体。Western blot实验结果显示,这5种单克隆抗体与多克隆抗体均能与原核表达的重组LIMD2蛋白结合,也能与卵巢癌细胞株中的天然LIMD2蛋白特异性结合。另外,我们对5种单克隆抗体进行了亚型鉴定。结果显示,4F3B12与3E5C7属于Ig G2a Kappa亚型,3F4B3与3F4C1属于Ig G2b Kappa亚型,4F5F12属于Ig G1 Kappa亚型。针对抗原LIMD2的ELISA实验结果表明,我们制备的多克隆抗体效价高于128K,单克隆抗体4F3B12、3E5C7和3F4B3效价达到512 K以上,单克隆抗体3F4C1和4F5F12效价达到256 K以上。我们通过交叉反应检测5种单克隆抗体与LIMD2近似蛋白LIMD1与LIMS1的结合能力。ELISA检测结果表明,3F4B3抗体针对LIMD1-His效价在16K左右,针对LIMS1-GST效价在2K左右;3F4C1抗体针对LIMD1-His效价在9K左右,针对LIMS1-GST效价在2K左右;3E5C7抗体针对LIMD1-His效价在0.6K左右,针对LIMS1-GST无效价;4F3B12抗体针对LIMD1-His效价在0.8K左右,针对LIMS1-GST效价在0.4K左右;4F5F12抗体针对LIMD1-His无效价,针对LIMS1-GST无效价。同时,Western blot实验结果显示,4F3B12、3E5C7、3F4B3、3F4C1与4F5F12均能与LIMD2蛋白结合,不能与LIMD2近似蛋白LIMS1结合,其中,4F3B12、3E5C7、3Ffake medicine4B3、4F5F12均不与LIMD1结合,仅3F4C1能与LIMD1结合。最后,我们利用5种单克隆抗体和1种多克隆抗体与大肠杆菌表达的LIMD2蛋白及卵巢癌细胞表达的LIMD2蛋白进行蛋白印迹实验,发现这5种单克隆抗体和1种多克隆抗体既能与原核表达的重组LIMD2蛋白结合,也能与卵巢癌细胞表达的LIMD2蛋白结合。随后,我们利用单抗4F5F12和LIMD2多抗对卵巢癌手术标本进行免疫组化,结果显示LIMD2在正常组织中不表达,在卵巢癌组织中高表达。这一系列研究为LIMD2的临床检验应用打下了良好的基础。综上所述,我们找到一个有潜力的卵巢癌生物标志物LIMD2蛋白。LIMD2通过Focal Adhesion信号通路促进卵巢癌细胞的增殖与转移。LIMD2也能促进CISD2的表达,进而促进FAK的表达。而LIMD2促进FAK表达的过程,能够被CISD2基因的沉默所抑制。制备的LIMD2单克隆抗体与多克隆抗体均能与LIMD2的原核表达产物及真核蛋白结合,为LIMD2的临床检测应用打下基础。

目的：探讨超声分类评估法预测乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的可行性。方法：选取南京医科大学第一附属PI3K抑制剂医院收治的经病理学检查证实的1 235例乳腺癌患者，按照检查时间先后顺序将其分为建模组（800获悉更多例）和验证组（435例），用统计学方法对建模组特征进行筛选和赋值，将总分值分段，创建分类评估法。绘制建模组总分值的受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评价该法诊断效能，再将验证组代入以验证organismal biology其可靠性。结果：肿块最长径、边缘及淋巴结皮质厚度、形态分型、血供类型是腋窝淋巴结转移的独立危险因素。建模组总分值曲线下面积（area under curve,AUC）为0.783，验证组AUC为0.831，分值分段转移率符合预设。结论：超声评估分类法在预测乳腺癌腋窝淋巴结转移方面具有可靠性。

蜂花粉富含多种活性营养成分,是营养全面的植物源天然食品,但是目前我国对蜂花粉的加工还比较简单,缺乏深入的活性挖掘和对先进加工技术的引入。为此,本文以油菜蜂花粉为原料,通过酶解法将其中的蛋白质转化成功能多肽,探讨其活性提升的可能性。为了提高酶解效率,本文构建了超声-冷冻温差复合法细胞破壁、超声辅助酶解新方法;通过动物实验,对酶解产物的免疫活性进行了检测;为了促进蜂花粉多肽制备的智能化,本文利用微型光纤近红外光谱技术进行了酶解过程原位实时监测技术的研究。研究内容及主要结论如下:(1)蜂花粉超声-冷冻温差复合法破壁条件优化研究。利用先冷冻再进行热水超声处理的超声-冷冻温差复合法进行蜂花粉破壁,优化获得的最佳破壁条件为:-20℃冷冻18 h,再按照1:10的料液比加入60℃的热水中,采用频率28 kHz、功率密度600W/L的超声波处理60 min,最优条件下油菜蜂花粉破壁率可达80.74%。扫描电镜结果可以看出,超声-冷冻温差复合法破壁油菜蜂花粉具有良好的破壁效果。经破壁后的蛋白、多糖、多酚、黄酮类物质溶出量和干物质中蛋白含量均显著提高,脂肪酸组分和含量变化不明显。破壁后的DPPH自由基清除率,·OH~-清除率,Fe~(2+)还原力以及ABTS自由基清除率较未破壁处理均有所提高,并且随着样液浓度的增加而增强,同时其IC_(50)值也均有相应的减小。(2)蜂花粉多肽酶解法制备及其肽段与序列分析。以经过破壁的蜂花粉料液为原料进行酶解,研究表明,最适合油菜蜂花粉酶解的蛋白酶为碱性蛋白酶,最佳的酶解条件为:酶解温度为55℃、酶解pH为11、加酶量1500为U/g、底物浓度为10%、酶解时间80 min,最佳条件下油菜蜂花粉的水解度为24.27%,多肽得率为70.34%。在600 W/L条件下进行了超声购买Bucladesine辅助酶解反应试验,以酶解产物的ACE抑制率为指标,最终确定20/28 kHz同步超声工作模式为最优处理模式,超声辅助酶解产物的ACE抑制率IC_(50)为0.8794 mg/mL,比常规酶解IC_(50)降低了54.52%。肽段及序列的分析表明:超声辅助酶解获得了更多的多肽序列,酶解产物中小于2000 Da的肽段数量由无超声对照组的3587条增加到5848条,增加了63.03%;末端为疏水性氨基酸的肽段数量由无超声对照组的20.82%上升到29.74%,增长了8.92%。酶解产物分子量分布研究表明:分子量大于5000 Da的组分降低了25.71%、分子量大于1000 Da小于5000 Da的组分降低了27.68%,分子量大于500 Da小于1000 Da的组分增加了27.48%,Adavosertib500 Da以下小分子量的组分增加了22.03%。超声辅助酶解获得的酶解产物,表现出更强的表面疏水性H_0,表明超声会促使更多疏水性氨基酸的暴露。(3)油菜蜂花粉破壁酶解产物对小鼠免疫力影响研究。通过对小鼠的体重增量、胸腺和肝脏指数、切片观察、外周血白细胞计数、血清中IgG、IL-6、睾酮含量、肠道菌群的测定与分析发现,破壁蜂花粉和酶解蜂花粉与未破壁蜂AM symbioses花粉比均显著提高了小鼠免疫力,与免疫力低下模型组相比均显著增加了可促进免疫力提高的艾克曼菌属Akkermansia的丰度,说明破壁和酶解都是改善蜂花粉免疫力的有效手段;不过与破壁蜂花粉比较,酶解蜂花粉提高小鼠免疫力的能力略有降低、Akkermansia的丰度有明显下降,但小鼠肠道菌群多样性有显著增强,表明酶解蜂花粉具有更强的改善肠道菌群的积极作用。(4)油菜蜂花粉酶解过程主要指标的原位实时检测。利用微型光纤式光谱仪对油菜蜂花粉酶解过程的近红外光谱进行原位实时采集,采用SNV、SG、1~(st) Der、2~(nd) Der四种方法对采集到的原始光谱进行预处理,利用偏最小二乘法(PLS)对酶解过程的多肽含量和ACE抑制率实测值数据与光谱信息进行关联建模,结果发现,采取1~(st)Der预处理方法所建模型对多肽含量的预测结果最佳,其R~2达到0.9922,RMSEP为0.2093;采取SNV预处理方法所建模型对ACE抑制率的预测结果最佳,其R~2达到0.9925,RMSEP为0.0147。

背景：作为在软骨中发现的唯一一种细胞，软骨细胞在骨性关节炎中的作用受到了广泛的关注。越来越多的研究发现长链非编码RNA能够通过影响软骨细胞的各种基本细胞特征从而参与骨性关节炎的发病机制。目的：综述长selleck BLZ945链非编码RNA在骨性关节炎软骨细胞中的研究进展，为骨性关节炎寻找更多的诊断和治疗靶标。方法virus-induced immunity：通过中国知网及PubMed数据库，以“骨性关节炎，长链非编码RNA，软骨细胞，自噬”为中文关键词；以“osteoarthritis;non-coding RNAs;long non-coding RNAs;chondrocytes;chondrocytes proliferation;chondrocytes autophagy;chondrocytes inflammation;chondrocytes extracellular matrix”为英文关键词，搜索2007-2022年在骨性关节炎中与长链非编码RNA有关的文献，排除重复研究、可信度低及无参考意义文献，共纳入62篇文献进行分析、归纳、总结。结果与结论：(1)长链非编码RNA能够通过调节软骨细ZD1839细胞培养胞增殖、自噬、炎症反应和细胞外基质合成等机制进而影响骨性关节炎的发展；(2)长链非编码RNA有可能成为骨性关节炎诊断或治疗的潜在生物标志物。

通过不对称合成方法制备具有连续手性立体中心,包括季碳中心的复杂分子一直是有机化学中的挑战性科学问题。对于成键反应,调节其反应性和控制其立体选择性都至关重要。本文主要发展了以手性路易斯Hp infection酸促进的不对称光致烯醇化Diels-Alder反应(PEDA反应),并将其应用于Napyradiomycin类天然产物diABZI STING agonist价格的全合成研究中。1961年,杨念祖先生报道了第一例PEDA反应,由邻甲基二芳基酮底物在紫外光激发下形成高活性的富电子双烯,进而被缺电子的亲双烯体捕获,发生串联的Diels-AlNSC 119875der反应。此反应可以通过简单片段一步构建较为复杂的多环骨架,步骤及原子经济性都很高。因此化学家们不断地拓展该反应的实用性,也对其对映选择性控制进行了一些研究。但是对于大位阻、多取代亲双烯体的PEDA反应,其反应性及立体选择性控制都是尚未解决的科学问题。我们在前期发展的Ti(Oi-Pr)_4促进的消旋PEDA反应基础上,通过加入TADDOL类手性配体,成功实现了三取代和四取代亲双烯体的不对称PEDA反应。研究发现:紫外光激发下形成的双烯中间体与大位阻的亲双烯体在含有手性配体的双核金属的作用下,可以高效且高对映选择性地发生环加成反应,其中配体加速效应及添加剂的作用均可以一定程度上降低消旋的背景反应速率,从而提高产物ee值并降低手性配体用量。由此可以一步构建含有单个或连续季碳中心的多环骨架结构,为相关天然产物及药物分子的合成提供了新的解决方案。此外,通过深入的研究,我们还发现对于芳基酮类的亲双烯体,在配体存在下可以exo构型的反应过渡态生成热力学能量更高的产物。在新发展的不对称PEDA反应基础上,我们展开了对Napyradiomycin类天然产物的全合成研究。在标准条件下,通过不对称PEDA反应顺利构建了含有连续季碳中心的三环骨架,其中包括一个氧杂季碳中心。通过串联的Barton反应实现了大位阻的苄位碳氢键氧化,然后通过氧化重排反应生成不饱和酮结构的分子骨架,最后以Wittig反应接入了完整的分子侧链完成了Napyradiomycin类分子全碳骨架的构建。此外,我们还研究了醛基底物的一锅法氧化串联脱羧氯代反应,以及不饱和酮的烯丙位卤代反应,为此类天然产物的合成奠定了基础。

目的 对黑色素瘤来源的外泌体miR-23a在黑色素瘤达拉非尼耐药中的机制进行分析和研究。方法 选择恶性黑色素瘤(MM)细胞系A375,用(0、30、100、300 nM)浓度的达拉非尼对其进行24 h处理,再用miR-23a模拟物转染对300 nM的A375细胞进行转染,利用免疫印迹(Western Blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测和比较转染前后A375细胞中的miR-23a、LC3Ⅰ/Ⅱ、活性氧(ROS)、caspase-3、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、caAirborne infection spreadspase-8表达水平；检测和比较恶性黑色素瘤细胞内被用不同浓度的达拉非尼处理前后LC3Ⅰ/Ⅱ表达的水平；分析miR-23a与耐药相关通路上各个因子的相关性。结果 将A375细胞系用不同浓度的达拉非尼(0、30、100、300 nM)处理,收集细胞。经Western Blot检测LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平,并行q PCR分析,发现LC3Ⅰ/Ⅱ水平随达拉非尼浓度的升高而增加,说明达拉非selleck CL13900尼以剂量依赖性方式显著激活了自噬信号。转染后, miR-23a、ROS、caspase-3、TNF-α、caspase-8的表达水平分别为(47.45±13.24)、(59.34±14.46)、(40.56±10.23)、RAD001 MW(49.23±15.34)、(50.34±8.78),均高于转染前的(26.16±8.23)、(49.55±13.36)、(25.16±5.12)、(30.49±11.54)、(33.53±13.36),差异具有统计学意义(P<0.05)。Pearson线性相关分析结果显示, miR-23a表达水平与caspase-3、TNF-α、caspase-8、TGF-β、LC3Ⅰ/Ⅱ呈正相关(P<0.05),与ROS无相关性(P>0.05)。结论 达拉非尼以剂量依赖性方式可以显著激活自噬信号,达拉非尼耐药恶性黑色素瘤细胞中的miR-23a表达水平上调后,能够促使耐药细胞发生自噬而导致凋亡加速,这可能就是miR-23a在黑色素瘤达拉非尼耐药中发生影响的可能机制。

目的 评价温中复原促愈汤治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效及对胃肠道激素的影响。方法 以2019Gefitinib-based PROTAC 3说明书年3月—2020年11月来该院就诊的124例慢性萎缩性胃炎为研究对象，依据随机对照法将患者分为研究组和参照组，每组62例。参照组患者在生活方式干预的基础上，采用西药常规疗法治疗。生活方式干预包括：规律饮食，劳逸结合、保持心情舒爽，戒烟戒酒等。口服奥美拉唑肠溶胶囊，2次/d, 20 mg/次；口服克拉霉素缓释片，2次/d, 1次0.5 g/次；口服阿莫西林分散片，1次/d, 0.25 g/次。研究组在对照组治疗的基础上，口服温中复原促愈汤治疗。两组连续治疗3个月。比较两组治疗前后脾胃虚寒证中医证候积分变化；比较两组治疗疗效；比较两组治疗前后胃镜下评分、病理组织评分和生活质量评分变化情况；比较两组治疗前后胃肠激素水平变化情况。结果 研究组治疗总有效率高于参照组(P<0.05);两组治疗后胃脘痛、喜温喜按、食少纳呆、大便稀溏和乏力气短等中医证候较治疗前降低，且研究组治疗后中医证候降低幅度大于参照组(P<0.05);两组治疗后胃镜下评分、病理组织评分较治疗前降低，生活质量评分较治疗前升高。且研究组治疗后胃镜下评分、病理Progestin-primed ovarian stimulation组织评分低于参照组，生活质量评分高于参照组(P<0.05);两组治疗后胃肠激素胃动素、胃泌素和生长抑素较治疗前升高，且研究组治疗后胃肠激素胃动素、胃泌素和生长抑素水平高于参照组(P<0.05)。结论 温中复原促愈汤治疗慢性萎缩性胃炎疗效确切，可降低患者的中医证候积分，促进胃功能恢复，调节胃肠道激素，改善患者的生活质量，提高治疗疗效，值得进一步更多探讨。

目的：研究拔伸松动手法对膝关节骨性关节炎模型兔早中晚期关节软骨中P38MAPK信号通路及相关因子的影响，从细胞分子水平研究推拿手法对早中晚期膝关节骨性关节炎的作用Education medical机制。方法：健康成年白兔90只，体重1.8 千克－2.5 千克，雌雄不限，重量分布均一。随机分为三组，每组10只：拔伸松动法组、模型组、空白组。采用Videman T造模方法，管型石膏伸直位固定兔右后肢膝关节2、4、6 周，复制膝关节骨性关节炎早期、中期和晚期的模型。造模完成后三天，治疗组以拔伸松动手法干预，治疗20 次后取标本，采用RT-PCR、Western Blot、IHC检测P38MAPK信号通路及相关因子的表达水平。结果：早期结果：经过治疗后早期治疗组关节软骨和模型组比较MMP1、MMP13、PTGER2、COX2、INOS、P38MAPK的mRNA表达、蛋白表达水平以及平均光密度值(IOD)略有降低，MMP13的mRNA表达水平和PTGER2蛋白表达Panobinostat纯度水平有差异(P＜0.05)。中期结果：经过治疗后中期治疗组关节软骨和模型组比较MMP1、MMP13、COX2、PTGER2、P38MAPK的蛋白表达水平以及平均光密度值(IOD)明显降低，MMP1、MMP13、PTGER2、P38MAPK的蛋白表达水平组间比较有显著差异(P＜0.05)。晚期结果：经过治疗后晚期治疗组关节软骨和模型组比较MMP1、MMP13、PTGER2、COX2、INOS、P38MAPK的mRNA表达、蛋白表达水平以及平均光密度值(IOD)显著降低，MMP1、MMP13、COX2、P38MAPK的mRNA表达、蛋白表达水平有显著差异(P＜0.05)，PTGER2和INOS蛋白表达水平无差异。结论：拔伸松动法可通过下调兔KOA早中期P38MAPK信号通路的表达，影响MMP1、MMP13、INOS、COX2、PTPexidartinib molecular weightGER2等相关因子的表达水平，改善KOA软骨细胞功能，有利于损伤软骨组织的修复。

流域地表特征与土地利用结构同流域水环境质量关系密切。流域空间结构指标能够表征流域空间结构特征和生态功能，主要包括流域特征指标和景观格局指数等。为探讨海湾流域生态系统结构与药物污染特征之间的关系，以浙江象山湾为研究区域，采用固相Alpelisib试剂萃取、超高效液相色谱质谱联用等分析手段，研究流域水环境中药物的污染水平、分析其分布特征与流域特征指标和景观结构的关系。结果表明，象山湾22个流域共有22种药物检出，总检出浓度范围为n.d.—220.2 ng/L,主要包括林可霉素、大环内酯类、喹诺酮类、抗癫痫药PCR Equipment物、β受体阻滞剂、抗抑郁药物，其中林可霉素、大环内酯类和抗癫痫药物的检出率高达100%,检出浓度分别为2.36—29.1 ng/L、n.d.—35.8 ng/L和n.d.—37.5 ng/L。流域地貌结构指标与水环境药物污染关系密切，其中平均坡度(MS)与药物总浓度、面积高程曲线斜率(SAEC)与β受体阻滞剂都呈显著负相关关系(P<0.01);流域景观结构也与水环境药物污染紧密相关，其中景观蔓延度指数(CONTAG)、城镇用地面积加权平均形状因子(IsSHAPE-AM)、林地最大斑块景观面积比(fLPI)与药物总浓度呈显著负相关关系(P<0.05),Shannon均匀度指数(SHEI)与药物总浓度呈显著正相关关系(P<0.05)。通过明确药物与流域空间IDN-6556生产商结构指标的关系，可为应用景观生态措施进行流域管理提供科学依据。