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研究目的:已有研究表明,运动后血液同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平升高,急性剧烈运动后Hcy升高更显著,经常训练的运动员群体血液中的Hcy水平显著超出正常水平,被称为运动导致的高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)。血液Hcy过高会引起血管内皮细胞损伤和功能障碍,是导致血管粥样硬化、脑卒中等心血管疾病的独立危险因素。维生素B9(叶酸)能够降低血液中同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平,减少血管炎症和卒中风险。人体自身无法合成叶酸,只能从食物中获取。已知基因型是影响叶酸吸收和Hcy降低的重要影响因素。MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRRA66G是最常见的三个单核苷酸多态性(SNP)位点,影响叶酸代谢酶的活性,进而影响血液中Hcy的降低。在我国汉族人群中,上述基因突变率显著高于西方人。因此,我国运动人群中应有更多人存在运动相关HHcy风险,危害他们的心脑血管健康。针对现在核酸检测普遍操作繁琐、需要专业实验室和专业操作人员的缺点,本研究利用全基成的微流控基因芯片技术,建立了无创伤、全自动、免人工操作、不需要专业人员的叶酸代谢基因型检测技术和系统,能够安装在体育场馆、学校、甚至运动现场附近,使运动人员能够方便、快速、准确地把握自身的叶酸代谢能力,进而开展精准的运动营养补充,防范运动相关HHcy风险和心血管疾病风险。研究方法:基于无创伤、全自动、免人工操作的基因检测系统,来实现叶酸代谢基因型的检测。主要技术内容包括:环介导的核酸恒温扩增(LAMP,Loop-mediated isothermal Amplification)技术,核酸扩增的可视化检测技术,全集成的微流控基因芯片技术。本基因检测系统由核酸提取模块、扩增模块和检测分析仪组成。核酸提取模块中样本细胞被裂Bafilomycin A1小鼠解,DNA被捕获并通过硅胶膜洗脱。在核酸扩增模块捕获的DNA与LAMP试剂进行混合,后注入检测芯片进行扩增反应。分析仪实现检测结果的自动判断,由三个模块组成:气路模块、加热模块和光学扫描模块。系统完全自动化操作,实现了”样本输入-应答-输出”的检测模式。目标基因序列由美国国家生物技术信息中心(NCBI)获得,使用SnpGene软件针对MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRRA66G位点设计LAMP引物,引物由生工生物(上海,中国)合成。采用口腔拭子获取检测样本。利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测多个基因位点,等温扩增检测反应程序为恒温65℃,45min。利用染料实现核酸扩增检测结果的可视化,反应室的颜色表示是否存在基因扩增,如果存在基因扩增,阳性反应后试剂的颜色从紫色变为绿色。通过对比反应前后试剂颜色进行SNP位点的判断。每个SNP位点需要两个反应腔进行检测,分别检测突变型和野生型,若两检测腔颜色都变为绿色,则说明该基因型为杂合子。使用PCR加一代测序技术作为金标方法开展对比测试,验证本系统的检测准确性。PCR检测体系为:缓冲液、引物、热启动酶(Hot start enzyme)、DNA模板和无核酸水。反应程序为:95℃进行5min,94℃进行30s,60℃进行30s,72℃进行1min。PCR产物测序由生工生物(上海,中国)完成。测序结果使用BioEdit软件进行分析。在体育高校招募受试者,要求具有一定的运动等级或经常进行体育活动,存在运动致HHcy的风险。采集受试者口腔拭子样本,使用建立的全自动基因检测系统进行MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRRA66G基因位点基因检测。统计基因型分布以及各基因突变率,分析潜在HHFc-mediated protective effectscy风险。研究结果:通过与基因测序结果对比,本研究搭建的全自动基因检测系统的灵敏度和特异性表现良好,并且基因芯片室间无交叉污染,SNP位点的分型检测的灵敏度达到300 copies/μl。完成26名运动人员的MTHFR MTRR全自动基因检测。26人成功检出,结果与基因测序结果一致。MTHFR C677T基因CC野生型4人,CT杂合型10人,TT突变型12人,C等位基因的频率为0.364,T等位基因的频率为0.654;MTHFR A1298C基因AA野生型21人,AC杂合型1人,CC突变型4人,A等位基因的频率为0.827,C等位基因的频率为0.173;MTRR A66G基因AA野生型24人,AG杂合型2人,无GG突变型,A等位基因的频率为0.962,G等位基因的频率为0.038。风险基因型MTHFR C677T位点TT型12人,MTHFR A1298C位点CC型4人,MTRR A66G位点AG型2人,只有一人同时有TT与AG基因型,其他个体均为单一位点突变风险。研究结论:利用全集成微流控基因芯片技术和可视化核酸简易检测技术,首次成功建立了对MTHFR、MTRR基因位点SNP的全自动基因检测体系,特异性好、灵敏Ferrostatin-1体内实验剂量度高。受试者基因突变率:MTHFR C677T>MTHFR A1298C>MTRR A66G。17名运动人员存在风险基因型,因此存在运动相关的HHcy风险以及心血管健康风险。上述人群的基因型特征表明,普通饮食已经无法满足需求,应在运动前服用叶酸补剂,来避免运动导致的血液中Hcy水平过高。本研究研发的叶酸代谢基因型全自动检测系统,实现了运动人员叶酸补充的精准化和个体化,在个性化精准运动营养领域,实现技术创新。

目的:观察苓桂术甘汤对心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌纤维化及心肌组织Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响,探讨点击此处其抑制心肌纤维化的作用和可能机制。方法:采用冠脉左前降支结扎法复制心肌梗死后慢性心衰大鼠模型;造模24 h后,连续干预4 w。采用小动物彩色Tumor biomarker多普勒超声成像系统检测大鼠LVIDd、LVIDs、LVEF、LVFS;HE及Masson染色观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CK-MB、cTnT及心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ水平;Western Blot检测大鼠心肌组织Wnt1、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及细胞核β-catenin蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVIDd、LVIDs水平显著升高,LVEF、LVFS水平显著降低(P<0.01),心肌组织出现明显的心肌细胞排列紊乱,心肌纤维部分断裂及间质纤维化等病理变化,血Z-IETD-FMK体内清CK-MB、cTnT和心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ含量及CollagenⅠ/CollagenⅢ比值显著升高,心肌组织细胞质GSK-3β蛋白表达显著降低,心肌组织α-SMA蛋白及细胞质Wnt1、β-catenin、pGSK-3β蛋白和细胞核β-catenin表达显著升高,心肌组织β-catenin、MMP-9 mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,苓桂术甘汤干预4 w后,上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:苓桂术甘汤能减轻心肌梗死后慢性心衰大鼠心肌损伤并抑制心肌纤维化,改善CHF大鼠心功能,此作用与其抑制心肌组织Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

目的 探讨健脾清化化瘀汤治疗胃癌前病变的可能作用机制。方法 将90只健康清洁级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为6组，包括正常组、模型组、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)抑制剂组、健脾清化化瘀汤低剂量组、健脾清化化瘀汤中剂量组、健脾清化化瘀汤高剂量组。除正常组外，其Ipatasertib临床试验余5组大鼠均用1×10~(9 )CFU/mL幽门螺杆菌(helicobacter pylori, HP)菌液灌胃7次，平均2次/周。确认HP感染后，除正常组外，其余5组均予150μg/mL甲基-N-硝基-N亚硝基胍(MNNG)溶液灌胃，频率5次/周，同时予100μg/mL MNNG溶液自由饮用，配合0.03%雷尼替丁饲料喂养、饥饱失常法(2天足量饲料喂养，1天禁食),持续造模28周。造模成功后，健脾清化化瘀汤低、中、高剂量组分别给予相应剂量健脾清化化瘀汤灌胃，iNOS抑制剂组给予氨基胍溶液50 mg/(kg·d)剂量进行灌胃，SAG分子量正常组及模型组予以生理盐水进行灌胃，均1次/天，干预治疗10周。干预结束后，运用苏木精—伊红染色观察大鼠胃黏膜病理变化；运用免疫组化法检测胃组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)蛋白表达；运用RT-PCR法检测胃组织miR-21、PTEN mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜可见腺体萎缩、肠化、异型增生，健脾清化化瘀汤中、高剂量组及iNOS抑制剂组较模型组有不同程度的改善，健脾清化化瘀汤低剂量组改善不明显。各ventral intermediate nucleus组大鼠胃黏膜miR-21、PTEN mRNA、PTEN蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.01)。与空白组比较，模型组miR-21表达显著升高(P<0.01),PTEN mRNA、蛋白表达显著下调(P<0.01;P<0.01);与模型组比较，健脾清化化瘀汤中、高剂量组、iNOS抑制剂组miR-21表达下调(均P<0.01),PTEN mRNA、蛋白表达升高(P<0.05;P<0.01),健脾清化化瘀汤低剂量组miR-21、PTEN mRNA、蛋白表达较模型组差异均无统计学意义。结论 健脾清化化瘀汤可能通过下调胃黏膜miR-21的表达，解除miR-21对PTEN表达的抑制，进一步激活PTEN下游信号通路，从而缓解胃黏膜病变，阻断胃癌前病变向胃癌进展。

基于非受体酪氨酸激酶（sarcoma receptor coactivator，Src）/磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）信号通路探索草乌甲素改FG-4592善实验性类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）骨破坏的作用机制。通过GeneCards、PharmGKB和OMIM数据库收集RA骨破坏的关键靶点，利用SwissTargetPrediction和PharmMapper数据库收集草乌甲素的潜在靶点，借助Venny 2.1.0平台获得交集靶点，运用STRING数据库及Cytoscape 3.8.0进行蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网络构建及拓扑分析。在DAVID数据库进行基因功能注释（Gene Ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析，运用AutoDock Vina对草乌甲素与关键靶点进行分子对接和结合能力预测。最后建立NF-κB配体受体激活物（receptor activator of nuclear factor-κB，RANKL）诱导体外破骨细胞分化模型，采用定量实时聚合酶连锁反应法（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测相关靶点mRNA表达水平，免疫荧光法、蛋dental pathology白免疫印迹法检测关键靶点蛋白表达水平。结果发现，药物-疾病靶点共29个，Src为草乌甲素抗RA骨破坏的核心EPZ-6438靶点。KEGG富集分析发现草乌甲素可能通过调控Src/PI3K/Akt信号通路发挥抗RA骨破坏的作用。分子对接结果显示，草乌甲素与Src、磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶（phosphatidylinositol-4，5-diphosphate 3-kinase，PIK3CA）和AKT1均有较好的结合能力。实验验证结果显示，草乌甲素不仅剂量依赖性地抑制破骨细胞分化相关基因组织蛋白酶K（cathepsin K，CTSK）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）mRNA的表达（P<0.01），还显著降低体外破骨细胞中p-c-Src、PI3K及p-Akt的表达（P<0.01）。综上，草乌甲素可能通过调控Src/PI3K/Akt信号通路抑制RA骨破坏。该研究为草乌甲素改善RA骨破坏提供实验支撑，也将为草乌甲素的临床应用奠定基础。

目的：分析铁死亡相关基因DPP4在泛癌中selleck化学的表达及其在肿瘤免疫、预后等方面的作用，探讨DPP4在肿瘤免疫治疗及临床预后中的价值。方法：利用CCLE、TCGA及GTEx数据库对铁死亡相关基因DPP4进行泛癌的差异表达分析，并通过Kaplan-Meier及Cox回归分析DPP4与肿瘤预后的相关性；使用CIBERSORT算法评估TIMER数据库中肿瘤免疫细胞浸润情况，ESTIMATE算法评估肿瘤微环境，Spearman检验分析基因表达与免疫新抗原、肿瘤突变负荷及微卫星不稳定性的关联；GSEA软件研究DPP4在肿瘤中的表达与信号通路的相关性。结合人类蛋白质图谱数据库、TCGA数据库及GEO数据库对分析结果进行验证。结果：DPP4基因在多种肿瘤中的表达差异具有统计学意义，且与多种肿瘤的生存及预后密切相关，其中在嗜铬细胞瘤和副神经节瘤（PCPG）、胸腺癌（THYM）中可作为保护因素，对肿瘤预后有正向作用；DPP4与肿瘤的多种免疫细胞浸润及免疫微环境密切相关，最显著相关的3类肿瘤为膀胱尿路上皮癌（BLCA）、乳腺浸润癌（BRCA）、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤（PABT-199小鼠CPG）;DPPRodent bioassays4与免疫新抗原、肿瘤突变负荷与微卫星不稳定性显著相关；GSEA分析结果显示存在多个与DPP4在肿瘤中高低表达相关的生物学通路，主要集中于物质代谢及炎症反应等通路；人类蛋白质图谱和TCGA、GEO数据库证实DPP4在肺癌、乳腺癌、直肠癌和前列腺癌中表达存在差异。结论：铁死亡相关基因DPP4可作为肿瘤免疫治疗的生物靶点用于泛癌预后评估，对临床肿瘤诊断、治疗及预后具有重要意义。

目的:多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种主要发生于中枢神经系统的自身免疫脱髓鞘性疾病。全球有超过两百万人罹患此病,患者主要为年轻女性。其典型病理特征是中枢神经系统局灶性脱髓鞘性斑块,轴突损伤和星形胶质细胞增生等。MS患者的临床表现多样,病因尚未完全明确。目前的治疗手段无法治愈MS,常用的治疗药物,如富马酸二甲酯等,被报道具有一定的副作用。炎性小体是一种多分子信号复合体,可以感受损伤和压力信号,促进促炎细胞因子的成熟和分泌。其中,NLRP3炎性小体是目前研究最为广泛的炎性小体。研究表明,NLRPImmune landscape3炎性小体参与多种免疫炎症性疾病,并且在中枢神经系统疾病中也有相关报道。炎性小体的激活可以介导焦亡发生,这是一种程序性细胞死亡,在MS中起到重要作用。作为脑内关键的免疫细胞,小胶质细胞在MS中也发挥着重要作用。大黄素是一种来源于大黄等草本植物的天然产物,具有抗炎和抗氧化等多种作用。目前的研究发现,大黄素对于中枢神经系统疾病具有神经保护作用。本研究采用实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型—一种经典的MS动物模型,初步探讨大黄素对于EAE的神经保护作用,以及在这一过程中涉及到的潜在作用机制。研究方法:一建立EAE大鼠模型及小胶质细胞炎症模型,探究大黄素对于EAE大鼠模型的神经保护作用,以及对小胶质细胞炎症的抑制作用1.建立EAE大鼠模型。从造模日开始,每日腹腔注射大黄素或相应溶剂,直到取材前一天。记录大鼠每日的体重及神经行为学评分;通过HE染色评价脑和脊髓内炎性细胞的浸润程度;通过LFB染色评价脊髓脱髓鞘的程度;q RT-PCR,NO检测和ELISA用于评价炎症相关因子的表达水平;通过免疫组织化NSC 127716说明书学染色评价脊髓内Iba-1和CD68的表达水平。2.建立小胶质细胞的炎症模型。通过CCK8法评价细胞的活力;通过NO检测和ELISA评价炎症相关因子的表达;通过荧光和流式实验检测ROS的水平。二探究大黄素对于EAE大鼠模型和小胶质细胞炎症模型中NLRP3炎性小体及焦亡的影响1.在体内实验中,通过Western blot检测NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过q RT-PCR和ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平。2.在体外实验中,通过Western blot检测NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平;通过Calcein-AM/PI染色评价细胞死亡程度。三大黄素影响NLRP3炎性小体和焦亡的机制研究1.通过网络药理学相关技术,预测大黄素影响MS的潜在作用靶点。2.通过分子对接,模拟大黄素与潜在作用靶点的结合;通过Western blot检测体内外实验中,潜在作用靶点的蛋白表达水平。3.在体外实验中,使用siRNA转染小胶质细胞,敲减潜在作用靶点(荧光,q RT-PCR及Western blot用于转染效率的验证);使用靶点抑制剂,抑制潜在靶点的蛋白表达(CCK8法和Western blot用于抑制效率的验证)。通过Western blot检测潜在作用靶点及其下游分子,NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平。4.在体外实验中,通过使用抑制剂来抑制潜在靶点的下游分子的蛋白表达(CCK8法和Western blot用于抑制效率的验证)。通过Western blot检测潜在作用靶点及其下游分子,NLRP3,ASC和cleaved-caspase-1的蛋白表达水平;通过ELISA检测IL-1β和IL-18的表达水平;通过LDH检测和GSDMD-N的Western blot检测,评价焦亡水平。结果:1.与正常对照组大鼠相比,疾病模型IACS-010759使用方法组大鼠的体重显著减少,神经行为学评分明显升高;脊髓内炎性细胞浸润和脱髓鞘的程度明显增加;脑内炎性细胞浸润的程度显著增加;脊髓组织及血清中炎症细胞因子的表达水平显著升高;脊髓组织内Iba-1和CD68的表达增加。与疾病模型组相比,在大黄素治疗组中,这些指标都有明显的改善。此外,与正常对照组相比,在大黄素对照组中这些指标无显著改变。2.与对照组的小胶质细胞相比,小胶质细胞炎症模型组中促炎因子表达增加,抗炎因子表达减少,ROS水平升高。而大黄素处理后可以显著抑制促炎因子的表达,增加抗炎因子的表达,并且降低ROS的水平。3.与正常对照组大鼠相比,疾病模型组大鼠的脊髓组织内NLRP3,ASC,cleaved-caspase-1和GSDMD-N的蛋白表达显著增加;脊髓组织内IL-1β和IL-18的m RNA的表达明显增加;血清中IL-1β,IL-18和LDH的水平显著升高。在大黄素治疗组中,这些指标的表达水平均显著降低。与正常对照组相比,在大黄素对照组中这些指标无明显改变。4.与对照组的小胶质细胞相比,小胶质细胞炎症模型组的NLRP3,ASC,cleaved-caspase-1和GSDMD-N的蛋白表达明显增加;细胞培养上清液中IL-1β,IL-18和LDH的表达明显增加;细胞死亡程度加重。大黄素处理后可以显著抑制这些指标的增加。5.结合网络药理学的结果和现有文献,SIRT1可能是大黄素影响MS的潜在作用靶点,PGC-1α是SIRT1的可能下游;分子对接结果表明,大黄素与SIRT1之间的结合可能性很大;Western blot的结果显示,在体内外模型组中,SIRT1和PGC-1α的表达水平下降,而大黄素处理之后可以增加它们的表达。6.在体外实验中,使用SIRT1的siRNA转染和抑制剂(EX527)可以显著抑制细胞内SIRT1的表达。与治疗组相比,转染后细胞内SIRT1和PGC-1α的表达水平明显降低,转染组细胞的NLRP3炎性小体和焦亡的相关指标表达显著增加,提示大黄素通过SIRT1调控NLRP3炎性小体活化和焦亡。然而,抑制剂组对于相关指标的影响并不显著。7.在体外实验中,使用PGC-1α抑制剂(SR-18292)可以明显降低细胞内PGC-1α的表达水平。与治疗组相比,抑制剂组细胞的PGC-1α的表达显著减少,但是SIRT1的表达水平并无明显改变,结合前面的结果,提示PGC-1α可能是SIRT1的下游因子;此外,抑制剂组细胞的NLRP3炎性小体和焦亡的相关指标表达显著增加,说明PGC-1α参与了大黄素对NLRP3炎性小体活化和焦亡的调控。因此,大黄素可能是通过SIRT1/PGC-1α途径调控NLRP3炎性小体活化和焦亡。结论:1.大黄素可以改善EAE大鼠模型的临床症状,抑制脊髓内炎性细胞浸润和脱髓鞘的程度,抑制脑内炎性细胞浸润的程度,减轻炎症水平,进而发挥神经保护作用;大黄素可以抑制小胶质细胞炎症模型的炎症水平。2.在EAE大鼠模型和小胶质细胞炎症模型中,大黄素可以抑制NLRP3炎性小体活化和焦亡的水平。3.大黄素通过SIRT1/PGC-1α途径调控NLRP3炎性小体活化和焦亡。

目的:本课题旨在研究六氨基乙酰丙酯(Hexylaminolaevulinate,HAL)介导的光动力疗法(Photo Dynamic Therapy,PDT)联合吡柔比星(Pirarubicin,THP)在体外对膀胱癌细胞系的杀伤作用及抑制侵袭和迁移作用,并阐明其机理。方法:将膀胱癌细胞株RT4和T24细胞分为空白对照组(Control组)、光动力治疗组(PDT组)、吡柔比星组(THP组)、光动力治疗联合吡柔比星组(PDT+THP组),利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用Hochest33342/PI双染检测各组细胞凋亡,Western blot检测各组耐药蛋白P-gp蛋白的变化,RT-q PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的变化;通过正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞构建3D共培养模型,利用细胞迁移实验与细胞侵袭实验检测各组对膀胱癌细胞侵袭与迁移的抑制作用;采用Western blot检测整合素integrinα3β1、上皮-间充质转变标记物E-cadherin、N-cadherin、基质蛋白MMP2和MMP9和Smad2/3蛋白的表达,研究可能参与的机制。研究还通过膀胱癌类器官进行验证,观察类器官的生长情况、形态结构的变化、HE染色情况以及整合素integrinα3β1、N-cadherin的表达。结果:1.膀胱癌细胞株RT4和T24细胞经PDT(12.500μg/ml,10 min)、THP(RT4:0.500μg/ml,T24:1.25μg/ml)以及PDT+THP处理24 h后,T24细胞PDT组、THP组、PDT+THCompound C分子式P组细胞存活率分别为65.79±6.33%、64.42±8.72%、27.52%±6.46,RT4细胞各组细胞存活率分别为52.38±2.39%、60.09±3.55%、17.72±4.23%。PDT+THP使膀胱癌细胞株RT4和T24细胞的P-gp蛋白表达下调、Bcl-2rapid immunochromatographic tests基因表达上调以及Bax基因表达下调。2.采取Transwell实验以及划痕实验检测各组对膀胱癌细胞株RT4和T24细胞侵袭和迁移能力的影响。膀胱癌细胞株RT4和T24细胞经PDT(12.500μg/ml,5 min)、THP(0.125μg/ml)以及PDT+THP处理24 h后,T24细胞Control组,PDT组、THP组、PDT+THP组OD值分别为1.24±2.65、0.74±1.98、0.87±0.93、0.25±2.32,RT4各组OD值分别为0.89±3.23、0.48±0.39、0.65±1.98、0.19±2.39;T24细胞Control组、PDT组、THP组和PDT+THP组伤口愈合率分别为60.54±2.32%、68.98±3.43%、13.87±4.32%,RT4各组伤口愈合率分别为45.92±5.34%、48.23±4.33%、10.23±3.49%。PDT+THP组使E-cadherin蛋白表达增加、integrinα3β1、N-cadherin、MMP2、MMP9表达减少,p-Smad2/3蛋白表达显著降低,Smad2/3转录因子在细胞核的荧光信号减弱。3.膀胱癌类器官经PDT(12.500μg/ml,10 min)、THP(RT4:0.500μg/ml,T24:1.250μg/ml)以及PDT+THP处理72 h后,Control组、PDT组、THP组和PDT+THP组膀胱癌类器官最大生长尺寸(n=5)分别为(95.76±2.11)nm、(73.83±3.21)nm、(70.22±3.98)nm、(36.77±3.21)nm;各组的膀胱癌类器官表面积(n=5)分别为(6.92±3.21)nm~2×1000、(4.12±2.11)nm~2×1000、(4.58±3.76)nm~2×1000、(2.32±2.78)nm~2×1000。联合治疗能够抑制类器官的生长、降低类器官最大尺寸和表面积,使类器官边缘毛糙selleckchem SB203580、缺损,使整合素integrinα3β1以及间充质标记物N-cadherin表达减少。结论:1.PDT+THP对膀胱癌细胞株RT4和T24细胞有协同杀伤作用,机制可能与联合治疗后膀胱癌细胞的P-gp蛋白下调、Bcl-2基因表达上调以及Bax基因表达下调,从而降低了癌细胞的耐药性以及促进了癌细胞的凋亡有关。2.低剂量的PDT+THP对膀胱癌细胞株RT4和T24细胞以及膀胱癌类器官迁移和侵袭能力有协同抑制作用,其机制可能与Smad2/3信号通路有关。

目的 探讨高危良性前列腺增生(BPH)经尿道前列腺剜除术(TUEP)与经尿道前列腺电切术(TURP)的安全性和近期效果。方法 前瞻性纳入2021-BYL719说明书03—2022-11于新乡医学院第一附属医院泌尿外科行手术治疗的高危BPH患者，根据手术方法分为TUEP组和TURP组。比较2组患者的基线资料、手术指标、手术前后的最大尿流率(Qmax)、残余尿量(RUV)、生活质量(QOL)评分，以及血清表皮生长因子(VEGF)、胰岛素生长因子-1(IGF-1selleck产品)水平。统计并发症发生率。结果 共纳入86例患者，每组43例，2组患者的基线资料差异无统计学意义(P>0.05)。TUEP组患者的手术时间、术中出血量、前列腺切除质量、膀胱冲洗时间，以及尿管留置时间等手术指标均优于TURP组，差异均有统计学意义(P<0.05)。术前2组患者的Qmax、RUV、QOL评分，以及血清VEGF、Bioclimatic architectureIGF-1水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3个月时，2组患者的上述指标均较术前显著改善，其中TUEP组患者的改善效果优于TURP组，差异均有统计学意义(P<0.05)。TUEP组患者的术后并发症发生率低于TURP组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 对于高危BPH患者，TUEP在优化手术指标，改善Qmax、RUV、QOL评分和血清VEGF、IGF-1水平，以及降低并发症发生率方面较TURP更具优势。

化疗性静脉炎(Chemotherapy induced phlebitis,CIP)的发生不仅增加患者静脉输液痛苦,同时也影响到有序的临床诊疗护理工作进程,所以静脉输液治疗中CIP的防治工作十分必要。马铃薯片外敷作为临床最常使用的植物外敷治疗CIP方法,因其使用操作经济、简便、有效、易于接受,应用较为普遍广泛,但是其作用机制尚不完全清楚。本研究(1)对新鲜马铃薯片外敷和50%硫酸镁湿敷,防治化疗性静脉炎的有效率进行系统评价。根据设定的研究对象和纳入排除标准,将文献收集分成两个时间阶段,开展了两次Meta分析研究,以期为临床应用提供参考依据。按照Meta分析的PICO原则。第一阶段,文献检索时间:建库到2017年12月。研究对象:化疗性静脉炎患者以及静脉输注高浓、高渗、高强刺激性药液患者。观察组为马铃薯片外敷患者,试验组为硫酸镁湿敷患者。Meta分析,第一阶段研究,涉及临床964例病例患者,其中马铃薯片组486例,硫酸镁组478例。采用随机效应模型,总体效应检验Z=5.37,P<0.01。第一阶段Meta分析结果显示:应用马铃薯片外敷组防治总有效率优于硫酸镁湿敷组,其结果具有统计学意义。第二阶段,文献检索时间范围:建库到2022年1月。研究对象:静脉炎患者,涵盖化疗性静脉炎的患者。限定观察组Navitoclax核磁是新鲜马铃薯片外敷患者,试验组是50%硫酸镁湿敷患者。排除非随机对照研究或两个以上对照组,不限定静脉输液用药,以及患者年龄、病种和性别及外敷观察天数。第二阶段研究,临床病例患者1557例。新鲜马铃薯片组808例,50%硫酸镁组749例。采用固定效应模型分析,总体效应检验Z=10.34,P<0.01,第二阶段Meta分析结果显示:新鲜马铃薯片外敷组防治化疗性静脉炎总有效率优于50%CH-223191生产商硫酸镁湿敷组,其结果具有统计学意义。(2)实验研究,探讨α-茄碱(α-Solanine)对临床常用的抗肿瘤化疗性药物5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil)诱导的血管内皮细胞炎症反应的保护作用。在进行Meta分析研究的过程中,通过采集阅读大量国内外文献,发现马铃薯内含有的马铃薯糖苷生物碱(Glycoalkaloid)具有良好的消除局部炎症,缓解疼痛、抗组织胺和抗变态反应作用。动物实验研究显示,能够明显抑制和缓解实验动物的水肿及炎症,有抗病原微生物、消炎镇痛、增强机体免疫力等药理学作用活性。分析马铃薯糖苷生物碱的有效成分,α-茄碱(α-solanine)和α-查茄碱(α-chaconine)占其总含量的90%以上,是其主要形式。其中α-茄碱具有抗肿瘤、抗微生物和抗寄生虫等广泛多样生物活性,但其潜在的药物活性和协同作用机制还不够深入,具有一定的研究应用前景。本实验研究中,采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs),因其人脐静脉内皮细胞在功能上与血管内皮细胞相似且较易获得。实验研究分成四个组,分别为空白对照组、5-氟尿嘧啶组、α-茄碱组、5-氟尿嘧啶+α-茄碱组。空白对照组不加入任何刺激物,5-氟尿嘧啶组用终浓度为10 mmol/L的5-氟尿嘧啶刺激细胞24h,α-茄碱组用终浓度为5μmol/L的α-茄碱刺激细胞24h,5-氟尿嘧啶+α-茄碱组用终浓度为10 mmol/L的5-氟尿嘧啶和终浓度为5μmol/L的α-茄碱刺激细胞24h。24h后,采用免疫荧光染色实验(Immunofluorescence,IF)检测空白对照组和5-氟尿嘧啶组中GSDME和GSDMD的表达。24h后收集各组细胞,采用蛋白质免疫印迹实验(Western Blot,WB)和聚合酶链式反应实验(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)将各组中GSDME、GSDMD和IL-1β进行表达。在免疫荧光染色实验的结果中显示,5-氟尿嘧啶刺激导致人脐静脉内皮细胞胞浆中的GSDME明显增多,但GSDMD并无明显变化。在RT-PCR和Western Blot实验中结果显示,5-氟尿嘧啶刺激导致人脐静脉内皮细胞中GSDME和IL-1β的表达明显增多,但GSDMD的表达并无明显变化,α-茄碱可以抑制5-氟尿嘧啶刺激导致的GSDME、IL-1β的表达增多。综上所述,本研究Meta分析结果提示,新鲜马铃薯片外敷有效预防治疗化疗性静脉炎,效果优于50%硫酸镁湿敷。实验研究中,5Biosorption mechanism-氟尿嘧啶可以诱导血管内皮细胞炎症反应,表现为GSDME而非GSDMD介导的细胞焦亡增加;α-茄碱可以抑制5-氟尿嘧啶刺激导致的GSDME和IL-1β信号通路,减轻细胞炎症反应。α-茄碱的药用功效正在医药领域被进一步研究,深度挖掘,新鲜马铃薯片外敷防治化疗性静脉炎,既减轻患者的痛苦,又降低医疗费用,是中药经典传统方法在静脉炎防治方向的探讨。

目的本研究旨在观察健脾补肾方对骨髓增生异常综合征患者乏力的疗效以及外周血各项指标的影响,分析健脾补肾方在骨髓增生异常综合征治疗过程中的临床意义。方法本研究将30例骨髓增生emerging pathology异常综合征患者随机分确认细节为实验组和对照组,每组15例。对照组采用输血、促生血或去甲基化等常规西医治疗,实验组在对照组基础上加补肾健脾方。治疗8周后,利用Piper疲乏量表评估两组治疗前后的评分变化,并分析外周血细胞计数、细胞因子以及生化指标。结果1.Piper疲乏量表评分:治疗后对照组认知维度评分较前降低(P<0.05),总体评分、行为维度、情感维度及感知维度较治疗前无明显改善(P>0.05);实验组总体评分及行为维度、情感维度、感知维度及认知维度相比治疗前均下降(P<0.05),情感维度及认知维度的改善更为明显。2.中医证候疗效评估:治疗后对照组的食少纳呆、浮肿、腰膝酸软及畏寒肢冷4个证候均未见改善(P>0.05),实验组的食少纳呆和腰膝酸软有明显改善(P<0.05)。3.外周全血细胞计数:对照组患者的三系血小板较治疗前无明显改善,实验组患者的中性粒细胞、红细胞及血红蛋白相比治疗前均显著提高(P<0.05selleck NMR),白细胞也有一定程度的升高,但差距无统计学意义(P>0.05)。4.细胞因子水平:对照组治疗前后IL-2、IL-4、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-8、IL-17A、IL-γ、IL-α、IL-5、IL-12p70、IL-1β未见明显改善,实验组治疗后IL-4、IL-5及IL-17A在正常范围内可见明显升高(P<0.05)。5.生化指标:两组患者治疗前后血清总蛋白、白蛋白及球蛋白水平均未见变化,钠离子及血清铁水平也无明显改善。实验组治疗后血清钾水平有所提升,乳酸脱氢酶水平有所下降,对照组则未见明显改变。结论健脾补肾方联合西医常规治疗能改善患者的乏力症状及中医证候,提髙生命质量,改善患者预后,并能提高部分血细胞计数、调节细胞因子含量、改善血清钾水平及降低乳酸脱氢酶。