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刚毛藻(Cladophora sp.)凭借强大的环境适应性异常增殖现象在淡水和海洋浅水区普遍存在。探讨了不同配置、不同提取方式及不renal pathology同质量浓度的植物浸提液对刚毛藻生长及光合系统的影响，以期为刚毛藻的防治提供科学依据。结果表明：银杏叶、柳树叶及两种落叶复配后的水提液均能对刚毛藻的生长表现出极显著抑制效果，其中银杏叶水提液的抑藻效果最好，96 h时的生长抑制率可达66.65%。此外，银杏叶水提液对刚毛藻的光合系统也产生了较高的抑制作用，96 h时最大PSⅡ光能转换效率FCobimetinib_v/F_m、实际光化学效率Yield及非光化学淬灭参数NPQ的抑制率分别达96.69%、99.22%和78.06%。不同提取剂对银杏叶浸提液抑藻效果的实验结果表明，银杏叶乙醇浸提液和丙酮浸提液对刚毛藻的生长抑制作用强于氯仿及水浸提液，其中银杏叶乙醇浸提液对刚毛藻光合系统的抑制效果最好，48 h时F_v/F_m、Yield及快速光曲线初始斜率α值3-Methyladenine核磁抑制率均可达99%。进一步研究不同浓度梯度银杏叶乙醇浸提液抑藻效果显示，浸提液质量浓度与抑藻效果存在正相关，3.00 g/L和6.00 g/L质量浓度组对刚毛藻有显著的抑制效果(P<0.05),6.00 g/L质量浓度组96 h时的F_v/F_m、Yield、α值抑制率分别达到99.87%、100%和100%。综上所述，以植物落叶为原料研制针对刚毛藻的抑藻剂是可行的。

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的间接ELISA方法。本研究以两Nirmatrelvir体内实验剂量株纯化的ASFV p30与p54蛋白单克隆抗体(mAbs)为靶分子，利用噬菌体展示十二肽库进行四轮生物淘选，筛选多肽表位，以氨基酸GGG为接头设计合成表位串联多肽作为包被抗原，通过棋盘滴定法确定间接ELISA的最佳反应条件，利用不同类型血清样本对建立的方法进行特异性分析、敏感度分析、稳定性分析及符合性评价。噬菌体淘选试验结果表明~(146)PAEPYTT~(152)为本实验室保存的mAb所识别的p54蛋白抗原表位核心序列。ELISA条件优化试验结果显示，以鸡卵白蛋白(OVA)作为N端偶联物的表位串联多肽抗原具有较低的非特异性血清反应背景，当多肽以碳酸盐缓冲液包被(2μg·mL~(-1)),血清以封闭液(1%明胶溶液)稀释10Taurine体内实验剂量0倍，辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体以0Familial Mediterraean Fever.05%PBST溶液稀释5 000倍时，反应效果最佳；以上述优化后的条件确定了血清抗体阳性临界值为0.339。方法评价试验结果显示，该方法与经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体阳性血清均无交叉反应，能检测低至1 600倍稀释的ASFV阳性血清，具有较好的重复性。用该方法与商品化的ASFV抗体检测试剂盒同时检测320份猪血清样本，两种方法的相对特异性和相对敏感性分别为97.6%与97.3%,总体符合率达97.5%(312/320)。综上表明，本研究建立的多肽间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性及重复性，具有发展为临床诊断试剂盒的潜在应用价值。

目的 探讨妊娠早期行胰岛素治疗妊娠糖尿病（GDM）的临床效果及对妊娠结局的影响。方法 选取2019年5月至2021年5月广州市番禺区第六人民医院收治的300例GDM患者作为研究对象，按照随机数字表法分为对照组和观察组，每组各150例。对glioblastoma biomarkers照组孕32周后予以胰岛素治疗，观察组孕32周前予以胰岛素治疗，两组患者均持续用药至分娩。比较两组患者临床疗效、血糖控制效果、妊娠结局及低血糖情况。结果 观察组的总有效率高于对照组，差异有统计学意义（Barasertib浓度P<0.05）；观察组分娩前的空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2 h PG）、日间平均血糖波动幅Berzosertib化学结构度（MODD）及24 h平均血糖波动幅度（MAGE）水平均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组的不良妊娠结局发生率低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；两组患者的低血糖发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 妊娠早期行胰岛素治疗GDM效果更佳，能稳定控制血糖水平，减少不良妊娠结局发生，安全可靠。

目的 探索微小RNA-22(miR-22)对妊娠糖尿病(GDM)患者糖代谢的影响。方法 收集2018-01至2019-01在武警广东总队医院就诊的75例妊娠糖尿病孕妇组的胎盘组织作为观察组(GDM组),selleck NMR75例正常妊娠孕妇作为对照组(HC组)。培养人绒毛膜HTR8/Svneo细胞建立细胞模型，检测胎盘绒毛组织和细胞的miRimmune memory-22表达。用人工合成的miR-22类似物和抑制物(反义寡核苷酸)转染HTR8/Svneo细胞，葡萄糖氧化酶法检测体外细胞摄取葡萄糖能力，Western blot检测细胞胰岛素信号通路上的PI3K、AKT、IRS、萄糖转运体4(GLUT4)的表达。设计构建含目的基因野生型和突变型的质粒，双荧光素酶报告基因系统分析miR-22与selleck合成靶基因的关系。结果 GDM胎盘组织和高糖组细胞中miR-22表达均明显低于对照组(P<0.05),miR-22表达与胰岛素抵抗指数呈负相关。GDM组织的IRS、PI3K、AKT、Glut4蛋白表达水平明显低于对照组；miR-22表达时，HTR8/Svneo细胞摄糖升高，Glut4表达升高，miR-22表达抑制时，细胞摄糖减少，GLUT4表达下降；miR-22过表达或抑制时，IRS、PI3K、AKT表达明显降低。双荧光素酶报告基因系统实验显示SLC2A4基因(编码GLUT4)是miR-22调节靶点。结论 发生胰岛素耐受时，胎盘绒毛组织和细胞miR-22表达下降，miR-22过表达可以提高体外细胞摄取糖水平，miR-22可能通过调节GLUT4而参与GDM的发病机制。

目的 通过对湘潭Erdafitinib地区育龄女性TORCH感染筛查结果进行总结分析，了解湘潭地区育龄女性TORCH感染情况，为本市改进优生优育工作提供数据参考。方法 选取2017年1月至2021年12月在湘潭市妇幼保健院进行孕前筛查和孕期普查的妇女共23 687例，采用化学发光免Etoposide体内实验剂量疫分析法(CLIA)进行血清anti-TORCH检测。结果 湘潭地区育龄女性的弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒IgM抗体阳性检出率分别为Bioreactor simulation0.24%、0.34%、0.53%和16.42%,IgG抗体阳性检出率分别为1.51%、83.75%、96.93%和82.16%。低龄组(15至35周岁)女性HSV_(1+2)-IgM阳性检出率高于高龄组(35至49岁)。CMV-IgM阳性检出率以秋季为高发期，HSV_(1+2)-IgM阳性检出率以夏、秋两季为高发期。2017～2021年间湘潭地区育龄妇女HSV_(1+2)-IgM的阳性检出率逐年升高，最高为20.99%。结论 开展育龄女性TORCH感染筛查工作，对优生优育及提高人口素质具有非常重要意义。

研究植物次生代谢产物对害螨的作用机制是开发新型植物源杀螨剂的重要策略。滨蒿内酯是一种简单的天然香豆素类衍生物,可从中草药茵陈蒿(Artemisia capillaris Thunb.)中分离提取获得,对害螨具有高效的杀螨活性,但其作用机制和靶点仍不清楚。本论文旨在系统地探索滨蒿内酯对朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)杀螨的潜在分子靶点,并为指导未来将滨蒿内酯用作全球农业害螨的杀螨药剂提供基础支撑。本文利用RNA-Seq、RNAi技术、荧光标记[Ca~(2+)]_i浓度测定技术、原核表达技术、真核表达技术、GST pull-down技术和电压钳技术等实验技术,全面而系统地对滨蒿内酯的杀螨机制和和潜在分子靶点进行探讨;以新颖靶点Ca~(2+)信号通路为切入点,从分子靶标筛选、功能基因分析和活性靶点验证三个层次系统揭示了滨蒿内酯杀螨活性的毒理学分子机制,明确了滨蒿内酯杀螨的作用机理和分子靶标,揭示天然产物滨蒿内酯杀螨活性的新颖靶标位点,主要结果如下:1滨蒿内酯对朱砂叶螨杀螨活性相关的候选靶基因的筛选及鉴定荧光标记[Ca~(2+)]_i浓度测定表明,滨蒿内酯以剂量依赖性方式显著增加昆虫Sf9(Spodoptera frugiperda,草地贪夜蛾)细胞中的[Ca~(2+)]_i水平。其次,滨蒿内酯胁迫下朱砂叶螨的RNA-Seq数据分析表明:在滨蒿内酯和溶剂处理害螨48 h后,251个基因被确定为显著差异表达基因,其中192个基因上调,59个基因下调;使用GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异基因进行功能富集分析表明,在GO和KEGG分析的前10个富集条目中,最富集的条目分别是“VGCC复合物”和“钙信号通路”。这些结果表明,朱砂叶螨体内的Ca~(2+)信号通路基因被滨蒿内酯过度激活。PPI(Protein-Protein Interaction)互作网络分析显示,钙调蛋白(Ca M1)是L-、T-和N-VGCC的主要相关信号分子;q PCR和RT-PCR分析表明,VGCCs和Ca Ms介导的钙信号通路的基因表达被不同浓度滨蒿内酯(LC_(70)、LC_(50)和LC_(30))激活;与其他Ca~(2+)信号通路基因相比,滨蒿内酯对L-VGCC和Ca M1基因表达的上调更为显著。最终,确定了1条L型-电压门控Ca~(2+)通道(VGCC)(Tc L-VGCC)、1条T型VGCC(Tc T-VGCC)、1条N型VGCC(Tc N-VGCC)和5条钙调蛋白(Ca M)(Tc Ca M1-5)介导的“钙信号通路”基因作为滨蒿内酯对朱砂叶螨杀螨活性相关的候选靶基因进行下一步研究。2朱砂叶螨Ca~(2+)通道(Tc L-VGCC、Tc N-VGCC、Tc T-VGCC)和钙调蛋白(Tc Ca M1-5)基因的生物学功能2.1朱砂叶螨3条钙离子通道基因(Tc L-、Tc T-、Tc N-VGCC)和5条钙调蛋白基因(Tc Ca M1-5)的克隆及序列分析序列比对分析结果表明,3条钙离子通道基因(Tc L-、Tc T-、Tc N-VGCC)都有获悉更多四个功能区(结构域I-IV),每个功能区由6个跨膜α-螺旋片段(S1-S6)组成;Tc Ca M1和Tc Ca M5分别包含4个和2个EF-hand结构域,Tc Ca M3包含1个跨膜α-螺旋,Tc Ca M2和Tc Ca M4不具有任何功能结构域;进化树分析表明,Tc L-、Tc T-、Tc N-VGCC与相应的昆虫纲、蛛形纲亲缘关系近,Tc Ca M1和Tc Ca M5与相应的蛛形纲亲缘关系近,Tc Ca M2、Tc Ca M3和Tc Ca M4与相应的昆虫纲亲缘关系近,而都与哺乳动物亲缘关系远;q PCR和RT-PCR分析表明,Tc L-、Tc T-、Tc N-VGCC和Tc Ca M1-5基因在朱砂叶螨所有发育阶段(卵,幼螨,若螨和成螨)都有表达。2.2朱砂叶螨Ca~(2+)通道(Tc L-、N-、T-VGCC)和钙调蛋白(Tc Ca M1-5)基因的RNAi研究q PCR和RT-PCR分析表明,与对照组相比,单独沉默Tc L-、Tc T-、Tc N-VGCC和Tc Ca M1-5基因的RNAi效率为50-72%;此外,L-VGCC和Ca M1的同时RNAi效率分别为68%和60%;生物测定结果表明,分别沉默Tc L-VGCC和Tc Ca M1基因的螨的死亡率显著低于对照组(分别为7.27倍和5.51倍),且同时沉默L-VGCC和Ca M1基因对螨虫死亡率的影响最大(11.48倍),表明Ca M1-和L-VGCC-介导的Ca~(2+)信号通路基因在滨蒿内酯的杀螨机制中扮演着最重要的角色。3滨蒿内酯激活朱砂叶螨Ca M1和L-VGCC基因介导的Ca~(2+)信号通路的分子机制钙调蛋白(Ca M)活性检测表明,滨蒿内酯在体外可以间接激活原核表达的Ca M1重组蛋白,其EC_(50)值为4.92μM;细胞内[Ca~(2+)]_i浓度分析表明,滨蒿内酯处理过表达Ca M1的Sf9细胞中的[Ca~(2+)]_i显著高于GFP表达细胞中的[Ca~(2+)]_i,证实了滨蒿内酯激活了Ca M1介导的螨体内Ca~(2+)信号通路。电生理分析表明,在没有Ca M1的情况下,滨蒿内酯显著增加了仅表达L-VGCC的卵母细胞中的电流,EC_(50)值为5.54μM;与Ca M1不同,在高浓度(>10μM)作用下,单独使用滨蒿内酯不会阻断Ca~(2+)通道活性;Ca M1增强了滨蒿内酯对L-VGCC钙通道的激活作用;滨蒿内酯显著增强Csingle-molecule biophysicsa M1介导的Ca~(2+)依赖性促进(CDF)和阻断Ca M1介导的Ca~(2+)依赖性失活(CDI)。4滨蒿内酯对朱砂叶螨Ca M1和L-VGCC介导的Ca~(2+)信号通路的靶标定位4.1朱砂叶螨钙调蛋白(Ca M1)对L-型Ca~(2+)通道(L-VGCC)的调控机制GST pull-down分析表明,钙调蛋白(Ca M1)可以与L-VGCC的N-末端(NT)和C-末端(CT)的近端CT1基序(CT1(包括EF-hand、Pre IQ和IQ基序)、CT1B(包括Pre IQ和IQ基序)、Pre IQ和IQ结合且呈浓度依赖性;在1 m M Ca~(2+)浓度条件下,多个Ca M1分子可与L-VGCC的C-末端(CT)的CT1B或CT1结合;Ca M与Ca~(2+)通道的N-末端(NT)结合需要较高的[Ca~(2+)]_i;在1 m M Ca~(2+)浓度条件下,对Ca M1与GST融合蛋白亲和力的大小进行排序,顺序如下:CT1B>CT1≈IQ>Pre IQ>NT;在100 n M Ca~(2+)浓度条件下,对Ca M1与GST融合蛋白亲和力的大小进行排序,顺序如下:Pre IQ>NT>CT1B>CT1>IQ。4.2滨蒿内酯对朱砂叶螨Ca M1和L-VGCC介导的Ca~(2+)信号通路的靶向调控位点GST pGefitinib-based PROTAC 3ull-down分析表明,滨蒿内酯显著促进了钙调蛋白(Ca M1)与L型-Ca~(2+)通道(L-VGCC)的C-末端的IQ结构域的结合;L型-Ca~(2+)通道(L-VGCC)中的IQ结构域(Ca M1结合的保守基序)突变为AA基序,显著降低其与Ca M1的结合能力(下降了66.78%)。电生理实验表明,野生型Ca~(2+)通道(L-VGCC)(WT-IQ)显示出显著的Ca~(2+)依赖性失活(CDI);与WT-IQ通道相比,突变型L-VGCC(MT-AA)通道的CDI值比其高了2.72倍,而MT-AA通道的CDF值比其低了1.51倍,结果表明,L-VGCC的IQ基序突变促进了Ca~(2+)通道的CDI并阻断了Ca~(2+)通道的CDF;在表达突变型Ca~(2+)通道(MT-AA)并用滨蒿内酯(EC_(50),5.54μM)预处理的卵母细胞中,表现显著的Ca~(2+)依赖性失活(CDI),结果表明,滨蒿内酯通过增强Ca M1-IQ相互作用从而阻断Ca M介导的L-VGCC的CDI或促进CDF。5滨蒿内酯对朱砂叶螨杀螨作用的新靶点功能根据目前的研究结果,得出滨蒿内酯对朱砂叶螨Ca M1和L-VGCC介导的Ca~(2+)信号通路的靶向调控位点的模型:在低[Ca~(2+)]_i下,Ca M主要以无Ca~(2+)形式(apo Ca M)存在,并以相对较高的亲和力与Pre IQ(Ca~(2+)通道的CT基序)相互作用,产生基础通道活性。由于apo Ca M对IQ/NT区域的亲和力相对较低,它们之间的相互作用可能很小。然而,当[Ca~(2+)]_i增加时,Ca~(2+)与Ca M结合,形成Ca~(2+)/Ca M,其与IQ基序具有较高的亲和力,从而触发促进Ca~(2+)依赖性促进(CDF)。滨蒿内酯作为激动剂在该位点诱导IQ/Ca M结合,然后以浓度依赖性方式诱导Ca~(2+)通道活性。综上所述,本研究表明,滨蒿内酯的作用方式涉及靶向Ca M1和L-VGCC之间的界面以及调节下游Ca~(2+)信号通路。有趣的是,Ca M1增强了滨蒿内酯的通道激活作用。滨蒿内酯激活Ca M结合位点,该位点位于Ca~(2+)通道C-末端的IQ基序中。因此,IQ基序可能是一种有前途的新型“绿色杀螨剂”结合的新靶标位点。它的鉴定可能会加速新型杀螨剂的开发,以控制全球范围内的破坏性植食性害螨。此外,本研究的结果可能有助于开发基于L-VGCC的靶标特异性绿色杀螨化合物。

目的 总结乳腺癌改良根治术后胸壁复发结节的超声图像特征，并构建预测模型，探讨其应用价值。方法 选取我院102例乳腺癌改良根治术后胸壁结节患者，其中恶性结节57例（复发组），良性结节45例（良性组），比较两组超声图像特征；应用多因素Logistic回归分析筛选乳腺癌术后Stem Cell Culture胸壁结节恶性风险预测因素，并建立预测模型，分析其预测胸壁结节恶性风险的诊断效能。结果 两组结节最大径、数Bucladesine目、累及组织层次、边界、形态、钙化、周围组织回声变化、血流分级和间隔时间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示，胸壁结节最大径、数目、边界、血流分级、间隔时间是乳腺癌术后胸壁结节恶性风险的独立影响因素（均P<0.05）。建立预测模型为：Logit(P)=-5.126+0.086X1+2.315X2+2.549X3+1.8获悉更多74X4+1.945X5(X1：病灶最大径，X2：病灶数目，X3：边界，X4：血流分级，X5：间隔时间)，其预测胸壁结节恶性风险的灵敏度、特异度、准确率、曲线下面积及95%可信区间分别为91.2%、82.2%、87.3%、0.935(0.890～0.979)。结论 基于超声图像特征构建的预测模型能有效评估乳腺癌改良根治术后胸壁结节恶性风险。

目的 建立有错配的加尾双引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(T-Afunctional biologyRMS PCR)多重检测的方法，实现针对肝细胞癌常见基因突变位点TP53 R249S、TP53 R273H、CTNNB1 S45F的多重检测。方法 针对3个基因突变位点进行引物设计，每个基因突变位点所设计引物序列的5′端不加一段DNA序列(Tail Free Primer)或者所设计的引物序列5′端加一段相同的DNA序列(Tailed Primer),利用实时荧光定量PCR仪分别检测并比较3个基因突变位点的不同引物序列形成的单重体系、三重体系的扩增结果，研究T-AMRS PCR方法对突变型基因位点突变负荷的检测限、特异性和多靶标检测能力。结果 3个基因突变位点Tailed Primer单重体系扩增结果显示，突变型质粒的扩Telaglenastat临床试验增均优于野生型质粒，野生型质粒的扩增均被有效抑制，突变负荷检测限低至0.10%,特异性良好。Tailed Primer三重体系减少了引物二聚体的产生，调控CTNNB1 S45F、TP53 R249S、TP53 R273H的解链温度分别为81.11℃、82.36℃、86.35℃,实现不同突变位点的显著区分。与Taqman探针基因分型方法相比，T-AMRS PCR方法野生型和突变型基因的Ct值差异更显著，单荧光通道即可实现突变基因检测。结论 运用T-ARMS PCR进行一管三重检测，分析熔解曲线，能有效检测到目的基因突变，抑制野生型模板的扩增，并区分不同的基因突变位点；同时，Tailed Primer设计减少了多重情况下引物二聚体的产生。该方法可为临床中肝细胞癌的早期筛查、预后预测、病情监测提供理论依FG-4592细胞培养据。

目的 探讨自噬相关基因5(autophagy-reC59研究购买lated gene 5, ATG5)在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC进展中的作用及其影响的下游信号通路。方法 通过肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库查找ATG5在HCC患者的组织表达及其亚组的差异分析。采用免疫印迹法明确ATG5在HCC细胞系中的表达水平。通过CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验观察敲减ATG5基因后对HCC细胞系（HCCLM3和MHCC97-H）增殖、迁移和侵袭功能的变化。在HCC细胞系MHCC97-H敲减ATG5基因后，使用有参转录组测序分析下游相关信号通路的变化。结果 TCGA数据库分析显示，在m RNA水平，ATG5在HCC组织的表达明显高于正常肝组织（P<0.000 1）,HCC 3期患者的ATG5水平高于1期患者的水平（P=0.013）,p53变异组患者癌组织的ATG5水平高于非变异组（P<0.000 1）。免疫印迹结果显示，与正常肝细胞L02相Insulin biosimilars比，ATG5蛋白水平在检测的HCC细胞株中均明显高表达。将ATG5基因敲减后发现，HCC细胞的增殖、迁移、侵袭的能力下降，有参测序发现其明显影响p53信号通路的基因表达，富集分析发现与细胞周期有关，同时影响了自噬相关基因的差异表达。结论 ATG5下调可抑制HTamoxifen供应商CC细胞的增殖、迁移和侵袭，同时可通过影响p53信号通路促进HCC发展。

目的 探讨纤维乳腺导管内视镜(FDS)在病理性乳头溢液(PND)诊治中的应用价值。方法 选取2011年1月至2020年1月该院乳腺外科收治的单侧单孔PND患者共126例进Navitoclax半抑制浓度行回顾性研究。将90例经术前FDS二维定位联合术中美蓝染色跟踪定位下行区段切除术的患者纳入观察组。将36例未行FDSGW4869 IC50检查，在传统美蓝染色跟踪定位下行区段切除术的患者纳入对照组。两组均进行病理检查。术中视组织缺损情况，行乳头乳晕复合体(NAC)或(和)转移带蒂复合组织瓣成形术。比较两组的病理结果阳性率、术后外观满意度、区段切除术手术时间、治疗费用及并发症情况。结果 观察组病理结果阳性率为95.6%,显著高于对照组的80.6%,差异有统计学意义(Pbone biomarkers<0.05)。观察组区段切除术手术时间低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。除浸润性乳腺癌和乳腺导管原位癌患者外，观察组患者治疗费用与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。观察组并发症发生率低于对照组，术后外观满意度高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 区段切除术前采用FDS二维定位联合术中美蓝染色跟踪法，可提高患者术后外观满意度、病理结果阳性率，同时减少术后并发症和缩短手术时间，且不增加治疗费用。