血栓性血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura, TTP）是一种罕见但有致命性的血栓性血液病。TTP分遗传型（hereditary）和免疫型（immune-mediated）。遗传型TTP是由于ADAMTS13(adisintegrin and metalloprotease with thrombospondin-1 repeats, 13)基因缺陷所致，而免疫型TTP则由ADAMTS13的自身抗体抑制了其血浆活性所致。准确和及时地对疑诊TTP的患者进行诊断和分型，并将TTP与补体介导的溶血性尿毒症综合征（complement-mediated hemolytic uremic syndrome, cHUS）和其他原因所致的血栓性微血管病（thrombotic microangiopathy）相鉴别，是近年来靶向治疗成功的关键。血浆ADAMTS13活性和抑制物（或自身抗体）的检测对TTP可疑患者的诊断和进一步处理有着极其重要的临床指导意义。三期临床试验和临床实践均表明，血浆置换（thelinear median jitter sumrapeutic plasma exchange, TPE）、类固醇皮质激素（corticoMLN4924浓度steroids）、卡普拉西族单抗（caplacizumab）和利妥昔单抗（ritux点击此处imab）四联疗法对急性免疫性TTP的治疗有效且安全。这种新疗法，可显著加速血小板计数恢复正常，减少治疗期间病情的反复，并缩短重症监护室和普通病房住院的时间。更重要的是，这种四联疗法可能降低TTP所致的死亡率和持续性微血栓所致的并发症。本文将如何诊断和处理TTP的一些最新进展作一简述。
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特纳综合征染色体核型与自身免疫性甲状腺疾病的相关性分析
目的 探讨特纳综合征（TS）患儿不同染色体核型与自身免疫性甲状腺疾病（AITD）发生率及甲状腺功能的关系。方法 回顾性收集93例特纳综合征患儿临床资料，分析AITD及甲状腺功能异常在各组染色体核型中的详细分布情况及二者之间的关联。结果 93例特纳综合征患儿初诊时有21例（22.6%）合并AITD，其中17例甲状腺功能正常，1例亚临床甲状腺功能减退（甲减），1例临床甲减，selleck激酶抑制剂2例甲状腺功能亢进（甲亢）。21例AITD患儿在中位时间间隔3年定期复查，以评估甲状腺功能状态随时间的变化，其中10例甲状腺功能正常，4例亚临床甲减genetic distinctiveness，3例临LEE011说明书床甲减，4例甲亢。AITD组按照核型被分为3个亚组(A1亚组8例45,X染色体单体、A2亚组1例嵌合体型及A3组12例X染色体结构异常)，随访结束时，各组的甲状腺功能异常的发生率随时间推移明显增加。结论 特纳综合征患儿随着时间的推移甲状腺功能出现逐步恶化，并且AITD初诊时年龄越大，甲状腺功能恶化发生率越高。特纳综合征患者需要定期监测甲状腺功能并及时处置。
骨化性肌炎11例临床病理学分析
目的 探讨骨化性肌炎的临床病理学特征。方法 收集11例骨化性肌炎的临床和病理资料，行免疫组化和FISH检测，并复习相关文献。结果 11例患者中男性5例，女性6例，年龄7～62岁(中位年龄41),病变发生于大腿7例，手掌部1例，小腿1例，上肢1例，臀部1例。9例有明确外伤史BMS-354825，1例有肌肉注射史，1例否认有外伤史。组织学病变中均见不规则新生骨，部分病例可见未钙化的编织状骨小梁、钙化骨，其中5例可见骨母细胞增生活跃伴梭形纤维细胞增生，2例纤维母细胞有轻度不典型性，可见核分裂象，2例间质可见淋巴细胞散在并局灶聚集。其中1例标本病变典型，由内向外分为中心带、中间带和边缘带nonmedical use，7例病变具有分带倾向。免疫表型：vimentin和SATB2均呈弥漫强阳性，SMA、MSA和desmin呈不同程度阳性，组织细胞和破骨细胞中CD68散在阳性，S-100、SOX-10、β-catenin、CD34、MyoD1、Myoglobin和CK均阴性，Ki-67增殖指数1%～30%。2例行FISH检测，均显示USP6基因断裂阳性。结论 诊断骨化性肌炎时需结合病史、临床selleck KD025特征、影像学表现、免疫表型及分子病理检测，注意与骨肉瘤等肿瘤鉴别。
纤维软骨性结构不良23例临床病理和分子特征分析
目的 探讨纤维软骨性结构不良(fibrocartilaginous dysplasia, FCD)的临床病理和分子特征。方法 回顾性分析23例FCD的临床病理和影像学特IACS-010759配制征，运用免疫组化和Sanger测序法分析FCD的免疫表型和分子特征。结果 23例FCD中男性14例，女性9例，发病年龄9～55岁，中位年龄19岁。3例为多骨性病变，其余为单骨性病变。病变主要发生于股骨(18/23),尤其好发于股骨颈；余肱骨2例，胫骨、髂骨和指骨各1例。影像学大多数表现为界限清楚的膨胀性磨玻璃样背景中见点状、环状或絮状钙化。镜检：病变内可见增生的纤维母细胞和不LY2157299成熟编织骨，以及多少不等的高分化透明软骨成分及软骨化骨。免疫表型：oncology staff纤维骨性成分均表达SATB2,Ki-67增殖指数低，不表达CK、CK5/6、p63等上皮标志物。6例分子检测提示GNAS基因第8外显子突变，分别为CGT>TGT导致的p.R201C位点突变(2例)和CGT>CAT导致的p.R201H位点突变(4例),不同形态区域突变位点一致；IDH1/IDH2均为野生型。结论 FCD是少见纤维结构不良特殊形态学亚型。纤维骨性成分和软骨成分同源，软骨成分是纤维结构不良发生、发展过程中的组成部分。纤维结构不良中出现软骨，再结合影像学改变和分子检测可辅助FCD的诊断。
局部枸橼酸钠联合低分子肝素治疗在行连续性肾脏替代治疗危重症患者中的抗凝效果
目的 探索局部枸橼酸钠联合低分子肝素治疗对行连续性肾脏替代治疗(CRRT)危重症患者抗凝效果的影响。方法INCB28060供应商 前瞻性选取2018年4月至2021年4月国药葛洲坝中心医院收治的80例行CRRT危重症患者作为研究对象，根据随机数字表法分为观察组(41例)和对照组(39例)。对照组采用局部枸橼酸钠抗凝，观Dibutyryl-cAMP研究购买察组采用局部枸橼酸钠联合低分子肝素抗凝。比较2组治疗前后凝血功能指标、血清电解质、pH值、血常规指标以及抗凝有效性和血滤器使用寿命。结果 治疗后24 h, 2组活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间均长于治疗前，且观察组均长于对照组[(51.7±4.7)s比(43.3±2.2)s、(18.96±1.24)s比(17.86±0.31)s、(20.5±2.6)s比(18.2±2.2)s](均P<0.05);2组血清氯离子、钙离子、钠离子、钾离子水平均低于治疗前，且观察组均低于对照组(均P<0.05);2组血小板Carcinoma hepatocellular计数、血红蛋白、白细胞计数均低于治疗前(均P<0.05),但组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后24 h,观察组抗凝有效性0级比例高于对照组，Ⅱ、Ⅲ级比例均低于对照组(均P<0.05)。观察组血滤器使用寿命长于对照组[(30±3)h比(28±4)h],但组间比较差异无统计学意义(t=1.918,P=0.059)。结论 局部枸橼酸钠联合低分子肝素用于行CRRT危重症患者中，能够延长血滤器使用寿命，维持机体电解质平衡。
基于羟自由基的生物荧光成像及药物释放
羟自由基(~·OH)具有活性高、寿命短、氧化性强的特点,其浓度波动与多种生理过程以及疾病的发生发展密切相关。利用高灵敏与高选择性的荧光探针分析研究~·OH在不同生理以及病程中的波动变化,对于探究疾病的分子机制与评价可能的治疗手段具有重要意义。为此,本研究首先设计合成了一种新型荧光探针NADHB用于~·OH的成像检测。该探针采用3,5-二羟基苄氧基作为~·OH特异性识别基团,能够与~·OH反应后脱除,从而释放出萘酰亚胺荧光团,导致荧光开启。NADHB具有高特异性、高灵敏度与良好的生物相容性,能够在细胞与活体水平实现~·OH的原位荧光成像。首先,利用NADHB探究了高浓度同型半胱氨酸(Hcy)对于神经细胞的影响以及相应的调控机制。结果显示,Hcy可使细胞内~·OH水平升高,且该过程受到N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和NADPH氧化酶的调控。Hcy激活NMDA受体启动下游信号通路,使NADPH氧化酶催化产生过量O_2~(·-),后者进一步通过Haber–Weiss反应与Fenton反应产生~·OH,导致谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达量降低,表明神经细胞发生铁死亡。此外,构建了高同型半胱氨酸血症小鼠模型,并通过行为学测试证明,高同型半胱氨酸血症诱导小鼠发生阿尔兹海默样痴呆。采用NADHB对小鼠脑内~·OH进行原位荧光成像,结果显示,相较于正常小鼠,高同型半胱氨酸血症小鼠脑内~·OH水平明显升高,而给selleck HPLC予叶酸处理的高同型半胱氨酸血症小鼠脑内~·OH水平明显降低。小鼠脑内的~·OH水平与阿尔兹海默样痴呆的严重程度呈正相关,表明~·OH是高同型半胱氨酸血症诱发阿尔兹海默样痴呆的关键致病因素。利用探针NADHB揭示了~·OH在阿尔兹海默样痴呆病变过程中所起的重要作用及相关的信号转导通路,提供了阿尔兹海默病预防与治疗的新视角。药物的时空可控释放对于提高用药安全性、实现疾病的精准治疗具有重要意义。阿霉素作为经典蒽环类抗肿瘤药物已被应用于临床治疗中,但是严重的心脏毒性限制了阿霉素的临床应用范围。实现阿霉素在肿瘤部位的可控释放将有望降低其心脏毒性,提高用药安全性。另一方面,超声波具有高时空可控、高组织穿透深度以及成本低廉等优点,已被广泛应用于临床诊断与治疗中。超声波可通过超声空化效应产生高浓度~·OH,可作为~·OH的安全来源。3,5-二羟基苄氧基与~·OH之间的特异性识别反应可用于实现~·OH介导的阿霉素可控释放。基于以上,我们将3,5-二羟基苄氧基与阿霉素的氨基相连,构建了超声激活型阿霉素前药DOXDHB。超声产生的~·OH能够与3,5-二羟基苄氧PUN30119说明书基反应使其脱除,从而释放阿霉素,实现抗肿瘤药物阿霉素的超声激活可控释放。研究结果表明,前药DOXDHB的细胞毒性与小鼠心脏毒性显著低于阿霉素,具有良好的生物安全性。DOXDHB可通过超声在肿瘤细胞内可控释放阿霉素,从而发挥抗肿瘤作用。采用~·OH介导的超声激活释放策略,实现了阿霉素的超声可控释放,有效降低其心脏毒性,为设计开发新型的激活释放型前药提供了新的思路。综上所述,基于3,5-二羟基苄氧基与~·OH之间的特异性识别反应,本论文构建了一种检测~·OH的荧光探针以及一种~·OH激活释放型前药。探针NADHB能够实现对细胞以及活体小鼠脑内~·OH的波动变化进行原位成像监测,并揭示了~·OH在高同型半胱氨酸血症诱导小鼠阿尔兹海默样痴呆过程中所起的关键性作用。前药DOXDHB能够被超声产生的~·OH特异性激Shoulder infection活,可控释放抗肿瘤药物阿霉素,在保持阿霉素抗肿瘤作用的同时,有效降低其心脏毒性。上述研究结果为~·OH相关的疾病机制研究以及药物的可控释放提供了新的思路。
白藜芦醇通过调节铁死亡通路抑制小鼠溃疡性结肠炎相关性结肠癌实验研究
目的medicines reconciliation:观察白藜芦醇(Res)是否可通过调节铁死亡通路抑制小鼠溃疡性结肠炎相关性结肠癌(UCACC)。方法:(1)将28只C57BL/6小鼠随机分为Control组、氧化偶氮甲烷(AOM)组、AOM+葡聚糖硫酸钠盐(DSS)组、AOM+DSS+Res组。造模实验周期为70 d。AOM组、AOM+DSS组和AOM+DSS+Res组第1天注射1次AOM。从造模第2周开始AOM+DSS组和AOM+DSS+Res组饮用含DSS水，第3周更换为无菌水，第4周换为含DSS水，以此循环到造模实验周期结束。Control组和AOM组饮用无菌水，AOM+DSS+Res组每周给予Res灌胃。造模结束后处死小鼠，取小鼠结肠组织，HE染色后观察小鼠结肠组织病理改变。分别采用免疫组织化学法(IHC)和Western blot检测小鼠结肠组织谷胱甘肽过氧化物酶4(GPXselleck Vorinostat4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、铁蛋白重链(FTH)、P53蛋白的表达。(2)将人结肠癌HCT 116细胞分为空白对照组及4、8、16μg/ml Res组。用不同浓度(4、8、16μg/ml)Res处理HCT 116细胞。收集处理的细胞后，采用CCK-8实验检测细胞增殖活性，采用Western blot检测细胞GPX4、ACSL4、FTH蛋白的表达。结果:(1)HE染色结果显示小鼠UCACC模型建模成功，Res可明显抑制AOM+DSS诱导的小鼠UCACC形成。IHC染色结果显示，与Control组比较，AOM组FTH蛋白表达下降；AOM+DSS组GPX4和FTH蛋白表达明显上升，ACSL4和P53蛋白表达明显下降(均P<0.05)。与AOM+DSS组比较，AOM+DSS+Res组GPX4和FTH蛋白表达下降，ACSL4和P53蛋白表达明显上升(均P<0.05)。Western blot检测结果显示，与Control组比较，AOM组GPX4、FTH蛋白表达下降，ACSL4表达上升；AOM+DSS组GPX4和FTH蛋白表达上升，ACSL4和P53蛋白表达下降(均P<0.05)。与AOM+DSS组比较，AOM+DSS+Res组GPX4和FTH蛋白表达下降，ACSL4和P53蛋白表达上升(均P<0.05)。(2)CCK-8实验结果显示，8、16μg/ml Res组细胞存活率低于空白对照组(均P<0.05)。Western b此网站lot检测结果显示，与空白对照组比较，4、8、16μg/ml Res组细胞GPX4和FTH蛋白表达下降，ACSL4蛋白表达上升(均P<0.05)。结论:Res可以通过调控细胞铁死亡通路抑制UCACC。
新发脂蛋白脂舫酶基因复合突变（M1?/L279Vfs*3和S63F/I221T）致Ⅰ型高脂蛋自血症的分子机制研究
研究背景:Ⅰ型高脂蛋白血症,也称为家族性乳糜微粒血症综合征(FCS)或家族性脂蛋白脂肪酶(LPL)缺乏症,是一种罕见的常染色体隐性遗传病。Ⅰ型高脂蛋白血症的患病率约为百万分之一,在法protective immunity国、加拿大、非洲等种族群体中,这种疾病的发病率会更高。Ⅰ型高脂蛋白血症的特点是由于乳糜微粒水解受损导致其大量积累,血浆中甘油三酯(TG)水平极高(>880 mg/dL或10 mmol/L)。该疾病的临床特征是反复发作的腹痛和胰腺炎、肝脾肿大、黄色瘤(特别多见于受压部位及伸肌表面)、视网膜质斑,多脂肪饮食可使血循环的乳糜微粒积聚从而使症状、体征加重。临床体征和症状通常出现在新生儿期/婴儿早期,包括发育不良、爆发性黄瘤、肝肿大、视网膜脂血症、严重和反复腹痛。其中,急性胰腺炎是该期最严重的临床表现。研究发现参与调节血浆脂质代谢的五个基因发生突变后会引起高甘油三酯血症,即脂蛋白脂肪酶基因(LPL)、载脂蛋白A-V基因(APOA5)、载脂蛋白C-Ⅱ基因(APOC2)、糖基磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1基因(GPIHBP1)、脂肪酶成熟因子1基因(LMF1)。LPL基因编码脂蛋白脂肪酶,脂蛋白脂肪酶催化富含TG的脂蛋白的水解;APOA5基因编码载脂蛋白A-V,载脂蛋白A-V可稳定脂蛋白-LPL复合物;APOC2基因编码载脂蛋白C-Ⅱ,载脂蛋白C-Ⅱ是LPL发挥作用必不可少的活化剂;GPIHBP1基因编码糖基磷脂酰肌醇锚定的高密度脂蛋白结合蛋白1,该蛋白可以介导LPL跨膜转运和结合;LMF1基因编码脂肪酶成熟因子1,脂肪酶成熟因子1参与LPL的折叠和表达。其中,LPL基因突变引起的高脂血症占所有I型高脂蛋白血症患者中报道的突变的大多数。人类LPL基因在8号染色体的短臂上,长度约30kb,由10个外显子组成,编码含有475个氨基酸的蛋白质LPL。LPL是一种具有甘油三酯脂肪酶活性的酶,它参与富含甘油三酯的脂蛋白颗粒中所含脂质的分配。活化后的LPL是一种非共价二聚体,具有由丝氨酸、天冬氨酸、组氨酸组成的催化三联体。LPL主要在心脏、骨骼肌和脂肪组织中合成,然后转运至血管内皮细胞的表面。细胞分泌后,二聚体的形成是LPL活性的关键步骤。到目前为止,已经报道的LPL基因突变已经超过200种,这些突变主要通过干扰分泌、与肝素结合或酶促活性来影响LPL的活性,但是目前的大多数研究主要通过软件预测基因突变的影响,仅对少数突变进行了导致高脂血症发病的机制评估。研究目的:本研究通过对两个I型高脂蛋白血症家系中先证者及其家系成员LPL基因突变的检测,进而进行体外功能实验探讨脂蛋白脂肪酶缺乏引起I型高脂蛋白血症的潜在分子学机制。研究方法:我们对两个患有I型高脂蛋白血症的家系进行了系统的临床特征和遗传学分析。在禁食过夜的情况下采集所有家系成员的肝素前血浆,然后静脉注射肝素(60IU/kg),10分钟后从对侧手臂采集肝素后血液。所有成员的肝素前血浆外周血标本通过提取基因组DNA进行全外显子基因测序,肝素后血浆用于LPL酶活性分析。将测序结果与基因组序列进行比较、分析,找出突变位点,构建包含LPL基因的野生型及突变型pcDNA3.1(+)质粒。然后,将野生型或突变型LPLpcDNA3.1(+)质粒瞬时转染人胚胎肾HEK-293T细胞进行体外研究:提取细胞裂解物和浓缩细胞培养基后,在细胞裂解物或培养基中分析LPL的产生量和酶活性。研究结果:1、家系资料:先证者1,女性,24岁时因“急性出血性坏死性胰腺炎”住院,在住院期间接受“手术”治疗,术后仍有间歇性腹痛,长期服用“胰酶”等药物治疗。25岁时,该患者初次发现其血清TG水平显著升高(约17 mmol/L),曾多次到多家医院就诊,在诊治过程中服用过多种降脂药物(包括非诺贝特、瑞舒伐他汀、中药等),但服药后TG水平均进一步升高。近年来,该患者停药后其TG 水平始终波动在13.63-33.94 mmol/L,血胆固醇(TC)水平波动在4.92-10.51mmol/L。该患者35岁时因“腹痛”住院,期间被诊断为糖尿病。糖尿病发病初期无明显高血糖症状(口干、烦渴、多尿等),该患者曾口服二甲双胍进行降血糖治疗,空腹血糖维持在5.2～8.9 mmol/L后自行停药。其49岁时出现明显高血糖症状,当时测空腹血糖15.22 mmol/L,口服中药汤剂后出现呕吐、腹泻。体格检查:腹胀,上腹部压痛,无反跳痛或墨菲征,双下肢无水肿。实验室检查:空腹血糖(11.81mmBemcentinib化学结构ol/L)和糖化血红蛋白(11.7%)高于正常参考范围;血尿淀粉酶在正常范围内;中性粒细胞计数(7.28×109/L)和红细胞沉降率(25mm/h)高于正常参考范围;TG(15.66mmol/L)和TC(7.45mmol/L)高于正常参考范围;高密度脂蛋白胆固醇(0.54mmol/L)、低密度脂蛋白胆固醇(0.72mmol/L)和载脂蛋白A(0.94g/L)高于正常参考范围。血管超声:颈动脉和下肢动脉动脉粥样硬化。腹部CT:胰腺形状不规则;肝脏形状和大小正常,实质未见异常密度影;肝内外胆管未见扩张;胆囊形状和大小正常,胆囊未见异常密度影;脾脏形状和大小正常;建议增强扫描(患者拒绝)。先证者1经皮下胰岛素泵降血糖(胰岛素剂量37u/d.kg 49.7 kg)治疗后,空腹和餐前血糖维持在4.7-6.1mmol/L,餐后2h血糖维持在6.4-11.7mmol/L,但 TG(31.85-33.57 mmol/L)和TC(9.18-10.14)水平仍升高。出院后,患者继续应用胰岛素和保肝药物治疗。两个月后,空腹和餐前血糖波动在4.8-6 mmol/L,餐后血糖在8 mmol/L左右,TG降至15.18mmol/L,TC降至5.47mmol/L,期间应用甘精胰岛素(晚上6u)皮下注射和赖脯胰岛素(早3u,中3u,晚3u)三餐前5-10分钟皮下注射控制血糖。此后,一直坚持低脂饮食,逐渐停止应用胰岛素和保肝药。2020年6月末次随访时,TG、TC、空腹血糖分别为15.37mmol/L、9.43mmol/L、6.01mmol/L。家族史:患者父母及姐姐均已去世,无法检测;姐姐曾患有复发性胰腺炎。先证者2在9个月大时因体检发现血样呈严重脂血症来我院就诊。入院第二天测TG 20.35mmol/L,TC 8.89mmol/L,经过低脂饮食和连续静脉输注小剂量胰岛素降低血脂3天后,TG 为 22.77mmol/L,TC 为 7.60mmol/L。7 天后 TG 为 12.32mmol/L,TC 为4.55mmol/L。10天后,TG为10.25mmol/L,TC为4.93mmol/L。先证者血脂明显好转后出院,出院后继续低脂饮食,没有特别不适。2020年6月末次随访,TG为3.35mmol/L,TC为2.72mmol/L,空腹血糖为5.60mmol/L。家族史:父母目前身体均健康。2、全外显子基因测序结果:经过测序和序列比对分析,发现先证者1携带一种新的LPL复合突变(c.3G>C和c.835_836delCT),这可能导致截断突变(p.M1?)和移码突变(p.L279Vfs*3)。其儿子和女儿携带p.M1?突变,但他们的血脂水平和其他表型均正常。先证者2也携带一种LPL的新型复合突变(c.188C>T和c.662T>C),分别导致编码蛋白质的第63个氨基酸从丝氨酸变为苯丙氨酸(p.Ser63Phe)和编码蛋白质的第221个氨基酸从异亮氨酸到苏氨酸(p.Ile221Thr)。先证者2的父母各携带一个突变,根据其父母携带突变情况可推测p.Ser63Phe突变来自父亲,p.Ile221Thr突变来自母亲,但到目前为止父母身体均健康。其他外显子测序未发现突变位点。3、生物信息学分析:四种新发突变所在位置在不同物种中蛋白质序列上的保守性,均为高度保守。致病性分析显示四种新发突变的致病性较强。4、致病机制研究结果:与对照组(1.6889 mU/mL)相比,患者1(0.4207mU/mL)和患者2(0.7213mU/mL)的肝素后LPL活性分别降低了75.09%和57.29%。先证者1的儿子和女儿、先证者2的父母的肝素后LPL活性和对照BAY 73-4506半抑制浓度组之间无显著差异。两种LPL的新型复合变体会引起患者血浆中LPL酶活性的变化,导致甘油三酯代谢缺陷,从而使血清甘油三酯极度升高。为了探索新鉴定的LPL突变在蛋白质水平上的影响,我们将野生型(pcDNA3.1-LPL-WT)和突变型(pcDNA3.1-LPL-MU)质粒瞬时转染到HEK293T/17细胞中。p.M1?转染组、p.L279Vfs*3转染组、p.M1?和p.L279Vfs*3共转染组细胞裂解物中几乎没有发现LPL蛋白质产生。与pcDNA3.1-LPL-WT质粒转染的细胞相比,p.S63F质粒或两种突变质粒(p.S63F和p.I221T)共转染的细胞LPL合成无显著差异,但p.I221T转染的细胞中LPL合成减少了 48.33±1.78%。HEK 293T/17培养基中的LPL活性:野生型LPL质粒转染的细胞培养基作为阳性对照,除了p.L279Vfs*3,转染pcDNA3.1-LPL-MU质粒的细胞培养基中LPL活性显著降低。具体来说,用p.M1?质粒或含两种变体(p.M1?和p.L279Vfs*3)质粒转染的细胞显示LPL酶活性分别减少55.93± 3.28%和59.84±4.47%,而LPL活性在用p.Ser63Phe或含两种变体(Ser63Phe+Ile221Thr)转染的HEK293T/17培养基中分别减少62.76±9.90%和63.25±10.55%。p.Ile221Thr质粒转染的细胞的培养基中显示了LPL活性的最大下降了81.56± 4.35%。结论:通过对两个Ⅰ型高脂蛋白血症家系中先证者及其家系成员LPL基因突变的检测,我们在国际上首次发现了两种新的LPL基因的复合突变(p.M1?/p.L279Vfs*3和p.S63F/p.I221T),两种突变均可导致患者LPL酶活性降低或者LPL蛋白表达量减少,从而导致LPL功能缺陷,引起Ⅰ型高脂蛋白血症。
β-葡聚糖对大肠杆菌攻毒仔猪肠道屏障的保护作用研究
β-葡聚糖(BGL)是由D-葡萄糖单体通过β-糖苷键连接而成的功能性多糖,具有抗炎、降血糖血脂、抗氧化等多种生物学活性。BGL广泛存在于细菌、真菌及谷物细胞壁中。此外,微生物发酵产生的次级代谢物也是BGL的重要来源。Agrobacterium sp.ZX09是一株分离于盐土的耐盐菌,能胞外分泌大量β-(1,3)-葡聚糖。目前有关其生物学活性及在动物生产上的应用却鲜有报道。本试验首先通过IPEC-J2细胞体外培养,研究Agrobacterium sp.ZX09来源的BGL对产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的IPEC-J2细胞损伤的保护效应;在此基础上进一步以ETEC攻毒仔猪为模型,研究BGL对仔猪生长性能、肠道炎症反应及屏障功能的影响,初步揭示其缓解仔猪肠道炎性损伤可能机制。体外试验采用2×2设计,设4个处理组,即:对照组(CON)、BGL组(50μg/m L BGL)、ETEC组(1×10~6CFU/m L ETEC)、EBGL组(50μg/m L BGL+1×10~6CFU/m L ETEC),BGL预处理细胞6 h后利用ETEC攻毒,2 h后收集细胞;体内试验则选取32头21日龄“杜洛克×长白×大白”三元杂交公猪,根据体重分为4组(n=8):对照组(基础饲粮,CON)、ETEC组(基础饲粮+ETEC)、BGL组(基础饲粮+500 mg/kg BGL)、EBGL组(基础饲粮+ETEC+500 mg/kg BGL),试验期28天。试验第26天,攻毒仔猪灌喂100 m L含ETEC的Luria-Bertani(LB)培养基(1×10~(10)CFU/m L),其余仔猪灌服等体积LB培养基。试验第29天早上,所有仔猪灌服D-木糖(0.1 g/kg BW),1小时后屠宰取样用于肠道组织形态、细胞凋亡等分析,结果如下:(1)ETEC攻毒增加IPEC-J2细胞总凋亡率(P<0.05),但BGL预处理可显著降低ETEC诱导的IPEC-J2细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率(P<0.05),下调凋亡关键分子含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)和Caspase 9表达水平(P<0.05);此外,BGL显著下调攻毒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及炎症反应关键转录因子Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)基因表达水平(P<0.05)。(2)饲粮添加BGL对未攻毒仔猪平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和主要养分表观消化率无显著影响(P>0.05);ETEC攻毒降低仔猪ADG(P<0.05),但饲粮添加BGL有改善攻毒仔猪ADG的趋势(0.05
结芋期干旱胁迫对芋叶片生理特性及芋子品质产量的影响
【目的】芋是一种江西省优势特色作物，干旱是限制芋种植和芋子品质产量的重要因素之一，研究干旱胁迫对结芋期芋叶片生长生理指标和采收期芋子品质产量的影响，为芋高产优质栽培提供理论依据。【方法】以耐旱性弱芋品种‘赣芋2号’（T22）及其耐旱性强芋突变体‘赣芋4号’（T24）为试验材料，在结芋期对2种芋进行干旱胁迫处理，测定并分析叶片结构相关重要性状指标、细胞膜保护系统重要相关酶和次级代谢物质、根系特征、芋子产量和品质相关性状等。【结果】相较于对照组，处理组的叶片面积、叶片数量、植株高度、叶绿素含量和蜡质含量等重要性状指标均会下降，但仅有叶片表面蜡质含量的下降幅度在两种材料之间具有显著的差异，不同处理组T24的叶片表面蜡质含量、气孔密度大于T22，气孔张开程度小于T22;T24处理组的Mplant bioactivityDA和H2O2含量的上升幅度显著低于T22处理组，但Pro含量的上升幅度和SOD、CAT和GR等酶活性显著高于T22处理组；T24芋子平均单球重、单株芋子平均产量和根数量的下降幅度显著低于T22，但平均根长、根系直径、根长增长幅度高于T22，中度干旱处理提高了两种芋头中的纤维素、可溶性总糖、维生素C和可溶性蛋白质含量，但不同程度的干旱均显著减少了芋头的产量及其淀粉含量。【结论】蜡质含量的增加、气孔形态的改变、SOD、CAT和GR等酶的作用以及发达VEGFR抑制剂的根系均有助于提高突变体T24的耐旱性，Pro可能对T24的抗旱性存在积极作用，干旱胁迫对T22细胞膜的损害程度更大，结芋期干旱胁迫会导致芋减产，但适当的干旱有助E-616452分子式于提高芋头品质，该研究结果可为芋的高产优质栽培、抗旱性资源的筛选及遗传改良提供指导和科学依据。