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目的:肝脏是氟暴露致机体损伤的重要靶器官,但氟致肝脏损伤的详细机制仍有待研究。本课题通过体内、外实验探究线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)、自噬和铁死亡在氟化钠(sodium fluoride,NaF)致肝损伤中的作用,尤其是mtROS介导的自噬和铁死亡在此过程中的机制,从而为地方性氟中毒致肝脏损伤的防控提供科学依据。方法:体内实验:将48只成年Sprague-Dawley(SD)大鼠(二月龄,体重为180-250 g)随机分为四组:一个对照组(水氟浓度低于1 mg/L)和三个染毒组(25、50和100 mg/L NaF组),每组12只,各组大鼠均通过自由饮水的方式摄入NaF。染毒2个月后,处死所有大鼠,取出肝脏。通过western blot法检测大鼠肝脏组织中铁死亡关键蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-Co A synthetase long chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)和转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC),以及自噬关键蛋白微管相关蛋白轻链3(membrane-type microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和(sequestosome 1,SQSTM1/p62)的表达水平。体外实验:构建不同剂量的NaF染毒大鼠肝细胞(BRL3A)模型(0、20、40和60 mg/L NaF),此外,使用铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)、自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和mtROS抑制剂(Mito-TEMPO)提前处理BRL3A细胞1 h后,NaF染毒24 h。通过western blot法检测BRL3A细胞内GPX4、ACSL4、FTH1、TFRC、LC3、p62和线粒体外膜受体亚基TOM20同源蛋白(mitochondrial import receptor subunit TOM20 homolog,TOMM20)蛋白的表达水平。m RFP-GFP-LC3双荧光标记法检测自噬流。JC-1荧光探针、Mito SOX Red线粒体超氧化物荧光探针和Ferro Orange荧光探针分别检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、mtROS和Fe~(2+)。通过分光光度法检测谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superPractice management medicaloxide dSAHA纯度ismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。结果:体内实验:1.NaF对大鼠肝脏铁死亡的影响:与对照组相比,100 mg/L NaF组中GPX4和FTH1表达水平降低(P<0.05),ACSL4和TFRC表达水平增加(P<0.05)。2.NaF对大鼠肝脏自噬流的影响:与对照组相比,100 mg/L NaF组中LC3-Ⅱ和p62的表达也显著增加(P<0.05)。体外实验:1.NaF对BRL3A细胞铁死亡的影响:Western blot结果显示,与对照组相比,60 mg/L NaF组中GPX4和FTH1的表达下降,ACSL4和TFRC的表达增加(P<0.05);Ferro Orange荧光探针染色后,与对照组相比,60 mg/L NaF组Fe~(2+)的含量也增加(P<0.05);同时,GSH和SOD的含量减少,而MDA的含量增加。2.NaF对BRL3A细胞自噬流的影响:Western blot结果显示,与对照组相比,60 mg/L NaF组中LC3-Ⅱ和p62的表达增加(P<0.05);m RFP-GFP-LC3双荧光结果显示,与对照组相比,60mg/L NaF组中代表自噬溶酶体的红色荧光斑点数量减少,代表自噬体的黄色荧光斑点数量增加(P<0.05)。3.NaF对BRL3A细胞线粒体的影响:JC-1荧光探针检测MMP的结果发现,NaF暴露诱导BRL3A细胞MMP下降(P<0.05);此外,Mito SOX Red荧光探针定位mtROS发现,NaF导致BRL3A细胞中mtROS显著增加(P<0.05);同时,与对照组相比,60mg/L NaF组TOMM20的表达明显增加(P<0.05)。4.RAPA对BRL3A细胞自噬流的影响:Western blot结果显示,与NaF组相比,RAPA与NaF联合干预组中LC3-Ⅱ的蛋白表达增加、p62的蛋白表达减少(P<0.05);此外,m RFP-GFP-LC3双荧光标记法发现红色荧光斑点数量增加,黄色荧光斑点数量减少。5.RAPA对BRL3A细胞铁死亡的影响:与NaF组相比,RAPA与NaF联合干预组中GPX4的蛋白表达升高、ACSL4的蛋白表达降低(P<0.05);细胞内Fe~(2+)的含量显著减少;GSH和SOD的含量增加,MDA的含量减少。6.Fer-1对BRL3A细胞铁死亡的影响:Western blot结果显示,与NaF组相比,Fer-1与NaF联合干预组中GPX4的蛋白表达增加、ACSL4的蛋白表达减少(P<0.05);细胞内Fe~(2+)的积累减少;同时,GSH和SOSBE-β-CD临床试验D的含量增加,MDA的含量减少。7.Fer-1对BRL3A细胞自噬流的影响:与NaF组相比,Fer-1与NaF联合干预组中LC3-Ⅱ和p62的蛋白表达均下降(P<0.05);同时,红色荧光斑点数量增加,黄色荧光斑点数量减少。8.Mito-TEMPO对BRL3A细胞铁死亡的影响:Western blot结果显示,与NaF组相比,Mito-TEMPO与NaF联合干预组中GPX4表达增加,ACSL4表达减少(P<0.05);细胞内Fe~(2+)的含量降低;同时,GSH和SOD的含量增加,MDA的含量减少。9.Mito-TEMPO对BRL3A细胞自噬流的影响:与NaF组相比,Mito-TEMPO与NaF联合干预组中LC3-Ⅱ和p62表达水平均下降(P<0.05);红色荧光斑点数量增加,黄色荧光斑点数量减少。结论:NaF诱导的大鼠肝脏和BRL3A细胞自噬流阻滞和铁死亡存在相互作用,且该过程受到mtROS调控,最终导致肝损伤。

为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能，本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式，通过CRISPR/Cas9基Cardiovascular biology因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3 dpf(days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量；qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示：chac1是母源基因，在受精后0～3 hpf(hours post fertilization)时其表达量较高，MK-1775抑制剂之后随着母本基因的影响逐渐变小，chac1的mRNA表达量下降；在斑马鱼成鱼中，其在肌肉、卵巢、脑中高表达；此外，C59分子式突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比，其苏丹黑染色阳性信号更多；chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上，chac1为母源基因，其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调。

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是常见的重要食源性致病菌,产生耐热溶血素(Thermostable direct hemolysin)和耐热相关溶血素(TDH-related hemolysin)是该菌具有危害性判定和食品安全检测最重要的依据。由于近年来我们在临床分离的菌株中检测出不携带tdh/trh两个基因,同时,从水产品和环境中分离出的菌株约60%是不携带tdh/trh两个基因,仍然可能具有致病性,从而导致食品安全事件发生,所以挖掘并解析新的毒力因子的功能和阐点击此处明危害形成机制成为了当下迫切需要解决的问题。本论文针对目前水产品来源的副溶血性弧菌在不携带tdh/trh的情况下,是否具有致病性的问题展开PUN30119细胞培养了研究,首先基于前期分离的菌种库,利用PCR方法对tdh~-/trh~-副溶血性弧菌进行基因分型,通过细胞实验和动物实验进行毒力差异菌株的筛选,确定了高毒力菌株;然后为了阐明tdh~-/trh~-高毒力菌株的危害形成原因,对其进行了全基因测序和比较基因组分析,明确其遗传特征,结合菌株感染细胞的转录组特征,确定了相关差异基因;为了揭示tdh~-/trh~-菌株的危害形成机制,通过基因定点敲除与回补解析了相关毒力因子的功能,并通过权重共表达网络分析了相关致病因子的调控机制;为了进一步解析相关毒力因子的调控机制,通过蛋白组学方法对相关基因突变体及野生型的差异表达蛋白进行分析,阐明了相关毒力因子在蛋白水平的作用机制;最后为了探究tdh~-/trh~-菌株在体内的作用机制,构建了tdh~-/trh~-副溶血性弧菌感染小鼠模型并初步探究了相关致病机制,同时,针对tdh~-/trh~-菌株感染的防控,应用本实验室选育的具有拮抗多种食源性致病菌的活性益生菌戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)进行了防控效果的评价。主要研究内容和结果如下:(1)高毒力tdh~-/trh~-副溶血性弧菌VP353的筛选及组学特征研究通过细胞实验和动物实验,从本实验室前期建立的水产品副溶血性弧菌菌种库中筛选出一株tdh~-/trh~-高毒力菌株VP353。通过全基因组测序,VP353全长5.28 Mb,由2条染色体组成,1号染色体由3.30 Mb和2952个预测ORF组成,2号染色体由1.98 Mb和1772个预测ORF组成;通过VFDB数据库,发现tdh~-/trh~-副溶血性弧菌高毒力株VP353同时携带新的毒力基因hly A、hly B、hly C和hly D,其蛋白亲缘关系与大肠杆菌最相近;通过比较基因组对VP353进行了T3SS基因簇的比较分析,发现VP353与标准菌株相比,T3SS1基因簇相似度均在99%以上,而T3SS2基因簇相似度只有66%以上;通过VP353感染Caco-2细胞前后转录组分析,发现一共有958个基因发生了上调,主要富集在有机氮化合物的生物合成和代谢过程,其中与毒力相关的MSHA IV型菌毛、鞭毛、群体感应基因(Cqs A、Lux S)、胞外多糖T2SS相关基因和hly A、hly C基因发生显著上调。(2)基于转录组的tdh~-/trh~-副溶血性弧菌VP353毒力基因Qrr5调控机制基于VP353感染宿主的转录本进行筛选,以Qrr5作为新型毒力因子进行了研究,通过基因敲除及基因回补表达方法,成功构建了副溶血性弧菌△Qrr5突变体及△Qrr5::Qrr5回补菌株;经过相关表型测定,发现△Qrr5突变体的细胞毒性、细胞粘附力及生物被膜的形成能力与野生型相比,都显著降低,表明Qrr5对毒力具有正调控作用;通过△Qrr5突变体及野生型感染宿主的转录组测序,发现分别在感染宿主0、2、4和6h分别改变了185、586、3prophylactic antibiotics55和74个显著差异表达基因,Qrr5基因缺失在感染宿主前期和后期显著影响了T3SS1基因簇的表达;基于△Qrr5突变体及野生型感染宿主的转录本分析,构建了Qrr5在感染宿主过程中的基因调控网络,一共有17个基因,其中VP2914、VP0485、VP2492和VP1665基因表现出强相关,并对其表达量进行了q RT-PCR的验证,结果基本一致。(3)基于蛋白组的tdh~-/trh~-副溶血性弧菌VP353毒力基因Qrr5调控机制通过蛋白组定量分析,发现△Qrr5突变株和野生型一共鉴定出297个显著差异表达的蛋白,其中有137个蛋白上调,160个蛋白下调;通过GO和KEGG对差异蛋白进行富集分析,发现上调的蛋白主要富集在氧化还原酶活性、硫代谢和ABC转运蛋白途径,下调蛋白主要富集在胞内信号转导、双组分系统和氨基酸生物合成途径;通过蛋白结构域的预测进行富集分析,发现上调蛋白主要富集在Na~+/H~+转运蛋白、C端Nha C样和转录调节因子HTH、Lys R结构域中,下调蛋白的主要富集结构域是翼状螺旋样DNA结合结构域超家族和Deo R型HTH结构域;通过对差异蛋白进行筛选和相关表型测定,发现Qrr5可能参与了调控因子Lys R家族蛋白、Omp A家族蛋白和接合转移蛋白Tra A的调控来抑制自凝集形成能力和对大肠杆菌的竞争力。(4)高毒力tdh~-/trh~-副溶血性弧菌VP353感染小鼠模型构建及防控研究通过构建tdh~-/trh~-副溶血性弧菌感染小鼠模型,发现TDNH感染组小鼠的存活率显著低于对照组,TDNH感染组小鼠结肠长度显著缩短,且组织中观察到明显的萎缩和损伤;通过对感染组小鼠血清的指标测定,发现TDNH感染组小鼠血清中IL-1β、IL-6水平与对照组相比显著升高,TDPH组小鼠血清中的TNF-α、IL-1β、IL-10水平显著升高。通过对不同感染组小鼠肠道菌群的测定,发现TDNH感染组显著降低了Roseburia,Faecalibaculum等菌群的丰度,显著升高了Eubacterium fissicatena,Erysipelatoclostridium等菌群丰度。应用本实验室选育的具有广泛拮抗多重食源性致病菌的活性益生菌戊糖片球菌IM96干预TDNH感染来进行防控效果评价,发现IM96干预组可以显著提高TDNH组小鼠的存活率,恢复感染带来的肠道损伤,显著降低TDNH组小鼠血清IL-1β、IL-6炎症因子水平,当戊糖片球菌IM96干预后,可以显著降低TDNH组Eubacterium coprostanoligenes,Clostridia vadin BB60,Marvinbryantia等菌群的丰度水平,而显著升高Romboutsia,Turicibacter,Parvibacter等菌群的丰度水平,表明IM96对于tdh~-/trh~-副溶血性弧菌感染具有良好的保护作用。综上,本论文系统研究了tdh~-/trh~-副溶血性弧菌危害形成机制,为副溶血性弧菌的检测和防控研究提供了新思路和新方法,对保障食品安全、促进水产相关食品产业可持续发展具有重大的意义。

目的 探讨上调c-Ski基因表达对青光眼兔术后瘢痕形成及转化生长因子(TGF)-β、Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(Rock)信号通路的影响。方法 取30只新西兰大白兔建立青光眼模型，并进行青光眼滤过手术。将其随机分为A组(仅造模及手术，不给药)、B组(结膜下注射400μg空白质粒)、C组(结膜下注射100μg c-Ski质粒)、D组(结膜下注射200μg c-Ski质粒)和E组(结膜下注射400μg c-Ski质粒),每组6只。分别于术后2 d、4 d、7 d、14 d和28 d检测各组兔的眼压、滤过道组织中Ⅰ型和Ⅱ型胶原面积占比。术后28 d采用实时荧光定量PCR检测各组兔滤过道组织中c-Ski、TGF-β1、Rock和RhoA mRNA表达水平，采用Western blot检测各组兔滤过道组织中TGF-β1、Rselleck NMRock及RhoA蛋白表达水平。结果 术后2 d、4 d、7 d、14 d、28 d, C组、D组及E组兔眼压均低于A组和B组，D组和E组兔眼压均低于C组(均P<0.05)。术后Z-IETD-FMK体内实验剂量2 d、4 d、7 d、14 d、28 d, C组、D组及E组Ⅰ型胶原面积占比依次降低且均低于A组和B组(均P<0.05);术后14Medical kits d, C组、D组及E组Ⅱ型胶原面积占比依次降低且均低于A组和B组(均P<0.05)。术后28 d, C组、D组、E组兔滤过道组织中c-Ski mRNA表达水平均高于A组和B组，TGF-β1、Rock及RhoA的mRNA和蛋白表达水平均低于A组和B组，且C组、D组、E组c-Ski mRNA表达水平依次升高，TGF-β1、Rock及RhoA的mRNA和蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论 上调c-Ski基因表达能够降低青光眼兔术后的眼压，减少胶原合成，抑制瘢痕形成，这可能与其抑制TGF-β1及RhoA/Rock信号通路有关。

目的：探讨二甲双胍（Met）对大鼠脑出血（ICH）后血肿周围组织继发损害的保护作用及机制。方法Ipatasertib体内：将60只成年雄性SD大鼠随机分为Met组、对照组和假手术组，每组20只，再分为1、3、7、14 d四个亚组。对照组和Met组大鼠脑实质内注射自体不凝血制作脑出血模型，假手术组不向大鼠脑内注血。Met组予以Met 100 mg/D-Lin-MC3-DMA试剂(kg·d)连续灌胃，对照组与假手术组予以100 mg/(kg·d)生理盐水连续灌胃。于第1、3、7、14天相应时间点处死大鼠获取脑组织标本，处死前观察各组大鼠症状进行神经功能障碍评分。脑组织标本采用干湿法测含水量、HE染色观察病理改变，黄嘌呤氧化酶法测SOD活力、硫代巴比妥酸法检测MDA含量，Western blot检测Bax及Bcl-2凋亡蛋白表达。结果：与假手术组相比，对照组和Met组术后第1、3、7、14天大鼠神经功能障碍评分均明显升高，血肿周围组织均可见炎性病理改变、含水量增加、SOD活力降低、MDA含量升高、Bax的表达上升及Bcl-2的表达降低（P<0.05）；与对照组相比，Met组术后第1、3、7、14天大鼠神经功能障碍评分明显降低，血肿周围gut-originated microbiota组织炎性病理改变程度减轻、含水量减少、SOD活力升高、MDA含量降低，Bax的表达降低及Bcl-2的表达增加（P<0.05）。结论：Met对大鼠ICH后血肿周围组织继发损害具有保护作用，其保护作用机制可能是通过清除血肿周围损害组织的自由基和抗细胞凋亡而发挥的。

水稻细菌性条斑病是由稻黄单胞菌稻生致病变种(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola， Xoc)所引起，尽管该病是水稻粮食生产中的严重病害之一，但目前对Xoc致病的分子机理研究较少。我们的前期工作对广西农科院分离到的Xoc菌株GX01进行基因组进行分析，发现一个编号为XOCgx＿2828的基因编码一个黄单胞菌Bucladesine IC50毒力调控蛋白XrvA。为了解该基因在Xoc致病过程中的作用，本工作采用自杀质粒pK18mobsacB介导的方法构建了xrvA基因的缺失突变体，并对突变体进行Calbiochem Probe IV反式互补。表型分析发现，xrvA基因突变体ΔxrvA在寄主植物水稻上的致病力无显著变化，其在非寄主植物烟草叶片上引起的过敏反应与野生型菌株基本一致。突变体的胞外多糖产量及胞外酶活性与野生型基本一致，但其运动性却显著增强。转录组分析发现，在营养丰富培养基NB中培养时，突变体ΔxrvA中很多与运动性相关基因的转录水平均升高；而RT-qPCR分析发现，在基本培养基XVM2中培养时，这些运动性相关基因在xrvA突变体中的表达均明显升高。这表明Xoc中的XrvA与病原菌的致病力无关，但能够通过调控运动相关基因的表达水平来调控细胞的运动性。综上所AM-2282述，本研究通过对Xoc中xrvA的基因的功能进行分析，发现不同黄单胞菌的XrvA对病原菌的致病性调控存在明显差异的，这有利于了解植物病原细菌与植物相互作用的分子机理，为日后防治水稻病害提供知识基础。

巨核细胞增生不良及血小板释放障碍在免疫性血小板减少症（ITP)中的致病作用日趋突显,并作为该病的治疗靶点而被广泛研究.升血小板胶囊在临床上可有效提高ITP患者的血小Pexidartinib MW板数量,但作用机制未知.用升血小板胶囊悬液通过灌胃处理Bal/c小鼠14 d,再腹腔注射CD41单抗造ITP模型并观察血小板回升情况.通过病理切片、流式分析、分选、RT-PCR、RNA-seqVP-16体内等技术分析升血小板胶囊对巨核细胞增殖及血小板释放的作用.结果表明,升血小板胶囊治疗组的ITP模型鼠血小板回升速度显著高于对照组;巨核细胞数量及血小板释放相关Congenital CMV infection凋亡蛋白表达增加;应用血小板生成素(TPO)受体及I型干扰素表达增加;JAK2-STAT信号通路被显著激活,均可促进巨核细胞增殖及血小板释放.本研究证明升血小板胶囊可以通过JAK2-STAT信号通路增加巨核细胞数量、促进巨核细胞血小板释放治疗ITP.

目的：依据肺腺癌（LUAD）患者铁死亡与长链非编码RNA(lncRNA)之间的相关性，结合免疫分型构建新型风险评分模型以评估LUAD患者的预后。方法：基于生物信息学技术下载TCGA数据库中LUAD样本转录组数据和临床数据，获取来自FerrDb数据库铁死亡相关的基因，通过“caret”包将整理后的504例LUAD样本随机分为50%训练集与50%验证集，采用Pearson相关性分析、单因素Cox回归得到与LUAD预后有关的铁死亡相关lncRNA，利用R软件的“ConensusClusterPlus”包和CIBERSORT软件进行免疫相关分析，LASSO回归分析建立probiotic supplementation铁死亡相关lncRNA模型，受试者工作特征（ROC）曲线及曲线下面积（AUC）评估预后模型的效能，并通Roxadustat体外过验证集进行验证。结果：单因素Cox及LASSO回归分析筛选出9个铁死亡相关lncRNA构成的风险评分模型。单Tezacaftor小鼠因素以及多因素Cox回归分析均显示，本预后模型可以作为一个独立的预后因素（P<0.001），该模型在训练集、内部验证集及外部验证集中均具有较好的预测效能。结论：本研究构建的LUAD患者风险评分模型可作为一种新的独立预后评估手段，或可具有进一步应用的价值。

背景及目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是人类常见的恶性肿瘤之一,在全球,结直肠癌的发病率排名第三,死亡率排名第二。在我国,结直肠癌发病率和死亡率呈上升趋势。过去的几十年里,我们对结直肠癌的了解不断加深。但是,仍然有相当一部分的病人预后较差。所以,探索各个信号通路及其相关基因对结直肠癌的影响有助于提高我们对结直肠癌的认知、改善结直肠癌患者的预后。有研究表明,PI3K-AKT信号通路在结直肠癌、乳腺癌等多种癌症的发生发展过程中发挥重要作用。PIK3CA基因作为PI3K-AKT通路中的一个关键基因,它的突变会引起PI3K催化活性异常增强,促使细胞发生癌变。PIK3CA基因与结直肠癌密切相关,尽管之前有研究已经报JNJ-42756493抑制剂道过PIK3CA基因对结直肠癌的影响,但是,目前仍然没有统一的定论。之前的研究更多的集中在转移性结直肠癌中,对于PIK3CA基因在非转移性结直肠癌中的研究还并不完善。并且,对于PI3KCA基因常见外显子9和外显子20的突变在非转移性结直肠癌中的研究也寥寥无几。因此,在本研究中,我们基于TCGA数据和本院数据,对PIK3CA基因及其常见外显子突变在非转移性结直肠癌中的作用进行了联合研究,旨在探讨PIK3CA基因在非转移性结直肠癌中的发生情况及其意义。方法:1、从TCGA数据库中下载结直肠癌患者的临床数据资料以及基因表达资料,筛选出非转移性结直肠癌病例。计算PIK3CA突变率及各个外显子突变率。分析PIK3CA突变在非转移性结直肠癌中与临床病理特征的相关性。同时,对于突变率前二的外显子(外显子9和外显子20),分别分析外显子突变在非转移性结直肠癌中与临床病理特征的相关性。对PIK3CA突变在非转移性结直肠癌、非转移性结肠癌和非转移性直肠癌中分别进行预后分析。分别分析突变率前三的外显子(外显子1、9、20)对非转移性结直肠癌的预后影响。2、按照纳入和排除标准,收集本院2014年12月至2021年12月非转移性结直肠癌患者相关信息并进行生存随访,同时对这些非转移性结直肠癌患者进行PIK3CA基因检测。计算PIK3CA突变率及各个外显子突变率。分析PIK3CA突变在非转移性结直肠癌中与临床病理特征的相关性。同样,分别分析外显子9和20突变在非转移性结直肠癌中与临床病理特征的相关性。分析PIK3CA突变在非转移性结直肠癌、非转移性结肠癌和非转移性直肠癌中的预后情况。分别分析外显子9和20突变对非转移性结直肠癌的预后影响。结果:1、在TCGA数据中,PIK3CA基因在非转移结直肠癌中的突变率为26.3%,在非转移性结肠癌中,PIK3CA突变率为30.0%,在非转移性直肠癌中,PIK3CA突变率仅为15.7%。在非转移性结直肠癌中,外显子9、外显子20和外显子1突变率位居前三,分别为10.3%、7.1%和5.6%。外显子9的E545K、E542K,外显子20的H1047R和外显子1的R88Q是突变频率较高的几个热点突变。进一步的分析发现,非转移性结直肠癌患者PIK3CA基因突变型与野生型在肿瘤部位(p=0.003)、TNM分期(p=0.011)、区域淋巴结转移(p=0.011)中具有统计学差异。外显子9突变型与野生型在肿瘤部位(p=0.038)中有统计学差异。外显子20突变型与野生型在肿瘤部位(p=0.002)、区域淋巴结转移(pFlow Antibodies=0.045)中有统计学差异。Kaplan-Meier分析结果显示,在非转移性结直肠癌中,PIK3CA突变型与野生型的总生存期(OS)无显著差异(p=0.753);在非转移性结肠癌中,PIK3CA突变型与野生型的OS也无显著差异(p=0.836);同样的,在非转移性直肠癌中,PIK3CA突变型与野生型的OS无显著差异(p=0.963)。具体到外显子1、9和20,在非转移性结直肠癌中,外显子1突变型和野生型OS无显著差异(p=0.402);外显子9突变型与野生型的OS无显著差异(p=0.585);外显子20突变型与野生型的OS也无显著差异(p=0.386)。2、在本院数据中,PIK3CA基因在非转移性结直肠癌中突变率为7.8%,非转移性结肠癌中突变率为9.4%,非转移性直肠癌中突变率为4.6%。在非转移性结直肠癌中,外显子9突变率为2.9%,外显子20突变率为4.9%。非转移性结直肠癌患者PIK3CA突变型与野生型在年龄(p=0.032)、肿瘤部位(p=0.029)、TNM分期(p=0.019)和区域淋巴结转移(p=0.007)中有统计学差异。外显子9突变型与野生型在年龄、肿瘤部位、区域淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征中均无统计学差异。外显子20突变型与野生型在年龄(p=0.001)、肿瘤部位(p=0.029)、TNM分期(p=0.001)和区域淋巴结转移(p=0.015)中有统计学差异。Kaplan-Meier分析结果显示,在非转移性结直肠癌中,PIK3CA突变型与野生型的OS无显著差异(p=0.567);在非转移性结肠Taurine试剂癌中,PIK3CA突变型与野生型的OS也无显著差异(p=0.531);同样的结果在非转移性直肠癌中也被发现,PIK3CA突变型与野生型的OS无显著差异(p=0.774)。具体到外显子,在非转移性结直肠癌中,外显子9突变型与野生型在OS上无显著差异(p=0.354)。外显子20突变型与野生型在OS也无显著差异(p=0.895)。结论:1、PIK3CA基因突变与非转移性结直肠癌患者的预后无关。2、在非转移性结直肠癌中,PIK3CA基因突变与年龄、肿瘤部位、TNM分期和区域淋巴结转移有关。3、在非转移性结直肠癌中,PIK3CA外显子9突变与肿瘤部位有关;4、在非转移性结直肠癌中,PIK3CA外显子20突变与年龄、肿瘤部位、TNM分期和区域淋巴结转移有关。

血栓性血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura, TTP）是一种罕见但有致命性的血栓性血液病。TTP分遗传型（hereditary）和免疫型（immune-mediated）。遗传型TTP是由于ADAMTS13(adisintegrin and metalloprotease with thrombospondin-1 repeats, 13)基因缺陷所致，而免疫型TTP则由ADAMTS13的自身抗体抑制了其血浆活性所致。准确和及时地对疑诊TTP的患者进行诊断和分型，并将TTP与补体介导的溶血性尿毒症综合征（complement-mediated hemolytic uremic syndrome, cHUS）和其他原因所致的血栓性微血管病（thrombotic microangiopathy）相鉴别，是近年来靶向治疗成功的关键。血浆ADAMTS13活性和抑制物（或自身抗体）的检测对TTP可疑患者的诊断和进一步处理有着极其重要的临床指导意义。三期临床试验和临床实践均表明，血浆置换（thelinear median jitter sumrapeutic plasma exchange, TPE）、类固醇皮质激素（corticoMLN4924浓度steroids）、卡普拉西族单抗（caplacizumab）和利妥昔单抗（ritux点击此处imab）四联疗法对急性免疫性TTP的治疗有效且安全。这种新疗法，可显著加速血小板计数恢复正常，减少治疗期间病情的反复，并缩短重症监护室和普通病房住院的时间。更重要的是，这种四联疗法可能降低TTP所致的死亡率和持续性微血栓所致的并发症。本文将如何诊断和处理TTP的一些最新进展作一简述。