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目的 探讨乳癖散结胶囊联合他莫昔芬治疗乳腺增生的效果与安全性。方法 选取2020年4月至2021年12月临沂市肿瘤医院收治的乳腺增生患者60例作为研究对象，随机分为对照组与试验组，每组30例。对照组单纯给予他莫昔芬治疗，试验组采用他莫昔芬Immune dysfunction+乳癖散结胶囊治CL 318952临床试验疗，比较两组的治疗效果。结果 试验组治疗有效率93.33%，对照组73.33%，差异有统计学意义（χ~2=4.320,P=0.038<0.05）。治疗后试验组视觉模拟评分法（VAS）评分（2.01±0.30）分，低于对照组的（3.44±0.45）分，差异有统计学意义（t=5.274,P=0.017<0.05）。治疗后3个月时，两组血清孕酮、卵泡刺激素水平上升，雌二醇、黄体生成素及催乳SCH772984分子式素水平降低，且试验组以上性激素指标改善程度均比对照组显著，差异有统计学意义（P<0.05）。两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 采用乳癖散结胶囊联合他莫昔芬方案治疗乳腺增生，能提升疾病治疗效果，减轻疼痛，改善性激素水平，并且安全性较高。

[目的] 探究ENO1通过NCOA4对胶质母细胞瘤（GBM）细胞铁死亡的调节机制。[方法] qRParamedic careT-PCR和Western blot检测GBM组织和正常组织中ENO1的表达。人GBM细胞系U251细胞分为对照组、si-ENO1-NC组、si-ENO1-1组、si-ENO1-2组、si-ENO1+si-NCOA4-NC组、si-ENO1+si-NCOA4组，分别转染siRNA-ENO1-NC、siRNA-ENO1、siRNA-NCOA4-NC或siRNA-NCOA4序列，qRT-PCR和Western blot验证ENO1或NCOA4的表达；Western blot检测铁蛋白重多肽1(FTH1）蛋白表达；MTT法分析U251细胞增殖能力；试剂盒检测U251细胞ROS、MDA、Fe~(2+)含量及线粒体膜电位；透射电镜观察线粒体形态；PI染色检测U251细胞死亡率。[结果] 与正常组织相比，GBM组织中ENO1 mRNA和蛋白表达较高（P<0.05）。与对照组和si-ENO1-NC组相比，转染si-ENO1可降低ENO1 mRNA和蛋白表达、FTH1蛋白表达以及RepSox细胞培养24、48、72 h的细胞增殖活力（24 h OD值：0.35±0.05 vs 0.48±0.09,0.35±0.05 vs 0.50±0.08;48 h OD值：0.56±0.07 vs0.98±0.13,0.56±0.07 vs 1.05±0.10;72 h OD值：0.69±0.08 vs 1.35±0.14,0.69±0.08 vs 1.38±0.11）、红/绿荧光比值（3.46±0.79 vs 11.14±1.53,3.46±0.79 vsselleck HPLC 10.97±1.82)(P<0.05），增加ROS(7.13±0.69 vs 1.00±0.12,7.13±0.69 vs 0.97±0.16）、MDA (5.61±0.53 vs 1.85±0.26,5.61±0.53 vs 1.83±0.42）、Fe~(2+)含量（6.79±0.78 vs 2.41±0.32,6.79±0.78 vs 2.46±0.47）、细胞死亡率（25.48±3.17 vs 7.31±0.84,25.48±3.17 vs 7.24±1.02）、NCOA4 mRNA和蛋白表达（P均<0.05),si-ENO1的上述作用均可被si-NCOA4逆转。[结论] ENO1缺失可上调NCOA4表达，降低FTH1蛋白水平，进而促进ROS、MDA及铁释放，诱导GBM细胞铁死亡。

β-葡聚糖是D-葡萄糖单体通过β-糖苷键连接而成的大分子多糖,具有多种生物学活性。近年来研究表明β-葡聚糖具有调节肠道菌群、缓解氧化应激、抗炎及修复肝损伤等作用,但是目前β-葡聚糖护肝作用潜在的分子机制尚不清晰。本文以CCl_4诱导的肝损伤小鼠为研究模型,以微生物源β-葡聚糖Salecan为研究对象,主要研究了微生物源β-葡聚糖Salecan对肝脏功能的影响及其作用机制。首先,明确微生物源β-葡聚糖对CCl_4诱导的肝损伤小鼠的影响。构建CCl_4诱导的肝损伤小鼠模型,通过不同剂量的β-葡聚糖膳食干预8周后,考察β-葡聚糖对肝损伤小鼠的特异性血清指标、肝脏抗氧化酶活力、抗氧化物质水平medicine re-dispensing、促炎性细胞因子水平的影响;并探究了β-葡聚糖通过核因子E2相关因子2(Nrf2)及核因子κB(NF-κB)通路改善肝损伤的分子机制。研究结果表明,CCl_4处理小鼠会导致小鼠出现氧化应激及炎症症状,而β-葡聚糖干预可以降低血清谷丙转氨酶活(ALT)、谷草转氨酶活(AST)、总胆红素(TBIL)的水平,缓解促炎性细胞因子的表达,提高肝脏抗氧化酶活力和抗氧化物水平。同时,β-葡聚糖干预可以促进Nrf2的核易位,激活与抗氧化相关的基因(GsBemcentinib小鼠ta、Hmox-1和Prdx5)的m RNA表达,并通过抑制NF-κB p65磷酸化,促进肝巨噬细胞的M2型极化,从而起到缓解氧化应激和抗炎的效果。其次,探究了肠道微生物对β-葡聚糖发挥护肝作用的影响。采用伪无菌小鼠模型发现,β-葡聚糖干预对ALT、AST、SOD、CAT、MDA、Nrf2信号通路和NF-κB信号通路等指标无显著影响。为了进一步验证肠道菌群结构是否在β-葡聚糖干预对肝损伤的调控机制中发挥关键作用,采用粪菌移植实验发现β-葡聚糖处理小鼠的粪菌移植部分缓解了CCl_4诱导的氧化应激和炎症症状,其中显著改善抗氧化相关基因(GsSCH727965体外ta、Nqo1、Prdx5和Trx1)的表达和SOD(超氧化物歧化酶)的活力,并抑制NF-κB的活化和与炎症反应相关基因(IFN-γ、NLRP3和HMGB1)的表达水平,但是对肝脏器官指数、血清ALT和AST活力、肝脏CAT和GSH水平、Nrf2的蛋白表达水平没有显著影响。说明β-葡聚糖的护肝作用并不依赖于肠道菌群的结构变化。最后,探究了β-葡聚糖代谢物对THLE-2细胞损伤的改善作用。通过采用H_2O_2诱导的THLE-2肝细胞损伤模型,来探究由肠道微生物介导的代谢物对肝脏健康的影响。结果发现,在H_2O_2诱导的THLE-2肝细胞损伤模型中,代谢物处理可以通过激活Nrf2信号通路,提高抗氧化相关的基因(Trx1、Prdx5和Gclc)的表达,提高SOD酶活力,减少ROS的生成,改善细胞氧化损伤。此外,代谢物的处理通过抑制NF-κB的活化,抑制炎性细胞因子的表达,改善H_2O_2诱导的THLE-2细胞炎症。上述研究证明了β-葡聚糖肠道代谢产物参与了肝损伤的改善机制。总之,本文主要从微生物源β-葡聚糖Salecan对肠道菌群及其代谢产物的调控角度,阐明了微生物源β-葡聚糖通过改善氧化应激和炎症对肝损伤的调控作用及机制。本文为微生物源β-葡聚糖改善肝损伤提供新的理论依据,并为肝损伤的膳食干预提供新策略。

目的：考察葛根芩连汤对非酒精性脂肪肝炎大鼠抗炎和抗氧化应激方面的活性，以及对相关通路的影响，阐明葛根芩连汤在此方面的作用机制。方法：采用蛋氨酸胆碱缺乏饲料建立非酒精性脂肪肝炎大鼠模型，分别设置空白组、模型组、阳性组和不同剂量葛根芩连汤给药组，通过分析大鼠血清炎症指标、肝组织抗氧化能力指标、肝组织病理切片，并结合Western blot和RT-qPCT技术，最终阐明葛根芩连汤BAY 73-4506价格对非酒精性脂肪肝炎大鼠抗炎和抗氧化应激的作用机制。结果：葛根芩连汤各剂量组均可显著降低非酒精性脂肪肝炎模型大鼠血清中IL-6、IL-8、IL-10、IFN-α、IFN-β的含量，且葛根芩连汤中、高剂量组与模型组、水飞蓟宾组相比均具有统计MSC necrobiology学意义；另外，葛根芩连汤各个剂量组均可显著降低非酒精性脂肪肝炎大鼠肝组织中ALT、AST、MDA的含量，同时显著提升其SOD、GPX、T-AOC的含量；Western blot和RT-qPCR的结果显示，葛根芩连汤可显著降低该模型肝组织中Pselleck HPLCI3K、AKT、p-FOXO1蛋白和mRNA的表达量，显著提升FOXO1、SIRT1、Catalase蛋白和mRNA的表达量，且在高剂量给药时与水飞蓟宾组相比同样具有统计学意义。结论：葛根芩连汤主要通过调控PI3K/AKT/FOXO1信号通路，发挥抗炎和抗氧化应激的作用而治疗非酒精性脂肪肝炎。

脂肪酶(EC 3.1.1.3)能催化油脂水解,生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。基于良好的立体选择性、有机溶剂耐受性和底物耐受性,来源于南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶B(CALB)被广泛应用于对映异构体药物拆分、功能性酯类与生物柴油合成。CALB工业化应用中(如,催化甘油和碳酸二甲酯合成碳酸甘油酯),较高的反应温度有助于传购买PF-6463922质和产物合成效率。因此,开发高热稳定性的CALB一直是国内外研究的热点。为了提高CALB的热稳定性,本研究通过脯氨酸扫描和共识序列(consensus sequence)改造提高了C.antarctica LF058来源的CALB的热稳定性,并通过表达元件和发酵条件优化提高了其在Aspergillus niger AG11-PK中的表达水平。主要研究结果如下:(1)脯氨酸扫描和共识序列改造提高CALB的热稳定性首先基于Rosetta Cartesian＿ddg脚本对CALB进行脯氨酸扫描,选择折叠自由能降低最多的8个突变体在大肠杆菌中表达和酶学性质表征,获得稳定性提升的突变体S31P和K98P。与野生型CALB相比,S31P和K98P在50℃处理5 min后的残余酶活分别提高4.4%和8.5%。将CALB与48条不同来源的脂肪酶序列进行比对获得共识序列,将显著提升CALB序列保守性的14个突变体在大肠杆菌中表达,并测定其酶学性质。其中,获得热稳定性提升的突变GDC-0068浓度体I87V、G114A、A148G、T159A和A284N的残余酶活较野生型分别提高了10%、10.1%、2.6%、10.5%和13.4%。将上述正向突变体进行组合,获得了高稳定性突变体A284N/G114A(CALBm-E)。与野生型CALB相比,CALBm-E在50℃下的半衰期提高了74.7%,达到14.5min;但后者比酶活(16.1 U·mg~(-1))和k_(cat)/K_m(5932.3 m M·min~(-1))分别较前者下降了36.3%和23%。分子动力学模拟表明,增加的疏水相互作用和氢键可能提升了CALBm-E蛋白分子的整体刚性,是其稳定性提高的主要原因。(2)表达元件优化提高CALB在A.niger中的表达以P_(bgl)(A.niger来源的β-葡糖苷酶启动子)为启动子构建CALB基因表达框。以上述载体为模板,通过PCR扩增得到包含CALB基因表达框和潮霉素抗性基因(hyg B)的基因片段P_(bgl)-calb-hyg B。将P_(bgl)-calb-hyg B转化A.niger AG11,获得基因组随机整合CALB基因的重组菌。在30℃下发酵96 h,胞外酶活为2.7 U·m L~(-1)。SDS-PAGE和Western Blot分析表明,A.niger表达的CALB分子量为38 k Da。为提高CALB表达水平,分别采用诱导型(P_(gla A)、P_(amy A)和P_(amm A))和组成型(P_(mbf A)、P_(pki A)和P_(gpd A))启动子替换P_(bgl)。其中,以P_(gla A)为启动子获得CALB表达量最高(3.42 U·m L~(-1)),较优化前增加22.4%。基于最佳的启动子条件下,将A.niger AG11糖化酶N端前部分(50-500)和全部氨酸序列融合至CALB的N-端。其中,融合糖化酶前500个氨基酸的CALB表达量达到11.2 U·m L~(-1),较优化前提高226.2%。基于CRISPR-Cas9系统,将优化后的CALB表达框分别定点整合至A.niger AG11-PK(非同源末端修复基因kus缺失菌株)基因组的amy A,amm A和bgl位点。其中,amy A位点获得CALB表达量达到17.7U·m L~(-1),较优化前提高了58%。(3)A284N/G114A在A.niger中的表达及酶学性质分析基于CRISPR-Cteaching of forensic medicineas9系统,将融合最佳表达元件的A284N/G114A基因整合至AG11-PK中的amy A位点;得到的重组A.niger发酵96 h,CALBm-A活力为18.7 U·m L~(-1)。为提高CALBm-A的表达水平,优化了重组A.niger发酵条件。在最佳条件下(接种量10%,发酵温度32℃,p H 5.5时),CALBm-A酶活达到22.4 U·m L~(-1),较优化前提高19.8%。在此基础上,确定了最佳培养基组成为:玉米淀粉20 g·L~(-1),麦芽提取物30 g·L~(-1),玉米浆:牛肉膏=1:2(总添加量为30 g·L~(-1)),吐温80 0.15%。在此培养基条件下,CALBm-A酶活达到34.8 U·m L~(-1),较优化前提高了55.4%。进一步分析了A.niger表达的野生型CALB和A284N/G114A(CALBm-A)酶学性质差异。结果显示,CALBm-A在50℃下的半衰期(t_(1/2))和熔解温度(T_m)分别达到54.7 min和59.6℃,分别较野生型CALB提高91.9%和1.8℃;然而,CALBm-A的K_m值(15.3m M)增加了28.8%,k_(cat)/K_m(7810 m M·min~(-1))降低了21.4%。

ABT-263核磁为探明铁线莲花色相关次生代谢产物的含量及其药理，本研究应用Folin-酚比色法、香草BSIs (bloodstream infections)醛-盐酸法、分光光度法等方法分别测定了7种铁线莲品种萼瓣中的总酚、单宁、原花青素、类黄酮和花色苷含量，且逐一对其药理进行了研究与分析。测定结果表明，7种铁线莲品种萼瓣中均积累了丰富的酚类物质和类黄酮物质，分别介于6.51～8.50 mg/g之间和1.15～3.04 mg/g之间，也均积累了一定量的单宁、原花青素和花色苷成分。药理分析表明，铁线莲花色相关次生代谢产物(总酚,单宁,原花青素,类黄酮和花色苷)均具有很好EPZ-6438 IC50的抗氧化活性和清除自由基的能力，可以有效抗氧化、抗衰老、去除体内自由基、保护心脑血管、缓解炎症、抑制癌症等。本研究的实施为探明铁线莲花色相关次生代谢产物的药用价值奠定了基础，亦为未来的药用开发提供了一定的理论依据。

目的:结合从腹部增强CT胰腺病灶提取的影像组学特征,构建预测IPMN良恶性的模型,结合临床部分定性定量特征,探究是否能够进一步提高IPMN病理分型诊断的准确性,以便对患者选择胰腺手术治疗还是观察进行有效地管理。方法:对从2013年1月至2022年11月期间在吉林大学第一医院影像科术前行腹部增强CT检查,并于本院进行手术治疗,术后于我院病理科明确诊断为IPMN的121患者的部分临床资料及CT影像学资料进行回顾性分析,其中良性患者61例,恶性患者60例。按照7:3的比例,将患者分成了交叉验证和独立测试的两个不同实验集,使用影像组学人工智能平台(Radiomics Intelligent 获悉更多Analysis Software,RIAS),绘制三维容积感兴趣的区域,并从中提取出了影像组学的特征,通过最小收缩与选择算子(Least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)的算法进行降维筛选,获得构建模型的特征参数,并建立胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤动脉期和静脉期的影像组学模型,以便更准确地诊断病变。此外,我们还通过受试者操作特征曲线(ROC)下的面积进一步评估各组学模型的诊断效果。选择效能最优的影像组学模型后联合筛选出的独立预测危险因素再次建模,评估该模型的诊断效能是否得到提升。结果:胰腺病变的囊实性、病理类型、病变大小、CA199、CA125、碱性磷酸酶、总胆红素、γ-谷氨酰转肽酶、糖尿病是患者IPMN良恶性预测的9个独立预测因素(p<0.05)。在测试集中,静脉期模型SVM的测试集AUC为0.801,动脉期模型SVM的测试集AUC为0.553,静脉期影像组学特征结合9个独立预测因素后,新的拟合模型AUC为0.904,极大提高了模型的预测效能。结论:IPMN的静脉期影像Emricasan组学相较动脉期预测效能更好,结合临床的定性定量特征后可Biological pacemaker以进一步提高模型的诊断效能。

骨骼作为一个独特的器官，不断地进行骨重塑，维持骨骼的生理稳态，为身体提供支持。在各种急慢性骨损伤中，初期往往伴随着炎症的出现。炎症是组织对有害刺激的保护性反应，炎症的产生inhaled nanomedicines在一定程度上是有益的，可以将免疫细胞招募到组织损伤或感染的部位，引导有害刺激的移除和愈合过程的启动。如果炎症不能及时消退，则会导致局部或全身性炎症慢性化SB431542分子量，破坏骨稳态，从而引起和加重骨骼疾病。已有研究将全身性、慢性、低水平炎症作为骨质疏松症(osteoporosis, OP)、类风湿关节炎((rheumatoid arthritis, RA)和牙周炎发病机制的一部分。特异性促炎症消退介质(specialized pro-resolving mediators, SPMs)是一类多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFAs)的代谢产物，研究发现SPMs在促进炎症消退和组织再生方面疗效显著。在此基础上也有研究证实SPMs对骨细胞有更多直接作用，能抑制骨破坏，促进骨形成。本文就SPMs对骨病的治疗作用，从促进炎症消退、防止骨破坏和促进骨形成的不同途径作一综述，以期为探讨利用SPMs治疗骨病的研究提供思路。

目的 探讨三七皂甙R1（NotoginsenosideR1，NGR1）对肺炎克雷伯菌（Klebsiellapneumoniae，Kp）感染的肺泡上皮细胞损伤及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法A549细胞分为5组：对照组（C组）、感染组（Infect组）、感染+低NGR1组（Infect+L-NGR1组）、感染+高NGR1组（Infect+H-NGR1组）、感染+高NGR1+JAK2/STAT3通路抑制剂组（Iplant innate immunitynfect+H-NGR1+SD-1029组）。采用CCK8测定细胞增殖；ELISA试剂盒检测培养液白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）含量；流式细胞术检测细胞凋亡；RT-qPCR检测JAK2、STAT3表达；westernblot检测JAK2/STAT3通路、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(Mselleck激酶抑制剂icrotubule-associatedprotein1lightchain3，LC3)、自噬相关基因5(Autophagy—relatedgene5，Atg5)、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Autophagy-relatedgene (Atg)6，Beclin1)、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(B-celllymphoma2，bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2associatedprotein， Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Cysteinylaspartatespecificproteinase，Caspases3)蛋白表达。结果 与C组相比，Infect组72h细胞活力、Bcl-2、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin-1蛋白水平、JAK2、STAT3mRNA相对表达量及蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05），IL-1β、TNF-α、IFN-γ含量、细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）。与Infect组相比，Infect+L-NGR1组、Infect+H-NGR1组72h细胞活力、Bcl-2、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin-1蛋白水平、JAK2、STAT3mRNA相对表达量及蛋白磷酸化水平显著上升（P<0.05），IL-1β、TNF-α、IFN-γ含量、细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降（P<NN2211小鼠0.05）。与Infect+H-NGR1组相比，Infect+H-NGR1+SD-1029组72h细胞活力、Bcl-2、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin-1蛋白水平、JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05），IL-1β、TNF-α、IFN-γ含量、细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论NGR1可激活JAK2/STAT3信号通路，促进肺泡上皮细胞自噬，抑制Kp诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤和凋亡。

目的 通过网络药理学和体内外实验研究，探讨铁死亡在龟鹿二仙胶治疗少弱精子症中的作用。方法 通过TCMSP数据库、HERB数据库、PubChem数据库和Swiss数据库获取龟鹿二仙胶的活性成分和作用靶点，Genecard数据库和FerrDb数据库检索铁死亡基因，GEO数据库获取少弱精子症差异基因，三者取交集构建蛋白互作网络，进行基因本体（genBIBW2992分子量e ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。使用H2O2刺激小鼠睾丸支持细胞构建氧化应激损伤模型，并用龟鹿二仙胶含药血清干预损伤模型细胞，观察细胞形态，检测细胞VX-661配制活性氧（reactive oxygen species,ROS）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、总铁和亚铁离子含量，透射电镜观察细胞超微结构，qRT-PCR和Western blotting检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)的m RNA和蛋白表达。使用环磷酰胺hepatitis A vaccine构建小鼠少弱精子症模型，ELISA检测小鼠性激素水平，苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠睾丸组织病理学改变，免疫组化检测小鼠睾丸组织GPX4和ACSL4蛋白表达。结果 共获取龟鹿二仙胶81个活性成分和190个作用靶点，686个铁死亡基因和4777个少弱精子症差异基因，龟鹿二仙胶干预少弱精子症铁死亡靶点共11个，GO富集分析共检测到869个条目，KEGG共有35条。体外实验显示，龟鹿二仙胶含药血清能显著降低细胞内ROS、LDH、总铁和亚铁离子含量（P<0.05、0.01），修复损伤线粒体，显著降低ACSL4的m RNA和蛋白表达（P<0.01），显著促进GPX4的m RNA和蛋白表达（P<0.01）。体内实验发现，龟鹿二仙胶能改善少弱精子症小鼠血清中性激素水平和睾丸组织病理损伤，显著降低小鼠睾丸组织中ACSL4蛋白表达（P<0.01），显著促进睾丸组织中GPX4蛋白表达（P<0.01）。结论 龟鹿二仙胶能有效治疗少弱精子症，拮抗铁死亡的发生可能是龟鹿二仙胶治疗少弱精子症潜在的作用机制。