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研究目的目前,肥胖已经发展为世界范围内的流行病ICI 46474 IC50,包括2型糖尿病、心脑血管疾病和肌肉骨骼类疾病。流行病学数据显示,肥胖患者及肥胖兼AMG510试剂二型糖尿病患者常伴有骨密度下降、骨质疏松、骨髓脂肪组织(Bone Marrow Adipose Tissue,BMAT)过度扩增等问题。与一般的脂肪组织(棕色脂肪组织、白色脂肪组织)不同,BMAT位于骨髓腔内。其功能包括调节骨量、造血功能、代谢稳态和骨重塑等。研究表明,运动可以提高肥胖患者的骨密度,并且减少过量的BMAT。然而,运动调节骨髓微环境的机制尚不清楚。本研究旨在探讨运动如何诱导肥胖雄性小鼠的骨髓重塑。我们通过高脂饮食(High Fat Diet,HFD)诱导建立肥胖小鼠模型,并采用转录组测序技术(RNA Sequencing,RNA-Seq)技术全面研究运动对雄性肥胖小鼠骨髓微环境的影响。同时,我们通过分离骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)并模拟体外运动,探讨运动对骨髓间充质干细胞的调节作用。本研究以期为运动治疗肥胖和糖尿病提供新的策略,并减少骨质疏松类并发症的可能。研究方法1.动物研究购买8周龄雄性C57BL/6小鼠。待小鼠适应期过后,对小鼠进行HFD喂养6周以诱导肥胖模型。随后将肥胖小鼠随机分为2组:肥胖组(Obesity group,Ob n=9)和肥胖联合运动组(Obesity+Exercise group,Ob+Exe n=9)。运动组每天以中等强度进行1小时跑台运动,每周6天,并持续12周。肥胖组除喂食HFD外无其他干预措施。每周通过核磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging,MRI)测量身体成分。在第十二周开始时,对小鼠进行胰岛素耐量实验(Insulin Tolerance Test,ITT)以及葡萄糖耐量实验(Glucose Tolerance Test,GTT)。2.骨骼处理与分析将股骨分离固定后,使用微型计算机断层扫描(Computed Tomography,CT)进行骨密度定量。扫描后重建股骨远端生长板附近的皮质骨和小梁骨结构。使用锇酸染色法对另一侧股骨BMAT进行染色,使用CT扫描重建BMAT并定量。3.骨髓处理与分析分离胫骨骨髓,使用RNA-seq技术检测运动前后骨髓组织全基因组的变化。使用实时荧光定量PCR(Real-time qpcr,RT-PCR)检测骨髓组织中部分骨代谢相关基因的表达水平;使用Western Blot检测降脂蛋白(Adipsin)及骨代谢相关蛋白含量。4.BMSCs的培养与处理从胫骨中分离BMSCs,待细胞密度达到70-90%后将BMSCs传代。收集第二代或第三代细胞,在6孔牵拉板中使用成熟脂肪诱导分化培养基诱导BMSCsarterial infection向脂肪细胞分化。同时,将所有细胞均分为对照组(Control,n=4)和牵拉组(Stretch,n=4),对照组除牵拉外其他条件与牵拉组保持一致。采用Flexcell FX-5000牵拉系统模拟体外运动。牵拉结束后收集细胞进一步分析。研究结果1.肥胖小鼠12周有氧运动改善体成分及胰岛素抵抗肥胖小鼠经12周中等强度跑台运动干预后,在HFD喂养条件下,Ob+Exe组小鼠的体重与脂肪含量均显著低于Ob组(p<0.01),瘦体重则无明显差异。ITT结果显示,在60min时间点时Ob+Exe组小鼠血糖浓度显著低于Ob组小鼠(p<0.05)。并且Ob+Exe组的ITT曲线下面积显著低于Ob组(p<0.05)。2.肥胖小鼠12周有氧运动提高骨密度12周中等强度跑台运动结束后,CT定量分析结果显示,Ob+Exe组小鼠股骨骨小梁的骨表面积、骨体积和平均密度指标均显著高于Ob组(p<0.05)。3.12周有氧运动抑制肥胖小鼠BMAT过度扩增12周中等强度跑台运动结束后,BMAT的CT定量分析结果显示,Ob+Exe组小鼠BMAT体积相比于Ob组小鼠下降28%。4.12周有氧运动显著抑制肥胖小鼠骨髓中Adipsin与Spp1的表达骨髓组织RT-PCR结果表明,相对于Ob组小鼠,Ob+Exe组小鼠成骨细胞相关因子Atf4、Sparc运动后m RNA表达水平显著上调(p<0.05),Ob+Exe组破骨细胞相关因子Rankl、Spp1显著下调(p<0.05)。骨髓组织Western blot结果显示,相对于Ob组小鼠,Ob+Exe组小鼠Alp蛋白水平显著上调(p<0.01),而Spp1与Adipsin蛋白水平在运动后显著下调(p<0.01)。5.12周有氧运动通过机械感应机制改善肥胖小鼠骨髓微环境骨髓组织RNA-seq结果显示,与Ob组相比,Ob+Exe组ECM-receptor interaction(细胞外基质Extracellular matrix,ECM)、Focal adhesions通路被显著抑制(p<0.01)。同时RNA-seq分析结果显示Ob+Exe组小鼠骨重塑相关因子Spp1相对于Ob组小鼠显著下降(p<0.001),此外结果显示Spp1富集在ECM-receptor interaction、Focal adhesion以及PI3K-Akt信号通路中。同时通过HINT数据库检索发现,脂肪因子Adipsin与Spp1存在蛋白质-蛋白质相互作用。6.机械牵拉抑制BMSCs向成熟脂肪细胞分化BMSCs的RT-PCR结果显示,Stretch组Pparg1与Pparg2在机械牵拉后m RNA表达水平显著降低(p<0.05)。BMSCs的Western blot结果显示,相对于Control组,Stretch组Adipsin蛋白表达水平显著降低(p<0.01)。研究结论1.有氧运动延缓肥胖小鼠体重增长,改善肥胖小鼠胰岛素抵抗。2.有氧运动提高肥胖小鼠骨密度(Bone Mineral Density,BMD),抑制肥胖小鼠BMAT过度扩增,改善肥胖小鼠骨髓微环境。3.有氧运动通过机械感应机制重塑骨髓微环境,并可能通过Adipsin-Spp1轴调控肥胖小鼠骨组织与脂肪组织的动态平衡。4.机械牵拉刺激抑制BMSCs分化为成熟脂肪细胞。

【目的】分析成人银屑病住院患者肾小球滤过率(eGFR)降低组与正常或升高组患者临床特征,观察分析银屑病患者eGFR降低的相关因素,为银屑病肾脏损害的诊断、治疗提供一定线索。【方法】采取回顾性研究的方法,收集2014年1月至2021年9月于昆明医科大学第二附属医院皮肤科住院治疗的成人银屑病患者住院资料,根据eGFR值将患者分为低滤过组[eGFR<90mL/(min·1.73 m~2)]和正常或高滤过组[eGFR≥90mL/(min·1.73CCRG 81045说明书 m~2)],收集两组患者的基本情况、发病情况、临床表现特点、实验室检查、治疗及结局资料,使用统计学方法(t检验、卡方检验、秩和检验、Fisher精确概率和Logistic回归分析)比较两组之间的差异。【结果】1.研究纳入327例成人银屑病患者,患者年龄18～90岁(平均年龄为46.37±14.74岁),男性214例(65.4%)、女性113例(34.6%),男女比例为1.89:1。eGFR低滤过组86例(26.3%)、正常或高滤过组241例(73.7%),分组比例等于1:2.8;2.低滤过组患者入院年龄、病程均大于正常或高滤过组(P<0.05)。两组患者在性别、民族、银屑病类型、吸烟史、饮酒史、银屑病家族史无统计学差异(RepSox作用P>0.05);3.低滤过组皮损首发部位在头皮的比例低于正常或高滤过组,伴有关节疼痛的比例高于正常或高滤过组(P<0.05)。两组间在皮肤自觉症状、皮损分布部位、皮损特征方面无统计学差异(P>0.05);4.与正常或高滤过组相比,低滤过组患者血球蛋白、肌酸激酶、尿素、肌酐、尿酸、钠、D-二聚体、白介素6水平和尿隐血1+及以上、尿蛋白1+及以上的发生率较高,而红细胞、白球比水平较低(P<0.05)。两组间在其他实验室指标构成差异上无统计学意义(P>0.05)。两组间在既往治疗、住院主要治疗用药、住院天数、费用、结局的差异无统计学意义(P>0.05);5.多因素Logistic回归分析提示患者银屑病病程长、血尿酸水平高、尿蛋白1+及以上与eGFR降低的风险增大显著相关。相反,皮损首发头皮、血红细胞高与eGFR降低的风险减小显著相关。【结论】银屑病病程越长肾小球滤过率降低的风险越大,而皮损首发在头皮的肾小球滤过率diversity in medical practice降低的风险较小;伴有关节疼痛对肾小球滤过率降低有一定参考价值;临床工作中需关注与肾小球滤过率相关的指标变化和因素,定期监测肾小球滤过率,对银屑病患者肾脏损害实现早发现、早诊断、早干预。

扇贝是重要的海产资源,具有很高的经济价值和营养价值。不同贮藏方式对扇贝贝柱营养品质由于化学或物理因素而发生相应的变化。目前,国内对扇贝在贮藏过程中的品质变化的研究主要以蛋白质的冷冻变性和组织结构的变化等方面为主。本文以栉孔扇贝贝柱为研究对象,对扇贝贝柱进行不同方式贮藏(新鲜、4°C冷藏7天以及-20°C冷冻30天),从扇贝贝柱品质特性、贝柱多糖理化性质、生物活性和消化特性四个方面进行研究比较,主要结果如下:(1)贝柱品质特性:新鲜扇贝贝柱中粗蛋白含量(以干重计)为14.22%,冷藏贝柱中粗蛋白含量为15.43%,冷冻贝柱含量为21.15%。经贮藏后扇贝贝柱中灰分含量均有所上升,而水分、多糖含量、牛磺酸含量较新鲜扇贝均下降,且冷藏扇贝下降的Bioelectronic medicine较多。扇贝贝柱经贮藏后总氨基酸含量均有所升高,但必需氨基酸与氨基酸总量比值(EAA/TAA)均有所降低。贝柱游离氨基酸结果中表明贝柱呈甜鲜味,贮藏过后甜味略微减少,鲜味略微增加。生化指标方面,贝柱冷冻后p H与新鲜贝柱无显著差异,冷藏贝柱p H升高显著;三种扇贝TVB-N值有显著性差异;肌原纤维蛋白在贮藏过程中均有损耗,三种贝柱有显著性差异;糖原含量均有所下降;乳酸含量SB431542体内实验剂量呈selleckchem Dorsomorphin上升趋势,与糖原结果相反。主成分分析中,营养成分及品质中主要含有两种主成分,新鲜贝柱综合得分最高,而冷冻贝柱得分最低。(2)不同贮藏方式扇贝贝柱多糖纯度和提取率呈现新鲜贝柱多糖>冷冻贝柱多糖>冷藏贝柱多糖,蛋白质含量呈现新鲜>冷藏>冷冻的结果。不同贮藏方式扇贝贝柱多糖均检测出8种单糖,其中葡萄糖占比最大。红外以及刚果红结果显示,三种多糖结构基团相似,均为含有α-糖苷键的多糖及三螺旋结构。DSC结果显示,冷冻由于结合水含量增加,导致冷冻多糖吸热峰温度增加。三种多糖表观特征有所区别,新鲜贝柱多糖表观特征呈现松散,冷藏贝柱多糖和冷冻贝柱多糖是固缩块状的。(3)多糖体外抗氧化活性方面,三种多糖对DPPH自由基、ABTS~+自由基的清除活性在0～10 mg/m L浓度范围内均呈上升趋势。冷藏贝柱多糖对羟基自由基的清除能力均高于新鲜和冷冻贝柱多糖。铁还原能力、超氧阴离子清除能力和亚硝酸根自由基清除能力相对较弱。免疫调节活性方面,冷冻贝柱多糖和冷藏贝柱多糖的巨噬细胞吞噬能力明显提高。冷藏贝柱多糖具有显著的促进巨噬细胞NO释放的能力。(4)多糖体外模拟消化方面,不同贮藏方式扇贝贝柱多糖唾液消化1 min后,扇贝贝柱多糖中还原糖含量急剧升高。1～3 min后新鲜和冷藏贝柱多糖还原糖含量增加减缓。胃液消化还原糖含量在0～2 h内增加较缓,在2～3 h内多糖消化液中还原糖含量快速升高。肠液消化还原糖含量均呈现随消化时间的延长还原糖浓度增加的趋势。经唾液消化,冷藏贝柱多糖释放出的游离单糖更多。三种多糖胃液消化特性相同。经过肠液消化后的贝柱多糖游离单糖主要以葡萄糖和半乳糖醛酸为主。游离单糖的肠液消化特性趋势并不完全相同。唾液消化时,含>2000 k Da大分子和<70 k Da的小分子,在胃液消化时分子量均明显减小。胃液消化0.5 h后,大分子被消化为<10 k Da的小分子后,未被进一步消化。冷冻多糖胃液消化特性与冷藏贝柱多糖相似。肠液消化对分子量的降低并不显著。三种多糖经唾液消化对DPPH清除能力影响特点一致,均为先升高后下降的趋势;三种多糖经胃液消化后消化特性不同。三种多糖经三种消化方式ABTS~+自由基清除能力最大值均出现在胃液消化时间内,新鲜贝柱多糖和冷冻多糖自由基清除能力最小值出现在胃液消化时间内,而冷冻贝柱多糖最小值出现在肠液消化2 h时。三种多糖经唾液消化后新鲜贝柱多糖和冷藏多糖唾液消化特性一致。经胃液消化冷冻贝柱多糖,新鲜多糖有所下降,其中冷冻多糖清除率较其他两种多糖较高,经肠液消化后,使羟基自由基清除率略微下降。综上所述,冷藏后扇贝贝柱相对于冷冻扇贝柱更好的保留了营养成分,而冷冻方式相对于冷藏较好的保留了扇贝贝柱中的鲜度和生化指标;冷藏多糖更好的体现了体外抗氧化活性以及免疫调节活性。

目的 探讨外周血巨噬细胞趋化因子(MCP)-1、脂联素(APN)水平在老年2型糖Emricasan使用方法尿病肾病(T2DN)患者中的变化及与肾血管内皮功能障碍的关系。方法 选取老年T2DN患者95例及2型糖尿病(T2DM)患者45例，另取同期体检中心健康志愿者45例为对照组。比较3组外周血MCP-1、APN及肾血管内皮功能相关指标血清可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1、内皮素(ET)-1水平，Pearson相关性分析MCP、APN与sICAM、ET-1水平的相关性。结果 与对照组比较，T2DM组和T2DN组MCP-1水平显著升高，且T2DN组显著高于T2DM组(P<0.05);与对照组比较，T2DM组和T2DN组APN水平显著降低，且T2DN组显著低于T2DM组(P<0.05)。与对照组比较，T2DM组和T2DN组sICAM、ET-1水平显著升高，且T2DN组显著高于T2DM组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示，MCP-1与sICAM、ET-1呈正相关(r=0.542、0.681,均P<0.05);APN与sICAM、ET-1呈负相关(r=-0.461、-0.586,均P<0.05)。Logistic回归分析显示，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高水平、尿清蛋白与肌酐比值(UACR)Microlagae biorefinery高水平、MCP-1高水平、APN低水平是T2DN发生的独立危险因素(P<0.05)。结论 老年T2DN患者外周血MCP-1异常高表达，APN异常低表GSK2118436核磁达，二者与T2DN的发生及肾血管内皮功能障碍关系密切，可作为T2DN患者早期血管内皮功能障碍早期预警指标。

目的 探讨食管癌患者淋巴细胞表面T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)、程序性死亡因子-1(PD-1)、程序性死亡1-配体(PD-L1)表达及预测术后早期复发的价值。方法 选取郑州大学第一附属医院2021年1月—2022年7月期间收治的86例食管癌患者术后癌组织、术后距切缘>5 cCH-223191试剂m癌旁正常组织，统计对比不同组织、临床病理特征Tim-3、PD-1、PD-L1表达，分析临床病理特征与Tim-3、PD-1、PD-L1表达相关性，随访6个月统计复发率，比较复发与未复发患者Tim-3、PD-1、PD-L1表达，分析Tim-3、PD-1、PD-L1表达对术后早期复发的预测价值。结果 癌组织Tim-3、PD-1、PD-L1阳性表达高于癌旁组织(P<0.05);癌组织Tim-3表达对比：低分化、病变最大径>3 cm、淋巴结转移、TNM分期中Ⅲ期的阳性表达率均高于其他病理特征(P<0.05);癌组织PD-1表达对比：TNM分期中Ⅲ期的阳性表达率高于Ⅰ期、Ⅱ期(P<0.05);癌组织PD-L1表达对比：病变最大径>3 cm、淋巴结转移、TNM分期中Ⅲ期的阳性表达量高于其他病理特征(P<0.05);癌组织Tim-3表达与分化程度呈负相关，与病变最大径、淋巴结转移、bio-based oil proof paperTNM分期呈正相关(P<0.05);癌组织PD-1表达与TNM分期呈正相关(P<0.05);癌组织PD-LI表达与病变最大径、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(P<0.05);复发患者癌组织Tim-3、PD-1、PD-L1阳性表达率高于未复发患者(P<0.05);ROC曲线结果为，癌组织Tim-3、PD-1、PD-L1表达水平联合预测食E7080管癌患者术后早期复发的AUC为0.881,最佳诊断敏感度、特异度分别为86.96%、90.48%(P<0.05)。结论 食管癌患者癌组织Tim-3、PD-1、PD-L1阳性表达率高，动态检测有利于早期评估病情，联合应用时能有效预测术后早期复发风险，为临床制定防治措施提供依据。

发酵山羊乳营养价值突出,但其在加工时凝乳特性差,乳清易析出,导致加工困难。而此类问题在加入谷氨酰胺转氨酶(Transglutaminase,TGase)后可得到改善。因此,本试验以搅拌型发酵山羊乳为研究对象,发酵前加入TG酶,研究TG酶对发酵山羊乳制备及贮藏过程中理化、凝乳、质构特性、微观结构及风味品质的影响,为发酵山羊乳的品质调控提供理论依据。研究内容如Ceralasertib抑制剂下:(1)TG酶处理山羊乳发酵工艺优化。以粘度为检测指标,对TG酶处理方式、处理温度、添加量以及处理时间进行单因素及正交试验,确定适宜方案为复原乳杀菌后加入TG酶,处理温度40℃,添加量0.8 g/L,处理时间1.5 h,此条件下的发酵山羊乳粘度达1934±24.25 m Pa.s。(2)TG酶对发酵山羊乳制备过程中凝乳品质的影响。以未处理山羊乳作为对照,考察TG酶处理山羊乳发酵、后熟过程中理化、凝乳、质构特性以及微观结构特征,发现TG酶可缩短发酵乳的凝乳时间,弱化发酵山羊乳的后酸化程度。同时,TG酶处理可显著增强发酵山羊乳的粘度、持水力、质构特性与蛋白质交联程度,使其微观结构更紧密,凝乳品质全面提升。(3)TG酶对发酵山羊乳制备过程中风味品质的影响。采用GC-IMS探究发酵山羊乳发酵、后熟过genetic etiology程中挥发性物质的组成与差异。共检测到42种风味物质,发酵使得山羊乳中庚醛、己醛等膻味物质减少,有效降低羊膻味。且发酵后山羊乳风味物质增加10种,使山羊乳风味更浓郁。(4)发酵山羊乳品质GSK2118436特性研究。考察TG酶处理对发酵山羊乳理化特性、活菌数、感官品质以及代谢物的影响,发现与空白组相比,TG酶处理使发酵山羊乳后酸化程度降低,感官品质增强,代谢物组成产生差异,具体包括99个上调代谢物和127个下调代谢物,关键上调代谢物主要为甘油磷酸、5’-胸苷酸以及L-酪氨酸,推测与核苷酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸合成等通路有关。(5)TG酶对发酵山羊乳贮藏品质的影响。对发酵山羊乳贮藏28 d内的理化特性、乳酸菌数、组织状态以及风味品质进行分析,发现TG酶可显著弱化发酵山羊乳的后酸化,并对活菌数无明显影响。两组发酵山羊乳均在贮藏第7 d达到组织状态与风味的最高值,随后空白组品质开始劣化,TG酶处理可使发酵山羊乳长时间保持在高粘度、低乳清析出、高质构特性、优质风味的稳定状态。

病毒是一类严重危害人类生活健康的病原体，特别是从2019年至今全球都在饱受着新型冠状病毒对人点击此处类生命、生活及发展带来的危害。寻找疗效确切的具有抗病毒及免疫调节作用的天然药物已成为当今时下热点。中医药治疗病毒效果确切，中药内含有多种天然活性成分，许多临床常用抗病毒Bio-active comounds药物来源于中药。多糖是碳水化合物的大分子，由伸长的单糖单链组成，由糖苷键连接。中药多糖广泛存在于多种中草药当中，易于提取制备，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等多种天然活性。中药多糖抗病毒作用显著，其抗病毒分子机制主要包括多糖及其衍生物是最常见的通过免疫调节具有抗流感活性的化合物，中药治疗具有多角度selleckchem Erastin、多机制协同的特点，可避免产生耐药性，是具有极大研究价值和开发潜力的抗病毒新药。文章综述着重于总结中药多糖的抗病毒研究的最新进展和优势；解释与中药病毒活性相关作用机制。

目的 探究吲哚布芬联合红外线照射在改善血液透析患者凝血状态、血管内皮功能和动静脉内瘘功能方面的效果。方法 随机数字表法将192例在本院肾CP-456773说明书脏内科建立自体动静脉内瘘（AVF）的维持性血液透析（MHD）患者均分为2组。对照组在AVF建立后每日给予红外线照射处理；研究组在红外线照射的同时服用吲哚布芬。对比2组干预前后血脂[总胆固醇（medical curriculaTC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）PLX4032研究购买、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）]、凝血功能[活化部分凝血活酶时间（APTT）、全血黏度、纤维蛋白原（Fib）、血小板聚集率]、血管内皮功能[内皮素-1 (ET-1)、一氧化氮（NO）、血管内皮生长因子-A (VEGF-A)]变化情况；统计2组干预1个月血管成熟率、内瘘口血流量和血管通畅率。结果 与对照组比，研究组治疗后血脂TG [(4.16±1.24)mmol/L与（4.32±1.10）mmol/L]、TG [(1.59±0.40)mmol/L与（1.59±0.42）mmol/L]、LDL-C [(2.40±0.60)mmol/L与（2.43±0.69）mmol/L]、HDL-C [(1.28±0.37)mmol/L与（1.26±0.33）mmol/L]水平比较差异无统计学意义（P>0.05），研究组APTT[(33.9±2.2)s与（31.9±2.3）s]明显延长，全血黏度[（4.72±0.43）mPa·s与（5.08±0.47）mPa·s]、血清Fib [(3.10±0.28)g/L与（3.40±0.27）g/L]、血小板聚集率[（50.7±5.3）%与（56.5±4.7）%]均明显下降（P <0.05），血清ET-1 [(62±14)μmol/L与（72±14）μmol/L]、NO [(90±12)μmol/L与（80±12）μmol/L]水平降低，VEGF-A [(191±47)pg/ml与（218±43）pg/ml]水平明显升高（P <0.05）。2组血管成熟率间比较差异（74.0%与70.8%）均无统计学意义（P>0.05），但研究组内瘘口血流量[（277±31）ml与（257±33）ml]和血管通畅率（99.0%与87.5%）均明显高于对照组（P<0.05）。结论 吲哚布芬联合红外线照射可在不明显影响血脂基础上，抑制血小板聚集，调节机体凝血状态和血管内皮功能，预防AVF狭窄，提高内瘘通畅率。

D-丙氨酸是革兰氏阳性菌生长必需的氨基酸,参与肽聚糖合成。革兰氏阳性菌一般通过丙氨酸消旋酶转化L-丙氨酸获得D-丙氨酸。近年来有研究发现一些革兰氏阳性菌利用转运蛋白吸收胞外的D-丙氨酸,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的Ala P和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的Ser P2已被鉴定有吸收D-丙氨酸的功能。目前,地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)没有转运蛋白被鉴定有吸收D-丙氨酸的功能。现有研究对地衣芽孢杆菌的丙氨酸代谢认识不充分。本研究在地衣芽孢杆菌9945a基因组中通过同源比对找到一个可能参与D-丙氨酸吸收的转运蛋白Ydg F1,对其进行结构分析与功能鉴定;根据Ydg F1的功能改造全细胞催化剂,分析转运改造对地衣芽孢杆菌全细胞催化合成α-甲基-L-丝氨酸的影响。主要研究结果如下:(1)分别构建ydg F1敲除菌株9945aΔydg F1和ydg F1过表达菌株9945a/p HY300-Shu-ydg F1。用仅含有葡萄糖、无机盐、D-丙氨酸的PDA培养基比较菌株间的生长差异,发现ydg F1的敲除削弱了地衣芽孢杆菌9945a在PDA培养基中的增殖能力,ydg Double PathologyF1的过表达增强了地衣芽孢杆菌9945a在PDA培养基中的增殖能力。细胞吸收实验中9945aΔydg F1吸收D-丙氨酸的浓度明显低于9945a,而9945a/p HY300-Shu-ydg F1吸收的浓度略高于9945a,进一步验证了Ydg F1在地衣芽孢杆菌9945a中参与D-丙氨酸吸收;ydg F1的敲除或过表达对地衣芽孢杆菌9945a吸收L-丙氨酸的能力几乎没有影响,说明转运蛋白Ydg F1对D-丙氨酸有手性偏好。此外,Ydg F1还可能吸收L-天冬酰胺及与L-天冬酰胺结构相近的氨基酸。(2)采用实时荧光定量PCR评价9945a、9945aΔydg F1在LB培养基中不同生长时期ydg Fselleck产品1基因的相对表达量,发现9945a的ydg F1相对表达量在转换期和稳定期逐渐提高;参与肽聚糖循环的β-乙酰氨基葡萄糖苷酶Ybb D、肽聚糖酰胺酶Ybb E也有类似的结果。对9945a、9945aΔydg F1后期的培养基进行平板活菌计数,计算CFU。9945aΔydg F1后期培养基的CFU低于9945a,其后期衰亡速率快于9945a,说明ydg F1的敲除减弱了地衣芽孢杆菌9945a后期的生存能力。(3)在地衣芽孢杆菌9945a中异源表达嗜碱副球菌(Paracoccus alcaliphilus)的α-甲基丝氨酸羟甲基转移酶(α-m确认细节ethylserine hydroxymethyltransferase,MSHMT),全细胞催化D-丙氨酸生成α-甲基-L-丝氨酸。同时过表达转运蛋白Ydg F1和MSHMT的9945a/p HY300-Shu-ydg F1-Shu-mshmt全细胞催化1 h合成的α-甲基-L-丝氨酸与仅过表达MSHMT的9945a/p HY300-Shu-mshmt相比增加了13.6%。D-丙氨酸初始浓度为30 mmol·L~(-1)时,9945a/p HY300-Shu-ydg F1-Shu-mshmt全细胞催化3 h合成20.39 mmol·L~(-1)的α-甲基-L-丝氨酸,转化率为85.1%。本研究初步鉴定了地衣芽孢杆菌9945a转运蛋白Ydg F1的转运功能,并探究了Ydg F1在地衣芽孢杆菌9945a后期生存中的作用;利用转运蛋白的功能改造全细胞催化剂的细胞膜,提高其传质效率,为之后全细胞催化的优化提供了参考。

目medical isolation的：采用两样本的孟德尔随机化（two-sample mendelian randomization,TSMR）分析方法，探讨茶摄入量与消化系统恶性肿瘤之间的因果关联。方法：在欧洲人群的全基因组关联研究（genome-wide association study,GWAS）中选择与暴露因素茶摄入量密切相关的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP）作为工具变量。英国生物库联合会（United Kingdom Biobank,UKB）提供了消化系统肿瘤的汇总统计数据作为结局变量，其中包括食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肝癌及肝内胆管癌。采用逆方差加权（inverse-variance weighted,IVW）作为主要分析方法，并进行了异质性检验、多效性分析以及敏感性分析以评价研究的可靠性。结果：本研究在全基因组显著性水平（P<5×10~(-8)）上，共纳入32个独立与茶摄入量相关的SNPs作为工具变量。IVW分析方法显示，茶摄入量与发生肝癌或肝内胆管癌的风险增加相关（OR=1.0019,95%CI=1.0003ZD1839 molecular weight～1.0035,P=0.020），而茶摄入量与其他消化系统肿瘤的发生在统计学上没有明显联系。研究结果均不受多效性、异质性的影响，敏感性分析验证了结果的可靠寻找更多性。结论：这项孟德尔随机研究表明，饮茶可能是增加肝癌和肝内胆管癌风险的一个危险因素，但目前仍需更大样本量的GWAS数据进行进一步的孟德尔随机化研究来验证这种关系。