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目的 探索大剂量盐酸羟考酮缓释片在恶性肿瘤重度癌痛患者治疗中的作用。方法 选取2020年12月-2022年12月128例恶性肿瘤重度癌痛患者作为研究对象，依照止痛方法分为常规镇痛组和试验镇痛组。常规镇痛组64例给予常规剂量硫酸吗啡缓释片止痛，试验镇痛组64例给予大剂量盐酸羟考酮缓释片止痛，对比两组患者止痛缓解情况、血清学指标、疼痛因子水平、镇痛起效时间、不良反应。结果 试验镇痛组止痛缓解率90.63%(58/64)高于常规镇痛immune genes and pathways组76.56%(49/64),无差异(P>0.05)。两组治疗1周后去甲肾上腺素(NE)、皮质醇(Cor)、5-羟色胺(5-HT)水平较治疗前降低，试验镇痛组低于常规镇痛组(P<0.05)。两组治疗1周后PVX-661物质(SP)、前列腺素E_2(PGE_2)水平较治疗前降低，试验镇痛组低于常规镇痛组；β-内啡肽(β-EP)水平较治疗前升高，试验镇痛组高于常规镇痛确认细节组(P<0.05)。试验镇痛组镇痛起效时间短于常规镇痛组(P<0.05)。经Fisher确切概率法检验，试验镇痛组不良反应发生率与常规镇痛组经统计学分析无差异(P>0.05)。结论 大剂量盐酸羟考酮缓释片可改善恶性肿瘤重度癌痛患者疼痛因子水平，调节血清学指标，镇痛起效时间短，有良好的镇痛效果，安全性高。

目的观察芪苈强心胶囊联合左西孟旦治疗急性心肌梗死合并心力衰竭患者的效果。方法选取2022年1月—2023年1月该院收治的110例急性心肌梗死合并心力衰竭患者进行前瞻性研究,按照随机数字表法将其分为研究组和对照组各55例。对照组采用左西孟旦治疗,研究组在对照组基础上联合芪苈强心胶囊治疗。比较两组临床疗效、治疗前后血清学指标[可溶性致癌抑制因子2Talazoparib(sST2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)]水平、心功能指标[左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室射血分数(LVEF)immune rejection]水平及不良反应发生率。结果研究组治疗总有效率为94.55%(52/55),高于对照组的81.82%(45/55),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组sST2、MMP-9水平均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);两组LVEF水平均高于治ICI 46474 IC50疗前,且研究组高于对照组,两组LVESD、LVESV水平均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);研究组不良反应发生率为9.09%(5/55),低于对照组的25.45%(14/55),差异有统计学意义(P <0.05)。结论芪苈强心胶囊联合左西孟旦治疗急性心肌梗死合并心力衰竭患者,可提高临床疗效,降低sST2、MMP-9水平,改善心功能,降低不良反应发生率,效果优于单纯左西孟旦治疗。

目的 观察齐留通干预花生四烯酸5脂氧合酶（ALOX5）蛋白对呼吸道合胞病毒（RSV）感染引起的气道炎症与气道高反应AZD6738作用性（AHR）的影响。方法 6～8周雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、RSV组和RSV+齐留通组，感染后第5天以Western blot检测各组肺组织中ALOX5蛋PS-341临床试验白水平。苏木精-伊红（HE）染色观察肺部病理损伤；检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及分类计数；全身体积描述记法检测小鼠气道反应性；ELISA检测BALF中cys-LTs、IL-6、IL-8水平；探针法RTPCR检测肺组织中RSV A2 N基因拷贝数。结果 RSV感染后第biosocial role theory5天，小鼠肺组织中ALOX5蛋白水平升高，于齐留通干预后降低。齐留通可显著改善RSV感染后小鼠肺部病理损害、BALF中炎症细胞募集及AHR；齐留通干预后BALF中cys-LTs、IL-6、IL-8水平显著降低，但RSV N基因拷贝数无改变。结论 齐留通可抑制ALOX5蛋白表达，减少炎症因子产生，改善RSV感染后小鼠气道炎症与AHR。

目的 探讨金雀异黄酮对糖尿病肾病大鼠肾组织损伤的影响及其可能的分子机制。方法 取雄性SD大鼠55只，随机选择10只作为正常组，其余大鼠采用一次性腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg的方法复制糖尿病肾病模型。将40只成模大鼠随机分为模型组、金雀异黄酮组、鸦胆子苦醇组和金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组，每组10只。金雀异黄酮组给予30 mg/kg金雀异黄酮灌胃，鸦胆子苦醇组给予鸦胆子苦醇2 mg/kg灌胃，金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组给予30 mg/kg金雀异黄酮和鸦胆子苦醇2 mg/kg灌胃，均1次/d，连续灌胃6周。检测各组大鼠空腹血糖(FPG)水平及肾功能指标[血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和24 h尿微量白蛋白(24h U-m Alb)]，计算肾脏指数，HE染色、PAS染色、Masson染色观察肾组织形态，透射电子显微镜观察肾细胞超微结构，分光光度法检测肾组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量，ELISA法检测肾组织中肿瘤Lactone bioproduction坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)含量，Western blot法检测肾组织中E2相关因子2(Nrf2)、p-Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、总核因子κB(NF-κB)、胞核NF-κB蛋白表达情况AY-22989体内。结果 与正常组比较，模型组大鼠FPG、SCr、BUN、24hU-m Alb水平和肾脏指数均明显升高(P均<0.05);肾小球肥大、硬化，炎性浸润，胶原沉积，肾小球细胞可见足突肿胀或消失、基底膜弥漫性增厚、线粒体嵴断裂或消失;肾组织中T-SOD、CAT活性均明显降低(P均<0.05),MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量均明显升高(P均<0.05);肾组织中p-Nrf2、HO-1、NQO1蛋白相对表达量及p-Nrf2/Nrf2比值均明显降低(P均<0.05)，胞核NF-κB蛋白相对表达量及胞核NF-κB/总NF-κB比值均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较，金雀异黄酮组和金雀异黄酮+鸦胆子苦醇组大鼠FPG、SCr、BUN、24hU-m Alb水平和肾脏指数均明显降低(P均<0.05);肾组织病理改变和肾小球细胞超微结构病变均明显减轻;肾组织中T-SOD、CAT活性均明显升高(P均<0.05),MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量均明显降低(P均<0.05);肾组织中p-Nrf2、HO-1、NQO1蛋白相对表达量及p-Nrf2/Nrf2比值均明显升高(PBucladesine分子量均<0.05)，胞核NF-κB蛋白相对表达量及胞核NF-κB/总NF-κB比值均明显降低(P均<0.05)。鸦胆子苦醇组上述指标变化趋势与模型组相同且更加严重，鸦胆子苦醇可明显逆转金雀异黄酮对上述指标的调控作用。结论 金雀异黄酮能够抑制糖尿病肾病大鼠肾组织氧化应激和炎症反应，减轻肾组织病变和肾细胞超微结构病变，其机制可能与促进Nrf2/HO-1通路活化、抑制NF-κB核转位有关。

采用SDS-PAGE电泳定性分析蛋白质分子量组成以及可见光分光光度检测器测定氨基酸含量，通过对文冠果中粗蛋白、粗脂肪和元素的含量进行测定，分析文冠果蛋白的成分，并检验文冠果蛋白对小鼠免疫力的调节作用.以文冠果蛋白为受试物，按1.25、2.50、5.00 g/kg/d(bw) 3个剂量经口给予小鼠1个月，进行细胞免疫、体液免疫、单核巨噬细胞功能测定及IL-6、IFN-γ水平测定.结果：成分分析显示，文冠果蛋白中粗蛋白含量为62%,粗脂肪含量为4.1 g/100 g,以谷氨酸和精氨酸含量较高.功能检验显示，5.00 g/kgViral Microbiology/d(bw)组小鼠淋巴细胞增殖能力、腹腔巨噬细胞吞噬能力显著高于对照组(P<0.05).2.50 g/kg/d(bw)和5.00 g/kg/d(bw)组小鼠血清半数溶血值(HC_(50))高于对照组(P<0.05).在本试验3-Methyladenine细胞培养条件下文Cobimetinib采购冠果蛋白具有增强免疫力功能的功效，且文冠果蛋白具有降低血清中IL-6的水平，升高血清中IFN-γ的水平的作用.

RhoA信号通路在糖尿病肾病的发生发展中发挥着关键作用，可作为糖尿病肾病的治疗靶点。中药活性成分及中药复方可通过调控RhoA信号通路发挥抗氧化应激、抑制炎症反应、抗纤维化、维持内皮细胞功能、保护足细胞等作用，延缓糖尿病肾病的进展，具有多组Osteogenic biomimetic porous scaffolds分、多selleck合成靶点、副作用小等优势。目前，中药调控RhoA信号通路防治糖尿病肾病的研究仍存在不足之处：RhoA在糖尿病肾病中作用机制复杂，尚未明确是单一靶点还是多靶点调控RhoA;RhoA信号通路的激活是通过调节多个下游效应蛋白实现的，但目前对下游通路的研究多集中于ROCK,需加强对其他通路的研究；对RhoA通路和糖尿病肾病的关系研究匮乏，多集中于炎症反应的研究，可进一步明确二者关系，拓展炎症反应方向的研究，明确中药单体及更多复方的作用机制，为相关实验提供理论支撑。

目的：探讨银屑病与细胞炎症反应、凋亡有关的机制及相关分子信号通路，分析白芍总苷（TGP发挥治疗作用的机制。方法：收集并分析临床银屑病患者全基因转录组表达测序结果，分析与银屑病发病相关的主要信号通路与分子靶点。使用不同浓度的白细胞介素-17(IL-17)刺激HaCaT细胞，构建银屑病细胞模型，在不同时间点采用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测细胞活性的变化，并确定IL-17的最佳作用浓度及作用时间。使用不同浓度的TGP处理后，检测角质形成细胞活性的变化。使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-17诱导HaCaT细胞中炎症相关分子的表达，并与TGP处理后的IL-17诱导HaCaT细胞炎症-凋亡相关分子表达结果进行对比。使用生物信息学数据库预测GSK2118436与细胞炎症-凋亡因子相关的转录因子。敲除转录因子相关基因后，检测IL-17处理的HaCaT细胞中炎症-凋亡因子表达，验证相关转录因子的表达调控作用。使用蛋白质印迹法（WB）和免疫荧光技术检测IL-17诱导的HaCaT细胞中炎症-凋亡相关分子的表达，并与TGP处理后IL-17诱导的HaCaT细胞进行对比，分析TGP的治疗机制。实验中采用随机分组并同步处理细胞，分为IL-17组、对照组及TGP+IL-17组，并使用Graph Pad-Prism 6软件，采用t检验对结果进行分析。结果：全基因转录组表达测序结果显示，IL-17相关信号通路评分最高，其下游分子靶点包括IL1B、趋化因子配体（CXCL）1/2/10、趋化因子配体20(CCL20)等。细胞活性结果显示，使用IL-17诱导HaCaT细胞的最佳浓度为12.5 mmol/L，最佳处理时间为24 h。使用不同浓度TGP处理BI 10773发现，40μg/mL质量浓度效果最佳，且处理24 h后IL-17组细胞活性明显升高（P<0.01）。IL-17组炎症-凋亡相关分子靶点IL1B、CXCL1/2/10、CCL20 RNA表达水平明显升高，TGP+IL-17组分子靶点的表达明显下调。生物信息学数据库预测发现信号转导与转录激活因子3(STAT3)是IL1B、CXCL1/2/10、CCL20的潜在转录调节因子，敲除STAT3后，炎症相关因子的表达明显降低。WB结果显示，IL-17组HaCaT细胞中STAT3磷酸化水平明显升高（P<0.01），同时细胞凋亡相关蛋白Caspase-3表达明显升高（P<0.05）;TGP+IL-17组STAT3磷酸化水平和细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达明显降低（P<0.05）。免疫荧光结果显示，TGP+IL-17组STAT3磷酸化水平明显低于IL-17组（P<0.01）。结论：IL-17相关信号通路在银屑病的发展中起主导地位；TGP可能通过抑制STAT3的磷酸surface-mediated gene delivery化，降低角质形成细胞的炎症反应和细胞凋亡。

癌症已成为严重危害我国人民健康的重大疾病之一。近年来,靶向抗肿瘤药物作为治疗癌症的有效手段,成为当前国内外创新药物研发热点。但由于靶向药物专注于优化药物结合亲和力,且作用机制为“占位驱动”,导致可成药靶点较少,并microbiome data存在半衰期短、易产生耐药性、易脱靶等小分子药物固有问题。蛋白水解靶向嵌合体(Proteolysis Targeting Chimeras,PROTACs)是一类由目的蛋白配体、连接链和E3泛素化酶配体三部分组成的双功能分子。PTOTACs分子通过诱导形成“目的蛋白-PROTAC-E3泛素化酶”三元复合物,使目的蛋白打上泛素化标记,从而被泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-Proteasome System,UPS)识别并降解。与传统小分子药物通过“占位驱动”作用不同,PROTACs通过“事件驱动”的方式起到抗肿瘤作用。因此PROTACs具有高催化活性、延缓耐药、靶点亲和力需求低、可靶向“难成药”靶点等优点。基于上述研究背景,本论文主要工作如下:(1)以多靶点酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼、舒尼替尼及其衍生物为目的蛋白配体,以CRBN配体为E3泛素化酶配体,通过改变selleck抑制剂连接链的空间位阻、极性基团位置及连接CRBN配体的位点等,设计并合成了28个新型PROTACs。通过结构表征得到了关键中间体和目标产物的~1H NMR、Taurine~(13)C NMR以及HRMS等数据。(2)通过CCK8法对合成的28个PROTACs进行体外抗肿瘤活性研究。实验结果表明,PROTAC 1(基于伊马替尼与CRBN配体)和PROTAC 27(基于舒尼替尼与CRBN配体)等化合物在K562、A498、HL60等肿瘤细胞系中展现出了较为显著的抗肿瘤活性(IC_(50)=0.1～5μM),且未在NCM460细胞中观察到明显的细胞毒性。(3)通过分析目的蛋白配体固有靶标并结合网络药理学实验结果,推测BCR-ABL等蛋白可能是新型PROTACs的靶标蛋白。Western blot结果表明:PROTAC 1在K562细胞中通过UPS途径诱导了BCR-ABL的降解,并下调了c-ABL的表达水平;PROTAC 27在K562细胞中通过UPS途径诱导了GSPT1的降解,并在A498细胞中下调了c-KIT、FLT3和SRC等蛋白的表达水平。综上所述,本论文以多靶点药物为目的蛋白配体,设计、合成了28个新型PROTACs,并获得了结构表征数据。通过CCK8和Western blot等方法研究了其抗肿瘤活性及作用机制,筛选出了2个具有抗肿瘤潜力的PROTACs候选化合物,研究了基于多靶药物设计的PROTACs中连接链的变化对抗肿瘤活性的影响。本研究工作为基于多靶点药物设计的PROTACs开发提供了借鉴,进一步证明了连接链的选择在PROTACs设计中的重要性,为PROTAC技术在克服靶向药物耐药等方面的应用奠定了基础。

目的:继乳腺癌后,宫颈癌(Cervical cancer,CC)已成为20至39岁女性癌症死亡的第二大原因,与高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)的持续感染密切相关。NFX1(Nuclear transcription factor,X-box binding 1)是一种MHC Ⅱ类基因的转录抑制因子,人NFX1-123是NFX1的亚型之一,在HPV阳性的原发性宫颈癌中高表达,推测NFX1-123可能在宫颈癌发生发展中发挥重要作用,可能与细胞端粒酶活性及细胞衰老等机制相关。本研究旨在:1.构建并验证NFX1-123基因真核表达质粒;2.初探NFX1-123与HPV16 E6的细胞定位关系和可能作用机制;3.阐明NFX1-123对过表达HPV E6的细胞端粒酶活性和细胞衰老的作用是否受高低危型HPV影响;4.探索上述E6-NFX1-123通路与E6-E6AP-p53/p21通路之间的相关性。方法:1.获取NFX1-123基因片段,将其插入真核表达载体,构建并鉴定重组表达质粒;2.通过免疫共沉淀方法对NFX1-123和HPV16 E6的相互作用进行验证,选用免疫荧光方法对两者的细胞定位关系进行研究;3.采用SA-β-Gal染色检测HEK 293T细胞的衰老情况;4.采用Western blot检测p53、p21、NFX1-123等蛋白的表达水平。结果:1.酶切鉴定和测序确认了重组表达质粒nHA-NFX1-123/pRK5构建成功,HA-NFX1-123蛋白可在HEK 293T细胞中正常表达且主要表达在细胞质中;2.通过免疫共沉淀法验证了 NFX1-123和HPV16 E6蛋白结合。通过免疫荧光实验观察到与HPV16 E6共表达时,NFX1-123从HEK 293T细胞的细胞质迁移至细胞核并与细胞核中的HPV16 E6发生共定位;Video bio-logging3.共同过表达高危型HPV16 E6和NFX1-123显著提高HEK 293T细胞的端粒酶活性,而过表达低危型HPV6 E6和NFX1-123对细胞的端粒酶活性无影响;4.过表达NFX1-123显著增强高危型HPV16 E6对HEK 293T细胞的细胞衰老的抑制作用,对过表达低危型HPV6 E6的细www.selleck.cn/products/Cisplatin胞无此增强作用;5.单纯过表达NFX1-123对p53和p21的蛋白表达没有明显影响,而当HPV16 E6和NFX1-123共同过表达时,HPV16 E6对p53和p21的降解明显增强,E6-NFX1-123通路协同增强E6-E6AP-p53通路。结论:NFX1-123可在高危型HPV16 E6的诱导下发生细胞定位改变并与E6结合,进而促使宿主蛋白NFX1-123的生物学功能发生改变,并且发现NFX1-123可显著提高过表达HPV16 E6的细胞的端粒酶活性、协同增强E6-E6AP-P53通路所介导的细胞衰老抑制。低危型HPV6 E6无法诱导宿主蛋白NFX1-123发生上述Nirmatrelvir改变,高危型HPV与低危型HPV感染的宫颈上皮组织的结局走向迥然不同可能与此机制相关。

髓母细胞瘤(Medulloblastoma,MB)是儿童时期中枢神经系统(CNS)最常见的恶性胚胎性肿瘤,约占所有儿童中枢神经系统肿瘤的10%。大多数MB病例起源于小脑中线或后窝蚓部。肿瘤恶性程度高,侵袭转移性强,易脑脊液播散,患者病死率高。MB是高度异质性的肿瘤,根据组织形态学不同,分为:经典型(Classic MB)、促纤维增生/结节型(Desmoplastic/nodular(D/N)MB)、伴广泛结节型(MB with extensive nodularity(MBEN))和大细胞/间变型(Large/anaplastic(LC/A)MB)四种类型。2021年新出版的中枢神经系统肿瘤WHO分类第五版明确将髓母细胞瘤分为四种分子亚型:WNT活化型、SHH激活伴TP53野生型、SHH激活伴TP53突变型和非WNT/非SHH型。非WNT/非SHH型又可以进一步分为包含8种亚型的Group 3和Group 4组。这四种分子亚型的MB具有明显不同的临床、病理形态和分子生物学特征,不同亚型患者之间预后差异显著。其中,WNT活化型极少软脑膜播散,此类患者对术后放化疗的敏感性最高,发生肿瘤转移的可能性最小,预后极好。WNT活化型儿童MB患者10年生存率可达95%。因此,对MB患者进行分子分型分层诊断具有重要的临床意义,尤其是筛选出WNT活化型病例,避免因过度治疗而导致的相关副作用的影响。MB分子分型常用的检测方法包括:NGS(Next generation sequencing)测序和DNA甲基化测序等。尽管NGS等高通量的基因检测方法比免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)方法更精确,但由于价格昂贵,所以使用受限。因此,寻找特异性、灵敏性高的免疫组化标记物,替代高通量的分子检测,快速有效的对MB患者进行辅助分型,评估患者预后,制定合适的治疗方案具有重要的诊断价值。尤其是对于减少WNT活化型MB患者的过度治疗,从而提高患者生存质量,具有重要的临床意义。在MB分子分型的病理诊断中,可用的免疫组化指标TGF-beta/Smad抑制剂包括:β-catenin(β-连环蛋白)、GAB1(GRB2 Associated Binding Protein 1)和YAP1(Yes-associated protein 1)。但由于敏感性和特异性不理想,一直没有得到广泛使用。例如,β-catenin核阳性表达是WNT活化型MB的有力指标,但在实际工作中,即使是分子检测证实的,具有CTNNB1基因突变的WNT活化型MB,也很少见到β-catenin核阳性表达。因此,是否存在其他免疫组化指标可以替代β-catenin鉴别WNT活化型成为我们探究的方向。β-catenin在细胞核内与淋巴样增强因子1(Lef-1)特异性相互作用形成转录复合体,调控WNT信号通路。考虑到β-catenin与Lef-1之间的特异性相互作用,我们推断Lef-1可能被用作WNT活化型MB的识别标记。目前,未见Lef-1免疫组化在MB中的报道。因此,在本研究中,我们检测了 Lef-1蛋白在MB中的表达,并将其与β-catenin的表达情况进行比较,以预测WNT活化型的MB。和MYC高度表达相关的非WNT/非SHH型MBHepatic differentiation恶性程度最高、预后最差,总生存率低于50%,因此被称为“极高风险”亚型。例如,伴有MYC扩增的Group 3型MB患者目前需接受强化治疗,包括手术切除和全脑脊髓照射,以及后续强化化疗。尽管采用了强化治疗,许多患者仍然死于该疾病,即使是幸存,也遭受到严重的治疗相关副作用的影响。因此,我们为了快速、高效的评估MB患者的风险分层和预后,我们进一步探究免疫组化标记物与MB患者的临床病理特征以及复发转移之间的关系。近期研究显示,Oligo2(Oligodendrocyte lineage transcription factor 2)是MYC扩增的MB高风险亚群的生物标志物和有效的治疗靶点,尤其是对于MYC扩增的MB亚组中,提示预后不良。因此,在本课题中,我们将通过免疫组化方法进一步评估Oligo2在判断不同分子分型MB复发风险中的应用价值。研究方法:收集齐鲁医院2017年-2022年的MB患者术后石蜡标本59例,实际随访成功并获得完整临床病理资料51例。由两名高年资的病理医师复核切片,确认病理诊断后进行组织学分型。(1)根据临床病理资料(年龄/性别/组织学分型/分子分型)将51例MB患者进行分组;(2)对51例MB石蜡组织,进行基于NGS的MB分子分型检测(包括62个MB相关基因和染色体的分子检测);(3)将NGS结果中的WNT活化型病例进行CTNNB1 3Exon的Sanger测序进一步验证;(4)免疫组化检测β-catenin、Lef-1、YAP1、GAB1 及Oligo2、Ki67在51 例MB病例中的表达;(5)通过采取电话随访的方式,获得病人复发转移情况;(6)分析上述蛋白表达情况与分子分型之间的关系,以及与肿瘤复发死亡的关系。结果:(1)在51例MB患者中,中位年龄10岁,男性患者为28例(54.9%),女性患者为23例(45.1%),男女比例1.2:1。经典型为29例(56.8%),促纤维增生/结节型为15例(29.4%),大细胞/间变型为7例(13.7%),广泛结节型0例;(2)经NGS测序,实际测序成功37例,其中,将7例归为WNT活化型,11例归为SHH激活伴TP53野生型,1例为SHH激活伴TP53突变型,18例归为非WNT/非SHH型;(3)经Sanger测序成功4例,CTNNB1基因3号外显子碱基突变位点分别为001904.4:c.101G>A,001904.4:c.94G>T,001904.4:c.98G>C,001904.4:c.109T>C;(4)免疫组化标记物表达与分子分型的关系①β-catenin在所有MB病例均显示肿瘤细胞膜或细胞浆表达,核阳性病例表现为局灶性散在表达(小于1%肿瘤细胞)。在弥漫的细胞膜/浆背景中,很难发现零星散在的β-catenin核阳性表达。我们选择β-catenin只要有核染色即判断为阳性,统计学分析显示β-catenin核染色阳性与WNT活化型密切相关(P<0.001)。如果参照文献以1%或者1%以上为阳性Cut-off值,则β-catenin核染色阳性率为0,无统计学相关性;②Lef-1染色阳性均表现为核阳性,Lef-1在WNT型中阳性率为100%(7/7),在SHH型中为41.6%(5/12),在非WNT/非SHH型中无表达。在21例Lef-1阳性表达的MB中,7例为弥漫阳性(阳性细胞大于50%),14例为局灶细胞阳性(阳性细胞小于50%)。Lef-1弥漫阳性的7例病例组织形态均为经典型,NGS测序结果证实为WNT活化型。Lef-1阳性表达与MB的分子分型有显著统计学相关性(P<0.001)。Lef-1核染色弥漫阳性高度提示WNT活化型MB,可作为WNT活化型的替代免疫组化标记物;③YAP1蛋白定位于细胞核。7例WNT活化型中,YAP1阳性6例(85.7%);12例SHH活化型中,YAP1阳性6例(50%),18例非WNT/非SHH型中,YAP1均阴性。YAP1表达在WNT型与非WNT/非SHH型间有统计学差异(P<0.001);在SHH型与非WNT/非SHH型间有统计学差异(P<0.005),在WNT型和SHH型间无统计学差异(P>0.05);④GAB1蛋白定位于细胞浆或细胞膜,7例WNT活化型中,GAB1阳性4例(57.1%),12例SHH激活型中,GAB1阳性10例(83.3%),18例非WNT/非SHH型中,GAB1阳性6例(阳性率33.3%)。GAB1的表达在SHH激活型与非WNT/非SHH型间有统计学差异(P<0.05),但在WNT活化型和SHH激活型,以及WNT活化型和非WNT/非SHH型均未发现统计学差异(P>0.05Apoptosis抑制剂);(5)免疫组化标记物表达与患者复发死亡的关系①Oligo2在MB中的表达以及与复发的相关性Oligo2在所有病例均未见弥漫性或者大于10%的部分表达模式。与胶质瘤中的弥漫阳性表达形成对比,可起到鉴别诊断的作用。51例MB中,有20例表现为Oligo2散在肿瘤细胞的表达(阳性细胞约1%-5%)。我们以1%为Oligo2阳性表达Cut-off值,在20例复发阳性病例中,Oligo2阳性12例,约占60%,在无复发的31例MB中,Oligo2阳性8例,约占25.8%。Oligo2表达与MB患者的复发有统计学差异(P<0.05)。同时,我们比较了不同组织学分型和分子分型中Oligo2的表达情况,均未发现统计学差异(P>0.05);②Ki67表达与MB病例复发转移的关系51例MB患者的Ki67增值指数介于20%-90%之间。复发组Ki67均值为(58.50±2.92),无复发生存组Ki67均值为(43.87±2.05)。Ki67表达在复发组与无复发组之间有显著性差异(P<0.001)。同时,我们比较了不同组织学分型和分子分型中Ki67的均值,均未发现统计学差异(P>0.05)。结论:1.Lef-1免疫组化蛋白表达可作为比β-catenin更敏感的标记物来预测WNT活化型的MB病例,弥补β-catenin染色难以识别的不足;Lef-1弥漫阳性表达高度提示是WNT活化型;2.MB病例中一般不表达Oligo2,本课题发现散在细胞Oligo2的表达(1%-5%肿瘤细胞阳性)与MB患者的复发密切相关,结合最新文献发现,提示Oligo2阳性细胞对于肿瘤干细胞特性的维持,以及在肿瘤复发中发挥重要作用;3.Ki67高表达与髓母细胞瘤复发密切相关,但在各组织学分型与分子分型之间不存在显著性差异,提示可作为一个独立的复发判断指标。