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免疫检查点抑制剂的应用已经在各瘤种展开，成为当下研究热点。本研究总结国内外影响免疫检查点抑制剂疗效的伴随用药研究，为临床实践提供参考。以“免疫检查点抑制剂”“肿瘤”“疗效”“伴随用药”和“并发症”为关键词，检索PubMed及CNKI期刊2017-01-01-2023-06-30相关文献，纳入标准：（1）伴随用药对肿瘤免疫检查点抑制剂疗效的影响；（2）伴随用药对肿瘤免疫检查点抑制剂并发症的影响；（3）伴随用药对肿瘤免疫检查点抑制剂预后的影响。排除标准：（1）重复发表或翻译的文献；（2）质量低的文献；（3）著作和汇编以及综述类的二次文献。最终纳入文献62篇。结果显示，糖皮质激素、抗生素、质子泵抑制剂、非甾体抗炎药、二甲双胍、抗血栓药物、阿片类药物、他汀类药物和β受体阻滞剂都会不同程度地影响免疫检查点抑制剂疗效。对于抗生素、PUN30119价格质子泵抑制剂和阿片类药物，多认为其可以通过自身genital tract immunity直接影响或通过肠道菌群间接影响免疫检查点抑制剂使用者的预后，而且与较差的临床结局有关。对于非甾体抗炎药、糖皮质激素和抗血栓形成类药物获悉更多，就目前的研究结论尚不统一。对于他汀类、二甲双胍和β受体阻滞剂则认为可能与临床结局改善有关，但这仍需要进一步研究加以验证。提示，临床常用的众多药物均可不同程度影响免疫检查点抑制剂的疗效及并发症，需要引起临床重视。但目前的研究多为小样本的回顾性研究，伴随药物对肿瘤免疫检查点抑制剂疗效的影响，仍需进行大样本、多中心的前瞻性研究验证。

目的肾脏清除是纳米材料从体内排出的主要途径之一。以前的研究发现,具有生物医学应用潜力的氧化石墨烯纳米片(Graphene Oxide nanosheets,GOs)能够通过肾脏大量排出。然而,横向尺Broken intramedually nail寸如何影响GO在肾脏中的清除途径——包括肾小球滤过、肾小管分泌和重吸收,仍然是未知的。因此,迫切需要进一步理解氧化石墨烯纳米片的横向尺寸对其肾脏排泄以及与肾脏相互作用的影响。材料和方法氧化石墨烯纳米片(s-GO约70 nm和l-GO约300 nm);稀土元素标记;荧光标记;激光剥蚀-电感耦合等离子体质谱;同步辐射显微红外成像;小动物活体成像技术等。结果研究发现两个尺寸的GO都能经肾脏由尿液排出。s-GO可以经肾小球滤过排出,而l-GO则主要通过近端肾小管分泌排出,其肾脏清除率比s-GO快。肾小管上皮细胞的转运体可能介导了GO经肾小管分泌途径的清除。近端肾小管上皮细胞对l-GO的摄取和外排均高于s-GO。与对照组和s-GO处理的小鼠相比,表达在近端肾小管基底膜上的摄取相关的有机阴离子转运INCB018424体Oat1和Oat2的mRNA表达水平明显上调。但没有发现顶端外排转运体Mdr1和Mrp4 mRNA的明显变化,这意味着GO在肾脏中长期积累的潜在风险。在GO的肾脏清除过程中,15 mg/kg的s-GO和lGO都造成了明显的肾脏损伤,但损伤部位不同。即s-GO造成明显selleckchem Dibutyryl-cAMP的肾小球基底膜变化,而l-GO则诱导更明显的肾小管损伤,包括肾小管上皮细胞坏死、刷状缘消失、管型形成等。这些组织病理学变化伴随着白蛋白尿和肾小球滤过率(GFR)的降低。特别是肾小管损伤的生物标志物Kim1和Ngal的mRNA水平在l-GO处理的小鼠中略有增加。此外,炎症细胞因子Ccl2和Tnfa mRNA水平上升了约1.8～3.5倍,表明高剂量的s-GO和l-GO暴露后可能会诱导肾脏炎症。在利用与肾排泄相关的三种典型肾细胞(人肾小球内皮细胞、人肾足细胞和人近端肾小管上皮细胞)研究GOs的横向尺寸对其细胞毒性的影响中发现,高剂量GO诱导细胞活力下降和凋亡增加,细胞内LDH释放,ROS水平升高以及GSH/GSSG比例下降,另外还伴随着线粒体膜电位下降和促炎症细胞因子TNF-A和IL-18的增加。同时,l-GOs比s-GOs具有更明显的细胞毒性,意味着GOs对肾脏细胞的横向尺寸依赖性的毒性。结论这项研究表明,GOs的横向尺寸影响了其与不同肾脏区的相互作用、肾脏排泄途径和潜在的肾脏损伤。

菊花(Chrysanthemum morifolium)是一种观赏性强、在园林中应用广泛的多年生草本花卉。菊花白色锈病(Chrysanthemum White Rust,CWR)是世界范围内的重要病害,堪称菊花“癌症”。目前,利用抗性基因培育抗病品种是防治病害的重要途径。本研究以菊花白色锈病抗病品种‘中国红’(Chrysanthemum morifolium cv.‘Zhongg uohong’)和感病品种‘神马’(Chrysanthemum morifolium cv.‘Jinba’)为试材,对菊花ANK类同源基因CmANK2-1克隆与生物信息学分析;通过构建CRISPR/Cas9敲除载体和过表达载体对菊花进行遗传转化以鉴定基因功能,最后开发CAPS分子标记辨别菊花白色锈病抗感性状。取得主要结果如下:1.对菊花ANK类同源基因CmANK2-1的全长和编码区克隆并测序,结果表明该基因在抗病品种‘中国红’中全长为2,156 bp,在感病品种‘神马’中全长为2,267 bp;CmANK2-1基因在两个品种的编码区内存在33个SNP(Single Nucleotide Polymorphism)差异,其中2个SNP差异导致功能域内2处氨基酸发生非同义突变。生物信息学分析表明CmANK2-1蛋白编码551个氨基酸,包括抗病保守结构域ANK2超家族。CmANK2-1蛋白是一个含有4个跨膜区,Cobimetinib试剂不具有信号肽的疏水性蛋白。2.利用CRISPR/Cas9系统构建CmANK2-1基因敲除载体p HSE401-CmANK2-1,通过农杆involuntary medication菌介导法转化菊花抗病品种‘中国红’,获得selleck MK-17751株敲除突变体。对野生型‘中国红’与突变体Cmank2-1接种病原菌后发现,野生型未感染菊花白色锈病,而Cmank2-1叶片出现菊花白色锈病表型,推测CmANK2-1基因与菊花白色锈病抗性相关。3.使用In-Fusion法构建CmANK2-1基因过表达载体p CAMBIA3301-CmANK2-1,通过农杆菌介导法转化菊花感病品种‘神马’并获得4株过表达阳性株。目的基因表达水平测定发现过表达阳性株的CmANK2-1基因表达量均高于野生型,接种病原菌后野生型感染菊花白色锈病而过表达阳性株均未感染,推测CmANK2-1为菊花白色锈病抗性相关基因。4.根据CmANK2-1基因在抗病品种‘中国红’和感病品种‘神马’中的序列差异,开发CAPS分子标记,并在抗病品种‘早玉盘’(Chrysanthemum morifolium cv.‘Zaoyupan’)和感病品种‘S20-4’(Chrysanthemum morifolium cv.‘S20-4’)中成功应用。该分子标记可以初步辨别菊花白色锈病抗性,为菊花白色锈病抗性鉴定提供参考,在抗病品种选育方面具有重要的科学意义。

恶性肿瘤是威胁人类健康的重要疾病,其临床治疗方法多为手术切除。然而,对于某些转移病灶,无法进行手术治疗,因此发展新型治疗方法,有效消融恶性肿瘤成为了研究人员的关注焦点。随着对恶性肿瘤研究的深入,人们发现肿瘤组织中除了肿瘤细胞,还存在肿瘤血管。密集丰富的肿瘤血管作为营养物质的输送通道,促使了恶性肿瘤飞速疯长。如果能阻断营养输送,阻止血管生成,有望从根本上实现肿瘤消融。自1971年以来,哈佛大学佛克曼教授就提出了切断肿瘤血管,饿死肿瘤的理论。这种“血管阻断疗法”就是利用各种途径阻断癌症细胞的营养供应来饿死癌细胞。其主要策略包括:抑制肿瘤中新血管的形成;通过栓塞阻断肿瘤血管的输血和供氧功能;抑制肿瘤细胞的代谢过程。目前,许多肿瘤血管生成抑制剂已被应用于临床,如索拉非尼、舒尼替尼、阿帕替尼等。然而,血管抑制剂作为一种口服小分子药物,水溶性差,导致胃肠道吸收效率较低,影响治疗效果。许多血管栓塞剂,如凝胶、硅化镁纳米颗粒和二氧化碳气体,能在短时间内发挥效果,然而肿瘤具有较强的突变能力和适应性,单一阻断疗法的疗效并不理想,很难通过血管栓塞剂的使用达到优异的抗肿瘤效果。因此,仍然需要开发一NN2211溶解度种新型血管阻断的协同治疗策略以实现理想的肿瘤治疗效果。水凝胶,尤其是智能响应水凝胶,作为一类新兴的生物材料,由于其优异的生物相容性和出色的药物递送能力,在生物医学应用中显示出巨大的前景。传统温敏凝胶机械强度差的劣势严重限制了它的生物应用。纳米复合水凝胶的出现可以有效解决传统水凝胶机械应力不足的问题,在低纳米材料含量下就能实现机械性能的显著增强。研究表明,层状双金属氢氧化物(Layered Double Hydroxide,LDHs)作为一种典型的二维纳米材料,其层板表面富含氢键,有望在低含量下通过编织三维网络构建纳米复合水凝胶。基于上述研究思路,我们合成了一种新型的近红外响应可注射型纳米复合水凝胶,能够实现近红外光响应的药物的控制释放并通过光热效应增强使其凝胶收缩挤压血管,阻断营养供应,实现肿瘤精准治疗。本论文的研究内容和相关结果如下:1.利用纳米增强效应制备了近红外响应的LDHs基纳米复合水凝胶我们首先通过简单共沉淀合成了单层MgAl-LDH纳米片,随后通过Cu2+取代Mg2+和A13+,经简单硫化后在MgAl-LDH层板上原位生长CuS纳米点。随后,我们在LDH-CuS表面通过分子间作用力(静电引力)结合SOR(血管抑制剂,可以靶向VEGF阻断新生血管生成)。最后通过自由基聚合制备纳米复合水凝胶SOR@LDH-CuS/PNIPAAm(简写为SOR@L/P)。通过一系列结构表征,如TEM、SEM、XRD、XPS,紫外等一系列表征手段,证明了纳米复合水凝胶的成功合成。基于LDH-CuS在NIR区优异的吸收能力,我们通过光热测试证明LDH-CuS以及纳米复合水凝胶SOR@L/P 同样展现出优异的近红外响应性能,在三次近红外光照下药物累积释放量可达到80%。我们也对不同LDH-CuS含量的SOR@L/P进行了力学、流变性能的测试,证明了纳米材料的加入可增加水凝胶的交联位点,使得机械性能提高2-4倍。上述实验结果证明我们合成的SOR@L/P纳米复合水凝胶可以实现SOR的近红外控制释放,并有望通过凝胶收缩挤压肿瘤血管阻断血供,在双重血管阻断作用下进行肿瘤治疗。2.NIR响应纳米复合水凝胶抗肿瘤体系体内外抗肿瘤效果研究通过体外血管收缩实验以及体内的血流显像证明这种纳米增强的水凝胶可以阻断血液与营养物质向肿瘤部位的输送。然后评价了 L/P凝胶材料对三种癌细胞(Hela、4T1、HepG2)的生物相容性,在高LDH-CuS浓度下仍能保持95%以上的存活率,证明该类凝胶材料优异的生物相容性。紧接着我们利用HepG2细胞对SOR@L/P进行了细胞毒性的验证,SOR@L/P+NIR组细胞存活率显著下降,仅为13%,远低于对照组。MTT、PI/CA活死细胞双染、流式细胞术分析实验结果与上述实验结果相匹配,证明SOR@L/P优异的抗肿瘤性能。最后,采用HepG2荷瘤小鼠进行活体研究,荧光成像结果表示水凝tissue biomechanics胶在可以在肿瘤部位长期保留,证明凝胶的稳定性,同时也为肿瘤的精准治疗提供了实验基础。随后对小鼠进行随机分组,分别为,(1)PBS、(2)L/P、(3)L/P+NIR(4)SOR、(5)SOR@L/P、(6)SOR@L/P+NIR我们通过监测小鼠肿瘤的生长情况,证明SOR@L/P在1064nm激光照射下对肿瘤具有良好的治疗效果,并且大大提高小鼠存活率。综上所述,我们制备了一种兼具抑制血管生成、阻断血液营养供应的双重Pidnarulex说明书性能的近红外响应纳米复合水凝胶SOR@L/P,解决了单一模式饥饿治疗难以彻底清除癌细胞的难题,实现了多模式高效饥饿治疗。

目的 基于非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路探究丹参多酚酸对抑郁症模型大鼠海马神经元细胞及单胺类神经递质的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、丹参多酚酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、丹参多酚酸高剂量组(40 mg·kg~(-1))、JAK2抑制药组(pacritinib, 10 mg·kg~(-1)),每组8只。除对照组外，其他各组采用慢性温和应激法建立抑郁症模型，再按剂量腹腔注射给药。用免疫组化法检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和成纤维细胞生长因子(FGF)表达，用酶联免疫吸附法检测海马组织白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平，用蛋白质印迹法检测海马组织JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 对照组、模型组、丹参多酚酸低、高剂量组、pacritinib组海马组织GFAP表达分别为35.68±3.28、8.32±2.25、12.36±3.54、16.52±3.13和20.57±4.12;FGF表达分别为48.55±5.22、9.24±1.07、11.29±2.28、19.46±3.83和23.49±4.65;IL-6含量分别为(12.48±2.24)、(39.35±4.32)、(36.68±6.47)、(24.17±5.81)和(21.60±5.29)ng·mL~(-1);IL-1β含量分别为(17.42±3.14)、(52.78±6.82)、(48.63±5.71)、(33.25±6.34)和(29.92±4.65)ng·mL~(-1);TNF-α含量分别为(24.67±3.51)、(65.81±9.47)、(61.25±7.38)、(41.72±5.63)和(37.79±5.46)ng·mL~(-1);5-HT含量分别为(28.75±2.54)、(19.16±3.61)、(21.72±2.98)、(24.91±3.23)和(26.37±3.74)ng·mL~(-1);DA含量分别为(269.78±22.34)、(205.41±17.66)、(212.36±19.42)和(245.52±26.73)、(251.75±29.95)ng·mL~(-1);NE含量分别为(32.47±2.36)、(Cloning and Expression22.68±3.14),(25.13±3.50)、(27.89±3.27)和(28.95±2.57)ng·mL~(-1);p-JAK2/JAK2分别为0.92±0.09、1.44±0.12、1.38±0.13、1AY-22989.13±0.11和1.08±0.15;p-STAT3/STAT3分别为0.94±0.07、1.62±0.18、1.57±0.20、1.11±0.15和1.04±0.12。上述指标，对照组与模型组比较，模型组与丹参多酚酸高剂量组、pacritinib组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 丹参多酚酸能有效改善大鼠抑郁样行为，可能通过抑制JAK2/STATDibutyryl-cAMP体内3信号通路，减轻神经炎症，调节单胺类神经递质水平，改善星形胶质细胞功能途径实现。

研究背景:曲霉属丝状真菌是引起人类浅表和侵袭性感染以及过敏反应的重要病原体,特别是由曲霉菌属引起的侵袭性真菌病,尽管已经取得了一些进展,但对于真菌感染的诊断仍然很困难。目前抗真菌药物的耐药率不断增加,因此迫切需要找到快速准确的诊断方法以及预防措施。目前免疫蛋白质组学技术的应用为曲霉疾病的诊断、治疗和疫苗研发提供了新的靶点,是未来研究的主要方向。目的:(1)探讨2020年11月至2021年3月肺部感染患者曲霉菌属感染的情况,比较不同检测方法对曲霉菌属检测的灵敏度和特异性。(2)本研究对Cal A和更多Cal B的免疫反应性及免疫原性进行评估,以评价其作为病原菌感染诊断标志和疫苗候选抗原的可行性。材料及方法:(1)收集2020年11月至2021年3月的肺泡灌洗液,通过分子诊断学技术,从162个肺泡灌洗液中鉴定出12个曲霉菌属感染,结合真菌培养和MALDI-TOF MS全自动生物质谱鉴定系统、显微镜检查、GM及BDG试验分析其诊断方法的灵敏度和特异性。(2)采用大肠埃希菌表达系统表达重组Cal A和Cal B蛋白后,将NPF-03084014 molecular weighti-NTA琼脂糖亲和柱纯化后的蛋白对小鼠进行免疫。通过酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测25例烟曲霉感染的患者和一组免疫小鼠血清中Cal A和Cal B特异性的Ig G抗体其Ig G亚型的水平、Cal A和Cal B免疫后小鼠脾细胞的抗原特异性免疫应答及FACS技术检测小鼠外周血/脾脏淋巴细胞亚群和Th1/Th2型细胞因子模式来探究Cal A和Cal B的抗原反应性和免疫原性。biomass pellets结果:(1)曲霉菌属感染的患者主要为男性,年龄>65岁居多。(2)对比之下,培养方法的灵敏度和特异性较高,抗原方法特异性较低,镜检方法灵敏度最低。(3)分子诊断学方法具有较高的灵敏度。(4)烟曲霉感染的患者体内有特异性Cal A和Cal B抗体,在经Cal A和Cal B免疫的小鼠中,Ig G1是主要的Ig G亚型。(5)Cal A和Cal B免疫的小鼠体内Th1、Th2和Th17型的细胞因子均有分泌。结论:体外实验及动物实验结果表明:Cal A和Cal B其具有良好的抗原反应性及免疫原性,可诱导Th1、Th2、Th17型细胞因子应答和高水平Ig G1抗体的产生,表明Cal A和Cal B具有成为烟曲霉诊断标志物和候选疫苗的潜力。

随着全球经济的快速发展和人民生活水平的不断提高,能源危机以及环保问题也日益加重,发展高能量密度且清洁可再生的新能源已迫在眉睫。氢气具有热值高、燃烧产物无污染等优点,被认为是最有前途的清洁能源之一。电催化分解水制氢是高效、低耗能的制氢技术之一,具有大规模工业应用的潜力。但是,电解水制氢面临电化学能垒高的问题,需要引入催化剂降低反应的势垒,商用的铂基、Ir O_2/Ru O_2催化剂分别具有高的析氢反应(Hydrogen evolution reaction,HER)和析氧反应(Oxygen evolution reaction,OER)催化活性,但高成本和稀缺性制约了其推广应用。因此,开发廉价、高效、稳定的替代电催化剂对电解水制氢技术具有重要意义。类普鲁士蓝(Prussian blue analogues,PBAs)作为一种廉价金属有机框架(Metal-organic Frameworks,MOF)材料,具有结构多样、化学成分可调、活性位点丰富的特点,在电催化分解水领域得到广泛关注。本文首先使用电沉积法在碳纤维纸(Carbon fiber paGalunisertib抑制剂per,CFP)上原位生长了Ni Co-PBA前驱体,结合低温硒化反应合成了二元复相金属电催化剂,进一步基于共沉淀法分别制备了Ni Co和Ni Co Fe-PBA粉体,采用相同的硒化工艺得到多金属硒化物电催化剂,系统研究了微观结构设计和成分调控对电催化剂分解水性能的影响,探寻了以类普鲁士蓝为前驱体提升多金属硒化物电催化剂性能的有效途径。(1)以CFP为基底,使用循环伏安法,在含有Ni~(2+)、[Co(CN)_6]~(3-)溶液中进行快速电沉积,通过调整溶液浓度、p H值等参数在CFP上原位生长了具有立方形貌的Ni Co-PBA前驱体。然后,使用化学气相沉积工艺,通过调节硒化温度和升温速率得到具有多孔互连结构的Ni Co-Se/CFP纳米材料,产物保持了前驱体的立方形貌特征。在p H=14的碱性环境中,Ni Co-Se/CFP仅需216 m V的HER过电位和308 m V的OER过电位即可驱动10 m A cm~(-2)的电流密度,性能明显优于单金属Co-Se/CFP电极和Ni Co-PBA/CFP前驱体。同时,Ni Co-Se/CFP电催化剂在碱性环境中表现出优异的耐久性。Ni Co-Se/CFP良好的催化活性得益于其独特的3D多孔互连结构,有利于暴露更多的活性位点,促进反应过程中物质的传输;Ni、Co复相硒化物产生的协同效应增强了电子转移动力学,提高了本征催化活性。(2)基于共沉淀法,合理设计溶液中Ni~(2+)Tibiocalcaneal arthrodesis/Co~(2+)的摩尔比,通过成分调控得到不同Ni~(2+)/Co~(2+)摩尔比的三金属Ni Co Fe-PBA前驱体,使寻找更多用相同的化学气相沉积工艺得到成分可控的Ni Co Fe-Se粉体。在相同的导电基底CFP上测试电催化性能,当Ni~(2+)/Co~(2+)=1:3时,Ni Co Fe-Se表现出最佳的电催化性能,驱动10 m A cm~(-2)的电流密度仅需194 m V的HER过电位和238 m V的OER过电位,对应的Tafel斜率分别低至36.9和57.1 m V dec~(-1),其性能远优于对应的双金属Ni Co-Se粉体催化剂,Ni Co Fe-Se性能的显著提升可归因于多相硒化物的协同效应,这说明合理的成分调控能进一步提高以PBAs为前驱体得到的金属硒化物电催化剂的性能,揭示了过渡金属基硒化物作为高效水分解电催化剂的潜力。

细菌性青枯病是由青枯劳尔氏菌（Ralstonia solanacearum）（以下简称“青枯菌”）引起的一种典型的维管束病害，发病后Alpelisib纯度严重影响作物产量与品质。选育抗病品种是从根本上解决青枯病危害的最有效措施，而了Mobile social media解植物免疫反应的分子机制是抗病育种的基础。越来越多的研究表明，维管束免疫具有细胞类型特异性。植物识别青枯菌后，通过信号传导诱导维管束细胞壁木质化，形成植物抵御青枯菌扩散的主要屏障。木质素的合成受到精细的调控，其关键合成酶基因在转录、翻译、时空特异性表达等不同方面受到调控。本文综述了植物对青枯菌的识别和信号传导机制，以及诱导维管束木质化调控青枯病抗性的研究进展AG-221细胞培养，包括诱导木质素合成基因表达、木质素单体转运和聚合、不同木质素类型产生等分子机制，以期为利用维管束木质化改性技术进行青枯病的抗性育种提供理论依据。

越来越多被广泛应用于消费品中的有机化合物被列为新污染物,引起了环境领域的广泛关注。三氯卡班Imidazole ketone erastin(TCC)是一种高效、广谱的抗菌试剂,广泛应用于沐浴用品、洗护用品、医用消毒剂等生活用品和医药用品的原料。TCC的抗生物降解性、高持久性和在环境的普遍性导致其具有潜在的生态风险。在新型冠状病毒肺炎疫情的影响下,大量药物和消毒剂的使用和积累导致TCC给生态、环境系统和人类健康带来更大的风险。已有研究表明,TCC易于从水体迁移到土壤环境中,可通过食物链生物累积。同时TCC在土壤环境中半衰期较长,并可诱导土壤动物(如蚯蚓)产生各类毒性效应。然而,氧化应激作为研究污染物毒性效应的重要指标,TCC的氧化应激效应目前并未得到广泛关注。现关于TCC的毒性效应仅停留在在个体水平上的剂量依赖性研究,以及少量氧化应激损伤的报道,而TCC在细胞和分子水平上诱导蚯蚓体腔细胞内氧化应激效应Alpelisib与抗氧化相关酶活性功能抑制的机制尚未阐明。为了更深入地了解TCC的氧化应激效应,并丰富研究层次,更好地分析TCC的综合毒性机制。基于上述研究进展,本研究在细胞和分子层面上选取了蚯蚓体腔细胞、两种典型抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)以及间接抗氧化酶溶菌酶(LZM)作为研究对象,揭示了 TCC的氧化应激效应机制,研究内容主要包括以下五个部分:第1章论述了环境中TCC的来源以及毒理学研究背景,介绍了 TCC的氧化应激毒性研究报道,并针对目前TCC目前广泛应用领域进行了总结,提出其对生态系统和人类健康的潜在危害仍值得关注。根据目前TCC毒性效应的研究进展,提出了研究领域亟待解决的关键科学问题,介绍了本研究的主要内容和研究价值。第2章在细胞水平构建了体外实验模型,以蚯蚓体腔细胞作为研究对象,检测不同剂量TCC暴露后蚯蚓体腔细胞内多项氧化损伤指标。TCC处理组体腔细胞活力下降至初始水平的77.3%,细胞内ROS、GSH、MDA水平均有不同程度的提高,证实了 TCC诱导蚯蚓体腔细胞产生氧化损伤。通过抗氧化实验,证实TCC能够显著抑制细胞内SOD(80.8%)和CAT(81.5%)活性。然而,我们发现抗氧化剂褪黑素能够削弱TCC对SOD和CAT活性的抑制作用,这一现象表明,TCC通过调节氧化应激效应影响SOD/CAT活性是一个潜在的机制。第3章在细胞实验研究的基础上,构建了 TCC与SOD和CAT直接结合的分子模型。在分子水平上,与TCC结合后,体外SOD活性受到抑制,CAT活性增强。结果证实,TCC影响SOD和CAT活性功能的另一个关键机制是TCC的直接结合作用。为了深入探讨TCC与SOD和CAT相互作用对其结构和功能的影响机制,进行了多光谱学、等温量热滴定法(ITC)和分子模拟技术综合研究。TCC的直接结合作用能够导致SOD/CAT蛋白骨架松动和多肽链扩展,破坏其二级结构。同时TCC与SOD和CAT的相互作用能够改变其聚集行为并形成了粒径更大的聚合体,以及破坏芳香族氨基酸的微环境。ITC实验表明,TCC通过相对温和的静电作用与SOD结合,而TCC通过更强亲和力的范德华力和氢键与CAT结合。TCC可以占据SOD的天然底物结合位点,导致SOD活性受到抑制。His 74、Asn 147和Tyr 357三种氨基酸残基均存在于CAT活性中心周围的结合口袋中,表明CAT活性的增强与其在血红素基团中结构的改变密切相关。研究结果全面揭示了 SOD/CAT在TCC诱导的氧化应激调控中的效应机制,并阐明了主要抗氧化酶SOD/CAT与TCC之间的相互作用机制。第4章在蛋白质分子水平上以溶菌酶(LZM)为研究对象,利用多光谱学技术探究了 TCC对LZM结构和构象的影响。TCC对活性中心附近的LZM残基有影响,使其氨基酸残基在较弱的极性微环境中重新定位。同时,TCAir Media MethodC与LZM的相互作用诱导产生了少量LZM的α-Helix结构,并改变了局部酰胺键(C=O)周围微环境,表明暴露于TCC后LZM的二级结构被破坏。α-Helix含量的增加促进了 LZM与TCC结合,LZM形成粒径较大的聚合体,表明蛋白骨架和多肽链被拉伸。此外,TCC可以通过分子间的相互作用,主要包括范德华力和氢键,以相对高的亲和力自发地与LZM结合,这是一种放热反应。进一步的分子对接结果表明,TCC结合位点位于LZM活性中心附近,与 Ala 107、Arg 112、Asn 59、Gln 57、Ile 98、Trp 108、Val109 和 Asp 52等多种残基相互作用。TCC与LZM和底物的结合位点发生相互作用,抑制了核心残基(Asp 52)对LZM活性的影响,从而表现出对天然底物的拮抗作用,导致LZM活性下降。这些结构变化会影响活性位点周围的构象和微环境,从而导致分子活性的抑制。本研究揭示了 TCC与LZM在结构和功能上相互作用的响应机制,并建立了 LZM与TCC结合的分子模型。第5章总结了本论文的主要实验内容,总结了创新点,提出了论文的不足之处并对下一步研究方向进行展望。在细胞层面,本研究探索了 TCC诱导蚯蚓体腔细胞产生的氧化应激相关毒性机制,通过抗氧化实验证实了 TCC能够诱导氧化损伤抑制抗氧化酶活性。通过模拟TCC与SOD和CAT的直接结合模型探究了 TCC影响SOD和CAT酶活性的分子机制,并对其结构和功能影响进行深入探讨。最后通过研究TCC与LZM的相互作用机制,从分子水平探究了 TCC对于间接抗氧化酶LZM活性和构象的影响,从而建立TCC与SOD、CAT和LZM三种抗氧化酶相互作用的结合模型。本论文在细胞和分子两个层面综合评价了 TCC的氧化应激毒性,为TCC毒性效应的研究提供了科学的参考依据

展青霉素(patulin, PAT)作为一种对人类和动物有致畸、致癌等多种危害的真菌毒素,极易污染水果、蔬菜和谷物及其制品等。鉴于PAT污染范围广、超标检出多等问题,针对该毒素的即时检测对保障食品安全至关重要。免疫分析是快速检测真菌毒素污染的有效手段之一。MC3生产商但是,尚未有灵敏性好、实用价值高的PAT单克隆抗体和基因工程抗体报道。本文综述了PAT免疫学检测方法研究现状,并通过梳理其免疫学检测发展历程,提出高效特异性PAT单克隆抗体制备的阻碍主要包selleck产品括PAT存在较大的极性、非免疫原性、在动物体内易被降解的特性及抗体制备选用的类似物结构偏差过大等。因此,本文认为筛选或制备结构稳定且更接近PAT的类似化合物可能是特异性PAT抗体制备的关键。另一方面,随着新型材料和技术(如电化学传感器)的发展,应用性能优良的抗体替代物建立新型免疫学或非免疫学检测方法的前景非常广阔,本hepatocyte transplantation文为PAT快速免疫检测方法的建立和应用提供理论依据和参考。