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目的 探讨干扰素λ4(IFNL4)单核苷酸多态性（SNP）与替诺福韦（TDF）+拉米夫定（3TC）+依非韦伦（EFV）抗病毒治疗应答的相关性。方法 选取2011年1月-2020年1月广西中医药大学附属瑞康医院门诊及住院确诊的HIV感染患者共137例，并予TDLY-188011供应商F+3TC+EFV抗病毒方案治疗12个月以上，定期门诊随访。对IFNL4的2个SNP位点进行基因分型，比较艾滋病患者抗病毒治疗12个月后基因分型之间的免疫应答和病毒应答情况。结果 位点rs4803221-GC基因型占8.8%,CC基因型占91.2%,rs12971396-GC和CC基因型分别为97.8%和2.2%。IFNL4-rs4803221、rs12971396不同基因型的患者相比较，基线CD4~+、CD8~+T细胞计数、CD4~+/CD8~+T细胞比值差异均无统计学意义（t_(rs4803221)=0.074、-0.612、0.701,t_(rs12971396)=1.896、1.682、-0.568,P均>0.05）。抗病毒治疗12个月后，不同基因型之间有效免疫学应答比例或有效病毒应答比例的差异也无统计学意义（P>0.05）。结论 广西地区艾滋病患者的IFNL4-rKPT-330s4803221基因型主要为CC,IFNL4-rs12971396基因host-microbiome interactions型主要为GC，其基因型与TDF+3TC+EFV抗病毒应答无关。

水稻(Oryza sativa L.)是全球最重要的粮食作物之一,也是人类主要的食物来源之一。据联合国粮农组织统计的数据,全球有超过30亿人依赖水稻作为主要粮食来源。尤其在亚洲地区,水稻是人们餐桌上不可或缺的食物,同时也是农民重要的经济来源。然而,由于气候变化、人口增长等因素的影响,全球粮食安全问题日益严峻,如何提高水稻产量和Cephalomedullary nail质量,成为全球育种学家研究的重要目标。并且,水稻作为一种模式植物,其在遗传学和分子生物学的研究范围内,为植物科学领域的发展做出了重要贡献。因此,深入研究水稻的生物学特性、生长发育规律、产量和品质的调控机制,不仅有助于提高水稻产量和质量,保障全球粮食安全,也有助于推动植物科学的发展,为其他作物(例如:油菜和玉米等经济作物)的研究提供借鉴和启示。本研究中所使用的两个突变体材料都是来自于实验室自主诱导的,通过诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)处理而得到;其中一个突变体osnsl2(narrow-stripe leaf力是通过EMS对籼型恢复系水稻缙恢10号(J10)处理后筛选而得到;另一突变体oscpp1(carbohydrate partitioning protein1)是通过EMS对某一保持系水稻西农1B号进行处理后经过筛选而得到。另一方面,通过对osnsl2进行表型分析、细胞学观察、图位克隆、亚细胞定位、dNTP含量测定、流式细胞仪分析和qRT-PCR分析等,探究osnsl2叶片变窄的原因。另一个突变体oscpp1,实验室前期已经对其进行了遗传鉴定,图位克隆,互补验证,发现oscpp1是一个显性的碳水化合物分配缺陷的突变体,并且之前已经对OsCPP1调控碳水化合物的分配进行了功能分析,本论文将对OsCPP1如何调控叶夹角进行相关研究,通过表型分析和细胞学观察,发现了oscpp1叶枕部位的厚壁细胞层数和数量减少,同时通过qRT-PCR分析,发现OsCPP1在叶枕部位具有较高表达,并且通过酵母双杂和双分子荧光互补实验进行验证,OsCPP1与纤维素类合酶家族蛋白CSLA6存在互作关系。主要研究结果如下:1.窄叶突变基因OsNSL2(1)实验室前期已成功地从水稻J10经过EMS诱变产生的突变体群体中分离出了窄叶条纹突变体osnsl2。通过统计观察,发现相比于WT(wildtype),osnsl2的剑叶、倒二叶和倒三叶的叶片宽度显著减小,而叶片长度无显著差异。为研究叶片宽度减小的原因,在孕穗期对叶片中部进行了形态学和组织学观察,通过石蜡切片和扫描电镜BI 10773 IC50发现osnsl2的大、小叶脉平均数量显著减少。通过光学显微镜观察,发现osnsl2中沿叶宽方向的细胞数量显著减少,而细胞宽度保持不变。这些观察结果表明,叶片宽度减小可能是由于沿叶宽方向的细胞数量减少所导致的。(2)实验室前期已将OsNSL2基因定位在第6号染色体的短臂,本研究中,利用F2代遗传群体中1500个隐性单株进行精细定位。最终将OsNSL2定位在第6号染色体,Indel6-1和Indel6-2之间,物理范围51 kb。对定位在区间内的10个注释基因全部进行DNA测序比对,发现osnsl2在LOC Os06g14620(编码核糖核苷酸小亚基)基因中存在一个G到A的单核苷酸突变,造成所编码的氨基酸由甘氨酸(Gly)变为丝氨酸(Ser)。进一步通过将WT中的LOC Os06g14620片段(包括上游2000 bp的序列、1020 bp的编码框序列和下游899 bp的序列)转入突变体osnsl2愈伤组织,发现osnsl2的表型在阳性互补植株中恢复,结果表明LOC Os06g14620就是OsNSL2基因。(3)基于图位克隆和遗传互补实验,OsNSL2编码核糖核苷酸还原酶(RNRs)的一个小亚基,通过构建系统进化发育树,发现在单子叶和双子叶植物中OsNSL2所编码的核糖核苷酸还原酶小亚基具有比较保守的生物学功能,同时在水稻中OsNSL2与另一个编码核糖核苷酸还原酶小亚基的LOC_Os06g03720同源关系较近。(4)利用qRT-PCR分析OsNSL2的表达模式,发现OsNSL2在根、茎、叶、鞘和穗均有表达,但在叶片中表达量最高;同时构建了 p35S::OsNSL2-GFP融合表达蛋白,通过水稻原生质体瞬时表达发现,在细胞核与细胞质中能检测到绿色荧光信号,表明OsNSL2定位在细胞核与细胞质。(5)通过测定WT和osnsl2中的dNTP含量,发现osnsl2的dNTP含量下降,进一步通过流式细胞仪分析和细胞周期相关基因的表达分析,发现osnsl2细胞周期减少。结果表明,dNTP的含量减少,导致DNA合成受阻,进而影响细胞周期,最终导致细胞数量减少,叶片变窄。2.OsCPP1调控水稻叶夹角(1)通过对WT和oscpp1苗期、分蘖期和成熟期的叶夹角观察与统计,发现oscpp1叶夹角在苗期时与WT无明显差异,分蘖期时oscpp1叶夹角度数达到44.5°,WT度数达到27.6°,oscpp1达到WT的161%,oscpp1叶夹角度数极显著大于WT;成熟期时oscpp1叶夹角平均度数达到53.1°,WT度数达到18.7°(n=20),oscpp1叶夹角度数达到WT的283%,oscpp1叶夹角度数极显著大于WT。石蜡切片观察发现,oscpp1叶枕处远轴端和近轴端的厚壁细胞数目、细胞层数与近远轴端的距离都极显著小于WT,表明oscpp1叶夹角度数增大是叶枕处近远轴的细胞数目、细胞层数和距离减少导致的。(2)通过构建pGBKT7-CPP1诱饵载体,进行水稻cDNA文库筛选,寻找其互作蛋白。并通过比对克隆序列,最终筛选到了与OsCPP1互作的纤维素类合酶家族蛋白CSLA6。因此,OsCPP1通过与CSLA6相互作用协同调控纤维素的合成,进而参与调控叶夹角的形成。(3)通过酵母双杂发现OsCPP1与CSLA6的三个与纤维素合成相关的结构域都互作,同时BiFC也表明OsCPP1与CSLA6互作,说明OsCPP1通过影响纤维素的合成,影响叶夹角变大。(4)通过对叶枕部位的纤维素含量分析,显示oscpp1叶枕部www.selleck.cn/products/Fulvestrant位纤维素含量仅是WT的70.7%,极显著低于WT;同时纤维素合成相关基因CESA1、CESA4、CESA7、CESA8、CESA9在oscpp1叶枕部位的表达量均极显著下降。

水稻(Oryza sativa L.)是全球最重要的粮食作物之一,也是人类主要的食物来源之一。据联合国粮农组织统计的数据,全球有超过30亿人依赖水稻作为主要粮食来源。尤其在亚洲地区,水稻是人们餐桌上不可或缺的食物,同时也是农民重要的经济来源。然而,由于气候变化、人口增长等因素的影响,全球粮食安全问题日益严峻,如何提高水稻产量和Cephalomedullary nail质量,成为全球育种学家研究的重要目标。并且,水稻作为一种模式植物,其在遗传学和分子生物学的研究范围内,为植物科学领域的发展做出了重要贡献。因此,深入研究水稻的生物学特性、生长发育规律、产量和品质的调控机制,不仅有助于提高水稻产量和质量,保障全球粮食安全,也有助于推动植物科学的发展,为其他作物(例如:油菜和玉米等经济作物)的研究提供借鉴和启示。本研究中所使用的两个突变体材料都是来自于实验室自主诱导的,通过诱变剂甲基磺酸乙酯(EMS)处理而得到;其中一个突变体osnsl2(narrow-stripe leaf力是通过EMS对籼型恢复系水稻缙恢10号(J10)处理后筛选而得到;另一突变体oscpp1(carbohydrate partitioning protein1)是通过EMS对某一保持系水稻西农1B号进行处理后经过筛选而得到。另一方面,通过对osnsl2进行表型分析、细胞学观察、图位克隆、亚细胞定位、dNTP含量测定、流式细胞仪分析和qRT-PCR分析等,探究osnsl2叶片变窄的原因。另一个突变体oscpp1,实验室前期已经对其进行了遗传鉴定,图位克隆,互补验证,发现oscpp1是一个显性的碳水化合物分配缺陷的突变体,并且之前已经对OsCPP1调控碳水化合物的分配进行了功能分析,本论文将对OsCPP1如何调控叶夹角进行相关研究,通过表型分析和细胞学观察,发现了oscpp1叶枕部位的厚壁细胞层数和数量减少,同时通过qRT-PCR分析,发现OsCPP1在叶枕部位具有较高表达,并且通过酵母双杂和双分子荧光互补实验进行验证,OsCPP1与纤维素类合酶家族蛋白CSLA6存在互作关系。主要研究结果如下:1.窄叶突变基因OsNSL2(1)实验室前期已成功地从水稻J10经过EMS诱变产生的突变体群体中分离出了窄叶条纹突变体osnsl2。通过统计观察,发现相比于WT(wildtype),osnsl2的剑叶、倒二叶和倒三叶的叶片宽度显著减小,而叶片长度无显著差异。为研究叶片宽度减小的原因,在孕穗期对叶片中部进行了形态学和组织学观察,通过石蜡切片和扫描电镜BI 10773 IC50发现osnsl2的大、小叶脉平均数量显著减少。通过光学显微镜观察,发现osnsl2中沿叶宽方向的细胞数量显著减少,而细胞宽度保持不变。这些观察结果表明,叶片宽度减小可能是由于沿叶宽方向的细胞数量减少所导致的。(2)实验室前期已将OsNSL2基因定位在第6号染色体的短臂,本研究中,利用F2代遗传群体中1500个隐性单株进行精细定位。最终将OsNSL2定位在第6号染色体,Indel6-1和Indel6-2之间,物理范围51 kb。对定位在区间内的10个注释基因全部进行DNA测序比对,发现osnsl2在LOC Os06g14620(编码核糖核苷酸小亚基)基因中存在一个G到A的单核苷酸突变,造成所编码的氨基酸由甘氨酸(Gly)变为丝氨酸(Ser)。进一步通过将WT中的LOC Os06g14620片段(包括上游2000 bp的序列、1020 bp的编码框序列和下游899 bp的序列)转入突变体osnsl2愈伤组织,发现osnsl2的表型在阳性互补植株中恢复,结果表明LOC Os06g14620就是OsNSL2基因。(3)基于图位克隆和遗传互补实验,OsNSL2编码核糖核苷酸还原酶(RNRs)的一个小亚基,通过构建系统进化发育树,发现在单子叶和双子叶植物中OsNSL2所编码的核糖核苷酸还原酶小亚基具有比较保守的生物学功能,同时在水稻中OsNSL2与另一个编码核糖核苷酸还原酶小亚基的LOC_Os06g03720同源关系较近。(4)利用qRT-PCR分析OsNSL2的表达模式,发现OsNSL2在根、茎、叶、鞘和穗均有表达,但在叶片中表达量最高;同时构建了 p35S::OsNSL2-GFP融合表达蛋白,通过水稻原生质体瞬时表达发现,在细胞核与细胞质中能检测到绿色荧光信号,表明OsNSL2定位在细胞核与细胞质。(5)通过测定WT和osnsl2中的dNTP含量,发现osnsl2的dNTP含量下降,进一步通过流式细胞仪分析和细胞周期相关基因的表达分析,发现osnsl2细胞周期减少。结果表明,dNTP的含量减少,导致DNA合成受阻,进而影响细胞周期,最终导致细胞数量减少,叶片变窄。2.OsCPP1调控水稻叶夹角(1)通过对WT和oscpp1苗期、分蘖期和成熟期的叶夹角观察与统计,发现oscpp1叶夹角在苗期时与WT无明显差异,分蘖期时oscpp1叶夹角度数达到44.5°,WT度数达到27.6°,oscpp1达到WT的161%,oscpp1叶夹角度数极显著大于WT;成熟期时oscpp1叶夹角平均度数达到53.1°,WT度数达到18.7°(n=20),oscpp1叶夹角度数达到WT的283%,oscpp1叶夹角度数极显著大于WT。石蜡切片观察发现,oscpp1叶枕处远轴端和近轴端的厚壁细胞数目、细胞层数与近远轴端的距离都极显著小于WT,表明oscpp1叶夹角度数增大是叶枕处近远轴的细胞数目、细胞层数和距离减少导致的。(2)通过构建pGBKT7-CPP1诱饵载体,进行水稻cDNA文库筛选,寻找其互作蛋白。并通过比对克隆序列,最终筛选到了与OsCPP1互作的纤维素类合酶家族蛋白CSLA6。因此,OsCPP1通过与CSLA6相互作用协同调控纤维素的合成,进而参与调控叶夹角的形成。(3)通过酵母双杂发现OsCPP1与CSLA6的三个与纤维素合成相关的结构域都互作,同时BiFC也表明OsCPP1与CSLA6互作,说明OsCPP1通过影响纤维素的合成,影响叶夹角变大。(4)通过对叶枕部位的纤维素含量分析,显示oscpp1叶枕部www.selleck.cn/products/Fulvestrant位纤维素含量仅是WT的70.7%,极显著低于WT;同时纤维素合成相关基因CESA1、CESA4、CESA7、CESA8、CESA9在oscpp1叶枕部位的表达量均极显著下降。

目的 研究Q开关1 064 nm medicinal valueNd:YAG激光联合水光注射疗法及5Adavosertib小鼠40nm强脉冲光治疗黄褐斑疗效。方法 选选取中山市博爱医院从2021年3月至2023年3月收治的60例黄褐斑患者进行研究。将其以电脑编号随机法分作治疗组(n=30)及对照组(n=30)。对照组开展Q开关1 064 nmNd:YAG激光治疗,治疗组则于AZD6738对照组的基础上,增用水光注射疗法及540 nm强脉冲光治疗。对比两组疗效,皮肤屏障功能,皮肤肤质,皮损及皮周部位血管扩张程度。结果 治疗组治疗总有效率高于对照组(96.67%vs 76.67%)(P<0.05)。治疗后两组各项皮肤屏障功能指标水平均高于治疗前,且治疗组高于对照组(P<0.05)。治疗后两组各项VISIA皮肤图像分析指标均低于治疗前,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后两组皮损部位a~*值均低于治疗前,且治疗组低于对照组(P<0.05)。结论 1064nmNd:YAG激光联合水光注射疗法及540nm强脉冲光治疗黄褐斑的疗效较佳,可改善皮肤屏障功能及皮肤肤质,改善皮损血管扩张程度。

柑橘(Citrus)果实富含柠檬酸等营养成分。为了探究柑橘果实汁胞细胞中关键基因的转录变化对柠檬酸等品质相关代谢物积累的影响，分别对两个遗传相近的枸橼类柑橘品种’甜柠檬'(C. limetta)与’尤力克'(C. limon)进行果实品质分析。转录组测序结果对比分析表明，两个品种的果实汁胞细胞之间参与柠檬酸等代谢物的合成、分解、转运相关基因发生转录变化。在果汁可滴Taurine供应商定酸含量差异显著的两个柑橘品种之间发现了4 044个差异表达基因。对差异表达基因进行了KEGG代谢通路的富集分析。低酸型’甜柠檬’的汁胞细胞中上调的差异表达基因富集于γ-氨基丁酸代谢(GABA shunt)等24个代谢通路；高酸型’尤力克’上调的差异表达基因富集于柠檬酸循环等13个代谢通路。在果实成熟期Compound 3，两个品种之间的柠檬酸合成酶基因的相对表达量没有显著性差异；’尤力克’汁胞细胞中质子泵转运基因的相对表达量显著高于’甜柠檬’，从而促进’尤力克’汁胞细胞中液泡的酸化。果实有机酸含量可能与柠檬酸分解、质子Programmed ventricular stimulation泵转运相关基因的上调表达有关。本研究为深入解析柑橘属果实的有机酸代谢机理提供了一定理论依据。

目的:拟探讨恩格列净(empagliflozin)对造影剂相关急性肾损伤(contrast-associated acute kidney iTezacaftor化学结构njury,CA-AKI)的作用和机理。方法:本实验主要包括SD大鼠、小鼠和细胞实验,所有实验动物均在适应性喂养1周后开展相关实验。第一部分实验:将雄性SD大鼠分配为如下4组:对照组、恩格列净组、模型组以及模型+恩格列净组。对照组大鼠,生理盐水(1.5 mg/kg)灌胃治疗,1次/日,恩格列净组给与等量恩格列净(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,两组连续灌胃7日;模型组禁水16小时后,建立造影剂相关急性肾损伤(contrast-associated acute kidney injury,CA-AKI)模型;模型+恩格列净组,造模前连续7天恩格列净(1.5 mg/kg.d)灌胃,禁水16小时后建立CA-AKI模型。注射碘海醇造模后继续进食和饮水喂养,12小时后对所有大鼠实施安乐死,并收集双肾和血清标本。利用ELISA方法测定血清肾功能相关指标,HE染色检测肾脏病理损伤及评分,利用蛋白印迹实验和免疫组织化学染色试剂对凋亡相关蛋白表达率进行定量分析,并利用TUNEL细胞凋亡染色荧光显影测定,进而评估大鼠肾脏细胞的凋亡阳性率;第二部分实验,为了研究恩格列净对CA-AKI发生发展的具体机制,采用了小鼠及细胞实验展开研究,将健康的C57 genetics and genomicsBL/6J雄性小鼠,随机分配到以下对照组、模型组、模型+生理盐水组和模型+恩格列净组4组。模型组小鼠禁水18小时,在腹腔内注射碘海醇造影剂,进而建立CA-AKI小鼠模型;模型+生理盐水组小鼠实验干预,CA-AKI造模前7天,持续予以生理盐水(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,模型+恩格列净组小鼠,持续7天予以恩格列净(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,两组小鼠均禁水18小时后CA-AKI造模;对照组小鼠不接受缺水、速尿、碘海醇和恩格列净处理,在正常环境下养育。碘海醇注射12小时后收集标本。通过ELISA、HE染色评估肾功能及肾脏病理损伤,通过蛋白印迹检测凋亡相关蛋白,并通过TUNEL细胞凋亡染色荧光显影测定技术对小鼠肾脏的组织进行染色反应,以了解及判定组织细胞凋亡阳性率;各组组织经包埋、制片等处理,经线粒体透射电镜视野观察,了解线粒体的外观及细微结构的变化情况;通过免疫组织化学染色实验,对各组解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2,UCP2)表达量进行定量;细胞实验:将肾小管上皮细胞(HK-2)划分为对照组、模型组、模型+溶剂组以及模型+恩格列净组。模型组用含有碘海醇(80 mg I/ml)的高糖培养基培养,模型+溶剂组用高糖培养基与DMSO溶剂培养细胞,模型+恩格列净组先给与含恩格列净的培养基预处理,然后使用含有高糖+碘海醇的培养基进行养育,经处理约2小时后进行线粒体活性物质细胞活力CCK-8 OD值测定,通过JC-1线粒体膜电位荧光作用探针实验、DCFH-DA活性氧ROS荧光探针等实验评估线粒体结构及功能状况,通过Western Blotting检测线粒体融合和分裂相关蛋白的表达情况。U点击此处CP2基因敲除小鼠相关的实验:将UCP2基因敲除小鼠随机分配为对照组,模型组,模型+生理盐水组和模型+恩格列净组,各组UCP2基因敲除小鼠的相关干预措施同C57小鼠相关实验。结果:模型组的动物肾功能、肾脏病理损伤及肾脏组织细胞凋亡较对照组显著增加,且线粒体肿胀、嵴排列紊乱和破裂;恩格列净预处理后动物肾功能、肾脏病理损伤及肾脏细胞凋亡较模型组明显缓解,线粒体结构恢复正常;HK-2细胞实验结果表明,模型+恩格列净组细胞线粒体膜电位较模型组升高,膜电位恢复至平衡,同时提示氧化应激反应显著抑制;恩格列净预处理解偶联蛋白2(UCP2)基因敲除小鼠,不能缓解造影剂对肾功能的损伤,同时线粒体的结构及功能破坏未能被修复。结论:恩格列净通过激活解偶联蛋白2(UCP2)调控氧化应激和细胞凋亡,从而缓解造影剂相关急性肾损伤。

水selleck Fulvestrant稻籽粒发育过程是影响水稻产量和品质的重要因素,目前关于水稻籽粒发育的研究较多,但其调控机制尚未完全阐明。在这项研究中,我resolved HBV infection们发现了一个新基因OsProCP5(LOC_Os11g05760),它在水稻胚乳发育早期高表达,调控籽粒灌浆过程。该基因编码一种溶selleck HPLC酶体羧肽酶,属于丝氨酸蛋白酶S28家族成员,目前该家族在植物中的功能还未被揭示。本研究以武运粳8号水稻材料为背景,探究了 OsProCP5基因在调控籽粒发育过程中的作用及其机理。结果如下:1.OsProCP5基因在水稻胚乳发育早期高表达。本课题组前期研究发现,RGB1基因干扰表达后会影响水稻籽粒发育。为了探究RGB1影响籽粒发育的机制,我们分析了RGB1干扰籽粒中差异表达的基因,并筛选到一个候选基因OsProCP5,该基因主要在水稻籽粒灌浆期,特别是在胚乳发育早期表达。因此,我们初步猜想OsProCP5基因在籽粒胚乳发育过程中扮演重要作用。2.OsProCP5基因突变导致水稻粒重减轻,且胚乳贮藏物质积累减少。通过CRISPR/Cas9技术,我们创建了 OsProCP5基因突变株材料。与野生型武运粳8号(WYJ8)相比,虽然OsProCP5基因突变株的水稻稻穗表型无显著变化,但是籽粒变薄,且千粒重显著降低;此外,OsProCP5基因突变株系的水稻籽粒胚乳横截面呈现明显的粉质不透明状表型,其灌浆速率与野生型相比也显著降低;进一步测定了成熟籽粒的组分含量,结果显示突变株籽粒总淀粉含量及粗蛋白含量均显著低于野生型。3.OsProCP5基因调控蔗糖卸载和淀粉合成相关基因的表达。为了进一步探究OsProCP5基因如何影响籽粒灌浆过程,我们对实验组OsProCP5基因突变株系水稻籽粒和对照组WYJ8水稻籽粒进行转录组测序,并分析了差异表达基因。分析结果表明,在OsProCP5基因突变株系水稻籽粒中,多数蔗糖卸载转运相关基因(如OsCIN1、OsINV1、OsSWEET11等)和淀粉合成酶相关基因(如AGPL1、SSⅡb、SSⅣb、BEⅡa等)的表达显著下调,RT-qPCR进一步验证了此结果。此外,WGCNA分析结果显示,在突变株籽粒中多数热激蛋白基因显著下调表达,表明在自然高温条件下,OsProCP5基因突变株系籽粒热胁迫响应受阻,影响了淀粉合成相关基因的表达,最终导致籽粒灌浆的不充分。4.OsProCP5基因突变导致籽粒淀粉合成相关基因的蛋白表达水平降低。我们使用PRM技术分析了差异基因的蛋白翻译水平。结果表明,与野生型相比,SSⅡa、SSⅣb和BEIIa等基因的蛋白相对表达量显著降低。因此,这些结果表明OsProCP5基因突变会导致籽粒总淀粉含量降低,直链淀粉含量增加,这主要是由于上述几种蛋白表达量降低所导致。综上所述,我们认为OsProCP5基因通过调控蔗糖卸载转运和淀粉合成相关基因转录水平和蛋白水平的表达,进而影响籽粒灌浆过程。

背景:慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)感染仍然是一重大全球性公共卫生问题,据世界卫生组织统计,目前约有2.57亿人感染乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)。HBV可导致肝脏炎症、纤维化、肝硬化及肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC),据估计每年约有887,000人死于HBV所致肝硬化和HCC。核苷(酸)类似物(nucleos(t)ide analogs,NAs)是最常用的抗病毒治疗药物,可有效抑制HBV的复制,减轻肝细胞炎症坏死及肝脏纤维组织增生,延缓疾病进展,改善患者生活质量,延长生存时间。由于CHB疾病特征、HBV的病毒特点以及NAs抗病毒靶点的不足,NAs治疗需要长期乃至终生用药。但长期NAs治疗也会带来一系列问题,例如在长期服药患者依从性差、经济花费高、药物不良反应、耐药性及超过10年的NAs治疗的长期安全性等问题。不同于高血压和糖尿病的终身治疗,由于抗HBV治疗属病因治疗,确实又存在有限疗程的特征;如何有效且安全的停药是广大患者(尤其是年轻患者)的“梦想”,也是临床医生探索的热点和难点问题。为此国内外CHB防治指南中均制订了抗病毒药物相对疗程和停药标准。由于HBeAg阳性和HBeAg阴性CHB代表慢性HBV感染自然病程中不同时期,两者在诸多方面存在差异,如HBeAg阴性CHB的HBVDNA水平较低,更容易出现波动,进展为晚期肝纤维化或肝硬化和HCC的风险更高。因此,两者停药标准和停药后评价指标均不同。欧洲肝脏疾病研究协会(European Association for the Study of Liver Diseases,EASL)、美国肝脏疾病研究协会(American Association for the Study of Liver Diseases,AASLD)和亚太肝脏疾病研究协会(Asian Pacific Association for the Study of Liver Diseases,APASL)均建议对于无肝硬化HBeAg阳性患者,HBeAg血清学转换伴HBV DNA检测不到后,巩固治疗至少12个月是可以接受的治疗终点。而对HBeAg阴性患者治疗的建议则不同,APASL指南建议HBV DNA检测不到后巩固治疗≥2年可以停止NAs;EASL指南建议HBV DNA检测不到后巩固治疗至少3年可以尝试停药,而AASLD指南则认为HBsAg阴转是唯一可接受的终点。另外,不同时期发布的停药标准也有所差别,总的趋势是倾向延长疗程。没有达到以上的停药标准,停止NAs可导致绝大多数患者病毒学复发或伴有谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)升高的临床复发;即使达到以上的停药标准,也存在一定比例的复发。故为验证和探索HBeAg阳性和HBeAg阴性CHB患者NAs停药后病毒学应答情况及预测指标,我们对达到一定的停药标准的患者采用连续入组建立了真实世界前瞻性研究队列,并进行了相关研究;其研究论文先后被AASLD、APASL和世界卫生组织(WHO)发布的CHB防治指南所引用。HBeAg阳性CHB多伴随高病毒负荷、HBsAg高水平以及机体对HBeAg、HBsAg的T细胞特异性免疫反应降低。对于HBeAg阳性患者,目前各诊疗指南均要求HBeAg血清学转换后巩固治疗一定时间方可停药。HBeAg血清学转换认为与炎症的缓解、肝纤维化减少和肝病的炎症和纤维化活动趋于稳定相关。在临床实践中HBeAg血清学转换率低,部分患者经NAs治疗后HBV DNA阴转、HBeAgLorlatinib消失,但乙型肝炎e抗体(hepatitis B e antibody,HBeAb)并不出现,甚至HBsAg消失即功能性治愈后HBeAb仍不阳转。以往的关于HBeAg阳性CHB患者达到HBeAg血清学转换并巩固治疗而停药的研究中涉及到该部分患者,但未进行系统探讨;且国内外CHB防治指南有关停药的部分也未涉及到该类人群。故持续HBeAg消失的CHB患者NAs可否停药目前尚无定论,停药后疗效和影响因素值得探讨,并可能为该类患者的停药提供依据和获得停药的机会。NAs主要通过抑制HBV DNA聚合酶来抑制病毒复制,对HBV复制的模板即肝细胞内的共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)无直接作用,故停药后存在复发的可能。由于cccDNA及HBV整合基因的持续存在,以及宿主对HBV的先天性和适应性免疫应答受损,导致血清乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)持续表达,作为CHB理想治疗终点的功能性治愈即HBsAg持续阴性伴或不伴乙肝表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)出现难以实现。虽然血清乙型肝炎核心相关抗原(hepatitis B core-related antigen,HBcrAg)和血清HBV RNA水平等新型乙肝标志物被认为与cccDNA转录活性相关并备受关注,但在临床上仍缺乏统一的标准而难以推广。有研究表明,停药时血清HBsAg低水平是停药后持续病毒学应答(sustained virological response,SVR)及功能性治愈的预测因素。较低的HBsAg似乎是一种现实可行的NAs停药指标,是目前研究的热点。然而不同的临床研究临界值不同,对于合适的临界值目前仍有争议。研究目的:以我们课题组随访长达10余年的CHB停药队列为基础,1)验证和研究HBeAg阳性和HBeAg阴性CHB患者NAs停药后病毒学应答情况及预测指标;2)系统探索HBeAg消失但未到达HBeAg血清学转换CHB患者NAs停药结局及相关因素;3)研究停药时HBsAg在HBeAg不同状态CHB患者NAs停药后疗效持久性和功能性治愈中的作用。对象和方法:自2001年以来,我们课题组建立了一个前瞻性观察性研究队列,并进行相关研究。患者初始单药治疗的抗病毒药物分别为拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定、恩替卡韦和替诺福韦酯。停药标准参考患者入组时国内外CHB诊疗指南,具体为:(1)HBeAg阳性CHB患者:达到HBeAg血清学转换、HBV-DNA低于检测下限及ALT复常后巩固治疗时间不少于6个月,总疗程不少于12月;部分患者达到HBeAg阴转但未出现HBeAg血清学转换,巩固治疗时间不少于6个月,总疗程不少于18个月也在严密监测下停药;(2)HBeAg阴性CHB患者:达到HBV DNA低于检测下限及ALT复常后巩固治疗时间不少于18个月,总疗程不少于24个月。应用病毒学复发(virological relapse,VR)与否判断患者停药后应答状态。VR定义为HBV DNA>104copies/ml,且间隔2周以上复查确认。肝硬化患者、肝功能失代偿患者排除在外。出现复发的患者均根据既往用药史、肝脏损伤严重程度、患者经济状况及个人意愿等进行了个体化的挽救治疗。结果:第一部分:研究纳入223例CHB患者(138例HBeAg血清学转换患者和85例HBeAg阴性患者),总体中位年龄为28岁(4-70岁),巩固治疗时间为21个月(6-91个月),治疗时间为29个月(12-101个月)。87例患者复发,其中H寻找更多BeAg血清学转转组患者38例,HBeAg阴性组患者49例。第1,3,5和10年的累积复发率(The cumulative relapse rates,CRRs)HBeAg血清学转换组分别为 20.3%,23.4%,27.9%和 30.9%,HBeAg 阴性组分别为 44.7%,52.5%,57.4%和62.3%。HBeAg血清学转换组患者的CRRs低于HBeAg阴性组患者,两者之间有统计学差异(logRank,P<0.001)。HBeAg血清学转换组患者Cox多因素回归分析显示停药时年龄、巩固治疗时间和HBeAg血清学转换所需时间是停药后VR的独立预测因素。<30岁患者的10年CRR仅为15.1%,低于≥30岁患者(55.6%)。年龄<30岁且HBeAg血清学转换时间所需时间>3月的患者的10年CRR低至12.5%。HBeAg阴性组患者Cox多因素回归分析显示停药时年龄和HBV DNA阴转所需时间是停药后VR的独立预测因素。≤20岁患者的CRR低于其他患者(28.6%vs.69.3%,P<0.001),如果结合HBV DNA阴性所需时间≤3月,停药年龄≤20岁患者的10年CRR低至10%。第二部分:83例持续HBeAg消失但未到达HBeAg血清学转换的CHB患者,因其个人意愿并知情同意而停药的患者纳入本研究;将同期HBeAg阳性发生HBeAg血清学转换的190例CHB患者作为对照纳入本研究。通过对两组患者基线特征进行倾向性评分匹配,共有72对患者予以配对,匹配后两组比较结果显示,持续HBeAg消失组患者CRRs高于HBeAg血清学转换组患者且有统计学差异(P=0.036)。83例HBeAg消失CHB患者,平均年龄为32.1±9.5岁,中位治疗时间为49(IQR 36-61)月,SVR患者的中位随访期为72(IQR 36-108)月,其中38例患者复发。停药后第 3,6,12,24,36,60,120 和 180 个月 CRRs 分别为 22.9%,36.1%,41.0%,43.5%,45.0%,45.0%,45.0%和 52.8%。复发患者中 68.4%发生在 NAs 停药后的前3个月,92.1%发生在停用后的1年内。Cox回归分析显示巩固治疗时间(≥24 月 vs.<24 月)(HR0.506,P=0.043)和停药时 HBsAg(≥ 100 IU/mL vs.<100IU/mL)(HR 14.869,P=0.008)是停药后VR的独立预测因子。停药时HBsAg<100 IU/mL患者的CRRs显著低于HBsAg≥100 IU/mL的患者(P<0.001)。51例巩固治疗时间较长(≥24个月)的患者,第3,6,12,24,36,60,120和180个月的CRRs 分别为 17.6%,27.5%,31.4%,31.4%,33.8%,33.8%,33.8%和 44.9%,显著低于巩固治疗时间较短(<24个月)的患者(P=0.012)。83例患者中6例在停药时实现了功能性治愈(HBsAg阴转),停药时HBsAg水平低(≥100IU/ml vs.<100IU/ml)(HR=4.867,P=0.004)、HBeAg 消失所需时间短(HR=1.013,P=0.031)、未复发(HR=0.21,P<0.001)是 HBeAg 消失 CHB 患者停药后功能性治愈的独立预测因子。停药时HBsAg<100IU/ml的患者停药后第1,8.5和10年的累积功能性治愈率分别为11.1%,20%和46.7%。第三部分:本研究共纳入168例CHB患者,其中87例HBeAg阳性(HBeAg血清学转换)和81例HBeAg阴性患者。对于HBeAg血清学转换CHB患者,回归分析显示年龄、停药时HBsAg水平、巩固治疗时间、基线HBV DNA水平和初始未联合IFN治疗是停药后VR的独立预测因子。在停药时年龄≤30岁患者,停药时HBsAg水平<1500IU/ml(OR 19.503,95%CI 1.395-272.650,p=0.027)和初始未联合 IFN 治疗(OR 3.148,95%CI 1.135-8.726,p=0.028)为停药后SVR的独立预测因子。年龄<30岁且停药时HBsAg<1500IU/mL的患者中,仅有1例出现病毒学复发。5例停药时HBsAg<100IU/mL的患者没有复发。11例(12.6%)HBeAg血清学转换CHB患者停药后实现功能性治愈。功能性治愈的患者者停药年龄更小(P=0.013),停药时HBsAg水平更低[中位数163.4(IQR 18.5-715)IU/ml vs.3219(IQR 378.6-10553.5)IU/ml,P<0.001],巩固治疗时间更长(34.8±11.9月vs.23.7±17.0月,P=0.011),随访时Prostate cancer biomarkers间更长(P=0.012)。停药时HBsAg水平<1500IU/ml的患者功能性治率更高。对于HBeAg阴性患者Cox回归分析显示,停药时HBsAg水平(≥250 IU/ml vs.<250 IU/ml)(HR 4.016,p=0.001),年龄(HR 1.069,p<0.001)和 HBV DNA 阴转所需时间(HR 1.221,p=0.010)为停药后VR的独立预测因子。停药时HBsAg<250 IU/mL的患者停药后第1,2,3,5年和10年的CRRs分别为18.7%,26.0%,44.9%和60.6%低于停药时HBsAg≥250 IU/mL的患者(p=0.004)。19例(23.5%)HBeAg阴性患者在停药后实现功能性治愈,与非功能性治愈者相比,功能性治愈者停药时HBsAg值<100 IU/mL(63.2%vs.14.5%,p<0.001)和停药时HBsAg值<250 IU mL(89.5%vs.24.2%,p=0.001)的比例更高且均未复发(P<0.001),治疗时间更长(63.3 月 vs.46.6 月,P=0.043)。停药时 HBsAg<250IU/ml的患者停药后第1,2,3和6年的累积功能性治愈率分别为28.1%,39.5%,43.4%和53.5%。结论:1、在NAs治疗达到CHB指南推荐停药标准的HBeAg阳性(HBeAg血清学转换)和HBeAg阴性患者,其停药后病毒学复发率不同。HBeAg阳性(HBeAg血清学转换)患者停药后病毒学复发率低于HBeAg阴性患者。对于HBeAg阴性CHB患者,NAs停药后复发率更高,需要更严格的停药标准。2、NAs治疗患者若有停药意愿时,针对年龄<30岁的HBeAg阳性(HBeAg血清学转换)CHB患者在经过巩固治疗后,以及针对于年龄≤20岁、HBV DNA转阴所需时间≤3月的HBeAg阴性CHB患者经过一定时间的巩固治疗后,可以考虑停药。3、在国内外首次对于NAs治疗过程中持续HBeAg消失但HBeAb未出现的CHB患者进行了停药后疗效的持久性和安全性研究,停药后累积复发率高于HBeAg血清学转换组患者。在经过≥24月巩固治疗后,HBsAg<100IU/mL的患者,可以考虑谨慎地停药。4、停药时较低的HBsAg对HBeAg阳性(HBeAg血清学转换)CHB患者停药后病毒学应答和功能性治愈有较好的预测价值。HBsAg<1500IU/mL、巩固治疗时间较长(>36月)的年龄≤30岁的年轻患者,停药后持续病毒学应答率高。HBsAg<1500IU/mL的患者停药后功能性治愈率高。HBsAg<100 IU/mL的患者,可以考虑停药。5、停药时较低的HBsAg对HBeAg阴性CHB患者NAs停药后病毒学应答和功能性治愈有较好的预测价值。HBsAg<250 IU/mL且年龄≤40岁的年轻患者停药后持续病毒学应答率高。HBsAg<250 IU/mL的患者停药后功能性治愈率高。6、长期NAs治疗的CHB在严密监测下停药时相对安全的,患者复发主要发生停药后1年内,尤其是前3个月,因此对停药后进行密切监测,特别是在停药后的早期阶段,以确保停药的安全性。

纳米载体体内吸收过程复杂，受生物吸收屏障影响，纳米制剂在促进活性分子吸收利用度方面受到质疑。本实验采用大豆分离蛋白（soy protein isolate,SPI）制备包埋β-胡萝卜素的植物基纳米颗粒（β-carotene loaded soy protein isolate nanoparticles,BC-SPIs），并通过体外模拟消化模型研究BC-SPIs在消化过程中的结构特性变化。同时，通过Caco2细胞转运模型考察消化条件对消化后BC-SPIs跨膜转运的影响机制。此外确认细节，利用含黏液层的Caco2-HT29共培养模型考察消化前后BC-SPIs的黏液层渗透性。研究发现，在消化前，BC-SPIs可以直接通过网格蛋白和小窝蛋白依赖的内吞作用被Caco2单层细胞吸收；而在经过体外模拟消化后，BC-SPIs粒径增大，可以通过网格蛋BSIs (bloodstream infections)白依赖的内吞作用、小窝蛋白依赖的内吞作用以及巨胞饮3种内吞形式被细胞直接吸收。消化后的BC-SPIs带有更高的负电荷，跨越黏液层屏障的能力提高了0.48倍，同时β-胡萝卜素的跨膜转运量提高了0.56倍。本研究明确了BC-SPIDolutegravir molecular weights在消化前和消化后的不同吸收途径，揭示了BC-SPIs在模拟消化条件下与胆盐互作及尺寸增大对其细胞转运吸收效率的促进作用。这些发现可为进一步提高纳米载体在生物利用度方面的应用潜力提供理论参考，有助于推动纳米技术在药物、保健品等领域的发展。

纳米载体体内吸收过程复杂，受生物吸收屏障影响，纳米制剂在促进活性分子吸收利用度方面受到质疑。本实验采用大豆分离蛋白（soy protein isolate,SPI）制备包埋β-胡萝卜素的植物基纳米颗粒（β-carotene loaded soy protein isolate nanoparticles,BC-SPIs），并通过体外模拟消化模型研究BC-SPIs在消化过程中的结构特性变化。同时，通过Caco2细胞转运模型考察消化条件对消化后BC-SPIs跨膜转运的影响机制。此外确认细节，利用含黏液层的Caco2-HT29共培养模型考察消化前后BC-SPIs的黏液层渗透性。研究发现，在消化前，BC-SPIs可以直接通过网格蛋白和小窝蛋白依赖的内吞作用被Caco2单层细胞吸收；而在经过体外模拟消化后，BC-SPIs粒径增大，可以通过网格蛋BSIs (bloodstream infections)白依赖的内吞作用、小窝蛋白依赖的内吞作用以及巨胞饮3种内吞形式被细胞直接吸收。消化后的BC-SPIs带有更高的负电荷，跨越黏液层屏障的能力提高了0.48倍，同时β-胡萝卜素的跨膜转运量提高了0.56倍。本研究明确了BC-SPIDolutegravir molecular weights在消化前和消化后的不同吸收途径，揭示了BC-SPIs在模拟消化条件下与胆盐互作及尺寸增大对其细胞转运吸收效率的促进作用。这些发现可为进一步提高纳米载体在生物利用度方面的应用潜力提供理论参考，有助于推动纳米技术在药物、保健品等领域的发展。