目selleckchem的 分析安徽省风疹病毒(Rubella virus, RV)流行株基因特征。方法 对安徽省2018-2022年RV阳性咽拭子标本开chronic viral hepatitis展RV分离、靶基因序列扩增和序列测定分析,构建与1E和2B基因亚型参考株之间的基因亲缘性关系树,鉴定RV基因亚型,分析核苷酸和氨基酸序列同源性。结果 2018-2021年共分离获得83株RV毒株,其中1E-L2基因亚型81株,来自2018-2020年13个地市;2B-L2c基因亚型2株,来自2019年和2021年2个地市;2022年未获得RV毒株。与其他省份同期的相应RV代表株相比,1E-L2基因亚型流行株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.32%-100%和98.78%-100BYL719%,2B-L2c基因亚型流行株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.59%-99.86%和100%。结论 安徽省2018-2021年RV流行株为输入性的1E-L2和2B-L2c基因亚型,其中1E-L2基因亚型RV为2018-2020年优势流行株。2022年流行RV基因型别不详,需加强风疹病原学监测。
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平原区城郊型河流微生物群落结构与氮代谢研究
水生态保护修复对于未来水环境综合治理至关重要。微生物在水体自然净化和参与氮转化过程中扮演着重要角色,目前关于不同时空条件下河流微生物群落结构特征与氮代谢潜力的研究仍然有限。本研究解析了平原区城郊型河流水质理化因子时空变化特征,通过源解析模型阐明外源输入对河流水质的影响;采用分子生物学分析了河流微生物群落结构的演替规律及与环境因子相关关系;结合KEGG数据库和PICRUSt2功能基因预测研究了河流氮功能微生物与氮代谢通路时空特征,揭示了河流微生物驱动氮素形态转化的机理。本研究对于平原区城郊型河流建立稳健的生态恢复目标,开发利用河流氮代谢微生物相关资源具有重要的理论价值与现实意义。主要结论如下:(1)平原区城郊型河流水质存在明显的季节差异,主要包括温度(T)、溶解氧(DO)、p H等环境因子;通过监测发现平原区城郊Baf-A1型河流存在一定程度的氮污染,源解析结果表明外源输入主要以土壤有机氮、肥料和降水中的氨氮为主。(2)河流微生物群落组成和多样性受时空变化影响显著。丰水期河流微生物丰富度和多样性显著高于枯水期,这主要与丰水期降雨形成的地表径流将外源微生物带入Pevonedistat溶解度河流有关;T、总氮(TN)、硝酸盐(NO_3~-)和铵盐(NH_4~+)为丰水期影响河流微生物群落结构的关键环境因子,p H和化学需氧量(CODcr)为枯水期影响河流微生物群落结构的关键环境因子。(3)季节性是影响河流微生物驱动氮素代谢及形态转化的关键因素。T和p H是主要影响河流氮功能微生物的环境因子,其中Dechloromonas和uncultured_f_Anaerolineaceae是参与丰水期河流中氮转化的主要优势菌,hgcl_clade、Sphingorhabdus和Limnohabitans是枯水期中主要优势菌;此外,丰水期河流中硝化功能基因丰度升高导致河流中NO_3~-累积;枯水期intensive lifestyle medicine河流中反硝化和硝酸盐还原功能基因丰度升高,促进河流中NO_3~-向亚硝酸盐(NO_2~-)转化。
GCN5催化的PCK1丙酰化修饰在2型糖尿病发生发展中的重要作用研究
近几十年来中国社会经济的快速发展和生活水平的提高丰富了人民的食物供给,再加上城市化的生活方式和老龄化的加LY2835219剧,导致了我国肥胖和糖尿病人口的大幅上升,并且带来了严重公共健康问题和巨大社会负担。虽然近年来对肥胖与糖尿病的研究取得了良好的进展,但因其复杂性,目前对它们的发病机制的认知还不够深入和准确。随着质谱技术的发展,越来越多的蛋白质翻译后修饰类型(post-translational modification,PTMs)如脂酰化修饰(acylation)被鉴定报道。目前的研究表明脂酰化修饰的辅酶供体均来源于糖脂和氨基酸代谢的中间产物,因此,代谢失调可能导致脂酰化修饰变化并可能与脂酰化修饰水平的变化密切相关。2型糖尿病作为一种典型的代谢性疾病,其主要特征为糖脂代谢的失调,但2型糖尿病的发生发展会导致脂酰化修饰如何变化及脂酰化修饰异常是否与2型糖尿病发生发展相关目前还缺乏系统研究。本论文围绕2型糖尿病是否存在脂酰化修饰异常及脂酰化修饰在2型糖尿病发生发展中的作用开展了一系此网站列研究。首先,我们通过对2型糖尿病病人外周血单核细胞样本以及2型糖尿病模型小鼠肝脏样本进行了多种脂酰化修饰检测,发现非组蛋白赖氨酸丙酰化修饰水平显著增高,其它脂酰化修饰无明显变化,组蛋白丙酰化修饰也无明显变化。为了探究丙酰化修饰增高是否与糖异生相关,我们用丙酸钠(Napr)处理来提升小鼠丙酰化修饰水平,发现丙酸钠处理能够增高小鼠非组蛋白丙酰化修饰水平并导致小鼠饥饿血糖水平的上升和糖异生能力增强。在细胞水平上,我们发现糖异生关键酶PCK1可发生赖氨酸丙酰化修饰,并且发现在2型糖尿病模型小鼠中PCK1丙酰化修饰水平上升。进一步体外实验证明PCK1丙酰化修饰可显著增强其糖异生酶活性。同时,我们通过体内体外实验发现GCN5以酶活依赖的方式催化PCK1的丙酰化修饰,并且GCN5能够在体外以酶活依赖的方式提高PCK1糖异生酶活性。为了探究GCN5是否在小鼠中通过其丙酰化修饰PCK1活性增强小鼠糖异生能力,我们对糖尿病小鼠使用GCN5酶活抑制剂(MB-3)处理,结果显示注射MB-3组肝脏组织的非组蛋白丙酰化修饰明显下降,而组蛋白丙酰化基本没有变化。重要的是,MB-3注射导致小鼠血糖的明显下降。我们也通过构建过表达GCN5腺病毒的小鼠以及GCN5丙酰化酶活受损的基因型小鼠,发现GCN5酶活与小鼠饥饿血糖以及糖异生能力密切相关。由于支链氨基酸(BCAA)分解代谢是产生丙酰辅酶A(propionylCo A)重要途径,并且BCAA水平增高是肥胖和糖尿病病人的重要特征,我们也研究了BCAA与糖尿病小鼠丙酰化异常的关系。我们发现高BCAA饲喂可以上调小鼠非组蛋白丙酰化修饰,促进糖尿病小鼠表型。重要的是,我们发现GCN5酶活受损的小鼠对支链氨基酸协同高脂饲喂诱导的糖尿病表型的发生发展具有抗性,其非组蛋白的丙酰化修饰也无明显上调,表明GCN5在介导PCK1的丙酰化修饰及糖异生的异常方面发挥重要作用,是糖尿病治疗的一个潜在靶点。综上,本项研究从丙酰化修饰的全新视野,探究了糖尿病发生发展的新型分子机制,发现GCN5介导的PCK1丙酰化修饰促进其糖异生能力,以及BCAA通过丙酰化修饰促进糖尿病发生发展,为肥胖和糖尿病防治提供了一个新的靶Short-term bioassays点和理论依据。
基于粗酶固定化的高产N-乙酰神经氨酸无细胞体系的构建
N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu Ac)是一种带负电荷的功能性单糖,广泛存在于多种植物、动物和微生物中。Neu Ac具有抗炎、抗癌、抗病毒、抗粘连活性,在制药领域具有应用的潜力,同时Neu Ac也是乳制品中重要的添加剂,可以增强婴儿的免疫力、促进大脑和骨骼的发育。发酵法和天然提取法生产Neu Ac存在产物回收率低、副产物较多、易造成环境污染等劣势,阻碍了其工业化应用。此外,目前在酶法合成Neu Ac的研究中主要采用纯化后的酶,增加了生产成本,不利于工业生产。本研究对Neu Ac醛缩酶(N-acetylneuraminic acid aldolase,Nan A)进行热稳定性改造并开发了一种基于粗酶固定化的无细胞体系(crude enzyme immobilization-based cell-free system,CEICFS)用于Neu Ac的合成。本论文主要研究内容如下:(1)重组酶在大肠杆菌中的异源表达。首先克隆鱼腥藻(Anabaena sp.CH1)来源的编码N-乙酰葡萄糖胺2-差向异构酶(N-acetylglucosamine-2-epimerase,AGE)的基因bage和葡萄球菌(Staphylococcus.hominis EFS20452.1)来源编码Neu Ac醛缩酶的基因nan A至表达载体p ET28a,在大肠杆菌中进行异源表达。进一步优化了重组酶的表达条件,将异源表达得到的粗酶液用于酶法合成Neu Ac,以0.4 mol·L~(-1) Glc NAc和1.0mol·L~(-1)丙酮酸钠为底物,反应10 h得到43.6 g·L~(-1) Neu Ac,其中Glc NAc的摩尔转化率为35.3%。(2)为了提高关键酶AGE和Nan A的表达水平,比较了融合促溶标签、伴侣蛋白和优化N-端编码序列(N-terminal coding sequence,NCS)三种策略对蛋白表达量的影响。结果发现融合促溶标签虽然可以提高重组酶的表达量,但导致酶活性降低;分子伴侣质粒对重组酶表达量的提高没有明显的效果,优化NCS使关键酶的表达量得到明显的提高。以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为报告蛋白,构建长度为30 nt的NCS突变文库并从中筛选出较优的突变体。通过优化NCS,AGE的表达量提高了1.5倍,达到14.82 U·m L~(-1),同时Nan A酶的表达量提高了1.2倍,达到12.65 U·m L~-1。(3)为了提高AGE和NBMS-907351an A的热稳定性,以酶的蛋白质序列和结构为出发点,对AZD6738核磁酶进行半理性改造。对biomarkers tumor两种方法筛选的位点进行定点突变,发现AGE的热稳定没有明显提高。相比于Nan A,突变体Nan A_(S188C/A197C)在50℃条件下的活性保留提高了3.9倍,在65℃的条件下半衰期由48.5 min提高至95.3 min,比活力提高了1.25倍。V_(max)为5.20μmol·min~(-1)·mg~(-1),K_m为93.88 mg·m L~(-1),k_(cat)为16.52 min~(-1),催化效率提高了142%。结构分析及分子动力学模拟表明,酶结构刚性的增加有效提高了Nan A突变体的热稳定性。(4)无细胞体系的固定化研究。根据固定化的方法对载体进行筛选,确定最佳固定化载体为氨基树脂LXTE-703。随后优化了固定化酶的条件,确定最优固定化条件:25 m L AGE(Nan A)粗酶液中加入5 g LXTE-703树脂置于25(30)℃,170 rpm的摇床中固定化12 h。考察固定化酶的酶学性质发现:最适反应温度和p H均和游离酶一致,温度稳定性高于游离酶,p H适应性较游离酶更宽泛。固定化酶的K_m增加,表明酶对底物的亲和力下降。CEICFS合成Neu Ac的产量达到了68 g·L~(-1),重复使用5次后仍可保留78%左右的酶活。
咪达唑仑口服溶液比右美托咪定喷鼻更有效缓解儿童术前焦虑
目的:比较咪达唑仑口服溶液与右美托咪定喷鼻对儿童术前焦虑的影响。方法:选Pidnarulex临床试验取2022年6~12月在我院拟行择期手术患儿90例,采用随机数字表法分为咪达唑仑口服溶液组、右美托咪定喷鼻组和生理盐水滴鼻组,麻醉前30 min,咪达唑仑口服溶液组0.5 mg/kg咪达唑仑口服溶液口服,右美托咪定喷鼻组2μg/kg右美托咪定喷鼻,生理盐水滴鼻组2 m L生理盐水滴鼻。记录3组患儿药物接受度。记录3组患儿给药前(T_1)、与父母分开时(T_2)、麻醉诱导时(T_3)、术后24 h(T_4)改良耶鲁术前焦虑量表VX-661试剂(modified Yale preoperative anxiettrophectoderm biopsyy scale-short form,m-YPAS-SF)评分。记录3组患儿麻醉诱导时的麻醉诱导期合作度量表(induction compliance checklist,ICC)评分。记录3组患儿苏醒时间和PACU停留时间。结果:与右美托咪定喷鼻组和生理盐水滴鼻组比较,咪达唑仑口服溶液组药物接受度评分较低(P<0.05),T_2、T_3和T_4的m-YPAS-SF评分较低(P<0.05),ICC评分较低(P<0.05),苏醒时间较长(P<0.05),PACU停留时间无明显差异(P>0.05)。结论:咪达唑仑口服溶液比右美托咪啶喷鼻更易被患儿接受,更有效缓解术前焦虑,但苏醒时间较长。
1例丙戊酸钠致儿童抗利尿激素分泌失调综合征报道并文献复习
目的:探讨儿童长期服用丙戊酸钠(VPA)导致抗利尿激素分泌失调综合征(SIADH)的发病机制、诊疗经过,提高临床医师认识水平。方法:总结1例TBC1D24基因突变相关癫痫儿童长期服用VPA导致SIADH的临床资料,并以“丙戊酸钠”和“抗利尿激素分泌失调综合征”为关键词在中国知网和PubMed数据库中进行文献检索和NSC125066临床试验分析。结果:该患儿12岁,因TBC1D24基因突变相关癫痫长期服用VPA,因癫痫发作伴意识障碍入院,住院后期发现重度低钠血症,积极补充selleck PF-64639223%氯化钠、限液、利尿等对症治疗后血钠水平未恢复正常,将VPA减量后血钠水平恢复正常,排除可能引起低钠血症的其他病因后确诊为VPA致SIADH,多次门诊随访监测显示血钠水平正常。检索数据库后共收集7篇相关病例报道,减停VPA后10例成人患者均血钠水平恢复正常。结论:儿童长期服noninvasive programmed stimulation用VPA出现顽固性低钠血症时,需考虑VPA致SIADH,及时调整治疗方案,避免出现严重的不良事件。
中空结构PBA及其衍生物材料的制备与OER电催化性能研究
氢能作为一种重要的清洁能源,已引起全社会的广泛关注。电解水是获取氢能的有效手段。由于其缓慢的反应动力学,析氧反应(OER)成为了限制水分解能量效率的瓶颈。设计高效的OER催化剂成为了近年来重要的研究方向。结构设计和组成调控是开发高性能催化剂材料的两个重要思路。中空纳米结构可以提供较多的催化活性位点、促进物质的传输,从而有利于电催化性能的提高。廉价的过渡金属基催化剂,由于原料易得、种类繁多、性能优异,已成为电催化领域的研究热点。普鲁士蓝类似物(PBAs)通常含有两种或两种以上的过渡金属元素,不同元素之间的协同效应常会带来更优的催化性能。更重要的是,通过对PBAs进行简单的处理,可以得到多种衍生材料,这些衍生材料不仅继承了 PBAs的组分优势,在衍生处理后导电性往往会得到较大的提升。此外,通过合理的实验方案设计,易于获得中空结构的PBAs及其衍生物材料。本论文中,我们借助阴离子交换反应和阳离子交换反应设计了三种中空结构PBAs,并对相关材料进行了衍生处理,实现了 OER催化性能的有效提升。1.利用ZIF-67空心球为前驱物,通过阴离子交换法获得了一种具有多级中空结构的CoFe PBA,并在氮气中对该材料进行了一系列的热处理。通过对热处理后的样品进行系统的材料表征来探究热处理温度对材料形貌结构和物质组成的影响。在所有热处理的样品中,350℃热处理的样品表现出了最佳的OER催化性能,当电流密度为10 mA cm-2时,过电位仅291 mV。这是因为它不仅维持住了中空结构,还Dibutyryl-cAMP试剂在适宜的热处理条件下转变成了多组分的复合材料。合金和金属单质提供了更多的催化活性位点,也提高了材料的导电性。2.利用碱式乙酸盐作为前驱体,通过阴离子交换法制备了钴、镍含量不同的棱柱状中空CoNiFe PBAs。在350℃下对CoNiFe PBAs进行磷化处理,得到了相应的衍生材料。借助形貌表征探究了钴、镍含量的改变对材料尺寸的影响。当钴和镍的投料比例为3:1时,前驱体具有较小的尺寸,相对应的CoNiFe PBA及其磷化物同样具有较小的尺寸,并表现出了优秀的电催化性能。结合rehabilitation medicine材料的尺寸以及金属元素含量的变化分析了电催化OER性能存在差异的原因。3.通过柠檬酸钠辅助合成了一种中空立方结构的MnFe PBA,并以此为前驱体,利用阳离子交换法制备了一种立方中空结构的MnCoFe PBA。在400℃下对MnFe PBA和MnCoFe PBA进行磷化处理。研究了 Co元素的引入对材料的形貌结构以及电催化性能产生的影响。MnCoFe PBA保持了 BMS-354825MnFe PBA的中空结构,金属钴的引入提供了更多的活性位点。MnCoFe PBA的磷化物在作为OER催化剂时展现出了较为优秀的催化活性和较好的稳定性。
非医学大学生抑郁症相关知识、态度和行为现况调查
目的 了解非医学大学生的抑郁症相关知识、态度、行为现况,为防治大学生抑郁症提供科学依据。方法 采用自行设计的调查问卷,对广东省5所高校非医学专业1 385名大学生进行大学生抑郁症相关知识、态度、行为现况调查。结果 抑郁症的临床症状表现知识知晓现状依次是:自杀念头或行为(76.53%)、睡眠障碍(72.92%)、情绪低落selleck合成(71.41%),其中有15.52%完全不知道,均未达到国家85Bacterial bioaerosol%的要求。对周围抑郁症患者的态度依次为:有机会希望关爱帮助他们(41.66%)、接纳(31.19%)、同情(12.27%)、无所谓(11.84%),但亦有少数选择了害怕、避而远之(0.94%)、歧视(0.79%)、厌恶、排斥(0.72%)。如果患抑郁症后:自己Panobinostat使用方法慢慢调整(38.84%)、心理咨询机构咨询(81.59%)、医院精神科就诊(58.77%)等;94.08%愿意参与防治抑郁症的教育宣传,93.94%愿意接受防治抑郁症知识。结论 大学生抑郁症知识并未达到国家85%的要求。防治抑郁症的健康教育不足,而大学生却对其认识明确、需求迫切、态度积极。应加强抑郁症的专业性知识教育,建议开展医校协同的、专业性强的、加大深度和广度的健康教育。
基于NF-κB信号通路探究SIRT7基因对口腔癌细胞株自噬蛋白及巨噬细胞极化的作用机制
目的:基于NF-κB信号通路探究SIRT7基因对口腔癌细胞株自噬蛋白及巨噬细胞极化的作用机制。方法:人口腔鳞状细胞癌细胞Management of immune-related hepatitis株SCC25细胞分为SCC25组(无干预的SCC25细胞)、阴性对照组(SCC25细胞转染空载体pLKO.1-vector-GFP)、SIRT7 shRNA组(SCC25细胞转染SIRT7 shRNA)、SIRT7组(SCC25细胞转染SIRT7慢病毒),联合A组(SCC25细胞+50μmol/L NF-κB抑制剂PDTC+SIRT7 shRNA)及联合B组(SCC25细胞+50μmol/L NF-κB抑制剂PDTC+SIRT7慢病毒),qRT-PCR检测SIRT7相对表达;Transwell法检测侵袭数目;划痕实验检测划痕愈合率;免疫荧光检测P62、LC3-Ⅱ表达,免疫印迹分别检测M1和M2标志蛋白及NF-κB、NF-κB p65蛋白水平。结果:SCC25组及阴性对照组SCC25细胞的侵袭数目、划痕愈合率、P62、LC3-Ⅱ、CD163、CD11C、NF-κB及NF-κB p65表达比较差异无统计学意义(P>0.05);与阴性对照组相比,SIRT7 shRNA组细胞侵袭数目增加、划痕愈合率、CD163、NF-κB及NF-κB p6CP-690550体外5升高,CD11C降低(P<0.05);与SIFUT-175说明书RT7 shRNA组相比,SIRT7组SCC25细胞的侵袭数目、划痕愈合率、CD163、NF-κB及NF-κB p65降低,CD11C升高(P<0.05)。与联合A组相比,且联合B组SCC25细胞的侵袭数目、划痕愈合率、CD163、NF-κB及NF-κB p65降低,CD11C升高(P<0.05)。结论:上调SIRT7可抑制口腔鳞状细胞癌细胞侵袭及迁移,降低自噬蛋白P62、LC3-Ⅱ活性,促进巨噬细胞M2向M1极化,研究机制可能与SIRT7调节NF-κB相关。
不同时期打顶对中、上部烟叶的氮代谢和品质的影响
打顶是烟叶大田生产的一项重要管理措施,能够阻断烟草的生殖生长,促进营养物质向烟叶分配;打破激素平衡;改变烟叶中原有的库源关系,促进根部发育;影响烟碱的合成;影响烟叶中的化学物质和香气成分,从而提高烟叶品质。恰当的打顶时期对提高烟叶品质具有重要作用。目前对于打顶的研究大多集中于烟草根部对打顶的响应机制,而对叶片中的响应研究较少。由于烟叶是烟草的最终收获对象,氮素又对烟叶质量影响较大,研究打顶后烟叶中氮代谢、激素和基因表达的变化对于分析优质烟叶形成的机理具有重要意义。本实验以大田栽培的中烟100(Nicotiana tabaccum cv.Zhongyan100)为实验材料,设置现蕾打顶(BS)、中心花开放打顶(F)和中心花开放7天后打顶(AF)三种不同时期的打顶处理,从农艺性状、烟叶常规成分、中性致香成分、氮素含量、氮代谢相关酶活、转录组检测等方面进行分析,探究不同时期打顶对烟株中部、上部叶(自下而上第16片叶和第21片叶)品质和氮代谢的影响。主要结果如下:1.不同时期打顶对中、上部叶的农艺性状影响显著。移栽后100 d时,BS16叶长为71.17cm显著大于F21和AF21,BS21叶长为72.88 cm、叶宽为38.51 cm显著大于F21和AF21;F和AF打顶处理的16和21叶叶长、叶宽无显著差异。移栽100 d时BS打顶处理叶片数为26.46片均显著低于F和AF打顶处理,株高均显著小于F和AF打顶处理,F和AF打顶处理的株高和叶片数无显著差异,表明BS打顶能够促进中部和上部叶的生长,有利于上部烟叶的开片,但叶片数较少。2.打顶时期影响烟叶的氮代谢。在中部叶中,移栽100 d时F16中总氮、蛋白质、硝态氮含量都显著低于BS16和AF16;F16硝酸还原酶(NR)活性显著高于BS16和AF16,谷氨酸合成酶(GOGAT)活性显著低于BS16,谷氨酰胺合成酶(GS)和天冬酰胺合成酶(AS)的活性都介于AF16和BS16之间,谷氨酸脱氢酶(GDH)活性显著高于AF16。在上部叶中,移栽100 d时F21叶总氮和蛋白质含量显著低于BS21和AF21,硝态氮和氨态氮含量都显著低于BS21;F21中NR、GS和GOGAT活性都显著低于BS21,AS活性显著高于BS21和AF21,三种打顶处理的GDH活性无显著差异。3.打顶时期对烟叶常规成分和致香成分均有影响。中部叶烤烟的总糖和还原糖含量随着打顶时期的推迟先增加后降低,烟碱含量先升高后降低,糖碱比先升高后降低;上部叶烤烟中随着打顶时期的推迟总糖和还原糖含量变化和中部叶一致、烟碱含量先降低后升高、糖碱比先升高后降低,且F总糖还原糖、烟碱和糖碱比在优质烟范围内,表明F打顶促进中、上部叶总糖和烟碱含量的协调。随着打顶时期的推迟中部叶钾含量逐渐降低,氯含量逐渐升高,烟草钾氯比逐渐下降;上部叶钾含量先降低后升高,氯含量逐渐升高,钾氯比逐渐下降,表明Panobinostat打顶时期较早有利于提高中、上部叶燃烧性。打顶时期影响烟叶的致香成分。上部烟叶中的色素含量均随着移栽天数的增加逐渐降低,随着烟叶逐渐成熟在移栽100 d时,随着打顶时期的推迟中、上部叶中叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素含量均先降低后升高,表明F打顶时能够使叶片在成熟过程中色素降解充分,有利于香气物质的生成,提高烟叶品质。中部叶中性致香成分总含量随着打顶时期的推迟先升高后降低,上部叶中总含量则逐渐升高;烤烟样评吸表明,F处理的中、上部叶得分最高。结合香气成分结果,可见F打顶有利于提高烟叶品质。4.为进一步分析不同时期打顶对中、上部叶烟叶品质和氮代谢的影响,移栽后100 d时,取不同打顶处理的第16和21片叶进行转录组检测。共测得基因49477个,其中BS16 vs Genetic animal modelsF16和AF16 vs F16中显著性差异基因分别为6525个和9648个,同时响应BS16 vs F16和AF16 vs F16的差异基因2984个;BS21 vs F21和AF21 vs F21显著性差异基因分别为2053个和13873个,同时响应BS21 vs F21和AF21 vs F21的差异基因850个。对2984个基因进行KEGG分析,发现主要影响了植物病原体相互作用,类黄酮生物合成,苯丙烷的生物合成,鞘脂类代谢,苯丙氨酸代谢,丙氨酸代谢等代谢途径;在850个基因中主要影响苯丙烷的生物合成,倍半萜和三萜生物合成,植物病原菌互作,类黄酮生物合成,丙氨酸代谢,参与玉米素生物合成,植物激素信号转导,氮代谢,甘油磷脂代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,苯丙氨酸代谢,肌醇磷酸盐代谢等代谢途径。其中在BS16 vs F16和AF16 vs F16中都下调的基因有PAL1和4CL3表达均下调,表明这两种打顶时期能够抑制烟叶中苯丙氨酸代谢,导致烟叶中苯丙氨酸类香气物质降低。硝酸盐转运相关基因NPF6.2、NPF5.16、NRT4.2、NPF4.7在BS16中下调,在AF16中上调;在BS16和AF16中氨态氮转运相关基因AMT2均上调,AMT1-2均下调;NR在BS16和AF16中均表达下调,不利于叶片中硝酸盐同化;GS2、GDHA在BS16中下调,在AF16中轻微上调,GLU1/GOGAT在AF16中下调,在BS16中变化不明显,AS1和AS2在BS16中上调,在AF16中下调。TTG2在BS16上调,在AF16中下调表明过早打顶有利于烟叶生长,过晚打顶不利于烟叶的生长发育。BS21vs F21和AF21 vs F2EPZ-64381中,BS21中CKX3下调、ARR3下调、FLS1上调有利于细胞分裂素积累;AF21中CKX3上调、ARR3上调、CHS上调、CHI上调、FLS1上调、DFR下调不利于细胞分裂素积累,但有利于黄酮类代谢增加上部叶香气物质的积累与香气测量结果一致;硝酸盐转运相关基因NPF6.2、NPF5.4、NPF4.7、NPF5.9在BS21和AF21中均下调;氨态氮转运相关基因AMT1-2、AMT1-3在BS21和AF21;氮同化相关基因NR、Ni R、GDHA在BS21中上调,在AF21中下调,GLU1/GOGAT在AF21中上调,在BS21中下调,AS1在BS21和AF21中均下调。另外对部分差异基因进行表达水平分析,其表达结果与转录组一致。综上所述,正常生长条件下,F打顶通过提高烟叶中PAL1、4CL3、NR和CKX3等基因的表达,影响NR、GOGAT、AS和GDH活性,改变苯丙氨酸代谢、黄酮类代谢、木质素合成等代谢途径,使中、上部烟叶中的成分更加协调,提高了烟叶品质和评吸效果。