Author: admin

肝纤维化是各种损伤因素所致的慢性肝损伤演变而来,其发病机制是肝脏细胞外基质(ECM,Extracellular Matrix)在肝脏过度沉积,肝星状细胞(HSCs,Hepatic Stellate Cell)是合成和分泌ECM的主要细胞,此外肝巨噬细胞在此过程中同样发挥着至关重要的作用。因此,抑制HSCs的炎性活化以及抑制肝巨噬细胞促炎表型对缓解肝纤维化至关重要。丁香酚具有抗炎、抗氧化等药理作用,有研究显示,丁香酚处理小鼠骨髓来源的间充质干细胞(MSCs,Mesenchymal Stem Cell),可以有效地增强其自我更新等生物学功能,然而丁香酚能否增强人脐带来源的间充质干细胞(HUC-MSCs,Human Umbilical Cord Derived MesenchymIntima-media thicknessal Stem Cells)的抗炎特性,改善其对肝纤维化的治疗作用仍未有研究报道。本课题研究内容如下:目的:观察丁香酚对HUC-MSCs细胞活力和迁移能力的影响;研究丁香酚对HUC-MSCs调控HSCABT-263价格s的炎性活化和巨噬细胞促炎表型能力的影响;研究丁香酚对HUC-MSCs抗小鼠肝纤维化能力的影响。方法:1.组织贴壁法体外培养HUC-MSCs,流式细胞术鉴定HUC-MSCs的表面标志物,特殊染色评估HUC-MSCs多向分化能力;2.MTT法评估丁香酚对HUC-MSCs细胞活力的影响;3.体外划痕实验观察丁香酚对HUC-MSCs迁移能力的影响;4.Western Blot实验检测Eu-MSCs-CM、MSCs-CM处理经转化生长因子-β_1(TGF-β_1,Transforming growth factor-β_1)诱导活化的LX-2细胞,对各组LX-2细胞中α-SMA、COL_1A_1、Smad2/3、P-Smad2/3的表达的影响;5.Eu-MSCs-CM、MSCs-CM处理经脂多糖(LPS,Lipopolysaccharide)诱导为促炎表型THP-1巨噬细胞,流式细胞术检测THP-1巨噬细胞表面标记物CD11b、CD86和CD206的表达,q RT-PCR检测THP-1巨噬细胞细胞促炎基因TNF-α、IL-1β、IL-6的表达;6.促炎型THP-1巨噬细胞与LX-2细胞共培养,Western Blot检测对LX-2细胞的α-SMA、COL_1A_1的影响表达;7.腹腔注射CCL_4构建小鼠肝纤维化模型,尾静脉注射Eu-MSCs、MSCs后,HE、Masson染色检测小鼠肝脏纤维化恢复程度;血清生化检测小鼠血清AST、ALT表达变化。结果:1.组织贴壁法培养得到多边形或梭形细胞,流式细胞术鉴定结果显示该细胞的MSCs标志物CD90、CD73、CD105表达率接近100%,造血细胞标志物CD45、CD19、CD34、CD11selleck产品b、HLA-DR几乎不表达;特殊染色观察到油红0染色阳性的成脂分化细胞和茜素红染色阳性的成骨分化细胞(p<0.05);2.MTT法结果显示0、7.5、15、30μg/m L浓度丁香酚处理HUC-MSCs 24h、48 h后细胞活力在90%以上,可认为对HUC-MSCs没有毒力作用(p<0.05);3.划痕实验显示:加15μg/m L丁香酚处理组的细胞迁移率为(83±1.6)%、未加丁香酚处理组的细胞迁徙率为(42±2.8)%(p<0.05);4.Western Blot结果显示:MSCs-CM处理组和Eu-MSCs-CM处理组,LX-2细胞α-SMA、COL_1A_1、p-Smad2/3、Smad2/3蛋白的表达水平均显著降低,与MSCs-CM处理组相比,Eu-MSCs-CM处理组降低更加显著(p<0.05);5.流式细胞术结果显示:MSCs-CM处理组和Eu-MSCs-CM处理组,THP-1巨噬细胞的M1型极化标志物CD86的表达水平均显著降低,与MSCs-CM处理组相比,Eu-MSCs-CM处理组降低更加显著;q RT-PCR结果显示:MSCs-CM处理组和Eu-MSCs-CM处理组,THP-1巨噬细胞促炎基因TNF-α、IL-1β、IL-6的表达均显著降低,与MSCs-CM处理组相比,Eu-MSCs-CM处理组降低更加显著(p<0.05);6.Western Blot结果显示:促炎型THP-1巨噬细胞与LX-2细胞共培养后,LX-2细胞中的α-SMA、COL_1A_1蛋白表达量显著升高(p<0.05)。7.HE、Masson染色结果显示:MSCs组和Eu-MSCs组小鼠肝纤维化均得到了恢复,与MSCs组相比,Eu-MSCs组恢复更加明显;生化分析结果显示:MSCs组和Eu-MSCs组,AST、ALT水平均显著降低,与MSCs组相比,Eu-MSCs组降低更加显著(p<0.05)。结论:(1)丁香酚可以增强HUC-MSCs的迁移能力;(2)丁香酚可以增强HUC-MSCs对HSCs炎性活化以及对巨噬细胞促炎表型的抑制作用;(3)丁香酚可以增强HUC-MSCs抗肝纤维化作用。

普洱茶富含多种活性成分,减肥降脂效果显著。茶褐素(theabrownin,TB)是普洱茶重要的活性成分,但其抗肥胖的潜在机制尚未完全阐明。miRNAs作为一种新型的营养调节生物功能的介质,在肥胖调控中发挥重要作用,探究miRNA介导茶褐素调节肥胖的潜在分子机制,可能有助于丰C59纯度富茶褐素调节健康的新靶点。因此,本研究采用高脂饮食诱导建立肥胖大鼠模型,同时进行WE(pu-erh tea water extract,WE)和TB干预,采用16S r RNA测序和代谢组学研究HFD大鼠肠道菌群、内源代谢物的变化规律,结合miRNA测序方法和体外/体内实验,探究WE和TB在高脂饮食模式下调控糖脂代谢紊乱的作用机制与miRNA谱的关联性,寻找WE、TB可能调控的关键miRNA。研究结果如下:(1)基于居里点热裂解气质联用技术分析不同裂解温度下WE与TB的挥发性裂解产物。WE和TB在380℃或600℃热裂解温度下,2种样品裂解产物中相对含量最高的化合物均为咖啡因,其中WE裂解产物中的咖啡因含量高于TB。(2)基于非靶向代谢组学方法揭示WE与TB之间的成分差异。WE和TB存在较大的代谢物差异,共检测到58种差异代谢物,主要包括12种脂Research Animals & Accessories肪酸、19种有机酸、3种生物碱、4种单体儿茶素衍生物、9种黄酮类,其中WE中生物碱、黄酮、单体儿茶素及其衍生物含量高于TB,TB含有更多的有机酸。(3)明确了WE和TB对高脂饮食大鼠的肥胖预防作用。结果表明WE和TB能够阻止高脂饮食模式下体重的快速增长,降低大鼠血脂血糖水平和脂肪系数,并且WE和TB均可显著降低HOMA-IR(P<0.05),且存在剂量效应。同时WE和TB能够改善高脂诱导的炎症反应,降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平,升高Nrf2含量。此外,WE和TB调节脂质代谢关键酶活性,增强ATGL、HSL酶活性,显著提高SOD、CAT、GSH-Px抗氧化酶活性(P<0.05),降低MDA累积以及缓解肝脏脂肪变性,降低肝脏中TC和TG水平,升高FFA含量。综合来看WE及TB在调节肥胖具有优异的效果。(4)16S rRNA测序分析结果表明WE及TB能够逆转高脂饮食模式的大鼠肠道菌群结构,菌群结构恢复至正常水平,提高HFD大鼠的Bacteroidetes/Firmicutes比值,并且WE和TB干预降低潜在有害菌(Enterobacteriaceae,Helicobacter和Lachnoclostridium)相对丰度;提高潜在有益菌(Bacteroides、Lactobacillus和Bifidobacterium)的相对丰度。表明WE和TB能够靶向调节肠道微生物组成和核心微生物相对丰度预防肥胖。(5)非靶向代谢组学技术分析大鼠盲肠内容物的代谢物,筛选WE和TB降脂作用相关差异代谢物。WE下调皮质酮、芥基醇、熊去氧胆酸等36种差异代谢物;上调氢化肉桂酸、(R)-3-羟基丁酸、L-苯丙氨酸等9种差异代谢物;与HFD组相比,TB上调甘露庚糖醇、甘油磷酸胆碱和https://www.selleck.cn/products/Nolvadex.htmlL-组氨酸等13种差异代谢物产物,降低苜蓿酸、2-甲基吡咯、甘露醇等8种差异代谢产物。WE和TB预防肥胖与苯丙氨酸代谢、甘油磷脂代谢、类固醇激素生物合成、花生四烯酸代谢和咖啡碱代谢等多个途径密切相关。(6)采用miRNA测序技术探究WE及TB在高脂饮食模式下大鼠肝脏miRNA表达的影响,筛选与WE及TB降脂作用相关的miRNA。与HFD组相比,WE、TB显著下调miR-125b-5p、miR-223-3p＿R+2、miR-148b-3p和miR-1247-5p表达(P<0.05),与正常组的表达水平无显著差异;差异miRNA靶基因在MAPK、P13K-AKT、AMPK、FOXO等信号通路显著富集,差异miRNA与肥胖相关指标显著相关(P<0.05),并且WE及TB调控差异miRNA富集信号通路。推测差异miRNA可能是WE和TB调节HFD诱导肥胖发生的潜在调节因子。(7)验证了WE、TB调控大鼠肥胖依赖于miRNA表达,WE及TB显著上调PI3K-AKT-FOXO信号通路中AKT、PGC-1a、G6Pase基因表达水平,显著下调FOXO、PGC-1a、G6Pase表达水平(P<0.05);miRNA过表达则抑制PI3K-AKT-FOXO信号传导,说明WE及TB通过抑制异常表达的miRNA激活PI3K-AKT-FOXO信号通路调节糖脂代谢。(8)揭示了差异miRNA调节糖脂代谢的具体分子机制,明确了miRNA的作用靶点。筛选出P13K-AKT-FOXO信号通路信号分子,包括Grb2、Pik3r3、Pik3ca和Gng10基因作为候选靶基因。WE与TB显著上调miRNA靶基因表达水平,miRNA过表达则显著降低靶基因表达水平(P<0.05);此外,靶基因野生型报告载体与miRNA共转染导致荧光素酶活性显著降低,研究结果确定了miRNA的作用位点。本研究表明,WE、TB具有有效调控糖脂代谢,改善非酒精性脂肪肝,增加胰岛素敏感性以及抑制氧化应激和炎症反应的作用。WE和TB对于上述表型的改善主要通过调控肠道菌群、代谢物组成的变化和miRNA-PI3K-AKT-FOXO途径来实现。

目的 探讨糖尿病肾病足细胞(podocyte)能量代谢的调控机制。方法 购买人源肾足细胞，高糖诱导建立糖尿病体外模型，转染miR-146a mimic或pcDNA3.1-TLR4及其阴性对照物。qRT-PCR检测miR-146a与TLR4的表达。通过检测细胞外酸化率(ECAR)、检测糖酵解关键酶HK2的mRNA评估足细胞的糖酵解能力；通过JC-1荧光染色与ATP试剂盒检测了线粒体膜电位的变化以及ATP的含量。Starbase网站(https://starbase.sysu.edu.cn/)预测、双荧光素酶报告实验检测miR-146a与TLR4的靶向结合。结果 高糖诱导的足细胞中miR-146a表达下调，TLR4表达上调，糖SBE-β-CD IC50酵解能力下降selleckchem，细胞膜电位下降，ATP产生减少；上调miR-146a的表达可以改善这种变化，而同时上调TLR4的表达则抑制了高表达miR-146a的改善作用。miR-146a靶向抑制TLR4的表达。结论 糖尿病肾病足细胞中miR-146a低表达，促进了TLImmunochemicalsR4的表达，抑制了足细胞的糖酵解、膜电位及ATP的含量，最终导致足细胞的能量代谢障碍。

目的 探讨生物反馈电刺激联合中药MK-2206试剂涂擦对外阴硬化性苔藓(VLS)患者的治疗效果。方法 选择甘肃中医药大学附属医院妇产科2022年1-12月收治的60例患者为研究对象，按照患者入院顺序随机分为对照组和观察组各30例。对照组患者给予中药涂擦治疗，观察组患者给予生物反馈电刺激Pevonedistat说明书联合中药涂擦治疗。对比2组患者治疗前后外阴瘙痒程度、皮肤颜色、皮肤弹性症状及体征评分及临床疗效。结果 观察组患者治疗后外阴瘙痒程度[(0.77±0.50)分]、皮肤颜色[(1.03±0.56)分]、皮肤弹性[(0.60±0.56)分]症状及体征评分均低于对照组[分别为(1.17Gel Doc Systems±0.59)、(1.47±0.78)、(1.17±0.75)分],差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后总有效率[96.7%(29/30)]高于对照组[83.3%(25/30)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 生物反馈电刺激联合中药涂擦治疗VLS疗效显著，能够改善临床症状，治疗效果优于单纯中药涂擦。

目的：探讨生殖道支原体、衣原体感染与人乳头瘤病毒(HPV)感染关系。方法：收集2019年3月-2022年10月本院行生殖道支原体培养、衣原体抗原检测的育龄妇女567例，检测宫颈口分泌物，依据检测结果分为支原体感染组、衣原体感染组、混合感染组以及无感BIBW2992染的对照组，比较各组HPV阳性率。将年龄等因素纳入协变量，logistic回归分析生殖道支原体、衣原体感染对于HPV感染风险的影响。结果；育龄妇女PF-03084014小鼠生殖道衣原体感染率为3.4%(19/567),支原体感染率为7.8%(44/567),混合感染率为2.8%(16/567);HPV阳性率为19.7%(112/567),主要以25～35岁年龄段最高；HPV亚型阳性率较高的为52型、16型以及58型，均为高危型；不同组HPV阳性检出率存在差异，混合感染组最高(87.5%),支原体感染组次之(65.9%)。多因素logistic回归分析显示，生殖道支原体与衣原体混合感染为HPV感染的风险因子(OR=acute infection1.732,95%CI 1.253～1.905)。结论：育龄妇女生殖道支原体与衣原体混合感染增加HPV感染风险，应注重两者筛查，以预防HPV感染。

目的 基于网络药理学、分子对接以及实验验证探讨淫羊藿苷联合泼尼松治疗激素抵抗性肾病综合征（Steroid-sensitive nephrotic syndrome,SRNS）大鼠的作用机制。方法 经由TCMSP、GeneCards及CTD数据库确定淫羊藿苷活性成分作用靶点；通过GeneCards基因库、OMIM遗传数据库、CTD靶点数据库以及DRUGBANK药物数据库筛选与SRNS相关的靶点，去重并整合；并绘制Venn图获取交集靶点；利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质互作网络，借助CytoscaLiproxstatin-1体内实验剂量pe 3.7.2进行拓扑分析筛选核心靶点；使用DAVID 6.8数据库对靶点进行GO和KEGG功能富集分析。用AutoDockTools 1.5.6软件及PyMOL软件进行分子对接研究。通过构建SRNS大鼠模型，检测各组大鼠体质量、24 h尿蛋白定量、HE染色观察各大鼠肾组织病理形态；采用Western blot实验检测核心靶点蛋白表达。结果 通过网络药理学分析，获得淫羊藿苷活性成C difficile infection分对应的靶点139个，与1476个SRNS相关靶点取交集，得到58个共同靶点，PPI网络中degree值排在前3位的分别是Akt、JUN、IL6，并且KEGG富集分析发现淫羊藿苷主要通过调控PI3K/AKT通路发挥对SRNS的治疗作用。分子对接验证显示，Akt、PI3K以及自噬相关蛋白LC3与淫羊藿苷有较好的结合活性。动物实验研究结果表明，淫羊藿苷联合泼尼松明显增加了SRNS大鼠的体质量（P<0.05）、降低了24 h尿蛋白定量（P<0.01）、改善了肾小球的形态学变化。Western blot实验结果表明，淫羊藿苷联合更多泼尼松可显著改善SRNS大鼠肾组织LC3-II蛋白的异常降低的Akt和PI3K蛋白表达水平的异常升高（P<0.01）。结论 淫羊藿苷可通过多靶点的、多通路途径发挥治疗SRNS的作用，调节PI3K-Akt信号通路，升高SRNS大鼠肾组织自噬活性可能是其主要作用机制之一。

越来越多的证据表明，肥胖会对大脑功能和结构产生负面影响。肥胖个体在食物线索、味觉和嗅觉、静息状态活动和功能连接方面显示出异常的神经反应，同时在决策、抑制控制、学习、记忆和注意力等认知任务中表现出异常。减重手术作为一种专门的治疗方案，可以改变消化系统解剖和生理机制，从而限制食物摄入或改变营养吸收来实现短期和长期的减重效果，改善并发症，降低死亡率，并提高生活质量。最近的研究表明，减重手术对改善肥胖症相关的认知功能障碍具有积极的影响。本文PEG300体内概述了肥胖与认知功能之间的关联，并重点阐述了近年来减重手术改善肥胖相关认知损伤的研究进展。涉及的内容包括寻找更多奖励处理、食物摄入控制、大脑区域对认知功能的调控、大脑结构异常的恢复、激素调节改变以及对肠道微生物immune pathways组成的改变，这些变化可能会影响脑功能和认知过程，这些研究成果有望为改善肥胖症患者的认知功能提供新的治疗策略和临床指导。

目的：分析黔东南地区591例肾活检患者的病理结果。方法：回顾性分析2020年1月—2022年1月黔东南苗族侗族自治州人民医院收治的因肾脏疾病开展肾活检的591例黔东南地区患者的临床资料，统计所有患者的性别、年龄、民族、肾活检病理类型分布情况，比较不同性别、不同年龄及不同民族患者的肾活检病理类型分布差异。结果：591例患者中，男性占57.02%，女性占47.98%；年龄分布方面，儿童占12.01%，青年占29.61%，中年占32.83%，老年占25.55%；民族分布方面，侗族占24.02%，汉族占13.71%，苗族占58.21%，其他占4.06%。591例黔东南地区患者的肾活检病理结果显示，膜性肾病（MN）占比最高，为33.50%;IgA肾病（IgAN）位居第二，占比是25.72%；局灶节段肾小球硬化（FSGS）位居第三，占比是14.38%；系膜增生肾小球肾炎（MsPGN）位居第四，占比是13.2functional medicine0%。不同性别及年龄患者的FSGS、MsPGN、微小病变性肾病（MCD）或潜在FSGS、乙肝病毒相关MDV3100使用方法性肾炎（HBV-GN）、糖尿病肾病（DN）及高血压肾损害比较，差异无统计学意义（P>0.05）。男性组MN发生率高于女Nirmatrelvir半抑制浓度性组，IgAN及LN发生率低于女性组，中年组MN发生率高于儿童组、青年组、老年组，青年组IgAN及LN发生率高于儿童组、中年组、老年组，差异有统计学意义（P<0.05）。不同民族患者的肾活检病理结果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：MN、IgAN是黔东南地区肾活检中的常见病理类型，不同性别及年龄患者的肾脏病理类型分布存在差异，但不同民族患者的肾脏病理类型分布基本相同。

目的 研究柴黄益肾颗粒对小鼠慢性肾病模型肾脏纤维化的影响及潜在作用机制。方法 将36只C57BL/6雄性小鼠随机均分为假手术组、模型组、柴黄益肾颗粒低剂量（3.835 g·kg~(-1)）组、柴黄益肾颗粒高剂量（7.67 g·kg~(-1)）组、阳性对照厄贝沙坦组和柴黄益肾颗粒高剂量+Mincle激动剂海藻糖-6,6-二苯甲酸酯（trehalose-6,6-dibehenate,TDB）组（术后1 h，一次性腹腔注射TDB 10 mg·kg~(-1)）。采用单侧输尿管结扎法（UUO）建立小鼠肾脏纤维化模型。术后1 h，各药物组给小鼠灌胃相应药物，假手术组和模型组灌胃生理盐水，每日1次，连续7 d。通过苏木精-伊红染色和天狼Liquid Media Method星红染色观察各组小鼠肾脏病理变化和纤维化改变，采用Real-time PCRSAG采购和ELISA法检测各组肾Panobinostat分子量脏中炎症因子白细胞介素（IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF)-α的表达和分泌，免疫组化和Western Blot法检测纤维化指标α-SMA和Fn的蛋白水平，免疫荧光和Western Blot法检测Mincle及其下游信号Syk/NF-κB的蛋白水平，流式细胞术分析Mincle阳性的巨噬细胞比例。结果 与模型组比，柴黄益肾颗粒低、高剂量组均能有效改善UUO诱导的肾脏损伤和纤维化，抑制肾脏α-SMA和Fn的蛋白水平（P<0.01）。同时，柴黄益肾颗粒高剂量组可有效降低UUO模型肾脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达和分泌（P<0.01），抑制NF-κB的磷酸化（P<0.01）。机制研究表明，柴黄益肾颗粒高剂量组可明显下调UUO小鼠肾脏中巨噬细胞Mincle的蛋白水平以及下游信号Syk的活性（P<0.01）。采用Mincle激动剂TDB激活Mincle后，柴黄益肾颗粒高剂量组改善的肾脏损伤、炎症因子分泌和纤维化效果明显减弱（P<0.05,P<0.01）。结论 柴黄益肾颗粒可改善UUO诱导的小鼠肾损伤、炎症和纤维化，其作用机制可能与下调巨噬细胞Mincle/Syk/NF-κB信号有关。

糖尿病作为临床上常见的慢性代谢性疾病，与其联系紧密selleck抑制剂的糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病周围神经病变、糖尿病心肌病、糖尿病足等都属于糖尿病并发症。以往研究发现，中药单体及复方的活性成分可调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、腺LY294002分子量苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、PTEN诱导假定激酶/帕金森病蛋白（PINK1/Parkin）、沉默信息Immunomicroscopie électronique调节因子1(SIRT1)等信号通路，通过上调自噬相关蛋白水平表达，调节异常葡萄糖代谢，改善微循环，抑制炎症及氧化应激反应，促进自噬，以治疗相关疾病。本文通过系统梳理多种自噬相关信号通路，总结中药干预自噬相关通路治疗糖尿病并发症的研究成果，以期为研究自噬在糖尿病并发症中的作用机制提供新的思路。