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目的 探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠血清环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)表达的影获悉更多响。方法 SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对AM-2282作用照大鼠(正常组)、CAP模型对照大鼠(模型组)、有氧运动大鼠(运动组),每组10只大鼠。采用酶联免疫吸附试验法检测大鼠血清内COX-2、PGE2表达和白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，比较各组大鼠前列腺组织内白细胞计数和卵磷脂小体计数，观察其病理学改变并进行病理评分。结果 与正常组比较，运动组和模型组大鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，运动组大鼠血清COX-2、PGE2表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示，CAP大鼠血清内COX-2、PGE2表达与IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关(P<0.01),COX-2与PGE2也呈正相关(P<0.01)。与模型组比较，运动组白细胞计数降低，卵磷脂小体计数上升，差异有统计学意义biomass liquefaction(P<0.05)。结论 有氧运动对CAP大鼠炎症的缓解作用可能与降低细胞因子水平、抑制COX-2、PGE2表达有关。

第一部分:δ-阿片受体激活后对帕金森病模型发挥神经保护作用的研究目的:帕金森病是老年人常见的一种以运动功能障碍为主要特征的神经退行性疾病,发病人群主要集中在60岁以上的老年人。目前帕金森病经典的治疗方案是多巴胺替代治疗和抗胆碱能药物治疗,虽然可以缓解症状但仍有许多局限性。因此我们迫切的需要开发更多的更有效的治疗PD的药物。研究表明δ-阿片受体可能是潜在的治疗靶点,但仍需更多实验支持并探究机制,因此我们在这一部分探究了 δ-阿片受体激活后对帕金森病模型发挥的神经保护作用。方法:研究基于PC12细胞及C57BL/6小鼠,建立PD细胞及动物模型,设立对照组、PD 组、PD+DADLE 组、PD+DADLE+Naltrindole 组、PD+Naltrindole组。利用CCK-8法和LDH漏出率的检测,同时倒置显微镜下观察细胞形态,评估δ-阿片受体在MPP+诱导的细胞的神经保护作用。通过行为学实验评估运动症状、免疫荧光法测定黑质及纹状体区酪氨酸羟化酶,评估δ-阿片受体在MPTP诱导的小鼠的神经保护作用。结果:1、PC12细胞模型:用倒置显微镜观察结果显示,在MPP+、MPP++DADLE+Naltrindole组、MPP++Naltrindole组中观察到漂浮的细胞,对照组及MPP++DADLE组形态正常。CCK-8检测结果显示,与对照组(98.50%±1.17%)相比 MPP+组(52.50%±2.58%)细胞活力下降(P<0.01),与 MPP+组比较 MPP++DADLE 组(82.50%±3.08%)细胞活力增加(P<0.01)。LDH检测显示,与对照组(4.95%±0.24%)相比MPP+组(28.72%±1.49%)LDH泄漏率增加(P<0.01),与 MPP+组比较 MPP++DADLE 组(10.00%±3.08%)LDH泄漏率下降(P<0.01)。2、C57BL/6小鼠模型:行为学实验结果显示,MPTP组小鼠的运动距离(t=86.09,P<0.01)及平均速度(t=28.34,P<0.01)显著低于对照组,而MPTP+DADLE处理小鼠的运动距离(t=6.83,P<0.01)和平均速度显著(t=21.44,P<0.01)高于MPTP组小鼠。免疫荧光结果显示,与对照组比较,MPTP组小鼠黑质区(t=28.34,P<0.01)和纹状体区(t-30.50,P<0.01)TH阳性的细胞数显著减少。而与MPTP组小鼠比较,MPTP+DADLE处理小鼠的黑质区(t=33.80,P<0.01)和纹状体区(t=13.83,P<0.01)TH阳性的细胞数显著增加。结论:1、δ-阿片受体可改善MPP+诱导的PC12细胞的细胞形态、减轻细胞毒性、提高细胞活力;2、δ-阿片受体可改善MPTP诱导的C57BL/6小鼠运动障碍、减轻黑质及纹状体区多巴胺能神经元的损伤。第二部分:6-阿片受体激活后通过上调Nrf2抑制MPTP诱导的C57BL/6小鼠多巴胺能神经元中铁死亡的研究目的:虽然目前已知帕金森病的主要病理改变是黑质和纹状体中多巴胺能神经元的丢失,但这种改变的确切机制尚不清楚。有研究表明多巴胺能神经元的丢失可能与铁死亡密切相关。因此我们在这一部分探究激活δ-阿片受体在MPTP诱导的C57BL/6小鼠中的神经保护作用与铁死亡的关联及其潜在机制。方法:建立MPTP诱导的C57BL/6小鼠模型,设立对照组、MPTP组、MPTP+铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)组、MPTP+DADLE 组、MPTP+DADLE+Naltrindole组、MPTP+Naltrindole组。利用行为学实验评估运动症状,免疫荧光法测定compound probiotics黑质及纹状体区酪氨酸羟化酶。利用ELISA测定小鼠脑组织中丙二醛(MDA)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平,评估脂质过氧化情况。利用透射电镜观察线粒体形态变化。采用WB,评估Nrf2、GPX4、SLC7a11等抗铁死亡蛋白的表达水平。结果:1、行为学实验结果提示,MPTP+F errostatin-1处理小鼠的运动距离(t=32.52,P<0.01)和平均速度(t=33.80,P<0.01)显著高于MPTP处理小鼠,且MPTP+F errostatin-1 组与 MPTP+DADLE 组比较运动距离(t=1.19,P=0.26)无统计学意义。免疫荧光结果提示,MPTP+F errostatin-1处理小鼠的黑质区(t=21.44,P<0.01)及纹状体区(t=14.45,P<0.01)的酪氨酸羟化酶阳性细胞数显著高于MPTP处理小鼠。与MPTP+DADLE组比较,MPTP+Ferrostatin-1组的黑质区(t=1.55,P=0.16)及纹状体区(t=0.12,P=0.90)酪氨酸羟化酶阳性细胞数无统计学差异。2、通过ELISA测定,MPTP组小鼠的中脑黑质组织内MDA(t=25.48,P<0.01)及4-HNE(t=7.67,P<0.01)水平显著高于对照组。与MPTP组小鼠比较,MPTP+DADLE组小鼠的中脑黑质组织内MDA(t=24.19,P<0.01)及4-HNE(t=2.34,P<0.05)水平显著下降,MPTP+DADLE+Naltrindole 组与MPTP+DADLE 组比较 MDA(t=22.70,P<0.01)及4-HNE(t=2.87,P<0.05)水平显著升高。MPTP+F errostatin-1组小鼠的中脑黑质组织内MDA(t=31.15,P<0.01)及4-HNE(t=5.87,P<0.01)水平显著低于MPTP组小鼠。与MPTP+DADLE 组比较,MPTP+F errostatin-1 组的中脑黑质组织内 MDA(t=2.01,P=0.07)及4-HNE(t=2.51,P=0.06)水平无统计学差异。3、通过TEM检测了小鼠中脑黑质组织中神经元细胞内超微结构的改变,对照组正常形态的线粒体,线粒体脊和线粒体外膜完整。MPTP组的线粒体脊消失和线粒体外膜被破坏。MPTP+F errostatin-1处理的小鼠和MPTP+DADLE处理小鼠的中脑黑质神经元细胞内线粒体脊未见消失和线粒体外膜未被破坏,神经元细胞内线粒体形态完整。4、WB结果显示,与对照组比较,MPTP组的GPX4(t=178.70,P<0.01)、SLC7a11(t=40.36,P<0.01)、Nrf2 6.68,P<0.01)的表达水平显著降低。与MPTP组的小鼠比较,MPTP+DADLE组小鼠的中脑黑质组织中的GPX4(t=91.31,P<0.01)、SLC7a11(t=34.59,P<0.01)、Nrf2(t=16.13,P<0.01)表达水平显著升高,MPTP+DADLE+Naltrindole 组较 MPTP+DADLE 组的 GPX4(t=68.15,P<0.01)、SLC7a11(t=30.55,P<0.01)、Nrf2(t=8.15,P<0.01)表达水平又显著下降。MPTP+F errostatin-1组小鼠的中脑黑质组织中的GPX4(t=118.0,P<0.01)、SLC7a11(t=50.78,P<0.01)、Nrf2(t=19.84,P<0.01)表达水平显著高于MPTP组小鼠。同时MPTP+F errostatin-1组小鼠的中脑黑质组织中的 GPX4(t=2.36,P=0.07)、SLC7a11(t=0.64,P=0.55)、Nrf2(t=0.46,P=0.91)表达水平与MPTP+DADLE组无统计学意义。结论:1、δ-阿片受体与铁死亡抑制剂对MPTP诱导C57BL/6小鼠均具有神经保护作用;2、δ-阿片受体与铁死亡抑制剂对MPTP诱导C57BL/6小鼠均可抑制脂质过氧化水平及线粒体破坏且效果一致;3、δ-阿片受体可能通过上调Nrf2、SLC7a11、GPX4表达抑制了MPTP诱导C57BL/6小鼠多巴胺能神经元中的铁死亡。第三部分:δ-阿片受体激活后通过Nrf2-GPX4/SLC7a11通路抑制MPP+诱导的PC12细胞铁死亡的研究目的:铁死亡参与了帕金森病的发病机制。本研究在动物模型中发现δ-阿片受体(DOR)激活后通过Nrf2抑制铁死亡。于是本研究在细胞模型中进一步进行验证,探究激活δ-阿片受体是否通过Nrf2-GPX4/SLC7a11通路抑制铁死亡发挥抗帕金森病作用。方法:本研究构建MPP+诱导的PC12细胞模型,设立对照组、MPP+组、MPP++Ferrostatin-1 组、MPP++DADLE 组、MPP++DADLE+Naltrindole 组、MPP++Naltrindole组。采用CCK-8法和LDH漏出率检测,评估细胞毒性及活力。使用Western blot评估抗铁死亡蛋白(GPX4和SLC7a11)和Nrf2蛋白表达水平。使用ELISA测量丙二醛(MDA)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平,评估脂质过氧化水平。使用JC-1染色,在MPP+诱导的细胞中确认细节测定线粒体膜电位。利用SiRNA技术在PC12细胞模型中敲低Nrf2,激活DOR后评估细胞毒性及活力,测定GPX4、SLC7a11、Nrf2蛋白表达水平,评估脂质过氧化水平,测定线粒体膜电位。结果:1、细胞毒性及活力结果显示,与MPP+组相比,MPP++DADLE组的PC12细胞生存率显著增加(t=17.60,P<0.01)、LDH漏出率显著降低(t=18.62,P<0.01)。与MPP+组相比,MPP++F errostatin-1组的PC12细胞存活率显著增加(32.80%±1.79%,P<0.05)、LDH 泄漏率显著降低(22.70%±0.66%,P<0.05)。MPP++DADLE 组和 MPP++F errostatin-1 组的细胞存活率(t=10.56,P=0.26)无统计学意义。与MPP++DADLE组比较,MPP++DADLE+SiRNA(-)组的细胞生存率无统计学意义(t=0.19,P=0.85),但MPP++DADLE+SiRNA(Nr2)组的细胞生存率显著降低(t=15.80,P<0.01)。与 MPP++DADLE 组比较,MPP++DADLE+SiRNA(-)组的LDH漏出率无统计学意义(t=0.44 P=0.66)。但MPP++DADLE+SiRNA(Nrf2)组的LDH漏出率显著增加(t=14.30,P<0.01)2、WB结果显示,与对照组比较,MPP+组的GPX4(t=9.10,P<0.01)、SLC7a11(t=8.64,P<0.01)、Nrf2(t=3.92,P<0.01)的表达水平显著降低。与 MPP+组比较,MPP++DADLE组中的 GPX4(t=5.35,P<0.01)、SLC7a11(t=6.80,P<0.01)、Nrf2(t=3.91,P<0.01)表达水平显著升高,但 MPP++DADLE+Naltrindole 组较MPP++DADLE 组的 GPX4(t=5.14,P<0.01)、SLC7a11(t=5.50,P<0.01)、Nrf2(t=4.00,P<0.01)表达水平又显著下寻找更多降。MPP++Ferrostatin-1 组中的 GPX4(t=4.87,P<0.01)、SLC7a11(t=4.72,P<0.01)、Nrf2(t=3.38,P<0.01)表达水平显著高于MPP+组。同时MPP++F errostatin-1组与MPP++DADLE组的GPX4(t=2.73,P=0.052)、SLC7a11(t=058,P=0.59)、Nrf2(t=0.78,P=0.44)表达水平无统计学意义。与 MPP++DADLE 组比较,MPP++DADLE+SiRNA(-)组Nrf2(t=0.17,P=0.86)、GPX4(t=0.77,P=0.48)、SLC7a11(t=1.71,P=0.16)的表达水平无统计学意义。但 MPP++DADLE+SiRNA(Nrf2)组 Nrf2(t=5.49,P<0.01)、GPX4(t=4.13,P<0.01)、SLC7a11(t=7.27,P<0.01)的表达水平显著低于 MPP++DADLE 组。3、ELISA结果显示,在MPP+诱导的PC12细胞中MDA(t=19.50,P<0.01)及4-HNE(t=5.27,P<0.01)水平显著高于对照组。与MPP+组比较,MPP++DADLE 组(t=16.92,P<0.01)和 MPP++F errostatin-1 组(t=15.53,P<0.01)的MDA水平显著下降。与MPP+组比较,MPP++DADLE组(t=3.35,P<0.01)和 MPP++F errostatin-1 组(t=4.12,P<0.01)的4-HNE 水平显著降低。MPP++DADLE 组和 MPP++F errostatin-1 组间的 MDA(t=0.36,P=0.72)及4-HNE(t=0.26,P=0.79)水平无统计学差异。与 MPP++DADLE 组比较,MPP++DADLE+SiRNA(-)组的 MDA(t=0.11,P=0.91)及4-HNE(t=0.28,P=0.78)水平无统计学意义。但MPP++DADLE+SiRNA(Nrf2)组的 MDA(t=17.70,P<0.01)及 4-HNE(t=1.94,P<0.05)水平显著增加。4、线粒体膜电位结果显示,与对照组比较,MPP+组的膜电位水平显著下降(t=86.09,P<0.01)。与MPP+组比较,MPP++DADLE组的膜电位水平显著增加(t=35.52,P<0.01)。但 MPP++DADLE+Naltrindole 组较 MPP++DADLE 组显著降低(t=33.51,P<0.01)。MPP++F errostatin-1组的膜电位水平显著高于MPP+组(t=24.83,P<0.01)。MPP++Ferrostatin-1 组与 MPP++DADLE 组的膜电位水平无统计学意义(t=1.07,P=0.31)。与MPP++DADLE组比较,MPP++DADLE+SiRNA(-)组的线粒体膜电位水平无统计学意义(t=0.10,P=0.92),但 MPP++DADLE+SiRNA(Nrf2)组的线粒体膜电位水平显著增加(t=33.21,P<0.01)。结论:1、δ-阿片受体减轻MPP+诱导的PC12细胞的细胞毒性、提高细胞活力、同时抑制脂质过氧化并改善线粒体膜电位,Nrf2敲低后δ-阿片受体的上述作用被逆转;2、δ-阿片受体与铁死亡抑制剂通过上调Nrf2、SLC7a11、GPX4表达抑制了 MPP+诱导PC12细胞中的铁死亡,Nrf2敲低后δ-阿片受体的抗铁死亡作用被逆转;3、δ-阿片受体可能通过Nrf2-GPX4/SLC7a11通路抑制MPP+诱导PC12细胞中的铁死亡,发挥抗帕金森病作用。

马铃薯疮痂病是一种由链霉菌引起的土传性病害,病原菌通过定殖或寄生在土壤中进行传播,难以控制,严重降低了马铃薯的经济价值。先前主要通过使用化学药剂、调整土壤pH值等方法进行疮痂病的防治,但化学药剂的过度使用会造成土壤和环境污染。近来,生物防治因其低毒性、高特异性和高效率已成为抵御农业病虫害极具前景的方式。据报道,一些微生物具有防治马铃薯疮痂病的效果,但应用效果与化学方法还存在一定差距,且作用机制尚不清晰,限制了其进一步应用。为此,本研究对抑制病原菌Streptomyces scabies的生防菌株进行了筛选、鉴定和生防效果评价,同时初步解析了其拮抗疮痂链霉菌的机制,并通过发酵优化提高了主要抑菌物质的产量。主要研究结果如下:(1)生防菌的筛选、鉴定及其生物防治效果评价。首先在马铃薯疮痂病发生地块通过抑菌圈法筛选到一株拮抗S.scabies的Bacillus subtilis YPS-7。然后以B.subtilis YPS-7为亲本菌株,采用ARTP诱变选育的方式获得一株对S.scabies拮抗活性更高的B.subtilis YPS-32。田间防治结果D-Lin-MC3-DMA IC50表明B.subtilis YPS-32对马铃薯疮痂病具有高的拮抗能力。在播种前和开花期间施用两次B.subtilis YPS-32,马铃薯疮痂病的防治率达到83.70%,马铃薯单果增产达到38.32%。(2)B.subtilis YPS-32的全基因组解析。全基因组测序结果表明,YPS-32含有一条4,084795 bp的环状染色体,编码4262个基因,GC含量为43.88%;它包含86个t RNA、30个rRNA和19个串联重复;没有发现质粒。进一步对其基因组中参与生物防治和促进植物生长相关的基因(基因簇)进行分析,结果表明B.subtiliPacemaker pocket infections YPS-32具有表面活性素、丰原素、儿茶酚铁载体、溶杆菌素、聚酮和芽孢杆菌素等次级代谢产物的编码基因簇和参与氮同化、挥发性化合物合成等促进植物生长相关的基因。(3)B.subtilis YPS-32受到S.scabies侵染的转录组学和蛋白质组学应答。首先确定了B.subtilis YPS-32与S.scabies共培养24 h,B.subtilis YPS-32对S.scabies的抑制作用最强。然后通过转录组学和蛋白质组学技术分析互作过程中B.subtilis YPS-32的差异表达基因和蛋白,结果表明丰原素生物合成关键酶(WP＿160214990.1、WP＿080015512.1、WP＿160214989.1、WP＿032723105.和WP＿089172562.1)、溶杆菌素生物合成的酶(WP＿003244300.1、WP＿003227505.1)、一种与表面活性素合成相关的酶WP＿160215002.1以及儿茶酚铁载体生物合成相关的一种蛋白WP＿003245811.1,在B.subtilis YPS-32受到S.scabies侵染后,蛋白质的丰度显著上调。另外,聚酮生物合成相关基因(sps L、rfbD、rfbB和spsI)的丰度在受到S.scabies侵染后也显著上调。推测B.subtilis YPS-32可能通过上调表达上述候选抑菌物质合成基因,促进丰原素、聚酮、溶杆菌素、儿茶酚铁载体、表面活性素等代谢产物的合成从而抑制病原菌的生长。(4)Bacillus subtilis YPS-32中无痕敲除方法的建立及其应用研究。首先建立了一套B.subtilis YPS-32的无痕敲除系统。然后利用无痕基因敲除方法对B.subtilis YPS-32基因组中负责表面活性素、丰原素、聚酮、儿茶酚铁载体、溶杆菌素合成的基因簇srfABCD、ppsEDCBA、pksBCDEFGHIJLMNRS、dhbABCEF、bacABCDEFG进行了敲除,并对其拮抗S.scabies的效果进行验证。结果表明聚酮和溶杆菌素合成基因簇缺失突变株对S.scabies的抑制效果无明显变化,即溶杆菌素和聚酮不是抑制S.scabies的关键物质。儿茶酚铁载体、丰原素和表面MDV3100化学结构活性素均起到抑制S.scabies的作用,其合成基因簇缺失突变株的相对抑制率分别降低至64.00%、76.56%和72.75%。(5)快速检测表面活性素含量方法的确定和B.subtilis YPS-32生产表面活性素的发酵工艺优化。首先,确定了CPC-BTB显色法能够快速检测表面活性素的含量;然后,利用单因素试验和响应面试验得到B.subtilis YPS-32生产表面活性素的摇瓶发酵参数。优化后表面活性素的摇瓶发酵的产量为1.82 g·L~(-1),是优化前的2.27倍;进一步,在5 L发酵罐水平发酵42.8 h后,表面活性素最大产量为2.39 g·L~(-1),较优化前提高了2.96倍;最后,在100 L发酵罐水平进行小试生产条件优化。发酵36 h后,表面活性素最大产量为3.25 g·L~(-1),较优化前提高了18.2%。且研究表明发酵条件优化后的发酵液拮抗S.scabies的效果更佳。

目的：分析医院重症社区获得性肺炎(severe community-acquired pneumonia,SCAP）患者的病原学特点与发生死亡的危险因素，为临床SCAP患者的救治提供参考。方法：选取2018年1月—2020年12月苏州大学附属第一医院收治的119例SCAP合并脓毒症患者作为研究对象，根据其治疗结局是否为死亡将其分为死亡组（n=27）和存活组（n=92），采集患者的年龄、性别、合并疾病、微生物培养结果、AG-221化学结构检查操作情况、用药史等信息，分析SCAP患者的病原学特点与发生死亡的危险因素。结果：死亡组和生存者SCAP患者的病原体均是以病毒（其构成比分别为40.74%和58.70%）与革兰阴性菌（其构成比分别为37.04%和36.96%）为主，并且其混合感染的发生率均较高（其构成比分别为44.44%和31.52%）;119例SCAP患者中继发院内感染的有36例（占30.25%），其微生物培养共检出病原菌55株，其中革兰阴性菌52株（占94.55%，以鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌为主）、革兰阳性菌3株（占5.45%，均为金黄色葡萄球菌）；回归分析结果显示，SCAP合并脓毒症患者死亡与是否行长期免疫抑制治疗、是否合并脓毒症休克、ICU住院时间、是否行机械通气、是否行纤维支气管镜检查、是否使用镇静药物、是Biogenic VOCs否使用神经肌肉阻滞剂、是否使用血管活性药物、是否使用抗多重耐药革兰阳性菌药物、是否使Bafilomycin A1纯度用抗多重耐药革兰阴性菌药物种数≤1、是否使用抗真菌药物有相关性（P<0.05），其中使用神经肌肉阻滞剂（OR=1.59）、使用抗真菌药物（OR=4.04）、使用抗多重耐药革兰阴性菌药物种数≤1(OR=7.96)是SCAP合并脓毒症患者死亡的独立危险因素（P<0.05），而ICU住院时间≥20 d(OR=0.71)是SCAP合并脓毒症患者死亡的保护性因素（P<0.05）。结论：SCAP患者的病原体主要为病毒和革兰阴性菌，SCAP合并脓毒症患者发生死亡主要与使用神经肌肉阻滞剂、抗真菌药物、抗多重耐药革兰阴性菌药物种数有重要关系，而入住ICU治疗对患者的存活具有重要作用。

目的 分析青海地区藏族、汉族毒性弥漫性甲状腺肿(Graves disease, GD)患者与健康者血清巨噬细胞移动抑制因子基因(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)rs755622、rs1007888、rs2096525位点基因多态性，探讨其与青海藏族、汉族GD发病的关联性。方法 本研究设GD组(汉族60例，藏族60例)、对照组(汉族60例，藏CP-456773 IC50族60例),应用SNaPshot法测定MIF基因多态性。结果 Pathologic processes藏族、汉族GD组及对照组均符合Hardy-Weinberg平衡检验，提示样本具有良好群体代表性。藏族GD组、藏族对照组、汉族GD组、汉族对照组四组MIF-rs755622位点基因型(GG、GC、CC)、SCH727965使用方法rs1007888位点基因型(GG、GA、AA)、rs2096525位点基因型(TT、TC、CC)频率的差异均无统计学意义；各位点等位基因(G/C、G/A、T/C)差异均无统计学意义。结论 MIF-rs755622位点GC单核苷酸多态性、rs1007888位点GA单核苷酸多态性、rs2096525位点TC单核苷酸多态性均与青海地区藏族、汉族GD发病无关联，该基因不是青海地区藏族、汉族GD发病的易感候选基因。

目的 基于MiniSeq基因测序技术对先天性巨结肠症患者NRG1、NRG3和SOX10基因多个位点单核苷酸多态性进行检测，探讨基因多态性与先天性巨结肠症发病的相关性。方法 选择本院在2019年2月到2023年2月期间确诊为先天性巨结肠症患儿74例作为病例组，并将同期83例健康儿童纳入对照组。基于MiniSeq基因测序技术对两组研究对象NRG1、NRG3和SOX10基因7个位点单核苷酸多态性进行检测，探讨不同基因型与先天性巨结肠症发病的相关性。通过Logistic回归分析确定先天性巨结肠症发病的独立危险因素，依据筛选出的因素构建预测先天性巨结肠症发病风险的列线图模型，并验证此模型。结果 病例组和对照组患者的7个单核苷酸多态性位点中，rs10748842、rs139884、rs16879552、rs10883866及rs6584400位点各基因型在两组间的分布频率差异均不显著(P>0.05);病例组患者NRMedial prefrontalG1基因rs2439302位点CG和GG基因型人数显著高于对照LGX818分子量组，并且rs7835688位点GC和CC基因型人数显著高于对照组(P<0.05);多因素分析表明，性别、母孕期主/被动吸烟、母亲接触有毒物质、rs2439302-G和rs7835688-C等位基因是影响先天性巨结肠症发病的危险因素，利用这些因素构建PD-0332991供应商的列线图预测模型，内部验证前后曲线下面积分别为0.837、0.841,灵敏度分别为86.5%和89.2%,特异度分别为77.1%、78.3%,准确性良好。结论 NRG1是先天性巨结肠症的易感基因，rs2439302-G和rs7835688-C为先天性巨结肠症发病的风险等位基因，而rs16879552、rs6584400、rs139884、rs10748842和rs10883866与先天性巨结肠症发病无明显相关性；基于性别、母孕期主/被动吸烟、母亲接触有毒物质、rs2439302-G和rs7835688-C构建的列线图模型对先天性巨结肠症发病风险有较好的预测效果。

单分子生物物理学是一门旨在从微观尺度探测与分析单个生物分子物理性质(静态结构特征或者动态转换路径)的学科。深入细致地解读单个生物分子所具有的物理特征与行为,可以科学与微妙地展示出生命科学中的诸多奥秘。而一维硅纳米线材料以其良好的尺寸匹配性与生物相容性广泛地应用于生物领域的各个方面。因此,本论文基于硅纳米线单分子器件平台从单个生物分子尺度上研究了蛋白分子的本征构象转换动力学行为。目前的研究工作如下:(1)利用具有超高灵敏度和时空分辨率的硅基生物传感器,记录了单个光合系统Ⅰ-光捕获复合体Ⅰ(PSI-LHCI)对各种应力条件(温度、光照和电场的梯度变化)的实时响应行为。在温度变化的条件下,PSI-LHCI复合蛋白的生理响应存在一个与固有热振动行为相关的双态切换过程。当光照和偏置电压发生变化时,观察到了两个附加的肩态,这可能是由蛋白的自我构象调整功能而诱导的。因此,依靠对单个PSI-LHCI超复合物寻找更多蛋白在不同应力条件下的实时动态监测,成功证明了该纳米技术在蛋白质结构分析和光合作用功能机制解析方面的应用前景。(2)利用基于硅基生物传感器,直接监测了光合LH1-RC复合物在生理条件下的构象变化。结果表明,LH1-RC复合物的结构转换发生在四种构象之间,具有较强的温度依赖性。在最适温度(55℃)下,状态2和状态3占据了 LH1-RC复合物的主要构象,其构象转换过程大多表现为非简谐振动模式,这更有助于蛋白对光子的获取和热传输。同时,也观察到了光激发对结构转换占比的影响,这可能是由光驱动色素分子的振动而造成的。这些结果证实了该技术在体外揭示各种生物分子本征生理功能机制方面的可靠性。(3)基于超高时间分辨率的硅基生物传感器,原位检测了单个PNPase降解酶蛋白在发挥催化降解功能时的生理动态行为。这项技术能够以单碱基分辨率实现对PNPase蛋白降解RNA底物分子过程的实时监测,完整的降解过程包括三个阶段:与RNA底物分子的结合、单核苷酸的水解和单碱基的移动。同时,还发现了酶(在活性位点附近)与核苷的结合事件,进一步解读了 RNA降解的关键机制。依靠对独立读长信息的系统分析,在人工设计RNA分子序列中,可以达到大约80%准确率核苷信息鉴定结果,而在细胞RNA分子中可以达到79%准确率。因此,这些结果验证了该技术在实现单分子测序方面的潜力价值,为实现高通量实时信息读取提供了全新的Immune evolutionary algorithm技术参考。(4)利用高增益的硅基生物传感器,成功地实现了对单个M-KF聚合酶酶促反应过程的实时检测,发现了 M-KF聚合酶在催化DNA聚合过程中的双稳态转换过程,分别对应于M-KF聚合酶在低导电态下的闭合构象与高导电态下的开向构象。最后,通过对不同模板链的对照测试,发现了 M-KF聚合酶在催化不同模板链聚合时的异质性反应动力学行为。研究结果发现,在闭合构象中不仅存在着聚合反应的链式增长过程,还同时存在着核苷酸分子与模板链碱基之间的氢键配位作用,且两种过程之间无相互干扰。因此,这项工作证明了硅基单分子生物传感器在揭示酶促反应机制中蛋白构象变化与结构转换路径方面的巨大潜力,为在单分子生物领域解析多种蛋白酶的催化Captisol机制提供了可靠的技术平台。

CoQ biosynthesis目的 ：探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCselleck合成N4)在大鼠体内和体外心肌成纤维细胞、心肌细胞中的表达分布及其增龄变化。方法 ：SD大鼠分为新生组（1～3 d），成年组（17个月）和老年组（22个月），每组8只，其中4只用于冰冻切片，另4只用于PCR；取新生SD大鼠心，酶消化法分离培养原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞。用免疫荧光、免疫组织化学检测原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞HCN4的表达；免疫印LXH254化学结构迹、实时荧光定量PCR检测原代心肌成纤维细胞HCN4的表达，用实时荧光定量PCR检测不同月龄大鼠心肌组织HCN4的表达。结果 ：体外细胞培养显示，成纤维细胞和原代心肌细胞中均表达HCN4。组织切片显示，新生、成年和老年大鼠心肌成纤维细胞和部分心肌细胞表达HCN4。P1～P4代成纤维细胞的免疫印迹和实时荧光定量PCR结果显示HCN4随着成纤维细胞代次增加，表达量逐渐降低；不同月龄大鼠左心室的实时荧光定量PCR结果显示随着大鼠月龄增加，HCN4的表达量逐渐降低，其结果与培养的细胞表达一致。结论 ：HCN4在心肌成纤维细胞和部分心肌细胞中表达。随增龄变化，心肌细胞和成纤维细胞HCN4的表达量逐渐下降。

目的 构建一种包含结核分枝杆菌(MTB)早期分泌蛋白和潜伏感染相关抗原表位的多阶段多表位疫苗。方法 运用免疫信息学方法预测12个MTB蛋白的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助性T细胞(HTL)表位，从中筛选具有抗原性且无细胞毒性和致敏性的表位构建多表位疫苗，并进行理化性质分析、二级结构预测，3D建模，模型精制、质量验证，与Toll样受体4(TLR4)受体分子对接，最后进行免疫模拟。结LY2157299研究购买果 MTB表位疫苗共包含12个B细胞表位、 11个CTL表位和12个HTL表位，具有灵活、稳定的球形构象，热稳定性和亲水性好，可与TLR4稳定相互Ferrostatin-1说明书作用。免疫模拟表明该疫苗能够同时激发有效的细胞和体液免疫应答Biophilia hypothesis。结论 提出了一种基于免疫信息学技术的多阶段多表位MTB疫苗构建策略，该疫苗可能对活动期和潜伏性MTB感染有预防作用。

骨质疏松症是一种以骨量减少和骨组织微结构破坏，导致骨脆性增加和骨折危险性增加为特点的全身性疾病。全球范围内，骨质疏松MK-4827症女性患病率高于男性，且近年来随着年龄的增加患病率大幅上涨。各国骨质疏松症的患病率均处于较高水平，与环境、生活习惯或种族的差异等有关。在不同地区、不同民族，我国骨质疏松症的患病率有较大差异。mixed infection在骨质疏松症的管理中，多数国家建议对人群进行骨折危险因素评估，再根据结果考虑是否进行骨密度测量和骨折风险评估，确定防治方案。针对骨质疏松症的防治，既要加强患病人群的筛选和管理，也要倡导防治并重及个体化治疗。未患病或低风险者需要保持健康的生活方式，而中高风险者需根据自身情况，在医生指导下选择合适的治疗方案和药物，同时通过健康的生活www.selleck.cn/products/r-gne-140方式防止或延缓骨量的降低，目前常用的药物有骨吸收抑制剂和骨形成促进剂，包括双膦酸盐类、雌激素、降钙素、RANKL抑制剂、甲状旁腺激素类似物等。