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探讨人细胞系激发试验（h-CLAT）预测化妆品皮肤致敏性的可行性以及应用策略。体外悬浮培养人源急性单核细胞白血病细胞（THP-1细胞系），参考OECD 442E方法，将THP-1细胞系分别暴露于化妆水、敷贴式面膜液等10款化妆品，通过流式细胞术检测THP-1细胞表面共刺激分子CD86和CD54的水平，判定待测产品的皮肤致敏性，同时与豚鼠最PEG300临床试验大剂量法（GPMT）结果进行比对。结果显示，在10款受试产品中，有4款产品在h-CLAT试验中被判定为具有潜在皮肤致敏性，而GPMVorinostatT结果显示，所有产品均不具有皮肤致敏性。以上结果表明，h-CLAT在预测化妆品产品皮肤致敏性方面有一定的应用前景，即当预测结果为阴性时，产品不具有皮肤致敏性的可能性较大，但当预测结果为阳性时，则需要进一步结合Medical adhesive其他预测方法进行判定，尤其是针对皮肤屏障受损人群。

【目的】长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)长度大于200 nt，一般不具有编码蛋白质功能。探究低温下lncRNA对邻近SAUR基因表达的影响，以期为研究水稻种子低温萌发的能力提供理论依据。【方法】lncRNA SVR由华南农业大学国家植物航天育种工程技术研究中心前期研究筛选，可以响应低温胁迫，通过生物信息学方法分析lncRNA SVR的二级结构并寻找lncRNA SVR内部的冷胁迫基序，通过qRT-PCR分析lncwww.selleck.cn/products/elexacaftorRNA SVR和SAUR基因的表达特性。【结果】lncRNA SVR序列中存在高度相似的冷胁迫响应基序，且在茎环连接处。表达特性分析表明，在种子萌发过SAHA程中低温胁迫会持续降低lncRNA accident and emergency medicineSVR的表达，邻近的多个SAUR基因在低温胁迫下的表达量明显高于在常温下的表达量，表明lncRNA SVR的邻近SAUR基因一定程度上能够和lncRNA SVR一样响应低温胁迫。表达相关性分析表明，在低温萌发中lncRNA SVR与这些SAUR基因的表达均呈负相关关系，lncRNA SVR与OsSAUR55的表达呈显著负相关关系。进一步分析种子低温萌发中SAUR基因在lncRNA SVR敲除系中的表达情况，结果表明，在敲除系中，lncRNA SVR的下降幅度低于其在野生型中的下降幅度，OsSAUR41、OsSAUR53、OsSAUR54、OsSAUR55表达量的上升幅度均显著低于其在野生型中的上升幅度。【结论】lncRNA SVR可能负调控OsSAUR55的表达，进而响应低温胁迫。

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)是一种重要的条件致病菌,会引起人和动物发生严重的肺炎、角膜炎、败血症等疾病,主要通过分泌大量胞外水解酶参与其致病作用,如蛋白酶、几丁质酶、核酸酶等。粘质沙雷氏菌不仅分泌一种分子量为27 k Da的核酸酶Nuc A,其核酸酶活性在50℃加热15分钟后完全失活;还分泌另一类核酸酶,即沙雷氏蛋白酶(Serralysin and serralysin like proteases),分子量在50-70 k Da之间,部分蛋白能耐受90℃高温。为探究S.marcescens 6M-6所分泌的耐高温核酸酶,试验通过粗酶液沉淀、离子层析及纯化以及异源表达等技术成功鉴定并纯化具有核酸酶活性的serralysin like protease D(SPD),并对其酶学特性、核酸酶结构域以及体外对中性粒细胞活性、细胞因子、胞外诱捕网的影响展开探索,具体如下。试验一粘质沙雷氏菌胞外核酸酶的鉴定及原核表达采用硫酸铵沉淀、DEAE-阴离子交换层析、Native-PAGE、以及90℃加热处理并结合质谱分析技术,成功鉴定出S.marcescens 6M-6分泌的三个核酸酶,属沙雷氏蛋白酶家族成员,分别命名为SM、SPB、SPD。以S.marcescens 6M-6基因组为研究对象,通过表达载体p ET-28a(+)、p Cold I、p ET-28a(+)-SUMO以及大肠杆菌BL21(DE3)plys S对SPD蛋白进行异源表达及纯化;同时通过p ET-28a(+)载体以及大肠杆菌BL21(DE3)plys S对SM、SPB蛋白进行异源表达及纯化。结果:(1)SPD蛋白主要以包涵体蛋白形式表达,并进一步通过镍柱亲和层析、包涵体变性、复性等步骤成功获得了具有核酸酶活性Dolutegravir化学结构的高纯度重组SPD蛋白。其中,在p ET-28a(+)和p ET-28a(+)-SUMO载体中,SPD蛋白最佳表达条件为37℃、1 m M IPTG、5 h;在p Cold I载体中,SPD蛋白最佳表达条件为16℃、1 m M IPTG、5 h。(2)参考获得重组SPD蛋白的方法,成功获得具有核酸酶活性的重组SM及SPB蛋白。上述结果表明,粘质沙雷氏菌能分泌多个具有核酸酶活性的蛋白,包括有SM、SPB、SPD等。试验二重组SPD蛋白的酶学特性研究进一步研究了温度、p H、金属离子(如Mg~(2+)、Zn~(2+)和Cu~(2+)等)、温度预处理对重组SPD蛋白水解核酸和酪蛋白活性的影响。1.SPD蛋白核酸酶学特性结果:(1)重组SPD蛋白具有降解不同类型的DNA片段,包括线性双链DNA(纯化的PCR产物)、环状质粒DNA(p ET-28a(+)载体)以及染色体DNA(大肠杆菌基因组DNA)的作用,但不能降解RNA(MDBK细胞),表明该蛋白是一种非特异性脱氧核糖核酸酶。(2)重组SPD蛋白降解线性双链DNA(double-stranded DNA,ds DNA)的温度范围为37-50℃(最适温度为50℃),p H范围为7.3-10.0(最适p H为10)。(3)Mg~(2+)具有增强重组SPD蛋白核酸酶活性的作用,最佳浓度为5 m M;Zn~(2+)、Cu~(2+)以及Ca~(2+)(浓度达1 m M以上)具有抑制重组SPD蛋白核酸酶活性的作用,而0.5 m M的Ca~(2+)则具有增强重组SPD蛋白核酸酶活性的作用;Mn~(2+)则对重组SPD蛋白的核酸酶活性没有影响。2.蛋白酶学特性结果:重组SPD蛋白降解酪蛋白的反应温度为37-50℃,p H范围为7.3-10(最适p H为7.3)。3.温度稳定性实验结果:重组SPD蛋白在-20到50℃温度范围放置10min,对其核酸酶活性和蛋白酶活性均无不良影响。试验三SPD蛋白核酸酶结构域的研究序列分析表明沙雷氏蛋白酶SPD、SM、SPB与目前已知的核酸酶没有同源性,提示它们可能是核酸酶家族的新成员。1.通过p ET-28a(+)载体和大肠杆菌BL21(DE3)plys S分别对SPD蛋白的N-端Zn~(2+)结合金属蛋白酶催化结构域和C-端Ca~(2+)结合结构域进行截短表达,并研究相应截短蛋白的核酸酶活性或蛋白酶活性:(1)成功构建了截短蛋白SPD_(1-306)(MW:33 k Da)和SPD_(307-538)(MW:25 k Da),其中SPD_(1-306)蛋白具有较弱的核酸酶活性和蛋白酶活性,而SPD_(307-538)蛋白无明显酶活性,表明SPD蛋白的双酶活性结构域均在N-端,而非C-端。(2)SPD_(1-306)蛋白在透析复性过程中极易沉淀且不稳定,表明C-端结构域对SPD蛋白结构的稳定起重要作用。2.鉴于许多双功能酶共享同一催化活性中心,进一步检测了保守金属蛋白酶催化基序HEXXHXXGXXH在SPD蛋白核酸酶功能中的作用;通过重叠PCR及原核表达分别在大肠杆菌BL21(DE3)plys S中构建4个重组SPD突变体蛋白(H234A、E235A、H238A、H244A),其蛋白酶活性均丧失而核酸酶活性不受影响。可见催化基序HEXXHXXGXXH仅是SPD蛋白的蛋白酶催化中心。试验四重组SPD蛋白对中性粒细胞活性、细胞因子以及胞外诱捕网的影响采用Percoll法从BALB/c小鼠的骨髓中提取原代中性粒细胞,通过流式细胞术检测中性粒细胞表面标志物Ly6G、CD11b以鉴定细胞纯度;CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测重组SPD及其相关蛋白对中性粒细胞活性的影响;ELISA检测重组SPD及突变体蛋白对中性粒细胞炎症因子释放的影响;免疫荧光染色和SYTOX Green胞外DNA定量检测Oncology Care Model佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和S.marcescens对中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil Extracellular Traps,NETs)形成的影响以及重组SPD蛋白及其相关蛋白对NETs的降解作用。结果:(1)用10μg/m L、200μg/m L的SPD或SPD_(1-306)孵育1 h,中性粒细胞的存活率均呈下降ABT-199使用方法趋势;而用50μg/m L、100μg/m L孵育,中性粒细胞相对活性呈增强趋势。表明SPD或SPD_(1-306)蛋白对中性粒细胞的活性及存活率的影响与其作用浓度及时间有关。而SPD_(307-538)以及突变体蛋白(H234A、E235A、H238A、H244A)对中性粒细胞的活性及存活率均无影响。综上表明,N-端结构域是SPD蛋白影响中性粒细胞活性及存活率的关键区域。(2)SPD蛋白作用中性粒细胞具有促进IFN-γ、IL-4、IL-6释放,抑制IL-10和IL-1β的作用,而E235A则仅有促进IFN-γ释放,抑制IL-1β的作用;表明SPD及E235A蛋白具有干扰中性粒细胞炎症因子释放的作用。(3)不同浓度(>50n M)的PMA和不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)(MOI=10、100、1000)的S.marcescens在不同诱导时间(1、3、5 h)均能诱导NETs的形成。(4)重组SPD、SPD_(1-306)及E235A蛋白对PMA和S.marcescens诱导形成的NETs具有降解作用,而SPD_(307-538)蛋白则无降解作用;表明N-端结构域是SPD蛋白发挥降解NETs的关键区域。(5)研究还发现,重组SM和SPB蛋白也具有影响中性粒细胞活性和降解NETs的能力,表明具有双酶活性(核酸酶活性和蛋白酶活性)的沙雷氏蛋白酶可能是细菌与中性粒细胞作用的重要介质。结论:1.来自S.marcescens 6M-6的沙雷氏蛋白酶SPD、SM和SPB是一种具有核酸酶和蛋白酶活性的双功能酶。2.重组SPD蛋白具有Mg~(2+)依赖性的DNA酶活性,其核酸酶活性最适反应温度为50℃,最适p H为10;蛋白酶活性反应温度为37-50℃,最适p H为7.3。3.SPD蛋白的核酸酶活性和蛋白酶活性均是通过其N-端催化结构域发挥作用的,催化基序HEXXHXXGXXH仅是其蛋白酶催化中心。4.重组SPD蛋白具有影响中性粒细胞活性、干扰中性粒细胞细胞因子释放以及降解NETs的能力。5.重组SM和SPB蛋白也具有影响中性粒细胞活性和降解NETs的能力,表明具有双酶活性(核酸酶活性和蛋白酶活性)的沙雷氏蛋白酶可能是细菌与中性粒细胞作用的重要介质。

自噬(Autophagy)是指细胞在外界环境因素的影响下,细胞利用溶酶体降解自身受损、变性或衰老的大分子物质以及细胞器的自我消化过程。自噬能把这些物质转化可重新利用的营养成分,从而降低细胞受到的各种损伤。光动力治疗(Photodynamic therapy,PDT)治疗癌症的过程中,癌细胞由于受到活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的刺激,会导致自噬的发生,保护性自噬会促进癌细胞的存活并降低PDT的治疗效果。然而过度激活自噬能促进细胞发生凋亡,本研究使用光敏剂焦脱镁叶绿酸-a(Pyropheophorbide-a,Ppa)产生大量的ROS达到杀伤癌细胞的效果,同时通过联用自噬诱导剂淫羊藿素(Icaritin,Ica)过度激活自噬,使自噬对癌细胞的保护作用转变为促进凋亡的作用,最终达到提高PDT治疗效果的目的。然而,使用传统的载体对同时递送Ppa和Ica到达肿瘤部位协同治疗,将不可避免地带来一些毒副作用。自组装纳米药物依靠小分子药物间的相互作用组装形成纳米级颗粒,无需额外的载体即可将药物递送到肿瘤区域,具有较高的载药量以及拥有较高的生物安全性。本研究利用Ica与Ppa之间的分子间相互作用力,成功构建了具有良好稳定性、高载药量等特点的自组装纳米药物IP。其中,该纳米药物的合成方法简单,通过药物自身作为载体,能使Ica与Ppa的载药量(Loading Efficiency,LE)分别高达83.53%和16.45%,且没有引入额外的载体材料以造成潜在的生物安全性隐患。此外,自组装纳米药物IP能通过过度激活自噬放大ROS带来的氧化应激,进而增强PDT的光毒性,这种协同策略显著地提高了PDT的抗肿瘤效果。研究目的:本研究拟将自噬诱导剂Ica与光敏剂Ppa通过自组装的方法制备形成纳米药物,以实现诱发癌细胞发生过度自噬,协同增强光动力学的抗肿瘤效果。首先对Ica与Ppa是否能形成纳米药物进行试验,以及检验二者之间的组装机制。探究纳米药物的稳定性以及药物载药率,阐明了自组装纳米药物相对于游离药物具有高稳定性与高载药率。对纳米药物在细胞摄取以及产生活性氧的能力等方面进行考察,突出了纳米药物具有易被细胞摄入和高效产活性氧的优势。探究纳米药物在光动力治疗与化疗的协同治疗后对肿瘤细胞的杀伤效果。重点阐明肿瘤细胞光动力学治疗与化疗之间的协同关系,进而揭示肿瘤治疗的新思路和新方法。方法:1.纳米药物IP的制备与表征:首先使用溶剂-反溶剂沉淀法合成得到自组装纳米药物IP,通过紫外-可见分光光度计(Ultraviolet-visible Spectrophotometer,UVS)与高效液相色谱仪(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)分别检测IP中Ica与Ppa的载药量,使用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)观察纳米药物IP的微观形态,并使用马尔文粒径仪检测其稳定性。2.纳米药物IP自组装机制的探究:通过UVS,比较在不同溶液中纳米药物IP在660 nm处的最大吸收峰的变化。3.纳米药物IP被细胞摄取的能力:通过使用CLSM、流式细胞仪分别测定经过纳米药物IP处理后的小鼠乳腺癌细胞在的荧光强度,检验纳米药物IP被细胞摄取的能力。4.纳米药物IP产生ROS的能力:使用荧光分光光度计检测纳米药物IP在水溶液中ROS的生成,其中SOSG作为单线态氧的检测试剂。利用激光扫描共聚焦显微镜(Confocal Laser Scanning Microscope,CLSM)观察经过纳米药物IP处理后,分别使用CellROX~(TM)Green探针和DCFH-DE探针染色后小鼠乳腺癌细胞的荧光强度。5.纳米药物IP诱导自噬的能力:在CLSM下,使用Rhodamine 123研究经过纳米药物IP处理过的小鼠乳腺癌细胞的线粒体形态。通过蛋白质印迹法(Western Blot,WB)考察纳米药物IP诱导小鼠乳腺癌细胞发生自噬的性能。6.纳米药物IP的协同治疗的能力:采用MTT比色法、活/死细胞染色法和流式细胞术检测细胞凋亡来考察纳米药物IP对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用,进而阐明纳米药Sub-clinical infection物IP的抗肿瘤效果。结果:1.动态光散射(Dynamic Light Scattering,DLS)法测得纳米药物IP的粒径大小为176.5±2.17 nm,多分散系数为0.171±0.015,且能在7天内保持稳定。从透射电子显微镜中观察,纳米药物IP在水中表现出均一的短棒状结构,且能够均匀分散。利用HPLC检测得出的结果经过计算后可以得出,纳米药物IP中Ppa和Ica的包封率分别为24.52%和61.11%,载药量分别为16.45%和83.53%。2.纳米药物IP的紫外-可见吸收光谱显示在660 nm处有纳米药物IP的特征吸收峰,且疏水性的十二烷基硫酸钠(Sodium Dodecyl Sulfate,SDS)会对纳米药物IP的吸收光谱产生相影响,表明纳米药物IP通过疏水作用力进行自组装。3.使用CLSM观察纳米药物IP的摄取情况显示,IP组的红色荧光无论在时间梯度或浓度梯度,都比游离药物Ppa更强。这表明纳米药物IP能比游离的Ppa更容易被小鼠乳腺癌细胞摄取。4.SOSG检测纳米药物IP单线态氧~1O_2的产生情况,相对于游离药物Ppa,纳米药物IP在光照后,荧光强度显著性增强。在细胞层面中,CellROX~(TM)Green探针或DCFH-DA作为ROS传感器来检测ROS的产生结果说明,纳米药物IP在光照后能够产生的大量的ROS,且相较于游离的Ppa产生ROS的能力更强。这表明光动力学治疗能够通过激活光敏剂Ppa产生大量ROS。5.罗丹明123染色结果表明,Ica可引发细胞的线粒体发生明显聚集,这表明Ica能够诱导小鼠乳腺癌细胞发生自噬,且WB分析实验的统计结果显示,经过纳米药物IP处理后,小鼠乳腺癌细胞的自噬相关蛋白5(Autophagy Related Protein 5,ATG5)显著上调,而微管相关蛋白1轻链3β(Microtubule-associated Protein 1 Light Chain 3 beta,LC3B)的变化也显示纳米药物IP能够诱导小鼠乳腺癌细胞发生自噬。6.MTT比色实验显示纳米药物IP对小鼠乳腺癌细胞存在浓度依赖性的光毒性。活寻找更多/死细胞染色实验GNE-140临床试验证明,经过光照后,经过游离药物Ppa和纳米药物IP处理的细胞红色荧光明显增强,且纳米药物IP表现更加明显。流式细胞术检测细胞凋亡实验证明,纳米药物IP处理后的细胞经过光照后造成的凋亡率远高于其它组别。研究结论:1.DLS与透射电子显微镜结果显示以Ppa和Ica为原料组成的无载体自组装纳米药物IP(简称为IP)能够形成稳定性良好,形态均一的短棒状纳米颗粒。HPLC结果显示纳米药物IP具有较好的载药量与包封率,且纳米药物IP是通过疏水作用力进行自组装。表明成功构建了自组装纳米药物IP,形成稳定性强、水溶性好、载药量高的纳米药物。2.小鼠乳腺癌细胞摄取实验表明,纳米药物IP增强了光敏剂的摄取。SOSG实验结果与DCFH-DA和CellROX~(TM)Green实验结果比较,表明纳米药物IP能够通过增强光敏剂的摄取量以提高ROS的产生。3.罗丹明123染色和WB分析实验结果表明,纳米药物IP能够诱导小鼠乳腺癌细胞发生自噬。纳米药物IP协同光动力治疗过度激活细胞自噬4.细胞毒性实验证明,经过光照后纳米药物IP具有在明显的抗小鼠乳腺癌细胞的效果,表现出纳米药物IP在光动力治疗中的巨大潜力。

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)属于鲤形目、鲤科、雅罗鱼亚科、草鱼属,是我国“四大家鱼”之一,养殖产量连续多年位居世界第一。豆粕是草鱼日粮中的重要蛋白源,由于我国耕地面积有限,大豆产量主要用于人类蛋白供给,无法满足养殖需求,依赖进口而又价格攀升,制约豆粕在水产饲料中的使用。单细胞藻类富含高蛋白、必需氨基酸和多不饱和脂肪酸,其中小球藻(Chlorella meal,CM)属于绿藻门、绿球藻目、小球藻属,是一种高效的光合植物,生长繁殖速度极快,营养价值高,可作为优质蛋白源作用于饲料工业。本论文以草鱼为研究对象,探究了小球藻替代日粮中的豆粕及添加酵母硒后,对草获悉更多鱼生长性能、健康状况及肌肉品质的影响,旨在为草鱼配合饲料中豆粕的合理替代和小球藻的应用提供参考资料。实验一、日粮中小球藻替代豆粕对草鱼生长性能、健康状况及肌肉品质的影响。用小球藻替代草鱼日粮中0%、15%、30%、45%、60%、75%和100%的豆粕,分别记为CM0、CM15、CM30、CM45、CM60、CM75、CM100组,配制7种等氮等脂日粮,将420尾草鱼(540.07±1.00 g)放入池塘网箱饲喂90天。结果显示,(1)在生长方面,与CM0组相比,小球藻替代组对草鱼末重、特定生长率、饲料系数均无显著性影响(P>0.05)。(2)在营养成分方面,CM30、CM45、CM75组肌肉粗蛋白含量显著高于CM0组,CM30、CM45组全鱼灰分显著高于CM75组(P<0.05);CM100组组氨酸含量显著低于CM0组,但CM100组脯氨酸含量显著高于CM0组(P<0.05);草鱼肌肉中亚麻酸、EPA和DHA的含量随着小球藻的替代水平而增加。与CM0组相比,CM60、CM75、CM100组的∑n-3PUFA和n-3/n-6ΣPUFA显著增加(P<0.05)。(3)在抗氧化方面,CM45、CM60组肌肉T-AOC显著高于CM0组(P<0.05),肌肉MDA含量随着替代比例增加呈下降趋势,且CM30、CM45、CM75、CM100组显著低于CM0组。(4)在体色方面,小球藻替代组背部红度值a*、腹部黄度值b*、饱和度值c*显著高于CM0组(P<0.05LY294002化学结构),CM30、CM100组背部黄度值b*、饱和度值c*显著高于CM0组(P<0.05)。(5)在肌肉风味方面,反映新鲜度的K值、Ki值及Ino含量在CM0组最高,且K值、Ki值显著高于小球藻替代组,Ino含量显著高于CM30、CM60组(P<0.05)。(6)在质构特性方面,CM100组肌肉内聚性显著高于CM0组,但却显著降低肌肉的硬度以及肌纤维密度(P<0.05)。研究表明,草鱼日粮中小球藻(添加水平:18.29%)完全替代豆粕(24%),对草鱼的生长性能和饲料利用没有负面影响。草鱼日粮中小球藻(添加水平13.97%)替代75%豆粕(6%)可通过提升草鱼肌肉抗氧化性能、粗蛋白含量、n-3/n-6ΣPUFA以及降低K值提升肌肉品质。实验二、日粮中小球藻完全替代豆粕添加酵母硒对草鱼生长性能、健康状况及肌肉品质的影响。本研究设计了5个处理,分别是豆粕组,小球藻完全替代豆粕组,小球藻完全替代豆粕加0.3mg/kg、0.6mg/kg、0.9mg/kg酵母硒组,并分别记为SM、CM、0.3SE、0.6SE、0.9SE组。将300尾草鱼(370.13±0.07g)在池塘网箱中进行了10周饲养。结果表明,(1)在生长方面,在草鱼日粮中添加酵母硒能显著提升草鱼生长、饲料利用及蛋白质效率(P<0.05);与SM组相比,0.3SE组能显著降低脾脏指数(P<0.05)。(2)在营养成分方面,0.9SE组全鱼的粗脂肪含量显著降低,0.6SE组肝脏的粗脂肪含量显著降低,0.3SE组肌肉的粗蛋白含量显著增加(P<0.05);酵母硒添加组能降低组氨酸含量(P<0.05);CM组和酵母硒添加组显著提升EPA、∑n-3PUNA含量和n-3/n-6ΣPUFA(P>0.05)。(3)在抗氧化方面,CM组和酵母硒添加组显著降低肌肉MDA的含量(P<0.05),0.9SE组显著提升CAT的活性(P<0.05),0.6SE和0.9SE组显著提升肌肉GSH-px的活性(P<0.05)。(4)在体色方面,与SM组相比,CM组和酵母硒添加组能够显著提升鱼体背部红度值a*、肉色黄色值b*和饱和度值c*(P<0.05)。(5)在肌肉风味方面,0.6SE组能显著提升草鱼肌肉的K值和Ki值(P>0.05)。(6)在质构特性方面,各组间草鱼肌肉弹性、剪切力、胶粘性、内聚性、恢复性、粘附性无影响(P>0.05),0.3SE处理组肌肉硬度显著高于SM组(P<0.05),添加酵母硒组肌肉咀嚼structured medication review性显著高于SM组和CM组(P<0.05)。肌肉质构特性主成分分析(PCA)结果表明,0.3SE组可改善草鱼的肌肉质构特性。肌纤维直径在0.3SE组达到最低,且显著低于其他实验组(P<0.05),肌纤维密度在0.3SE达到最高,且酵母硒添加组显著高于SM和CM组(P<0.05),同时0.3SE组显著上调myod、myf5基因,下调mstn基因的表达。研究表明,当日粮中小球藻完全替代豆粕后,添加0.3mg/kg酵母硒会显著提升草鱼的生长性能、饲料利用、抗氧化性能以及肌肉品质。综上所述,草鱼日粮中使用18.29%小球藻不影响草鱼的生长性能,使用10.09%的小球藻还可提升草鱼的健康状况和肌肉品质;在小球藻完全替代豆粕的基础上补充0.3mg/kg酵母硒(饲料硒含量0.89mg/kg),可提升草鱼健康状况,增加肌肉的粗蛋白含量、硒含量和硬度等,提升肌肉品质。

副干酪乳酪杆菌Zhang最初分离自传统酸马奶,生产中可用作含酒精乳饮料的发酵剂,乙醇胁迫是乳酸菌发酵过程中最大的抑制因素。副干酪乳酪杆菌ZhangΔpgl X是甲基化表型控制基因pgl X敲除后的突变体,前期研究发现与野生型副干酪乳酪杆菌Zhang相比,突变体具有更强的乙醇耐受性。本研究旨在进一步研究甲基化转移酶缺失对菌株乙醇耐受性的影响。通过整合多组学技术对两菌株在乙醇胁迫下生长4 h和12 h的转录组、蛋白组和代谢组的差异进行比较。具体研究结果如下:1.转录组学结果表明:与野生型相比突变体在10%乙醇中培养4 h时,鉴定到405个差异表达基因,12 hselleck合成时筛选出392个差异表达基因。在这两个时间点有203个差异表达基因重合。富集分析表明两个时间点的碳水化合物代谢相关通路都显著富集,包括磷酸转移酶系统、半乳糖代谢、果糖和甘露糖代谢、抗坏血酸和醛酸代谢。此外脂肪酸生物合成和ATP结合盒式蛋白仅在4 h时显著富集。脂肪酸生物合成相关基因被抑制而细胞膜脂肪酸含量显著增加。2.蛋白质组学结果表明:在突变体和野生型之间共鉴定到168个差异表达蛋白质(4 h时126个,12 h时97个)。差异表达蛋白质在碳水化合物代谢和膜运输通路注释到的数量最多,富集分析显示许多碳水化合物代谢相关通路如磷酸转移酶系统、三羧酸循环、淀粉和蔗糖代谢等都显著富集。此外生物素代谢仅在4 h时显著富集,丙酮酸代谢仅在12 h时显著富集。3.代谢组学结果表明:与野生型相比突变体中的代谢物腺苷蛋氨酸、辛酸和N6-乙酰基-2,6-二氨基庚二酸酯显著增加,瓜氨酸、富马酸和褪黑激素显著减少。功能富集分析结果显示突变体和野生型之间的差异代谢物在精氨酸生物合成和色氨酸代谢途径的富集显著性十分明显。4.多组学联合分析结果表明:在甲基化转移酶突变体细胞中物质运输、碳水化合物代谢、脂肪酸生物合成、氨基酸合成与代谢这些通路发生变化。突变体细胞中多糖、有机离子、金属离子转运蛋白受到促进,碳水化合物代谢相关基因被诱导,细胞膜脂肪酸含量增加。通过以上表现可以推测甲基Fetal Immune Cells化转移酶突变体的乙醇胁迫响应机制分为以下几点:(1)增加细胞内的物质运输效率,加速营养物质摄取;(2)促进碳水化合物消耗,维持菌株的生长;(3)增加细胞膜脂肪酸含量维持细胞膜强度和流速。综上,副干酪乳酪杆菌在乙醇胁迫下,会发生一系列的生理和代谢变化,包括膜脂肪酸的改变、蛋白质的合成和降解等。本研究首次分析了副干酪乳酪杆Tezacaftor分子式菌Zhang在表观遗传水平的应激反应机制,为乳酸菌应激反应的甲基化调控提供了见解。

目的 分析炎症性肠病（inflammatory bowel Entinostat体外disease,IBD）合并艰难梭菌感染（clostridium difficile infection,CDIPF-07321332）住院患者的临床特征及危险因素。方法 回顾性调查2021年1月至2022年4月住院的IBD患者，在入院后立即留取粪便采用艰难梭菌表面抗原谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase,GDH）和PCR法检测艰难梭菌感染情况。分析纳入患者CDIhost immune response的发生情况、临床特征和危险因素。结果 228例IBD患者中，溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）100例，克罗恩病（Crohn’s disease,CD）128例，UC患者CDI阳性率25.0%,CD患者阳性率30.2%。UC患者中，CDI阳性组与阴性组在粪钙卫蛋白、C反应蛋白、白蛋白、肌酐、临床类型、入院前3个月内住院史和30d内糖皮质激素、美沙拉嗪、质子泵抑制剂使用史中，差异有显著性（P<0.05）;CD患者中，CDI阳性组与阴性组在病程、红细胞沉降率、C反应蛋白、总胆固醇、病变部位、乌司奴单抗、入院前3个月内住院史和30d内糖皮质激素、美沙拉嗪、质子泵抑制剂、抗生素使用史中，差异有显著性（P<0.05）。二元logistic回归分析显示，UC中，粪钙卫蛋白升高（OR=1.006,95%CI 1.001～1.011,P=0.018）、临床类型为复发型（OR=10.186,95%CI 1.540～67.354,P<0.05）、既往3个月内有住院史（OR=35.958,95%CI 5.930～218.039,P<0.001）及白蛋白降低（OR=0.882,95%CI 0.730～0.924,P=0.05）是CDI感染的危险因素。CD中，既往30d内使用PPI(OR=43.085,95%CI 7.286～254.767,P<0.001)、C反应蛋白升高（OR=1.02,95%CI 1.007～1.033,P=0.003）和总胆固醇升高（OR=2.937,95%CI 1.478～5.837,P=0.002）是CDI感染的危险因素。结论 住院IBD患者有较高的CDI发生率，临床类型为复发型、粪钙卫蛋白过高、既往有住院史、白蛋白过低是UC患者发生CDI的独立危险因素。既往30d内有PPI使用史、总胆固醇、C反应蛋白过高是CD患者发生CDI的独立危险因素。

目的:1.明确低氧刺激对脏器及肠道微生物的影响;2.探索β-烟酰胺单核苷酸(NMN)对低氧引起的脏器损伤和肠道微生物变化的影响。方法:通过低氧舱模拟低氧环境,氧浓度设为10%。持续常压低氧为全天低氧,间歇常压低氧则是每天低氧8小时。通过灌胃或自由饮水的摄入方式观察NMN对低氧引起的脏器寻找更多损伤及肠道微生物变化的影响。在研究结束时,我们留取血液,摘取心脏、肝脏、脾、肺脏并称重,随后立即使用锡箔纸包裹放入液氮中快速冷冻,最后放置在-80℃冰箱中保存备用,通过计算器官与体重的比值分析了器官指数变化,通过全自动血细胞分析仪检测红细胞数量、血红蛋白浓度、红细胞比容等,通过血液生化检测仪检测肌酸激酶、乳酸脱氢酶等血液学指标,通过实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)分析了右心室ANP、BNP、Myh6、Myh7等基因的表达水平,通过16S r RNA基因测序分析了肠道微生物多样性及菌群组间差异。结果:1.NMN对持续常压低氧引起的小鼠脏器损伤和肠道微生物变化的影响1.1小鼠解剖结果提示,低氧环境下小鼠体重显著降低,心脏明显肥大,且红细胞数量、血红蛋白浓度、红细胞比容升高,Trimmed L-moments白细胞、淋巴细胞数量减少;高剂量NMN干预对低氧引起的整体心脏肥大有改善趋势,且恢复低氧引起的红细胞数量、血红蛋白浓度、红细胞比容升高及白细胞、淋巴细胞数量的减少。1.2肠道菌群16S r RNA基因测序结果显示,低氧刺激及低氧下通过NMN干预对肠道微生物α多样性没有显著影响;低氧刺激对组间群落结构有显著影响,并且通过高剂量NMN干预组间群落结构差异恢复至正常水平;低氧刺激、NMN干预都会使差异物种增多,在属水平上,低氧刺激可以显著增加Akkermansia和Dubosiella的丰度,高剂量NMN干预后进一步增加Dubosiella的丰度。1.3通过q RT-PCR检测方法,发现低氧刺激会引起右心室BNP的m RNA表达水平升高,SIRT2表达水平降低,NMN干预不影响SIRT2表达水平,但可以显著改善由低氧引起的BNP表达水平升高。2.NMN对持续常压低氧引起的大鼠脏器损伤和肠道微生物变化的影响2.1大鼠解剖结果提示,低氧刺激后大鼠体重显著降低,在低氧环境下NMN干预不影响体重,但常氧环境下NMN干预后大鼠体重显著下降。低氧刺激4周后大鼠心脏明显肥厚,且以右心室肥厚为主,肺指数明显升高;红细胞数量、血红蛋白浓度、红细胞比容、肌酸激酶、乳酸脱氢酶显著升高,NMN干Ceralasertib抑制剂预无显著效果。2.2肠道菌群16S r RNA基因测序结果显示,低氧刺激降低了大鼠肠道微生物的α、β多样性,降低了物种丰富度和均匀度,而NMN干预不影响α、β多样性。低氧刺激、NMN干预均会使差异物种增多,且影响显著,在属水平上,低氧刺激使Lactobacillus、Micrococcus和Romboutsia丰度增加,Lachnospiraceae、Prevotellaceae和GCA丰度降低;常氧环境下NMN干预后Lactobacillus丰度增加,Prevotellaceae丰度降低;低氧环境下NMN干预后Muribaculum,Fournierella和Butyricimonas丰度增加,Micrococcus丰度降低。2.3通过q RT-PCR检测方法,发现低氧刺激4周后大鼠右心室Myh6表达水平降低,BNP、Myh7表达水平升高,常氧环境下NMN干预后Myh6、Myh7表达水平降低。3.NMN对间歇常压低氧引起的小鼠脏器损伤和肠道微生物变化的影响3.1小鼠解剖结果提示,进入低氧环境后小鼠体重显著降低,6天后适应环境,体重逐渐恢复,且与常氧组小鼠无显著性差异。间歇低氧环境下小鼠心脏肥厚,且以右心室为主,肺指数、脾指数升高,但不影响肝指数,NMN干预改善了低氧引起的脾指数升高;间歇低氧后小鼠红细胞数量、血红蛋白浓度、红细胞比容、乳酸脱氢酶和肌酸激酶均升高,NMN干预后乳酸脱氢酶含量进一步增高,但对其他血液学指标无影响。3.2肠道菌群16S r RNA基因测序结果显示,间歇低氧及NMN干预均不影响肠道微生物α多样性,但使组间差异物种增多,改变了微生物主成分,间歇低氧后β多样性指数显著降低,且NMN干预提高了β多样性指数。在目水平上,间歇低氧后Bacteroidales丰度升高,Clostridia＿UCG、Erysipelotrichales、Oscillospirales、Clostridiales和Peptococcales丰度降低,间歇低氧环境下通过NMN干预后Clostridia＿UCG、Clostridiales丰度升高,Enterobacterales、Mycoplasmatales丰度降低。3.3通过q RT-PCR检测方法,发现间歇低氧刺激后小鼠右心室BNP、Myh7表达水平显著升高,NMN干预不影响Myh7表达水平,但显著改善了由间歇低氧引起的BNP表达水平升高。结论:本研究表明持续常压低氧和间歇常压低氧均会引起病理性的以右心室肥厚为主的心肌损伤,且肺指数升高,以及血液学指标的改变。此外,还会引起肠道菌群失调,但不同低氧模型及鼠种其肠道微生物的变化也不同。NMN干预对脏器指数及血液学指标的影响是存在差异的,主要影响肠道菌群,使差异物种增多。

能源危机一直都是人们迫切需要解决的问题。随着化石燃料的落幕,新能源将慢慢成为未来经济生活中的主导动力。作为化石燃料替代之一的氢能,被认为是21世纪最具发展潜力的能源。与利用二次能源电能进行电催化产氢相比,直接利用可再生太阳能的光催化水分解产氢过程更加Bemcentinib简洁,在经济上更具竞争力。然而,光催化水分解反应通常需要克服较大的能垒来进行,为此设计高效的光催化剂至关重要。作为共价有机框架(Covalent Organic Frameworks,COFs)中的一种,共价三嗪框架(Covalent Triazine Frameworks,CTFs)是一类具有较强稳定性的材料。其中,以对苯二腈缩合形成的CTF-1具有π共轭的芳香结构、三嗪环以及较好的层状结构,近年来被广泛用于光催化产氢领域。普鲁士蓝类似物(Prussian Blue Analogues,PBAs)是一类具有良好的导电性和金属调控性的配位化合物,一直以来被广泛用于各个领域。但是其在光催化产氢领域的应用鲜有报道。本文工作内容主要包括以下两部分:(1)铂纳米粒子(Pt NPs)作为一种优异的光催化活性FUT-175半抑制浓度物质,一直都是光催化产氢的最佳助催化剂之一。将超小Pt NPs均匀地负载到CTF-1上可以有效构建肖特基异质结构,在保证Pt NPs循环利用的同时,大幅提升材料的光催化性能。在Pt含量为0.40 wt%的情况下,Pt@CTF-1的产氢速率达到了20.0 mmol g~(-1)h~(-1)(在λ=420 nm处的AQE=7.5%)。与未改性的CTF-1相比,Pt@CTF-1的光催化产氢效率提高了44倍。密度泛函理论(Density Functional Theory,DFT)计算结果表明Pt NPs和CTF-1之间存在强的电子转移(Q(Pt)=-0.726 q_e),这是Pt NPs吸附在CTF-1上保证稳定性的原因。同plastic biodegradation时,复合催化剂的氢吸附吉布斯自由能(ΔG_(H*))比纯CTF-1小,表明这样的复合结构更有利于光催化水分解产氢反应的进行。此项工作为NPs与COFs结合的光催化剂的制备提供了一种新方案。(2)考虑到贵金属材料的高成本,选用Ni-Co PBA为基体材料制备了不含贵金属材料的光催化剂。通过两步刻蚀法,我们在PBA上原位生成了少量Mo S_2,制备了乐高积木状PBA-Mo S_2复合催化剂并将其应用于光催化产氢的研究。实验结果表明,此复合催化剂达到了比含贵金属的催化剂更高的产氢活性,PBA-Mo S_2-10的产氢速率为22.69 mmol g~(-1)h~(-1)。结果分析表明,刻蚀有效增加了PBA的表面积,使得其催化活性位点充分暴露,大幅提升了PBA-Mo S_2的光催化产氢性能。同时Ni-Co PBA与Mo S_2之间的结合,降低了复合材料的带隙,促进了光电子的转移,进一步加速了光催化反应的进行。这一合成策略为高效光催化剂的设计提供了一种新方案。

烟粉虱Bemisia tabaci是一种危害严重的多食性害虫,在世界范围内广泛分布。桨角蚜小蜂Eretmocerus sp.Alpelisib纯度是烟粉虱的优势专性寄生蜂。本研究利用线粒体mt DNA COⅠ基因作为分子标记,对天津市7个地区10个地理种群的桨角蚜小蜂进行分子鉴定和遗传多样性分析。测定嗪虫唑酰胺、双丙环虫酯和氟雷拉纳三种杀虫剂对烟粉虱优势寄生phage biocontrol蜂的室内毒力,并根据选择毒力指数对蒙氏桨角蚜小蜂Eretmocerus mundus进行安全性评价,探究这三种杀虫剂在亚致死浓度(LC_(15))和致死中浓度(LC_(50))水平下对蒙氏桨角蚜小蜂生物学特性的影响。通过田间试验明确这三种杀虫剂对MED烟粉虱以及对桨角蚜小蜂温室种群动态的影响。结果表明:(1)天津桨角蚜小蜂分子鉴定及遗传多样性分析在天津武清、静海、宁河、宝坻、北辰、西青6个地区采集到73头蒙氏桨角蚜小蜂,在西青、静海、宝坻、蓟州4个地区采集到18头未命名桨角蚜小蜂。蒙氏桨角蚜小蜂6个地理种群中,宝坻区种群遗传分化系数最高,静海区最为保守;未命名桨角蚜小蜂4个地理种群中,宝坻区种群内遗传分化指数最高,而蓟州区种群最为保守。序列分析定义了13种蒙氏桨角蚜小蜂单倍型和14种未命名桨角蚜小蜂单倍型。其中,蒙氏桨角蚜小蜂单倍型MHap＿1、MHap＿2和未命名桨角蚜小蜂单倍型SHap＿1发生频率最高、分布最广,可认为是各自种群中较为原始的优势单倍型,各个地理种群之间既有基因交流,又存在遗传分化的现象。错配分析结果表明,蒙氏桨角蚜小蜂种群在天津地区稳定存在,未命名桨角蚜小蜂种群存在时间较短且具有较强的适应能力和遗传变异能力。(2)三种杀虫剂对蒙氏桨角蚜小蜂室内毒力测定及安全性评价蒙氏桨角蚜小蜂对杀虫剂的敏感性依次为:氟雷拉纳>双丙环虫酯>嗪虫唑酰胺。选择性毒力指数表明,嗪虫唑酰胺和双丙环虫酯对蒙氏桨角蚜小蜂均为正向选择性,氟雷拉纳对蒙氏桨角蚜小蜂为负向选择性。(3)三种杀虫剂对蒙氏桨角蚜小蜂生物学特性影响嗪虫唑酰胺、双丙环虫酯和氟雷拉纳的亚致死浓度(LC_(15))和致死中浓度(LC_(50))对蒙氏桨角蚜小蜂具有一定的影响,除嗪虫唑酰胺LC_(15)处理外,嗪虫唑酰胺、双丙环虫酯和氟雷拉纳LC_(15)和LC_(50)剂量下,蒙氏桨角蚜小蜂均出现寿命显著缩短现象;蒙氏桨角蚜小蜂雌成虫在嗪虫唑酰胺和双丙环虫酯处理下寄生率显著降低,而氟雷拉纳LC_(50)处理下,雌成虫寄生率显著上升;嗪虫唑酰胺和双丙环虫酯均导致蒙氏桨角蚜小蜂后代发育历期显著延长,氟雷拉纳LC_(15)剂量下对后代发育历期无显著影响;双丙环虫酯和氟雷拉纳LC_(50)剂量下均导致小蜂后代羽化率显著降低,而嗪虫唑酰胺对小蜂后代羽化率无显著影响。(4)三种杀虫剂对蒙氏桨角蚜小蜂及MED烟粉虱温室种群动态的影响田间3种杀虫剂对MED烟粉虱均有较好的防治效果。其防治效果依次为:嗪虫唑酰胺>双丙环虫酯>氟雷拉纳;嗪虫唑酰胺、双丙环虫酯和氟雷获悉更多拉纳作用于桨角蚜小蜂种群后,均导致桨角蚜小蜂温室种群数量大幅减少,氟雷拉纳对桨角蚜小蜂温室种群数量的影响相对较小。