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癌症是人类健康面临的最大威胁之一,手术、化疗和放疗是目前最常规的治疗方法。这些治疗方法副作用较多,难以达到理想的治疗效果。人们一直在寻找有效且侵入性较小的癌症治疗方法。光热治疗是通过近红外光(NIR)辐照激活光热治疗剂,光能被转换为热能,具有无创性、高可控性和高精准度等优点。然而单一的光热治疗有其局限性,随着纳米技术的发展,将光热治疗与纳米药物载体结合的光热联合化疗已成为当前的研究热点。此外,光热、光动力、化学治疗联合以及光热、化学、化学动力学联合治疗的研究也较为广泛。金纳米棒(AuNRs)具有形貌可控、光学性质优异和易于功能化等优点,在肿瘤治疗和成像等领域得到了广泛应用。但因其不稳定、暗毒性大、载药量有限、光热效应有待增强,需要在其表面修饰配体。在药物载体中,介孔聚多巴胺(m PDA)具有制备方法简单、生物相容性好、粘附性强、载药量高、对pH敏感等特点,被广泛用于药物输运的载体。将二者有机结合不仅提高了金纳米材料的稳定性,而且制备的复合材料兼具聚合物和纳米金的优点,在癌症治疗方面具有更大的应用前景。为此,本论文主要开展了以下三部分工作:(1)pH/NIR响应性AuNRs@m PDA纳米载体的制备及光热/化疗性能通过种子生长法和软模板法制备了核壳型纳米药物载体。该载体以AuNRs为内核,以m PDA为外壳,负载化疗药物盐酸阿霉素后,以pH响应性聚乙烯亚胺(PEI)封堵药物分子。由于内核AuNRs和外壳m PDA均具有光热转换性能,随后考察了不同厚度多巴胺层对载体光热性能的影响。AuNRs@m PDA@PEI纳米药物载体的光热转化效率达到了55.7%。此外,该载体表现出pH、NIR响应性药物释放行为。细胞毒性试验表明载体具有较低的细胞毒性,载药后的载体对癌细胞具有光热和化学联合治疗性能。(2)pH/NIR/温度响应性AuNRs@ZnO@m PDA的制备及Pexidartinib核磁光热/光动力/化疗协同效应通过一种简单的方法制备AuNRs@ZnO@m PDA三层复合结构,构建了集热疗、光动力治疗及化疗于一体的多功能癌症治疗平台。AuNRs核心赋予载体光热性能;接着利用水热法在其表面包覆一层ZnO后,赋予载体光动力性能;随后通过软模板法在AuNRs@ZnO表面包覆m PDA;最后,将化疗药物和相变材料1-十四醇封装在纳米载体的介孔结构中。在808 nm激光照射下,由于温度升高导致1-十四醇的熔融,该纳米载体表现出pH、NIR和温度触发的药物释放行为。细胞毒性实验表明,负载化疗药物后的载药体系具有良好的光热、光动力和化疗协同治疗效果。(3)pH/NIR/GSH响应性CAuNRs@m PDA@Mn O_2的制备及光热/化疗/化学动力学联合治疗金-银双金属纳米立方体通过氯金酸刻蚀形成中空笼状金纳米棒(CAuNRs)。以其为核心,通过多巴胺在碱性环境下自聚合形成一层m PDA,通过静电相互作用在m PDA层组装二氧化锰(Mn O_2)。CAuNRs兼具光热和载药性能,m PDA作为壳层,同时充当光热剂和药物载体Navitoclax小鼠。Mn O_2在酸性环境和高谷胱甘肽(GSH)浓度下分解成Mn~(2+),Mn~(2+)可以作为类芬顿试剂触发类芬顿反应产生高毒性的羟基自由基。在808 nm激光照射下,纳米Medical toxicology载体表现出较高的光热转化效率(57.0%);且该载药体系药物释放具有pH、GSH和NIR刺激性响应特性。此外,该载体下实现了对癌细胞的光热、化疗和化学动力学协同治疗效应。激光共聚焦和流式细胞术分析测试结果表明该载体表现出显著的细胞成像能力。

实现高灵敏度的癌症标志物检测和开发智能的特异性给药系统是癌症诊断治疗的两大主题。在检测方面,micro RNA(mi RNA)作为一种重要的癌症诊断生物标志物,其在各类细胞的基因表达过程中具有重要的调节作用,因而实现其高灵敏度和选择性检测对于肿瘤等相关疾病早期诊断和预后具有重要意义。然而,由于mi RNA片段的小尺IDN-6556核磁寸、低表达、易降解、高序列同源性等特点,使用常规方法实现mi RNA的高灵敏检测面Laduviglusib试剂临着许多挑战。而在药物治疗方面,常规的给药策略药物有效载荷能力有限,无法在复杂的细胞环境中实现特异性靶向和现场主动药物释放,治疗效果不足。因而寻求一种可实现定制治疗功能、高效药物负载、特定肿瘤识别、可控药物释放,在提高治疗效果的同时将其对正常组织的损害降到最低的智能给药系统开发仍是一大挑战。近年来,随着纳米材料和核酸纳米技术的发展,基于核酸的生物传感器和药物输送系统已成为越来越重要的新兴策略。本论文以DNA分子作为构建模块,将纳米材料与信号扩增反应和新兴检测技术相结合以实现mi RNA灵敏检测和智能给药系统开发,并希望为基于核酸纳米结构自组装的生物传感检测和药物递送治疗等领域提供新的设计思路和策略。本研究主要包括以下两个部分:(1)构筑基于金纳米粒子的DNA纳米水凝胶用于特异性靶向癌细胞和ATP响应性解组装在该部分工作中,首先设计了一种通用的基于金纳米颗粒(Au NPs)的DNA纳米水凝胶,其主要以杂交链式反应(HCR)产物为凝胶网络框架,si RNA为交联链,通过DNA自组装形成核酸交联网状结构并连接到Au NPs载体上。在该结构中HCR可以提高si RNA的负载率,si RNA则可协助形成交联结构提高纳米凝胶的稳定性。在此基础上,开发了一种具有定制治疗功能、特异性靶向识别和可控药物释放的癌细胞给药系统,其可通过DNA设计包覆三种不同的治疗组分:金纳米棒(Au NRs)、si RNA和化疗药物(Dox),三者可在未来实现光热、免疫和化学协同治疗的目的;引入双适配体(AS1411和anti-VEGF)可协同提高Au NRs@DNA纳米水凝胶的特定靶向和内吞作用;凝胶框架中的ATP适配体可通过对癌细胞内ATP的特异性结合从而响应性触发DNA纳米水凝胶的解组装并实现可控释放凝胶内药物分子的目的。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、琼脂糖凝胶电泳(AGE)、透射电镜(TEM)、紫外-可见光光谱(UV-Vis)、Zeta电位、动态光散射(DLS)和荧光光谱(FL)等多种表征手段成功证实了Au@DNA纳米水凝胶的形成和ATP响应解组装。最后,通过荧光显微镜验证了Au NRs@DNA纳米水凝胶可以通过双适配体介导的内吞作用进入癌细胞并成功实现可控释放。(2)构建基于多层“核卫星”纳米结构的表面增强拉曼散射生物传感平台用于癌症标志物Let-7a的检测在该部分工作中,首先合成了组装“核卫星”纳米结构所需的两种不同尺寸的金纳米颗粒:45 nm core-Au NPs和16 nm satellite-Au NPs。然后将两种Au NPsurface biomarkers由靶标链Let-7a触发首先通过普通的DNA杂交反应自组装形成单层“核卫星”纳米结构。更进一步,通过HCR反应可在45 nm core-Au NPs表面形成大量可连接16 nm satellite-Au NPs的连续位点,进而形成多层“核卫星”纳米组装结构,并通过TEM、UV-Vis等进行表征得以证实。另外,由于多层“核卫星”结构具有相较于单层更多的“热点”,因而附着在卫星纳米粒子上的拉曼报告分子(DTNB)其SERS信号增强更明显。结果表明,随着Let-7a浓度的增加,DTNB的SERS特征峰(1334cm~(-1))强度逐渐增强,二者在0.1-1000 n M浓度区间下存在线性关系,检测限达到4 p M。而在相同靶标浓度下,单层“核卫星”引发的SERS信号要明显弱于多层“核卫星”,证实了多层“核卫星”组装的优势。我们发现多层“核卫星”纳米结构溶液相和基底相UV-Vis特征峰强度均与靶标链浓度存在一定的线性关系,因而可作为SERS以外的辅助检测手段。最后实验结果证实该多层“核卫星”生物传感器具有良好的靶标选择性和在实际血清样品中的检测能力。

近年来,声称自己皮肤敏感的人群比例越来越高,主要表现为皮肤刺痛感、灼热感、痒感,这些症状的生理机制与皮肤屏障受损、皮肤神经感受异常、皮肤炎症有关。诱发敏感肌的因素很多,例如年龄、内分泌、气候、化妆品成分等等。其中,最常与皮肤接触的化学物质——表面活性剂对皮肤的刺激作用受到广泛关注和证实。因此,开发温和不刺激的表面活性剂原料是一种缓解敏感肌问题的解决方案。非致病酵母菌代谢得到的槐糖脂(SL)具有绿色温和、表面活性良好、独特生物活性等特质,可作为缓解敏感肌的一种天然原料,在个人护理及清洁领域具有很大潜力。然而,槐糖脂在国内大规模工业生产应用的实例很少,已被报道的提纯工艺较为复杂繁琐;关于槐糖脂生物活性的研究支撑数据相当少,需要进一步的机理探究。因此,本文研究了槐糖脂的提纯工艺优化及其针对敏感肌的抗炎舒缓功效,具体研究内容与结论如下:1.采用水洗法提纯发酵得到的SL,经过单因素筛选、正交优化后的水洗法提纯工艺为45℃下,p H为4,洗涤水添加量为1倍产物体积,水洗次数为3次。在此最优组合条件下,发酵液的蛋白脱除率为55.37%,糖脂损失率为9.90%。通过液质联用分析产物的组成结构,结果显示自制SL中酸型和内酯型的构型比例约为24:76,其中分子量为688的双乙酰化内酯型SL为产物的最主要成分。体外玉米醇溶蛋白实验及血红细胞溶血测试显示自制SL的超温和性,几乎不与蛋白及细胞膜发生反应;透明质酸酶抑制实验的结果表明SL具备抗炎舒敏的潜力。2.建立LPS诱导的小鼠巨噬细胞体外炎症模AZD6738型,在MTT细胞活力测试基础上,探究了SL抗炎的生物活性。结PS-341浓度果显示SL能够显著减少LPS诱导的炎症因子NO、IL-6、TNF-α的过度分泌,下调细胞内ROS、钙离子水平,降低i NOS、COX-2 m RNA的过度表达。同时,不同浓度的SL单独刺激细胞不会诱导细胞分泌额外的促炎因子,说明SL具有良好的抗炎活性。3.为了解释SL抗炎活性的具体机制,考察了SL对炎症反应中的关键转录因子之一NF-κB的调控作用。细胞免疫荧光染色实验的结果显示SL预处理可明显抑制LPS诱导的NF-κB核转录。此外,采用Western blotting法检测了SL对转录过程中p65和IκBα蛋白表达及磷酸化比例,结果显示不同浓度的SL预处理均能够抑制炎症引起的p65和IκBα的磷酸化过表达,降低磷酸化比例,说明在LPS诱导的体外炎症模型中,SL可以抑制炎症相关NF-κB通路的激活。分子对接辅助预测的结果表明,SL的作用靶点可能是Toll样受体复合物以及膜内激酶,从而阻止炎症信号的进一步传递。4.建立组胺诱导的体内小鼠瘙痒模型及体外角质细胞钙内流模型,在MTT细胞活力测试基础上,探究了SL舒缓皮肤瘙痒的生物活性。皮肤瘙痒刺激物组胺能够诱发小鼠的抓挠行为,行为学结果显示,SL对组胺引起的小鼠抓挠行为有抑制作用。小鼠抓挠部位皮肤的H&E染色图显示SL可以缓解皮肤瘙痒加剧后的屏障受损及炎症。利用荧光酶标仪、荧光显微镜,考察了SL对组胺诱导的Ha Ca T细胞钙内流的影响,结果表明不同浓度的SL预处理后,组胺诱导的钙内流被显著抑制。5.为了研究SL舒缓瘙痒的分子机制,首先利用钙的荧光标记,考察了在组胺刺激时SL与组胺H1或H4受体之间是否存在相互作用,结果表明SL可以通过与组胺H1、H4受体发生作用,抑制下游信号传导。此外,RT-PCR的结果显示,不同浓度的SL能够分别显著抑制组胺受体激活导致的PLCγ1、IP3R、PKCα信号分子基因的过度表达in vivo pathology。为了进一步探讨SL抑制钙内流的机制,研究了SL是否可以调控下游阳离子通道TRPV1的激活,结果显示SL能够下调TRPV1激活剂辣椒素诱导的钙内流。免疫荧光标记结果表明SL能够抑制辣椒素或组胺导致的TRPV1过度荧光表达,具有调节TRPV1通道活性的能力,分子对接预测结果表明SL可能通过相互作用的方式抑制刺激物激活TRPV1。

目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞Transjugular liver biopsy极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后，免疫荧光法观察Krt5和F-actin在PAC2细胞的分布变化；细胞划痕实验检测PAC2细胞迁移能力；转录组测序和免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析Krt5调控网络。结果:Krt5围绕着细胞核，在胞浆成束成网分布并扩展到细胞质膜；过表达Krt5增加鬼笔环LY2835219使用方法肽标记的F-actin代表的细胞丝状伪足形成，并加快细胞迁移愈合；转录组分析显示，Krt5明显增加Rac2/Rhov、NFselleck产品-κB、Mylkb、Ifnphi1、IL-13和IL-11的转录，降低多个胶原蛋白、肌动蛋白和TGF-β家族基因转录，同时IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10诱导处理总体上与Krt5作用一致；IP-MS证实Krt5与α-辅肌动蛋白(Actn1)和非肌肉肌球蛋白重链(Myh9b, Myh10)紧密结合。结论:Krt5可能通过与肌动蛋白相互作用激活Rac/Rho机制从而促进细胞生成丝状伪足，重塑细胞因子受体结构与巨噬细胞极化因子的相互作用。

白藜芦醇是一种对人体健康有益的多酚化合物,对于人类疾病的预防有巨大的潜力,其主要来源是葡萄。设施葡萄一年两熟栽培为葡萄种植的关键技术。此外,气温变化对白藜芦醇的积累具有重要影响。本试验以‘夏黑’葡萄为试材,探究在设施一年两熟栽培模式下夏果和冬果不同部位白藜芦醇含量在不同生长期的变化情况;探索白藜芦醇生物合成相关的代谢通路以及筛选候选基因;探究设施内气温变化对不同发育时期夏果与冬果中白藜芦醇含量以及候选基因表达量的影响。研究结果如下:1.通过分析夏果和冬果的生长发育过程中白藜芦醇含量的变化。结果表明:随着葡萄生长成熟,冬果果皮与果肉中白藜芦醇含量前期变化不显著,转色期后呈显著上升趋势,夏果果皮与果肉中白藜芦醇含量从青果期至转色期呈下降趋势,转色期后呈上升趋势。成熟期冬果的白藜芦醇含量显著高于夏果(P<0.05)。冬果与夏果果皮中白藜芦醇含量均显著高于其果肉(P<0.05)。冬果与夏果白藜芦醇含量不同的原因推测可能与冬季栽培、夏季栽培气温变化有关。2.结合转录组表达量数据及白藜芦醇含量数据,通过加权基因共表达网络分析(WGCNA),筛选葡萄果实生长发育过程中白藜芦醇生物合成的候选基因。结果表明,通过WGCNA共鉴定到10个特异性模块,发现Magenta、Purple、Cyan模块的基因表达与白藜芦醇含量变化呈显著正相关。利用Cy点击此处toscape软件在3个模块中筛选出12个与白藜芦醇生物合成相关的候选基因(STS＿1、STS＿2、STS＿3、STS＿4、CHS、PAL＿1、PAL＿2、F3’5’H＿1、F3’5’H＿2、F3’5’H＿3、F3’5’H＿4、HCT),发现随着果实生长CHS、STS、F3’5’H、PAL在成熟期表达量达到最大值。通过KEGG通路富集分析表明,白藜芦醇生物合成显著富集到类黄酮生物合成、苯丙氨酸代谢、苯丙烷生物合成以及二苯乙烯生物合成通路。从候选基因中选取了6个基因(STS＿1、STS＿2、STS＿3、PAL＿1、PAL＿2、F3’5’H＿1)在冬果与夏果不同部位进行q RT-PCR的验证,结果表明冬果中CSF biomarkers候选基因表达量显著高于夏果,冬果与夏果果皮中候选基因表达量均显著高于果肉,候选基因表达量白藜芦醇含量均在成熟期达到最大值。3.通过温度传感器智能监测设施大棚内温度变化,分析白藜芦醇含量、候选基因表达量与气温的相关性。结果表明:在冬果生长发育期间果皮中白藜芦醇含量与日均气温呈显著负相关(P<0.05)。同时,冬果果皮中F3’5’H＿1、STS＿1表达量与果肉中STS＿1、STS＿2表达量均与日均气温呈显著负相关(P<0.05),很可能冬果处在日均气温逐渐降低的环境压力中,激发STS大量表达,并在成熟期达到最大值。此外,冬果果皮中PAL＿1表达量与昼夜温差呈显著正相关(P<0.05),说明昼夜温差越大,PAL＿1表达量越高JNJ-42756493价格。夏果果肉中PAL＿2表达量与日均气温、昼夜温差呈显著正相关。说明气温变化影响PAL表达量,进而可能影响白藜芦醇的生物合成。

茶树[Camellia sinensis(L.)O.Kuntze]是山茶科中最具经济价值的植物,其鲜叶加工而成的饮品为世界三大无酒精饮料之一。新梢作为制茶的基本原料,其嫩度对于茶叶品质形成具有重要意义。本研究基于RNA-Seq分析结果,对木质素、纤维素、半纤维素、果胶等细胞壁组分含量及生物合成进行了综合分析,并深入探讨了CsLAC33基因的功能及其调控机制,主要研究结果及结论如下:(1)通过RNA-Seq分析,在叶和茎中分别鉴定出8548个和6246个差异基因,GO和KEGG富集结果显示,差异基因主要富集在光合作用、DNA装配以及细胞壁生物合成及代谢三部分。对苯丙烷代谢及其下游途径的综合分析MLN4924纯度发现,随着新梢嫩度的降低,儿茶素、花青素含量及其生物合成相关的Cs CHS、Cs ANR、Cs LAR和Cs ANS等基因下调表达,而木质素合成分支中的Cs HCT、Cs CAD、Cs PER等基因的表达水平上调,其中CsEpimedium koreanum CHS和Cs HCT可能作为关键的节点基因控制两大分支途径的流向。同时,这一过程可能受到MYB、WRKY等转录因子的调控,其中MYB可能是调控木质素生物合成和类黄酮合成的关键转录因子。另一方面,纤维素含量随着新梢嫩度降低而增加,且相应合成酶Cs Ces A和Cs COBL的表达量上调;类似地,新梢嫩度的降低伴随半纤维素含量的增加以及Cs IRX、Cs CSL等合成酶基因表达水平的上升。另外,总果胶含量与新梢嫩度呈正相关,其可能受Cs GAUT基因表达水平上升寻找更多调控;而Cs PME作为果胶形态转化的关键酶基因主要参与了可溶性果胶的积累。(2)茎和叶共同差异表达的CsLAC3基因中,10个CsLAC3基因的表达水平随着新梢嫩度的降低而上升,表明其在新梢木质素合成过程发挥重要作用。克隆获得了CsLAC32～6基因c DNA全长序列,其编码蛋白序列高度保守,且均定位于细胞膜或细胞壁。其中,CsLAC33与拟南芥中已知调控木质素合成的LAC聚为一支,过表达CsLAC33拟南芥茎中木质素含量显著高于对照株系,表明其在介导木质素合成中的关键作用。另外,体外实验证实CsLAC33的表达可以被Csmi RNA397所抑制,过表达Csmi RNA397拟南芥中CsLAC33的同源基因At LAC2也被显著抑制表达,且过表达Csmi RNA397株系表现出根长变长、叶面积减小、次生木质部变薄、机械支持力变差等与木质素含量相关的特征性表型,表明Csmi RNA397可能通过抑制CsLAC33的表达影响木质素生物合成。本研究有助于解析CsLAC3介导木质素合成参与调控茶树新稍嫩度的分子机制,为茶树新梢嫩度的研究提供理论参考,有望服务于茶树新梢嫩度以及茶叶品质的提升。

【目的】通过比较和分析不同品种樱桃番茄（Solanum lycopersicum var. cerasiforme）在华南连栋温室基质袋培模式下的产量和品质，筛选出适宜的优质品种，为生产提供理论参考。【方法】比较分析了‘千禧’‘金玉’‘白妃’‘迷彩’‘翡翠’‘战马’6个樱桃番茄品种的生长、单果质量、抗氧化能力和果实品质指标，包括可溶性固形物、Vc、番茄红素、可溶性总糖含量等，同时对以上指标进行主成分分析、聚类分析和相关性分析。【结果】MEK抑制剂‘千禧’和‘战马’植株第1穗开花时间较其他品种提早3～6 d，其中‘战马’的花期最长，第1、第2穗花期可达37 d。‘战马’植株长势较强且小叶数量多，株高较‘翡翠’‘千禧’‘迷彩’‘金玉’和‘白妃’分别高出54.8%、34.7%、23.4%、17.2%和13.9%。‘翡翠’植株为矮粗状，单果质量和单株产量均显著高于其他品种。‘迷彩’和‘战马’品种产量高，表现为单穗结果数较多、分别达24、32个。供试6个品种樱桃番茄的品质差异明显，‘迷彩’果实的叶绿素、类胡萝卜素、番茄红素含量最高，分别为33.7、86.1、74.5μg/g；‘迷彩’和‘战马’果实的Vc含量最高，为200～220μg/g；‘金玉’果实的多酚含量最高；‘翡翠’果实品质相对较差。主成分分析、聚类分析和相关性分析结果表明，‘迷彩’品种综合评价最优，‘千禧’和‘战马’Enteral immunonutrition次之，再次是‘白妃’和‘金玉’，‘翡翠’品种综合评价最差；果实大小与果实品质呈极显著负相关；各品种樱桃番茄叶绿素含量与果实品质（类胡萝卜素、番茄红素、类黄酮、Vc含量）呈显著正相关Compound 3研究购买关系。【结论】‘迷彩’和‘战马’品种单穗果实数量多、产量较高，‘千禧’品种风味品质较佳，3个品种综合鉴评好，适宜作为华南连栋温室基质袋培的优质高产樱桃番茄品种。成熟的‘迷彩’樱桃番茄果实中富含叶绿素、类胡萝卜素和番茄红素，可作为栽培上选育樱桃番茄果实色素含量高的理想材料。

目的:研究各浓度亚砷酸钠(Na As O_2)对人肝星状细胞(LX-2)活化、铁死亡相关蛋白表达的影响,以及探索SLC7A11、CDKN1A甲基化在Na As O_2诱导LX-2细胞活化中作用机制。方法:1)采用MTT比色法检测细胞相对存活率,确定Na As O_2染毒LX-2细胞的IC_(50),并根据具体情况确定Na As O_2染毒浓度,将其分为低、中、高剂量组;2)通过划痕观察细胞迁移和愈合情况;3)通过Illumina Infinium Methylation EPIC Bead Chips(850K甲基化芯片)对差异DNA甲基化位点进行筛查;4)实时荧光定量(q RT-PCR)检测溶质载体家族7成员11基因(solute carrier family 7,(cationic amino acid transporter,y+system)member 11,slc7a11)、细胞周期素依赖性激酶抑制因子1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,cdkn1a)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,tgf-β1)Ⅲ型胶原蛋白(Anti-Collagen TypeⅢ,collagenⅢ)m RNA的转录水平;免疫印迹法(Western blot)检测SLC7A11、CDKN1A、SLC7A4、TGF-β1、collagenⅢ的蛋白表达水平;5)经甲基化抑制剂(5-Aza-cd R)干预细胞,并测定其半数致死剂量;6)通过质谱技术探讨SLC7A11、CDKN1A、SLC7A4基因启动子区甲基化水平在Na As O_2致肝星状细胞活化中的作用机制;7)免疫印迹法(Western blot)检测甲基化抑制剂(5-Aza-Cd R)+Na As O_2干预后SLC7A11、CDKN1A、SLC7A4、TGF-β1、collagenⅢ的蛋白表达水平。结果:1)Na As O_2染毒LX-2细胞,测得IC_(50)为27.24umol/L,确定浓度:对照组(0.00μmol/L)、低剂量组(5.00μmol/L)、中剂量组(10.00μmol/L)、高剂量组(15.00μmol/L);2)Na As O_2干预组细胞划痕愈合率明显低于对照组,且随着Na As O_2浓度的增高,划痕愈合率逐渐降低;3)利用基因芯片技术,筛查后存在差异甲基化位点共74267个。筛选出SLC7A11在启动子区cg22659014位点高甲基化;CDKN1A在启动子区cg17964532位点高甲基化,SLC7A4在启动子区cg24333469位点高甲基化;4)Na As O_2溶液染毒结束后,与对照组比较,Na As O_2低、中、高剂量组的SLC7A11 m RNA表达降低,Na As O_2低、高剂量组SLC7A4 m RNA表达升高(P<0.05),TGF-β1、collagenⅢm RNA表达均升高(P<0.05);与对照组比较,Na As O_2低、中、高剂量组细胞中SLC7A11蛋白表达水平降低,CDKN1A蛋白表达水平升高,Na As O_2中、高剂量组细胞中SLC7A4蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,Na As O_2低、中、高剂量组细胞中TGF-β1蛋白表达水平升高,Na As O_2高剂量组细胞中collagenⅢ蛋白表达水平升高(P<0.05);5)各干预剂量组的5-Aza-Cd R对LX-2细胞的细胞生长具有一定抑制作用,且随着5-Aza-Cd R浓度的升高,细胞活性逐渐降低,OD值呈下降趋势,抑制Sexually explicit media变得明显;6)与对照组比较,Na As O_2组中SLC7A11 m RNA表达水平降低,SLC7A4 m RNA表达水平升高,TGF-β1、CollagenⅢm RNA表达水平均升高(P<0.05),Na As O_2+5-Aza-Cd R组中SLC7A4 m RNA表达水平升高(P<0.05);与Na As O_2组比较,Na As O_2+5-Aza-Cd R组中SLC7A11 m RNA表达水平升高(P<0.05),SLC7A4 m RNA表达水平降低,CDKN1A m RNA表达水平升高(P>0.05),TGF-β1、CollagenⅢm RNA表达水平降低(P<0.05);与低剂量组比较,低剂量+5-Aza-Cd R组中SLC7A11CB-839研究购买蛋白表达水平升高,CDKN1A、TGF-β1蛋Entinostat采购白表达水平降低(P<0.05);与中剂量组比较,中剂量+5-Aza-Cd R组中SLC7A11蛋白表达水平升高,CDKN1A、SLC7A4、TGF-β1蛋白表达水平降低(P<0.05);与高剂量组比较,高剂量+5-Aza-Cd R组中SLC7A11蛋白表达水平升高,CDKN1A、SLC7A4、TGF-β1、CollagenⅢ蛋白表达水平降低(P<0.05);7)质谱技术验证发现SLC7A4甲基化水平差异分析SLC7A4＿FA40＿Cp G＿2、SLC7A4＿FA28＿Cp G＿4、SLC7A4＿FA40＿Cp G＿3、SLC7A4＿FA40＿Cp G＿11、SLC7A4＿FA40＿Cp G＿12、SLC7A4＿FA43＿Cp G＿2、SLC7A4＿FA43＿Cp G＿3.4各片段Cp G位点平均甲基化程度有统计学意义(P<0.05)。结论:甲基化参与Na As O_2诱导LX-2细胞活化过程。5-Aza-Cd R可能降低Na As O_2诱导的LX-2细胞活化程度,由此推测甲基化水平降低可能会减缓由Na As O_2所诱导的肝纤维化过程,对肝脏产生一定的保护作用。

目的 分析宫颈癌(CC)中肌联蛋白Titin(TTN)突变与免疫应答之间的关联以及临床预后。方法 宫颈癌的RNA-Seq、基因突变和临床生存数据从人类基因组图谱(TCGA)网站获取；GSE9750数据从基因表达综合数据库(GEO)获取。临床病例选择确诊为宫颈癌的患者共55人，RT-qPphotobiomodulation (PBM)CR和Western blot检测癌组织和正常组织中TNN的表达，生存曲线分析总体存活(OS),基因集富集分析法(GSEA)分析TTNRegorafenib采购与免疫反应的相关程度。结果 TTN在宫颈癌中的突变率为32%,数据库样本和宫颈癌样本中TTN均显著高表达(P<0.05)。在TCGA数据库样Empagliflozin体外本中，TTN在突变型与野生型之间没有显著的表达差异(P=0.603)。在TTN突变的宫颈癌患者中，TTN高表达与总生存率相关性具有统计学差异(HR=0.156,P=0.040),但在TTN野生型的宫颈癌患者中，TTN高表达与总生存率相关性无统计学差异(HR=0.702,P=0.212)。在TTN突变的宫颈鳞状细胞癌患者中，TTN高表达与良好的总生存率相关性具有统计学差异(HR=0,P=0.025),但在TTN野生型的宫颈鳞状细胞癌患者中，TTN高表达与总生存率相关性无统计学差异(HR=1.39,P=0.248)。在TTN野生型宫颈癌中，TTN高表达后T细胞和B细胞过程呈显著负富集。然而，在TTN突变型宫颈癌中，TTN过表达T细胞和B细胞活性过程没有显著负富集。结论 TTN与宫颈癌发生及预后密切相关，TTN突变参与T细胞和B细胞相关免疫反应，TTN有望成为宫颈癌诊断和治疗的作用靶点。

目的：寻找更多观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织铁转运相关蛋白表达及铁死亡的影响。方法：32只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组和补阳还五汤组，每组8只。除假手术组外，其他组均建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。除假手术组外，其余3组均于术前7 d和再灌注后连续3 d分别给予等量0.9%氯化钠溶液、依达拉奉腹腔注射，补阳还五汤颗粒剂灌胃，每日1次。采用TTC染色检测各组大鼠脑梗死面积，HE染色和尼氏染色观察缺血侧海马CA3区病理组织形态变化genetic differentiation，免疫组织化学法观察缺血侧海马CA3区Fn、Tf、TfR、FPN1蛋白表达情况，Western Blot法检测铁死亡相关蛋白Nrf2、HO-1、GPX4蛋白表达情况。结果：与模型组比较，补阳还五汤组脑梗死面积显著减小（P<0.01），尼氏小体计数显著增多（P<0.05），病理损伤减轻，Tf、TfRAZD2281供应商、Fn蛋白表达显著降低（P<0.05）,FPN1、Nrf2、HO-1和GPX4蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：补阳还五汤通过调节脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧海马CA3区铁转运蛋白的表达，调控Nrf2/HO-1/GPX4信号通路，减轻脑缺血损伤。