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目的:探究抗菌药物对非小Severe pulmonary infection细胞肺癌(NSCLC)患者一线含铂化疗预后的影响。方法:回顾性纳入接受一线含铂双药化疗的Stem Cells & Wnt抑制剂晚期NSCLC患者125例，化疗期间使用抗菌药物的患者为抗菌药物组，未使用的为对照组。对比化疗2周期后与基线的检查报告，对患者的疗效及不良反应进行评价。临床终点为客观有效率(ORR)和疾病控制率(DCR),不良反应包括血液系统不良反应(白细胞减少、粒细胞减少、血小板减少、血红蛋白减少)和胃肠道不良反应。结果:抗菌药物组的ORR(8.3%)显著低于对照组ORR(20.8%)(P=0.045)。抗菌药物组的DCR(77.8%)低于对照组的DCR(90.6%),但差异无统计学意义(P=0.059)。两组的血液系统不良反应事件(包括白细胞减少、粒细胞减少、血小板减少、血红蛋白减少)无显著差异(Pselleckchem MK-4827>0.05),而胃肠道不良反应率有显著差异(P=0.036),抗生组有50例(69.4%),对照组有27例(50.9%)。结论:抗菌药物可影响晚期NSCLC患者一线化疗患者的预后，应在严格适应证的情况下给癌症患者使用。

目的:总结血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者的临床及实验室参数特征，分析疾病预后、急性期疗效的影响因素。方法:回顾性分析湖南省人民医院收治的59例TTP患者的诱因、临床特征、实验室参数、治疗方案等资料，比较各因素在死亡组与生存组的组间差异；分析各因素与预后、急性期疗效的相关性。结果:59例TTP患者中，1名4岁男童为遗传性TTP,其余58例为获得性TTP(39例为特发性TTP,19例为继发性TTP),其中男27例，女31例，中位年龄54(11-84)岁。36例行血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性测定，34例(94.44%)患者存在酶活性降低，特发性与继发性TTP患者ADAMTS13酶活性程度存在统计学差异(P<0.001)。死亡组、存活组比较，年龄(64岁vs 51岁)、ALT/AST比值(0.61 vs 0.36)、血浆置换(TPE)次数(3次vs 8次)与持续时间(3 d vs 9 d)等因素有统计学差异。多因素分析结果显示，TPE次数(OR=点击此处5.175,95%CI:1.169-22.914,P=0.030)、ALT/AST比值(OR=4.387,95%CI:1.019-18.891,P=0.047)与死亡率相关。COX回归分析结果显示，Next Gen Sequencing神经精神障碍程度(HR=0.200,95%CI:0.084-0.474,P<0.001)、起病至TPE启动时间(HR=0.288,95%CI:0.114-0.726,P=0.008)、治疗方案(HR=0.336,95%CI:0.125PF-03084014试剂-0.902,P=0.030)与TTP急性期疗效相关。结论:高ALT/AST比值的TTP患者死亡率高；足次、足程血浆置换者死亡率低。重度神经精神障碍、诊治时间延迟、TPE无反应加用利妥昔单抗者疗效欠佳。

金藻昆布多糖（Chrysolaminarin）是一种具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂和免疫调节等多种功效的β-1,3-葡聚糖。NN2211浓度海洋硅藻中富含金藻昆布多糖，但提取纯化工艺和准确定量分析方法是目前研究和开发的瓶颈。该研究对海洋硅藻三角褐指藻胞内金藻昆布多糖的提取纯化工艺进行了优化，建立的最佳条件为：以Tris-EDTA缓冲液提取冻干藻粉4次后，采用终浓度为10%的三氯乙酸（Trichloroacetic Acid,TCA）除蛋白后再进行醇沉回收多糖。随后系统比较了苯胺蓝荧光检测法、苯酚-硫酸法、凝胶液相色谱法检测其含量的方法学。结果表明，苯胺蓝荧光检测法的最佳检测范围为1～40μg/m L，具有最低检测下限（4.1Entinostat抑制剂2μg/m L）Whole Genome Sequencing、最高精密度（相对标准偏差1.27%）和最好重现性（相对标准偏差2.49%），加样平均回收率高达100.85%，显著优于其他两种方法。该研究建立的优化工艺和检测新方法为金藻昆布多糖的开发利用提供了技术支持。

化橘红是芸香科植物化州柚(Citrus grandis‘Tomentosa’)的未成熟或近成熟果实的干燥外层果皮及组织,在止咳、化痰、润肺方面都是君药,对多数人群具有明显的疗效,以致疫情期间一药难求。化橘红被国家卫健委连续五次列入新冠诊疗方案的推荐药品目录,在打赢疫情的防控阻击战中起到重要作用。类黄酮化合物和香气成分是化橘红品质的核心质量指标,本研究检测了化橘红的类黄酮药用成分,建立质量指纹图谱,并进一步对化州柚果皮挥发性香气成分进行检测,解构正品化橘红呈香物质,提取化橘红精油,为化橘红产业开发和精深加工利用提供Metal bioavailability依据,研究结果如下:(1)化橘红基原植物性状观察。观察化橘红基原植物化州柚的枝叶、果实和花朵性状,发现绒毛密度是区分品系的重要依据,可分为正毛、副毛、无毛品系,绒毛密度逐渐递减;花器无明显差异,具有初花期和盛花期,主要呈白色总状花序,盛花期开放4～5瓣;叶片长度为12.20～14.40 cm,呈绿色互生单身复叶,两面皆有绒毛。一般认为,果实表面绒毛越密,品质越好,多毛的“正金毛”、MRTX849“西洋”是化橘红的优良品系。(2)不同品系化橘红药用成分检测。在330 nm和280nm波长下分别对化橘红果皮中类黄酮物质进行含量分析,发现27份化橘红样品共标记12个共有峰,其中鉴定出的6种类黄酮成分中,柚皮苷含量均大于其它物质。不同品系中柚皮苷和野漆树苷的含量为13.77～127.21mg/g、3.11～35.97 mg/g,其中“正金毛”品系的柚皮苷含量最高。(3)化州柚果实的香气物质比较分析。利用气相色谱-质谱联用技术,检测6种化州柚品系果皮挥发性物质特征,共检测出38种萜类成分,以D-柠檬烯、β-月桂烯、γ-萜品烯、α-蒎烯等10种香气成分为主,D-柠檬烯在6种化州柚品系中含量较高,且在“无毛”中含量最高;比较不同样本间差异性,得到p-樟脑烯、桉油烯醇、α-萜品醇等11种代表性差异物质。综合分析表明,“正金毛”与其他品系聚类分区明显,差异度最大,β-蒎烯、榄香烯是其特征成分。(4)化橘红关键呈香物质分析。利用气相色谱-嗅闻仪结合感官试验鉴定化橘红关键呈香物质,共检测到27种香气化合物,含量最高的为D-柠檬烯,质量浓度为238.35μg/g。经GC-O筛选(FD>9及OAV大于1),正品化橘红的关键呈香物质为甲酸叔丁酯、α-蒎烯、甲酸香叶酯和β-萜品烯,使化橘红呈现类梅子香、树脂松木的厚重香,同时具有蔷薇嫩叶香等特点。(5)化橘红精油提取工艺路线优化。以新鲜成熟的化橘红果皮为原料,采Fulvestrant体外用超临界CO_2萃取法,萃取温度为36℃,萃取压力为27 MPa,萃取时间为1.9 h为最佳工艺参数。综上所述,本研究为广东省化州市化橘红产区的化橘红资源圃建立形态差异、药用成分区分的基础,基于6种化州柚品系检测出的38种挥发性物质来比较不同样本间差异性;研究将制作的27份化橘红样品进行HPLC检测鉴定了6种类黄酮成分,其中“正金毛”品系的柚皮苷含量最高;并在以上基础上利用GC-O-MS分析“正金毛”关键呈香物质,从香气的角度区分正品化橘红与其他,同时该研究优化了化橘红精油的提取方法,为产业带来实际效益。研究结果为化橘红资源开发利用及药用柑橘产品的研发提供了理论基础和借鉴价值。

目的 观察生酮饮食对人肺腺癌表皮生长因子受体（EGFR）基因突变型细胞株PC9和Kirsten大鼠肉瘤病毒基因同源物（KRAS）基因突变型细胞株A549裸鼠移植瘤生长的影响，并探讨相应机制。方法 将处于对数生长期的A549、PC9细胞分别接种于裸鼠右前肢皮下，制作A549、PC9细胞裸鼠移植瘤模型。于瘤体直径达到2 mm时，将每种荷瘤裸鼠分为标准饮食组（SD组）和生酮饮食组（KD组），每组genetic exchange6只，分别采用标准饮食和生酮饮食，连续饮食干预30 d。定期测量裸鼠体质量、血糖、血酮体、肿瘤体积，于饮食干预第30天处死裸鼠，取肿瘤组织测量瘤PD-0332991配制重并计算抑瘤率，观察裸鼠心、肝、肺、肾、脑组织的病理变化。分析酮代谢关键酶3-琥珀酰辅酶A转移酶1(OXCT1)、β-羟基丁酸脱氢酶1(BDH1)基因在A549、PC9细胞株的表达。筛选KD组与SD组的差异表达基因，并进行KEGG通路富集分析。结果 第10天起两种荷瘤裸鼠KD组血酮体水平均高于SD组（P均<0.05）。与SD组相比，KD组A549细胞移植瘤体积变小、质量变轻，KD组PC9细胞移植瘤体积增大、质量增加（P均<0.05）。KD组A549、PCImidazole ketone erastin研究购买9细胞移植瘤的抑瘤率分别为58%、-133%。两种荷瘤裸鼠在不同干预条件下各脏器未见明显病理改变。PC9细胞中OXCT1、BDH1基因表达高于A549细胞。不同饮食干预条件下，A549、PC9细胞裸鼠移植瘤中基因表达存在明显差异，且A549和PC9细胞荷瘤裸鼠相比，其肿瘤组织中基因表达也存在差异。KD组与SD组A549细胞裸鼠移植瘤中差异表达基因主要富集在细胞周期和JAK-STAT等信号通路，而在PC9细胞裸鼠移植瘤中差异表达基因主要富集在IL-17、Relaxin、AGE-RAGE和NF-κB等肿瘤信号通路。结论 生酮饮食可抑制A549细胞裸鼠移植瘤生长但可促进PC9细胞移植瘤生长，生酮饮食干预导致两种肺癌细胞裸鼠移植瘤基因表达谱和信号通路改变，其中OXCT1基因表达升高和肿瘤信号通路富集可能是生酮饮食促进PC9细胞移植瘤生长的原因。

研究背景:嗅上皮是哺乳动物成年以后唯一具备神经元此网站再生能力的神经组织。嗅上皮的持续性神经发生为研究神经干细胞自我更新提供了一个独特的模型。嗅上皮是假复层上皮,主要由嗅神经干细胞、微绒毛细胞、鲍曼腺体/导管、支持细胞、嗅觉感觉神经元构成。嗅上皮基底部的嗅神经干细胞主要为水平基底细胞(horizontal basal cells,HBCs)和球状基底细胞(global basal cells,GBCs)。生理情况下,GBCs位于HBCs和未成熟嗅觉感觉神经元之间的基底嗅上皮;HBCs相对静止,并作为储备干细胞库,在嗅上皮严重损伤后激活。嗅上皮日常暴露于空气中,易于受到外界因素(如化学试剂、病毒、烟尘等)的影响。在轻度损伤时,GBCs可以快速大量增殖,分化为大多数嗅上皮细胞类型。在重度损伤情况下,HBCs被快速激活,增殖分化为GBCs和其他嗅上皮所需的细胞类型。嗅上皮受到损伤后,产生大量细胞死亡,同时也激活了嗅神经干细胞的增殖分化。但细胞死亡与嗅神经干细胞增殖分化的关系目前还不清楚,有待进一步研究。本课题首先观察了嗅上皮损伤后的细胞死亡类型,然后通过采用程序性细胞坏死关键分子受体相互作用丝苏氨酸蛋白激酶3(receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 3,RIPK3)基因敲除小鼠、混合谱系激酶结构域样假激酶(mixed lineage kinase domain like pseudokinase,MLKL)基因敲除小鼠,研究了程序性细胞坏死在嗅上皮损伤后嗅神经干细胞活化的作用。研究目的:考虑到程序性细胞坏死是嗅上皮损伤的直接后果,我们推测嗅神经前体细胞对损伤的反应即是对细胞死亡的反应。然而,嗅细胞死亡是否参与调节嗅上皮的反应性细胞增殖,至今未见研究。本课题通过采用程序性细胞坏死关键分子RIPK3基因敲除小鼠、MLKL基因敲除小鼠,研究程序性细胞坏死在嗅上皮损伤后反应性细胞增殖中的作用,以及坏死对于嗅上皮损伤后干细胞活化的机制。MLN8237研究方法:1.采用C57野生型小鼠、RIPK3基因敲除小鼠、MLKL基因敲除小鼠和甲巯咪唑制备嗅上皮损伤模型。2.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(Terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick end labeling,TUNEL)染色、活体碘化丙啶(propidium iodide,PI)标记法观察细胞死亡。3.采用Western Blotting检测程序性细胞坏死关键蛋白分子RIPK3、MLKL及磷酸化(p-MLKL)水平变化;Wnt信号相关蛋白分子(Axin2、β-catenin、Wnt2、SFRP1)表达水平变化;巨噬细胞极化相关蛋白分子(i NOS、Argnase-1、CD206)表达水平的变化;NF-κB信号通路相关蛋白分子(P65、p-P65、IκB、p-IκB)。4.采用Brd U/SOX2免疫荧光双标染色观察小鼠嗅上皮损伤后干细胞活化;OMP/DCX免疫荧光双标染色观察小鼠嗅上皮损伤后嗅神经元的再生。研究结果:1.嗅上皮损伤后3 d,嗅上皮细胞主要发生程序性细胞坏死,少量发生凋亡。2.RIPK3或MLKL基因敲除小鼠嗅上皮损伤后3 d,可观察到比野生型小鼠显著增多的嗅上皮神经干细胞增殖。3.MLKL基因敲除小鼠嗅上皮损伤后7 d,可观察到比野生型小鼠显著增多的新生嗅觉感觉神经元。4.与野生型小鼠相比,MLKL基因敲除小鼠嗅上皮损伤后3 d,嗅上皮可观察到显著增多的巨噬细胞浸润。5.MLKL基因敲除对嗅上皮损伤后Wnt信号和巨噬/胶质细胞的极化无明显影响。6.MLKL基因敲除可抑制嗅上皮损伤后的NF-κB信号激活。研究结论:1.嗅上皮损伤早期,细胞死亡以程序性细胞坏死为主,嗅上皮神经干细胞迅速活化。2.MLKL,RIPK3敲除可促进损伤后的嗅上皮干细胞活化及神经元再生。3.MLKL敲除对嗅上皮损伤后genetic drift的Wnt信号激活无显著影响;MLKL与RIPK3敲除可促进损伤后嗅上皮巨噬细胞浸润;MLKL敲除可抑制嗅上皮损伤后的NF-κB信号活化。

南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctic lipase B,CALB)对水溶性和非水溶性底PI3K/Akt/mTOR抑制剂物均有良好的催化效率，广泛应用于各种工业领域，例如，生物柴油、对映体酮洛芬、甘油碳酸酯等的合成。为提高CALB热稳定性，将CAAG-221抑制剂LB与48条不同来源的脂肪酶序列进行比对获得共识序列，并初步确定了可显著提升CALB保守性的Biodata mining14个突变位点。随后，通过定点突变获得热稳定性显著提升的组合突变体G114A/A284 N(CALBm)。结果显示，与CALB相比，CALBm在50℃下的半衰期(t_(1/2))提高了74.7%,达到14.5 min,但比酶活(16.1 U/mg)和k_(cat)/K_m[5 932.3 mmol/(L·min)]分别下降了36.3%和23%。分子动力学模拟表明，增加的疏水相互作用(G114 vs M83,G114 vs V84,G114 vs I121)和氢键(A284 vs G41,A284 vs A281)提升了CALBm蛋白分子的整体刚性和稳定性。分子对接分析显示，CALBm与底物分子之间作用力的减少可能是其活性降低的主要原因。研究结果将有助于提升CALB高温条件下的应用效果。

目的 探讨低分子量肝素对腹腔镜下胆囊切除术后深静脉血栓（DVT）形成的预防价值。方法 收集2019年3月至2022年12月于海口市第四人民医院住院接受腹腔镜下胆囊切除术的98例患者的临床资料，并根据术Hepatic alveolar echinococcosis后是否使用低分子量Panobinostat体内实验剂量肝素将患者分为肝素组（n=45）和对照组（n=53）。比较两组患者的胆囊疾病分布情况、手术相关指标、术后住院期间DVT发生情况、D-二聚体水平复查结果、凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间。结果 两组患者的胆囊疾病分布情况、手术相关指标比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）。术后住院期间，肝素组患者的DVT发生率低于对照组患者，D-二聚体水平升高的比例低于对照组患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）；两组患者的凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）。两组患者术后住院期间均未发生明显出血的现象。结论 低分子量肝素可以安全有效地降低腹腔镜下胆囊Elexacaftor分子式切除术后患者DVT形成的风险。

近年来,由豚鼠气单胞菌侵染水生动物的报道逐渐增多,给水产养殖带来了严重威胁。由于当今对该细菌引发疾病的治疗仍处于使用化学药物的阶段,而大量使用不同抗生素则导致病原菌严重耐药,进而造成食品安全问题。疫苗的使用则不仅能有效预防疾病,且可以缓解上述问题。如果佐剂与灭活疫苗联用,则能够事半功倍的发挥疫苗效力,更好的抵御病原菌的侵袭。鉴于尚未出现豚鼠气单胞菌佐剂灭活苗的报道,本研究将已鉴定的豚鼠气单胞菌AC-CY株制备成灭活疫苗,并选用氢氧化铝凝胶、葡聚糖、黄芪和蜂胶作为疫苗佐剂,分别与灭活疫苗配伍免疫鲫鱼,在根据全面考虑佐剂来源、使用成本、运用方式和途径、安全性等诸多情况下,筛选出更适宜于大量生产的豚鼠气单胞菌灭活疫苗佐剂。本研究探讨将四种不同免疫佐剂与灭活疫苗配伍,对鲫鱼血清生化指标、血清抗体效价、白细胞吞噬活性、组织免疫相关细胞因子表达量等免疫指标的影响。将各佐剂与灭活疫苗按照1:1的比例配伍制成佐剂灭活苗,同时设立一个空白对照组和一个无佐剂灭活苗实验组。在饲喂的第medication-related hospitalisation1d和第14d进行腹腔免疫注射,于首次免疫前0d,免疫后第7d、14d、21d、28d和35d随机挑选不同鲫鱼进行血液和组织器官的采集用于免疫相关指标检测。研究结果表明,各免疫组鲫鱼血清中ACP、AKP、C3、C4、CAT、Ig M、LZM、SOD表达量相较对照组均有显著(p<0.01)提升,黄芪多糖组、铝胶组、葡聚糖组和蜂胶组鲫鱼血清中各生化指标表达量显著(p<0.05)高于疫苗组;经白细胞吞噬实验进一步证实各免疫组均可增强白细胞吞噬活性;血清抗体效价AMG510配制中,各免疫组的血清抗体效价结果均高于对照组,佐剂组结果高于疫苗组;检测肝脏、脾脏、肾脏和肠道组织中的IL-10、IL-1β、IFN-γ及TNF-α基因的相对表达量,证实加入佐剂能促进体内炎症反应。免疫保护实验中,攻毒后7d对照组鲫鱼全部死亡,黄芪多糖组鲫鱼的存活率最高为84%,葡聚糖组、蜂胶组、铝胶组鲫鱼存活率分别为72%、80%、68%,疫苗组鲫鱼存活率最低为60%,各免疫组均能在一定程度上抵御豚鼠气单胞菌的感染,且佐剂组要更优于疫苗组;细菌载量检测中各免疫组均能有效抑制豚鼠气单胞菌在鲫鱼体内增值并可以降低系统性器官中的细菌载量。最终结果表明鲫鱼接种灭活疫苗能使鱼体产生免疫保护力,铝胶、葡聚糖、黄芪多糖、蜂胶作为佐剂均能提高鲫鱼的免疫能力和对豚鼠气单胞菌AC-CY株的抗感染能力,黄芪多糖Roxadustat抑制剂组与蜂胶组鲫鱼的整体免疫能力最强,其次为葡聚糖组,铝胶组在各项结果中略低于前者。综上,筛选出更适宜于大量生产的豚鼠气单胞菌灭活疫苗佐剂,可更有效的预防豚鼠气单胞菌感染,为豚鼠气单胞菌灭活疫苗佐剂的应用方面提供更加有力的数据支持及参考。

脓毒症是一种临床综合征,表现为宿主对感染的反应失调,导致危及生命的器官功能障碍。目前全球每年大约有1900万人罹患脓毒症,住院死亡率约为26%,尽管经过多方面的努力,近十年病死率有所下降,但是脓毒症仍然是全球面临的巨大健康挑战。近年来的研究发现,脓毒症诱发心肌损伤的患者更容易并发多器官功能衰竭,预后也更为不良。流行病学调查显示,脓毒症诱发心功能障碍的患者约占脓毒症总人数的40%-50%,其病死率可达70%。有效预防、早期诊断和干预脓毒症心肌损害有助于降低脓毒症病死率,改善患者的预后。在正常生理过程中,铁是一种广泛参与代谢和生物功能的活性成分,对许多细胞生命活动具有重要影响。尽管铁的吸收、运输和储存受到人体的严格调控,但在脓毒症时可能发生代谢紊乱,且高水平的铁可导致宿主体内氧化应激增加,从而对细胞和组织造成损害,因此明确脓毒症中铁代谢的改变显得尤为重要。为了探讨铁、脓毒症和心肌病之间的因果关系,我们采用了孟德尔随机化分析方法,利用全基因组关联研究的策略。根据上述研究结果,我们在小鼠脓毒症模型中进行了高铁和低铁饮食的实验,检测了循环中铁参数、炎症指标以及心肌组织铁死亡等相关指标的变化情况,观察铁对脓毒症和心脏功能的影响。同时,我们使用脓毒症心肌细胞损伤模型来探究脓毒症心肌损伤发生的机制。由于肠道及肠道微生物在铁吸收、代谢及脓毒症发病过程中扮演重要角色,因此我们进一步在临床上评估了脓毒症心肌病患者铁参数变化与肠道菌群的相关性。通过这些研究,我们期望为脓毒症心肌病的预防、早期诊断和治疗提供新的理论依据。我们的研究成果有望揭示铁代谢与脓毒症心肌病发生发展的内在联系,为深入理解脓毒症心肌病的发病机制提供科学依据。同时,通过对肠道微生物群的研究,我们可能发现与脓毒症心肌病相关的潜在生物标志物,为临床治疗提供新的靶点。第1章铁与脓毒症心肌病的孟德尔随机化研究及铁对脓毒症心肌病的影响目的:铁稳态对于正常的心脏功能至关重要,越来越多的证据表明,铁失衡是许多心血管疾病亚型的共同特征。为进一步探索铁代谢与脓毒症及脓毒症心功能障碍中潜在的机制。我们首先基于最新的铁参数,脓毒症,心肌病全基因关联分析数据库,使用孟德尔随机化分析他们之间潜在因果关系。随后本研究使用脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠模型,探讨铁对脓毒症小鼠心功能的影响及其潜在的发病机制。方法:1、进行双向孟德尔随机化(MR)研究,探寻铁相关参数(血清铁、铁蛋白、转铁蛋白饱和度、转铁蛋白、转铁蛋白受体1)、脓毒症和心肌病之间的潜在因果关系。2、选取约8周龄、雄性C57BL/6J野生型小鼠,分为四组进行研究:空白对照(CON)组、脂多糖(LPS)组、LPS+高铁饮食组和LPS+低铁饮食组。3、记录小鼠死亡率,并利用小动物高频超声检测仪评估小鼠心脏功能的变化。4、使用相关试剂盒评估心脏组织中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)的变化。5、最后,应用RT-qPCR和Western blot等方法评估心脏相关基因或蛋白分子的变化。结果:1、孟德尔随机化表明遗传变异预测较高的转铁蛋白饱和度水平与FDR矫正后任何心肌病、肥厚性、肥厚性梗阻性心肌病、肥厚性心肌病合并心力衰竭的风险增加有关。转铁蛋白还显示FDR矫正后肥厚性、肥厚性梗阻性心肌病、肥厚性心肌病合并心力衰竭的风险降低,其他两组经校正后差异无统计学意义。在反向分析中,铁参数不受心肌病的影响。2、动物模型观察LPS或生理盐水干预后1天、2天、7天、14天小鼠的死亡率,发现在7天内死亡率变化最大;LPS联合高铁饮食干预组死亡率最高,基本发生在1-7天内。低铁饮食联合组能增加小鼠的存活率。3、炎症水平的变化如IL-1β、IL-6、TNF-α的水平在LPS组及LPS联合高铁饮食组都明显增加,且联合组的表现更为明显,IL-10的水平在LPS联合高铁饮食组显著下降,这些都表明高铁饮食能显著增加小鼠体循环的炎症水平,并且低铁饮食联合组能有效的降低体循环的炎症状态。4、小鼠模型心脏超声结果显示:LPS组中射血分数(Ejection fraction,EF)及短轴缩短率(Fractional shortening,FS)均值分别为31.53%、16.34%,显著低于CON组(P<0.001),提示脓毒症诱导了心脏功能障碍;而应用高铁饮食干预后后,该数值进一步降低为21.31%、11.68%(P<0.05);在低铁饮食组射血分数及短轴缩短率的损失有所减轻,达到60.29%、31.54%。此外,高铁饮食联合LPS的干预会损害舒张功能,如等容舒张时间(isovolumic relaxation time)、E/A 比值,而低铁饮食能减缓LPS诱导的舒获悉更多张功能的损伤。5、促纤维化的相关mRNA进行RT-qPCR,LPS组心脏组织中COL Ⅰ、COL Ⅲ、TGFβ、SMAα、水平显著高于CON组以及低铁饮食联合组,这种表现在高铁饮食联合组表现的更为明显。在14天的小鼠超声中,联合高铁组的射血分数及短轴缩短率的仍然存在显著性的下降,而等容舒张时间、E/A比值未见明显差异。6、动物模型心脏组织铁死亡相关特征性指标(PTGS2、GPX4),相比对照组,LPS组心肌组织的铁死亡相关蛋白PTGS2表达增加、GPX4表达下降,而高铁饮食联合组的干预同样也增加了 PTGS2的表达、降低了 GPX4的表达,低铁饮食组此表现较轻。对心肌组织氧化还原相关指标GSH,MDA,GPX活性进行检测,LPS的干预降低GSH的含量,联合高铁饮食进一步降低了 GSH的含量,而低铁饮食组GSH的下降较LPS组减轻。这一现象也能在MDA、GPX的检测中观察到。结论:孟德尔随机化研究提示提高铁的水平能增加人的脓毒症及心肌病的风险。动物模型发现脓毒症小鼠的心功能受损,铁的增加会进一步损伤脓毒症小鼠的心功能。其影响心功能的机制可能是铁稳态失调加重LPS诱导的氧化还原能力的失衡,进一步诱导心肌细胞的铁死亡。第2章铁代谢紊乱及铁死亡与脂多糖诱导脓毒症心肌细胞损害机制的探索目的:心肌细胞富含线粒体,然而目前线粒体中铁代谢对脓毒症心肌损伤的影响并不清楚。线粒体铁稳态是维持心肌细胞正常生命活动的重要因素。在脓毒症的动物模型中,铁代谢紊乱会导致心肌细胞功能障碍及铁死亡。考虑到线粒体中铁代谢的重要性,我们在脓毒症的细胞模型上探索胞质和线粒体铁代谢变化及诱导铁死亡的机制。方法:1、使用一系列脂多糖(LPS)浓度梯度(0-20 μg/ml)处理HL-1心肌细胞24小时。2、通过检测铁死亡相关标志物PTGS2和GPX4,以及应用铁死亡特异性抑制剂Ferrostatin-1进行评估心肌细胞铁死亡的情况。3、使用免疫荧光JC-1、Liperfluo和DCFH-DA探针评估心肌细胞线粒体膜电位、脂质过氧化和活性氧的变化情况。4、使用FerroOrange和Mito-FerroGreen探针评估胞质和线粒体内亚铁离子的变化情况。5、通过检测BECN1、LC3BⅡ和LC3BⅠ蛋白评估心肌细胞自噬的变化情况。6、评估影响心肌细胞铁代谢的关键蛋白FTH1、FTMT和MFRN1的变化情况。7、为了探讨氧化应激在铁死亡中的作用机制,我们使用去铁胺(DFO)、N-乙酰半胱氨Fer-1抑制剂酸(NAC)和Mito-TEMPO(一种线粒体抗氧化剂)进行了处理。8、通过检测核受体辅激活因子4(NCOA4)以及应用泛素化抑制剂MG132,我们评估了线粒体铁蛋白的降解方式。9、最后,我们使用慢病毒过表达心肌细胞线粒体铁蛋白,并使用线粒体自噬激活剂CCCP评估了线粒体铁蛋白对线粒体自噬的影响。结果:在该研究中,用LPS建立了一种脓毒症心肌损伤模型,并观察了 LPS对心肌细胞的影响。LPS干预后,PTGS2mRNA表达逐渐增加,GPX4表达逐渐降低,提示心肌细胞可能发生铁死亡。铁死亡抑制剂能够逆转心肌细胞的存活率的下降。进一步观察发现,LPS也影响了心肌细胞的铁代谢,使得胞质和线粒体的铁离子水平增加。过表达FTMT(线粒体铁蛋白)能够降低亚铁离子水平并部分逆转心肌细胞的死亡。此外,LPS还能激活心肌细胞的自噬,自噬参与了心肌细胞内铁代谢途径。NALPA genetic variantsC能降低心肌细胞的自噬水平,与TEMPO一样能增加心肌细胞的存活率,而DFO的干预未能降低自噬的水平。联合使用NAC、TEMPO和单独抑制自噬的心肌细胞存活率相比,也未见显著性的改善。进一步的实验发现,FTMT的降低是通过NCOA4介导的自噬性降解而不是泛素化介导的蛋白降解。此外,LPS能增加线粒体铁转运蛋白的表达,这些表明LPS参与了心肌细胞线粒体的铁运输和铁储存。PINK1及Parkin的表达增加,说明线粒体自噬发生激活。而FTMT过表达能降低PINK1、Parkin的表达,表明FTMT能抑制自噬。线粒体自噬的激活剂CCCP增加了心肌细胞的铁死亡标志物的表达及降低了心肌细胞活力,表明FTMT也能通过作用线粒体的自噬影响心肌细胞的铁死亡。结论:LPS可诱导心肌细胞内铁的运输和储存过程紊乱,同时影响线粒体铁代谢,导致心肌细胞铁代谢紊乱及铁死亡。抑制线粒体铁代谢紊乱可部分逆转LPS诱导的心肌细胞铁代谢紊乱及铁死亡。第3章铁代谢与肠道微生物群失调及脓毒症心肌病的关系目的:肠道是铁吸收和代谢的最重要的场所,目前已证实微生物群在脓毒症中的作用,但鲜有研究报道肠道微生物群和铁代谢在脓毒症心肌病中的变化和作用。该部分研究旨在探索肠道微生物群及铁代谢在脓毒症心肌病的变化和相关性。方法:本研究为单中心观察性研究,选取了 2022年2月至2022年9月期间收治于苏北人民医院重症医学科的脓毒症患者。符合入选标准的患者在第1天、第3天和第7天时采集血液和粪便样本。血液样本用于检测铁代谢水平,粪便样本进行16S rDNA测序以评估肠道微生物多样性。入选的患者在72小时内进行超声心动图检查,根据超声结果将患者分为脓毒症心肌病组和非脓毒症心肌病组。收集两组患者的临床数据,包括年龄、性别、身体质量指数(BMI)、序贯器官衰竭评分(SOFA)和急性生理与慢性健康评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)等基本信息。比较两组患者的肠道微生物多样性、铁代谢水平、28天病死率、ICU住院时长、总住院时长、以及血管活性药物使用强度等。结果:研究期间入组患者共有48例,其中脓毒症心肌病组有23例,非脓毒症心肌病组有25例。患者的基线特征比较结果表明,两组患者的年龄、SOFA评分、APACHEII评分、肌钙蛋白 Ⅰ(cardiac TroponinI,cTnⅠ)、B 型钠尿肽(B-type Natriuretic Peptide,BNP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)等均无统计学意义(P>0.05)。但是两组患者的中心静脉压(Central Venous Pressure,CVP)、乳酸(Lactate,Lac)水平等存在统计学差异(P<0.05),且脓毒症心肌病组均高于非脓毒症心肌病组。对两组患者铁代谢水平分析,结果显示,两组患者入组第1天和第3天铁蛋白(serum ferritin,SF)水平存在统计学差异(P<0.05),且脓毒症心肌病组的SF水平均高于非脓毒症心肌病组。其他铁代谢水平包括第1、3、7天的血清铁(serum iron,SI)、转铁蛋白(serum transferring,TRF)、转铁蛋白饱和度(transferrin saturation,TSAT)、总铁结合力(total ironbinding capacity,TIBC)等均无统计学意义(P>0.05)。对两组患者肠道微生物群丰富度及多样性分析,结果显示两组患者的ACE指数和Chao1指数存在统计学差异(P<0.01),而Shannon指数和Simpson指数无统计学差异(P>0.05)。进一步评估两组患者与时间相关的肠道微生物群Alpha多样性,发现脓毒症心肌病组第7天的Simpson指数较第1天下降,且存在统计学差异(P<0.05)。对两组患者肠道微生物群Beta多样性进行分析,PCoA分析提示存在显著差异(P<0.01)。我们比较两组患者不同分类水平上的肠道微生物群组成,在门水平上,脓毒症心肌病组中放线菌(Actinobacteria)(P=0.018)和一种未知细菌(unidentified_Bacteria)的丰度(P=0.024)较低。科水平上,脓毒症心肌病组中气单胞菌科(Aeromonadaceae)的丰度较低(P=0.023)。属水平上,枸橼酸杆菌属(Citrobacter)在脓毒症心肌病中更丰富(P=0.007)。物种层面上,诺德拟杆菌(Bacteroides_nordii)(P=0.037)和速生梭菌([Clostridium]_celerescens)(P=0.026)在脓毒症心肌病中更丰富。通过LEfSe分析,我们发现肠杆菌(Enterobacter)和夸氏肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella_quasipneumoniae)可能是脓毒症心肌病特定的肠道微生物(LDA评分=4.2747,P=0.003)。通过临床指标与肠道微生物群的Spearman等级相关分析,我们发现多形拟杆菌(Bacteroides_thetaiotaomicron)与BNP、SI、TSAT呈正相关(P<0.05)。脆弱拟杆菌(Bacteroides_fragilis)与 cTnⅠ、TRF、TIBC 呈负相关(P<0.05)。解糖胨普雷沃菌(Prevotella_disiens)和提蒙普雷沃菌(Prevotella_timonensis)与SF呈负相关(P<0.05)。本次研究的次要观察指标,包括患者的28天病死率、ICU住院时长、总住院时长、机械通气率、连续性肾脏替代治疗(C ontinuous renal replacement therapy,CRRT)使用率、血管活性药物使用强度、入组24小时液体使用量等均无统计学差异。结论:我们的研究表明,铁蛋白可能对早期识别脓毒症心肌病有预测价值,同时肠杆菌科可能是脓毒症心肌病特定的肠道微生物群。此外,肠道微生物群多样性的改变影响铁代谢的变化,最终可能诱导脓毒症心肌病的发生,未来还需要进行更大规模的研究来验证。