目的:构建SARI基因过表达真核表达载体并完成鉴定。研究SARI基因过表达对CNE2鼻咽癌细胞的生物学特性的影响并初步探讨相关分子机制。方法:钓取并克隆SARI基因的全长cDNA序列,纯化后用Bgl II和Xba I进行双酶切消化,经T4 DNA连接酶作用,连接至pDsRed2-C-RFP真核表达载体,连接产物经转化、挑取克隆、扩增培养后,提取小量质粒,进行DNA测序鉴定,并用Bgl II和Xba I内切酶消化酶消化连接产物,琼脂糖凝胶电泳鉴定。重组质粒转染SARI阴性表达的CNE2细胞,荧光显微镜观察SARI-RFP融合蛋白的表达。Western blot检测转染后SARI-RFP融合蛋白的表达。pDsRed2-SARI-RFP真核表达载体转染至CNE2细胞,通过CCK-8比色绘制生长曲线、Transwell小室侵袭实验、划痕修复实验、Caspase-3活性检测、DNA片段电泳检测等实验,探讨SARI过表达对CNE2鼻咽癌细胞生长增殖、凋亡等生物学特性的影响。Western blot检测内源性线粒体凋亡途径相关蛋白的表达变化,探讨SARI过表达对CNE2细胞增殖、凋亡影响的分子机制。结果:DNA测序结果表明,SARIselleck全长cDNA序列已正确连接至pDsRed2-C-RFP载体。双酶切鉴定结果显示,pDsRed2-SARI-RFP真核表达载体的构建成功。重组质粒转染至CNE2细胞后可表达SARI-RFP融合蛋白。CCK-8比色、Transwell小室侵袭、划痕修复实验结果显示SARI过表达组细胞生长增殖、侵袭迁移能力显著低于空载体对照组和空白对照组(PMedical Symptom Validity Test (MSVT)<0.05);Caspase-3活性及DNA梯状电泳结果显示,SARI过表达诱导CNE2细胞产生凋亡,明显高于空载体对照组和空白对照组(P<0.05)。Western blot检测显示SARI过表达组CNE2细胞较空载体对照组和空白对照组Bcl-2表达下调,Bax、Cytochrome CICI 46474半抑制浓度表达上调,同时伴有凋亡途径相关蛋白Caspase-3和Caspase-9剪接激活以及PARP的表达上调。结论:成功构建pDsRed2-SARI-RFP真核表达载体;SARI过表达可明显抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖和侵袭迁移能力,诱导细胞凋亡;SARI可能通过激活线粒体内源性凋亡途径诱导CNE2鼻咽癌细胞凋亡,发挥抑癌作用。