重组降血压肽ACEIP的表达及其活性鉴定

降血压肽（Antihypertensivepeptides）是一类源自食物蛋白质的、可通过抑制血管紧张素转换酶（AngiotensinⅠ-convertingenzyme，ACE）的活性，而降低血压的小分子肽的总称。由于降血压肽的肽链较短，易被微生物中的蛋白酶和肽酶降解，故难以通过菌体直接表达。本研究选择降血压肽WQVLPNAVPAK，人工合成了大肠杆菌密码子优化后六串联体基因片段ACEIP，将其克隆至表达载体pET30a后构建重组质粒pET30a-ACEIP。该重组质粒经限制性内切酶NdeⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、菌落PCR鉴定后，将其化转至E.coli BL21(DUTI urinary tract infectionE3)感受态细胞中，构建了表达工程菌E.coli BL21(DE3)/pET30a-ACEIP。工程菌selleckchem BLZ945经终浓度为0.8 mmol/L IPTG诱导后，Tricine-SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量约为8.7 kDa处出现一条明显条带。经Ni~(2+)亲和层析、肠激酶酶切后纯化得到串联多肽ACEIP。其中融合蛋白的表达量为61Crizotinib半抑制浓度.30 mg/L，串联多肽ACEIP的表达量为57.84 mg/L。串联多肽经胰蛋白酶酶解后的IC_(50)值为6.39 mg/mL，ACE抑制活性高于单体肽WQVLPNAVPAK的抑制活性（IC_(50)为12.34 mg/mL）。