刘寄奴(Artemisiae anomalae S.Moore)是一种菊科植物,具有抗炎、活血化瘀、保护心脑血管和肝脏等功效。炎症是机体为了防御有害刺激而产生的反应,长时间和剧烈的炎症反应会损伤机体,严重时甚至会造成死亡,影响畜禽的健康养殖。目前临床上治疗炎症的药物主要为甾体抗炎药物、非甾体抗炎药物和中兽药,但前两者长期使用会产生胃肠道反应等毒副作用,而具有低毒、药理作用广泛和不易产生耐药性等优点的中兽药引起了研究者的广泛关注。本试验以刘寄奴总黄酮为研究对象,探究了其最佳提取工艺、主要化学成分和抗炎作用,为临床抗炎中兽药的开发提供重要参考依据。本研究采用单因素试验和响应面法明确了刘寄奴总黄酮的最佳提取工艺;采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)分离与分析了刘寄奴总黄酮的主要成分;利用脂多糖(LPS)构建RAW264.7细胞炎症模型评价了刘寄奴总黄酮对细胞吞噬活性、炎症介质NO的含量以及细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)含量的影响,并进一步研究了刘寄奴总黄酮对TLR4-MyD88-NF-selleck产品κB信号通路中TLR4、MyD88、p65和p-p65等4个蛋白的相对表达水平的影响,揭示其体外抗炎作用机制;同时采用LPS诱导雏鸡的炎症模型,通过观察雏鸡临床症状与脏器表观病理变化,检测血清中炎症介质NO的含量和血常规,计算脏器指数,观察组织病理学切片揭示刘寄奴总黄酮对雏鸡炎症的预防作用。本研究经单因素试验和响应面试验优化获得刘寄奴总黄酮的最佳提取工艺为:乙醇浓度为50%,超声时间为30 min,液料比为20:1 ml/g时,该条件下的提取率为2.02%;采用UPLC-QTOF-MS的方法初步分析了刘寄奴总黄酮中的43种化学成分;体外抗炎试验表明,刘寄奴总黄酮能极显著降低RAW264.7细胞的吞噬活性,减少炎症细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6和IL-10的释放,抑制TLR4、MyD88和p-p65蛋白的相对表达量,表明刘寄奴总黄酮的抗炎作用与抑制TLR4-MyD88-NF-κB信号通路的激活密切相关;体内抗炎试验表明,刘寄奴总黄酮可以减轻雏鸡注射LPS后的临床症状,减轻脏器表观的炎症病变,减少血清中NO的释放,下调鸡血液中升高的白细胞总数、中性粒细胞数和中性粒细胞百分比,上调淋巴细胞数和淋巴细胞百分比,下调LPS造成的雏鸡肝脏指数、肺脏指数、胸腺指数和脾脏指数的升高,改善雏鸡胸腺形态结构的病理改变。综上所述,本研究成功优化出刘寄奴总黄酮的最佳提取工艺,并分析了其主要化学成分;通过建立RAW264.7细胞炎症模型,较为全面的揭示了刘寄奴总黄酮的体外抗炎作用及机制;并进一步利用雏鸡炎症模型,On-the-fly immunoassay初步评价了刘寄奴总黄酮对炎症的预防作用,为研究和开发抗炎中兽药提供AM-2282采购了重要基础。