研究目的:1.收集赵纪生教授治疗糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)的医案,运用中医传承辅助平台2.5、R studio等软件的药性分析、聚类分析等功能,总结、分析赵纪生教授治疗DKD的用药组方规律及核心方。2.运用网络药理学及分子对接方法,探究赵纪生教授治疗DKD核心处方的活性成分、涉及的靶点和相关通路,预测核心方治疗DKD的潜在机制。研究方法:1.数据挖掘:依据纳入排除标准收集赵纪生教授诊治DKD的医案,将患者的姓名、中药处方等信息输入到WPS表格中,并导入中医传承辅助平台建立一个数据库。利用平台各项功能板块统计患者年龄、性别等基本信息及药物使用频率、性味归经等情况。在R studio中运用Apriori算法进行关联规则分析,运用Ward法进行聚类分析。总结、分析赵纪生教授治疗DKD的用药规律及核心方。2.网络药理学:通过TCMSP数据库获取核心方各药物活性成分及其对应的靶点,通过Gene Cards等数据库获取DKD的靶点并筛选共同靶点,整理上述信息导入Cytoscape3.9软件构画中药-成分-靶点-疾病网络、蛋白互作网络,通过拓扑分析功能筛选出核心靶点,并利用该软件的拓扑分析功能筛选出核心靶点,再对共同靶点进行GO及KEGG富集分析,运用MOE软件将关键靶点与活性成分进行分子对接。探究核心处方治疗DKD的潜在机制。研究结果1.赵纪生教授治疗糖尿病肾病组方规律的研究本研究共收集132名患者的396份医案,其中男性71人,女性61人,平均年龄为60.7岁。396份医案中,DKDⅡ期48例,DKDⅢ期180例,处于DKDⅣ期168例。共涉及中药130味,包含补虚药(1096)、清热解毒药(627)、祛风湿药(694)、利水消肿药(528)等几类药物。药性方面,以寒、温、平三性为主,分别占3biospray dressing3.76%、35.64%、19.16%。药味方面,以甘、苦、辛三味为主,分别占34.85%、30.19%、19.89%。归经方面主要涉及肾、肝、脾、胃、肺5经。使用频率前十的药物分别为黄芪(370)、山茱萸(351)、薏苡Entinostat价格仁(272)、川芎(265)、白花蛇舌草(249)、大黄(203)、穿山龙(189)、灯盏花(189)、徐长卿(180)、淫羊藿(165)。在R studio中运用Apriori算法分别对各期处方进行关联规则分析,调整设置参数,Ⅱ期、Ⅲ期处方支持度、置信度分别设置为0.4、0.9,Ⅳ期处方支持度设置为0.35,置信度设置为0.9。Ⅱ期病例处方获得关联规则151条,包含的药物有黄芪、山茱萸、茯苓、川芎、灯盏花、白花蛇舌草、薏苡仁、徐长卿、穿山龙、青风藤、鬼箭羽、生地黄。Ⅲ期病例处方获得关联规则92条,包含中药黄芪、山茱萸、茯苓、川芎、灯盏花、白花蛇舌草、薏苡仁、徐长卿、青风藤、穿山龙、生地黄。Ⅳ期病例处方获得关联规则237条,包含中药黄芪、山茱萸、土茯苓、大黄、川芎、淫羊藿、薏苡仁、白花蛇舌草、徐长卿、穿山龙。调整参数,设置支持度为0.45,置信度0.9,Ⅱ期病例处方此时包含的中药为黄芪、山茱萸、茯苓、灯盏花、川芎、徐长卿、薏苡仁、白花蛇舌草。Ⅲ期病例处方所得到的中药有黄芪、山茱萸、川芎、灯盏花、薏苡仁、白花蛇舌草、徐长卿。Ⅳ期病例处方获得的中药包括黄芪、山茱萸、大黄、土茯苓、川芎、薏苡仁、白花蛇舌草、穿山龙、淫羊藿。基于Ward法进行层次聚类分析,选取频数大于20的50味中药聚类,可归为5类轮廓系数0.40。聚类分析所得潜在处方为:(1)黄芪、山茱萸、川芎、薏苡仁、白花蛇舌草。(2)大黄、土茯苓。(3)玄参、麦冬、淫羊藿、鬼箭羽。(4)灯盏花。(5)穿山龙、青风藤、徐长卿。综合上述结果及赵纪生教授用药习惯,核心方拟定为黄芪、山茱萸、茯苓、灯盏花、川芎、薏苡仁、白花蛇舌草、穿山龙。2.基于网络药理学探究核心处方治疗DKD的机制研究核心方治疗DKD涉及的活性成分包括槲皮素、木犀草素、芒柄花素、黄芩素、β-谷甾醇等,关键靶点为转录因子AP-1、肿瘤蛋白p53、丝裂原相关蛋白激酶1、雌激素受体1、缺氧诱导因子1-α等,涉及脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、IL-17等信号通路。研究结论1.本研究运用数据挖掘方法,总结分析了赵纪生教授诊治DKD的常用药对、组方规律等经验,赵纪生教授认为DKD由消渴病迁延不愈而累及于肾发展而来,病性总属本虚标实,病机多为五脏虚弱,湿瘀胶着,五脏虚弱又以脾、肾二脏为主,瘀血贯穿DKD全程。治疗以补益脾肾,祛湿化瘀为主。治疗DKD的核心方为黄芪、山茱萸、茯苓、灯盏花、川芎、薏苡仁、白花蛇舌草、穿山龙。2.采用网络药理学方法对核心处方治疗DKD的潜在靶点、通路等进行了Pexidartinib细胞培养探索,核心处方通过槲皮素、木犀草素、黄芩素等成分作用于JUN、MYC、MAPK1等靶点,调控AGE-RAGE信号通路、IL-17等信号通路而治疗DKD。