目的:探讨蠲痹方含药血清对绝经后膝骨关节炎(knee ostmicrobial symbiosiseoarthritis, KOA)大鼠软骨细胞自噬的影响及其作用机制。方法:(1)绝经后KOA动物模型的建造和蠲痹方含药血清的制备。采用摘取大鼠卵巢，并切断膝关节内侧副韧带、前交叉韧带，摘除膝关节内侧半月板的方法，建造绝经后KOA大鼠模型。造模成功后，对模型大鼠进行蠲痹方浓缩液灌胃，制备蠲痹方含药血清。(2)大鼠软骨细胞的提取。分别取正常大鼠和模型大鼠的膝关节软骨分离、提取软骨细胞。(3)蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选。将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25%、2.5%、5%、10%、20%含药血清组6组，除模型组外，其余各组分别加入相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h。检测各组软骨细胞的活力，筛选蠲痹方含药血清最佳作用浓度。(4)蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞G蛋白耦联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)表达影响的检测。将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25%、2.5%、5%、10%含药血清组，并取正常大鼠软骨细胞设为空白组。除模型组和空白组外，其他各组软骨细胞用相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h。检测各组大鼠软骨细胞GPR30的相对表达量。(5)蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞自噬相关蛋白表达和AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路影响的检测。将模型大鼠软骨细胞分为模型组、含药血清组、含药血清+Compound C组、Compound C组，并取正常大鼠软骨细胞设为空白组。除模型组和空白组外，含药血清组、含药血清+Compound C组、Compound C组分别用10%蠲痹方含药血清、10%蠲痹方含药血清+Compound C及Compound C干预24 h。检测各组软骨细胞中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3β(microtubule-associated protein light chain 3 beta, MAPLC3β)、Beclin-1、p62,及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白磷酸化AMP活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase, p-AMPK)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR)的相对表达量。结果:(1)动物模型鉴定结果。造模8周后，可见造模大鼠膝关节表面软骨毛糙或缺损，关节间隙变窄，滑膜增生，绝经后KOA大鼠模型造模成功。(2)软骨细胞鉴定结果。甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定结果显示，所提取的细胞符合软骨细胞特征。(3)蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选结果。5%、10%、20%含药血清组细胞活力均高于Galunisertib半抑制浓度1.25%、2.5%含药血清组和模型组(LSD-t=6.767,P=0.003,LSD-t=7.666,P=0.002,LSD-t=5.091,P=0.007;LSD-t=5.080,P=0.007,LSD-t=6.690,P=0.003,LSD-t=3.433,P=0.027;LSD-t=7.5https://www.selleck.cn/products/gsk-j4-hcl.html90,P=0.002,LSD-t=8.200,P=0.001,LSD-t=6.031,P=0.004);10%含药血清组细胞活力高于5%含药血清组和20%含药血清组(LSD-t=3.204,P=0.033,LSD-t=4.671,P=0.010)。(4)蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞GPR30表达影响的检测结果。模型组GPR30相对表达量低于空白组及5%、10%含药血清组(LSD-t=5.695,P=0.005,LSD-t=5.400,P=0.006,LSD-t=9.006,P=0.001),5%、10%含药血清组GPR30相对表达量均高于1.25%含药血清组(LSD-t=2.782,P=0.049,LSD-t=4.473,P=0.011),10%含药血清组GPR30相对表达量高于2.5%含药血清组(LSD-t=4.544,P=0.011)。(5)蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞自噬相关蛋白表达影响的检测结果。模型组、含药血清+Compound C组、Compound C组MAPLC3β相对表达量均低于空白组、含药血清组(LSD-t=6.855,P=0.002,LSD-t=8.675,P=0.001;LSD-t=5.096,P=0.007,LSD-t=5.931,P=0.004;LSD-t=5.560,P=0.005,LSD-t=5.354,P=0.006);模型组、Compound C组MAPLC3β相对表达量均低于含药血清+Compound C组(LSD-t=4.627,P=0.010,LSD-t=8.677,P=0.001)。模型组、Compound C组Beclin-1相对表达量低于空白组、含药血清组、含药血清+Compound C(LSD-t=12.912,P=0.000,LSD-t=7.401,P=0.002,LSD-t=5.360,P=0.006;LSD-t=2.950,P=0.042,LSD-t=5.484,P=0.005,LSD-t=3.903,P=0.018);含药血清+Compound C组Beclin-1相对表达量低于空白组(LSD-t=26.840,P=0.000)。含药血清组、空白组p62相对表达量低于模型组、含药血清+Compound C组、Compound C组(LSD-t=3.925,P=0.017,LSD-t=3.985,P=0.019,LSD-t=0.016,P=0.001;LSD-t=