炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎与克罗恩氏病,可能进一步发展成结直肠癌。IBD的发生发展与基因、环境以及患者的免疫状态密切相关,其目前的治疗药物如水杨酸制剂和类固醇激素等存在副作用、不适合长期服用的缺点。因此,开发天然的生物制剂Tofacitinib生产商具有重要价值。益生菌(乳杆菌、双歧杆菌等)在改善IBD症状方面已有文献报道,其通过调节肠道菌群平衡,维持肠屏障稳态及改善机体免疫,起到防治的效果。为此,在获得鼠源乳杆菌的基础上,开展了其防治IBD的系统研究,主要研究内容和结果如下。采用传统微生物分离法分离获得罗伊氏乳杆菌GLRE01和约氏乳杆菌GLJO02,研究其益生特性(耐受胆盐、胃肠道环境,黏附Caco-2细胞能力)。结果表明:在p H2.5和3.5、0.1%和0.15%胆盐浓度处理6 h,两株菌生物量均能从起始的10~7cfu/m L,维持在10~5cfu/mbrain pathologies L以上;模拟胃肠液环境处理7 h,2株益生菌生物量均能从起始的10~9cfu/m L以上,维持在10~9cfu/m L左右;黏附实验结果表明,GLRE01及GLJO02的黏附率分别为7.15%和32.2%,两株乳杆菌均具有良好的益生性与抗逆性,可进一步用于防治结肠炎小鼠的研究。采用DSS构建结肠炎小鼠模型,研究罗伊氏乳杆菌GLRE01与约氏乳杆菌GLJO02缓解结肠炎的作用。小鼠被随机分为Control+PBS组、DSS+PBS组、DSS+GLRE01组和DSS+GLJO02组。结果表明:与DSS组相比,GLRE01与GLJO02均可缓解DSS诱导的小鼠结肠炎,维持小鼠体重(P<0.05),降低DAI评分(P<0.01),提高结肠长度(P<0.01),降低血清LPS水平(P=0.11),调节细胞因子表达(P<0.05)和增加盲肠SCFAs水平(P<0.01)。16S rRNA基因高通量测序小鼠肠道菌群发现。四个组别间的shanon指数无显著性差异(P>0.05);β多样性的PCA和PLS-DA分析发现,与DSS组相比,益生菌组的肠道菌群有显著差异;物种组成分析及LEf Se分析发现,罗伊氏乳杆菌GLRE01和约氏乳杆菌GLJO02可改善DSS所导致的厚壁菌门(Firmicutes)、梭菌目(Clostridiales)、梭菌属(Clostridium)和拟杆菌属(Bacteroides)相对丰度降低,GLRE01和GLJO02均可降低变形菌门(ProteobacteDinaciclibria)、肠杆菌目(Enterobacteriales)和肠球菌属(Enterococcus)的相对丰度。采用荧光实时定量技术检测巨噬细胞炎症因子,研究短链脂肪酸对LPS+IFN-γ诱导THP-1细胞M1型极化的影响。结果显示,短链脂肪酸能够显著下调M1极化单核细胞THP-1炎症因子(Tnf-α、Il-1β及Inos)表达水平(P<0.05),M1型巨噬细胞标志物Cd86的表达(P<0.01),G蛋白偶联受体Gpr41和Gpr43的表达(P<0.01);上调M2型巨噬细胞标志物(Cd206、ArgⅠ及Ccl18)的表达。综上所述,罗伊氏乳杆菌GLRE01和约氏乳杆菌GLJO02是性能优良的益生菌,能够调节小鼠的巨噬细胞极化及改善肠道菌群的结构,同时,促进肠道短链脂肪酸生成,短链脂肪酸通过与LPS竞争GPR41/GPR43受体位点达到调节巨噬细胞极化进而抑制炎症的效果。本文研究结果将为后续约氏乳杆菌及罗伊氏乳杆菌的开发应用提供数据支撑。