目的:研究毛萼乙素B(Eriocalyxin B,EriB)改善三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导小鼠肠炎的作用及其作用机制。方法:1.选择6-8周龄的C57BL/6小鼠为研究对象,实验设置正常对照组(Control)、模型组(TNBS)、EriB低剂量组(5 mg/kg)、EriB中剂量组(10 mg/kg)、EriB高剂量组(20 mg/kg)和5-氨基水杨酸(5-aminosalicylic acid,5-ASA;50mg/kg)组,每组8只小鼠。模型小鼠通过肛门注射2.5%的三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)乙醇溶液构建。正常对照组和模型组给予生理盐水,连续灌胃7天;EriB低中高剂量组分别给予EriB 5 mg/kg、10 mg/kg和20mg/kg,连续灌胃7天。观察记录各组小鼠的体重变化、便血和腹泻情况,计算各组疾病活动指数(disease activity index,DAI);测量小鼠结肠长度;通过小鼠结肠切片HE染色进行组织学炎症评分;ELISA检测结肠组织炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β的蛋白水平;流式细胞术检测小鼠黏膜固有层M1型和M2型巨噬细胞的比例;q RT-PCR检测M1型巨噬细胞标记物(i NOS、CD86)、M2型巨噬细胞标记物(CD206、Arg1)及肠屏障相关蛋白(ZO-1、Occludin、claudin-1)的m RNA水平。2.采用CCK-8法检测EriB对骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)BMDMs活力的影响。使用LPS和IFN-γ诱导BMDMs向M1型极化;使用IL-4诱导BMDMs向M2型极化。流式细胞术检测EriB对BMDMs极化的影响;q RT-PCR检测M1型巨噬细胞标记物(i NOS、CD86)和M2型巨噬细胞标记物(CD206、Arg1)的m RNA水平;ELISA检测细胞培养上清炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10和TGF-β)的水平。3.分子对接技术验证EriB与JAK2的对接情况;host immune responseWestern blotting检测EriB对BMDMs的M1极化信号通路JAK2/STAT1及其磷酸化蛋白的影响;Western blotting检测小鼠结肠组织JAK2/STAT1及其磷酸化蛋白的表达。结果:1.与TNBS组相比,EriB(10,20 mg/kg)和5-ASA(50 mg/kg)缓解小鼠体重减低、DAI评分、结肠缩短和病理损伤selleck Z-VAD-FMK,使炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平降低。流式结果显示,EriB(10,20 mg/kg)和5-ASA(50 mg/kg)处理抑制结肠固有层M1型巨噬细胞的比例,而对M2型巨噬细胞的比例没有影响。q RT-PCR结果表明EriB(10,20 mg/kg)和5-ASA(50 mg/kg)下调M1型巨噬细胞标志物i NOS和CD86的表达,而对M2型巨噬细胞标志物(CD206、Arg1)的表达没有影响。此外,q RT-PCR结果表明EriB处理对肠屏障相关蛋白(ZO-1、occludin、claudin-1)的表达没有影响。2.CCK-8结果显示EriB(2.5,5,10μM)对BMDMs没有毒性。流式结果显示,EriB(5,10μM)处理抑制BMDMs向M1型巨噬细胞极化,对BMDMs向M2型巨噬细胞极化则没有明显作用。q RT-PCR结果表明EriB(5,10μM)处理BMDMs下调M1型巨噬细胞标志物i NOS和CD86的表达,而对M2型巨噬细胞标志物(CD206、Arg1)的表达没有影响。ELISA结果显示EriB(5,10μM)处理抑制BMDM分泌M1型巨噬细胞因子(IL-6、TNF-α和IL-1β);对M2型巨噬细胞因子(IL-10和TGF-β)的表达没有影响。3.分子对接结果显示EriB与JAK2的四个氨基酸残基(LYS-607,GLU-791,ASP-789和TYR-790)形成氢键。Western blotting结果显示,EriB可以降低JAK2和STAT1的磷酸化。结论:EriB可以抑制结肠组织中巨噬细胞M1极化从而缓解结肠炎,该功能可能Rapamycin与EriB拮抗JAK2/STAT1信号通路有关。