研究目的:三七三醇皂苷(Panaxatriol Saponin,PTS)是三七的有效成分之一,既往研究显示,PTS可通过靶向调节氧化应激缓解急性心肌梗死诱导的大鼠心肌纤维化,但尚无证据表明PTS这一药理效果是否与调控TGF-β1/Smad2、Wnt/β-catenin信号通路有关。因此,本课题将基于这两条信号通路通过体内、体外实验进一步探讨PTS抗炎作用和抗纤维化分子机制,为临床应用PTS治疗心肌纤维化提供实验室依据。研究方法:1.评价PTS对AMI模型大鼠的心肌纤维化治疗作用采用随机数字表法,随机将100只SD大鼠分为假手术组、模型组、PTS高、中、低剂量组,假手术组只予手术操作,不结扎冠状动脉,余大鼠均予手术结扎左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死(AMI)诱导的心肌纤维化模型大鼠,PTS高、中、低剂量组大鼠予PTS水溶液灌胃30天。超声心动图评价PTS对模型大鼠心肌纤维化的治疗效果;HE染色评估PTS对AMI模型大鼠心肌病理损伤的影响,Masson染色评估PTS对AMI模型大鼠心肌纤维化的影响。2.探究PTS抗心肌纤维化的作用机制(1)WB检测AMI模型大鼠心脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen TypeⅠ,Collagen I)和III型胶原蛋白(Collagen Type III,Collagen III)表达,免疫荧光检测α-SMA蛋白表达,从而评估心肌成纤维细胞激活情况;WB检测p-Smad和p-β-catenin蛋白表达,判断PTS是否通过抑制TGF-β1/Smads或Wnt/β-catenin信号通路降低成纤维细胞分化从而发挥抗纤维化作用。(2)TGF-β1体外诱导心肌成纤维细胞分化,WB检测成纤维细胞α-SMA、Collagen I和Collagen III表达评估心肌成纤维细胞激活情况;WB检测p-Smad和p-β-catenin蛋白表达,从而评估PTS对TGF-β1/Smads或Wnt/β-catenin信号通路激活的影响。3.探究PTS通过抗炎作用抑制心肌纤维化的作用机制(1)PTS治疗AMI模型大鼠三天,WB检测大鼠心脏促炎因子、NLRP3以Liquid Handling及p-P65蛋白,研究PTS抗炎作用及机制。(2)LPS及PTS共处理RAW264.7细胞,免疫荧光法检测TNF-α和p-P65蛋白水平,进一步证实PTS的抗炎作CL 318952用和机制。研究结果:1.疗效指标(1)PTS可明显改善AMI模型大鼠一般精神状态,降低AMI模型大鼠的心脏指数。超声心动图检测结果提示,与假手术组相比,AMI模型组LVIDs及LVIDd明显升高(P<0.05),EF及FS降低(P<0.05);与模型组比较,PTS组LVIDs及LVIDd显著降低(P<0.05),EF及FS升高(P<0.05)。(2)HE染色结果提示PTS可抑制胶原纤维增生,减少急性心肌梗死瘢痕组织面积。Masson染色结果提示PTS可抑制胶原纤维增生,降低心肌相对胶原密度(P<0.05),从而改善心肌纤维化。2.抗纤维化机制指标(1)WB结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织中α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,PTS组大鼠心肌组织中α-SMA、Collagen I和Collagen III表达降低(P<0.05)。(2)与假手术组相比,模型组大鼠心脏组织中p-P65、p-β-catenin蛋白量显著增多(P<0.01);与模型组相比https://www.selleck.cn/products/sbe-b-cd.html,PTS大鼠组心脏组织中p-P65、p-β-catenin蛋白量明显降低(P<0.05)。(3)在无TGF-β1诱导时,与空白组相比,PTS组心肌成纤维细胞中α-SMA、Collagen I和Collagen III表达明显降低(P<0.05);在TGF-β1诱导下,与空白组相比,PTS组心肌成纤维细胞中α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达显著降低(P<0.05);免疫荧光可见,与空白组相比,PTS组α-SMA的表达明显减少。(4)在无TGF-β1诱导时,对比空白组,P TS组心肌成纤维细胞中p-Smad2和p-β-catenin蛋白的表达明显下降(P<0.05)。在TGF-β1的刺激下,与空白组相比,PTS组中p-Smad2和p-β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。3.PTS对炎性小体及NF-κB通路的影响(1)与假手术组相比,模型组大鼠心脏组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平显著升高(P<0.05),与模型组相比,PTS组相上述促炎因子的表达明显降低(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠心脏组织中p-P65蛋白表达增加(P<0.05),与模型组相比,高剂量PTS组p-P65蛋白表达降低(P<0.05)。(2)以LPS和PTS共培养RAW264.7巨噬细胞,免疫荧光检测结果显示,无LPS刺激时,PTS对TNF-α和p-P65蛋白表达无影响;在LPS的刺激下,与空白组相比,PTS组TNF-α和p-P65蛋白表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.PTS可抗急性心肌梗死诱导的大鼠心肌纤维化,减少大鼠心肌纤维化瘢痕,改善心功能。2.PTS可降低α-SMA、Collagen I和Collagen III的表达,减少胶原过度沉积,其机制可能是通抑制TGF-β1/Smads或Wnt/β-catenin信号通路的激活,从而缓解急性心肌梗死诱导的大鼠心肌纤维化。3.PTS可降低炎性小体的激活,改善大鼠急性心肌梗死早期的炎症反应,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活性,从而缓解纤维化。