目的:构建体外诱导人肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages,TAM)模型,并鉴定其细胞表型特征。方法:首先用佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激人单核细胞株THP-1细胞48h,诱导其分化为M0型巨噬细胞,再通过白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)和IL-13刺激巨噬细胞48h,诱导分化成为TAM(M2型巨噬细胞)。运用流式细胞仪分析两组巨噬细胞表面分子CD14和CD206的表达水平;Real-time PCR分析两组巨噬细胞内细胞因子IL-10和趋化因子CCL2的m RNA的表达情况。结果:与仅用PMA刺激诱导生成的M0型巨噬细胞相比,经由IL-4和IL-13继续诱导生成的M2型巨噬细胞表面CD14和CD206表达明显增加(P<0.001),Real-time PCR实验显示M2型巨噬细胞内IL-10 m RNA及CCL2 m RNA表达水平明显升高(P<0.001)。结论:本部分实验成功地诱导建立了具有M2型巨噬细胞特征的TAM模型,表现为CD14、CD206、IL-10、CCL2高表达。目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞在三阴乳腺癌细胞对白蛋白结合型紫杉醇(Nab-PTX)耐药中的作用,并分析其潜在分子机制。方法:首先运用CCK-8(cell counting kit-UTI urinary tract infection8)法检测Nab-PTX对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231的有效杀伤浓度;通过Transwell小室培养法建立TAM与乳腺癌细胞共培养模式,通过CCK-8法分析比较不同培养条件下MDA-MB-231细胞对Nab-PTX的敏感性;采用流式细胞术检测不同培养条件下MDA-MB-231细胞凋亡情况;用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同培养条件下MDA-MB-231细胞内MDR1和Caspase-3基因表达的情况;运用蛋白质印迹法(Western Blot)检测不同培养条件下MDA-MB-231细胞内IGF-1R信号通路关键蛋白IGF-1R、p-IGF-1R、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK蛋白的激活情况;进而使用IGF-1R通路抑制剂Linsitinib抑制IGF-1R信号通路,运用Western Blot检测抑制IGF-1R信号通路后对肿瘤细胞内IGF-1R、p-IGF-1R、AKT、p AKT、ERK、p ERK蛋白表达的影响;通过CCK-8法检测白蛋白结合型紫杉醇药物刺激下肿瘤细胞活力的变化;流式细胞术分析肿瘤细胞凋亡率的变化;Real-time PCR法检测肿瘤细胞内MDR1和Caspase-3基因表达的变化。结果:与单独培养的MDA-MB-231细胞相比,TAM共培养组MDA-MB-231细胞对Nab-PTBarasertib NMRX药物的敏感性降低,这表明在Nab-PTX处理的条件下,TAM可增加MDA-MB-231细胞的存活率(P<0.001)。流式细胞仪分析显示,相比于单独培养的MDA-MB-231细胞,TAM共培养组MDA-MB-231JAK抑制剂细胞接受白蛋白结合型紫杉醇处理后,凋亡明显减少(P<0.01),表明TAM可增加MDA-MB-231细胞的抗凋亡能力。Real-time PCR实验显示,TAM共培养组MDA-MB-231细胞中MDR1 m RNA表达明显增高(P<0.001),Caspase-3 m RNA表达明显降低(P<0.05),Western blot结果提示IGF-1R信号通路相关蛋白p-IGF-1R、p-AKT、p-ERK明显激活(P<0.001)。进一步研究发现,加入IGF-1R抑制剂阻断了TAM激活的MDA-MB-231细胞中IGF-1R及其下游信号通路关键蛋白的表达(P<0.001)。降低了TAM共培养组肿瘤细胞的存活率和MDR1的表达(P<0.001),增加了细胞凋亡率和Caspase-3的表达(P<0.01),改善肿瘤细胞对白蛋白结合型紫杉醇的敏感性,部分逆转TAM介导的细胞耐药。结论:TAM能引发三阴乳腺癌细胞对白蛋白结合型紫杉醇药物耐药,其机制可能与TAM激活MDA-MB-231细胞内IGF-1R信号通路有关。IGF-1R通过调控下游AKT和ERK通路,发挥促肿瘤耐药作用。TAM和IGF-1R可能是白蛋白结合型紫杉醇耐药的三阴乳腺癌患者潜在的治疗靶点。