松茸富硒深层发酵及其菌丝体多糖生物活性的研究

目的获取高产富硒的松茸(Tricholoma matsutake(S.Ito et)Sing)菌丝体以提取多糖,探究富硒松茸菌丝体多糖的生物活性。方法采用平板法确定松茸最适菌种耐硒浓度;以松茸菌丝体干重为指标,单因素实验结合正交实验明确松茸菌丝体深层发酵培养基的氮源、碳源和维生素,并在此基础上均匀设计实验优化氮源、碳源和维生素的配比;通过检测松茸菌丝体干重和有机硒含量,确定松茸菌丝体液体发酵的最适硒浓度,并进行发酵罐扩大培养;以多糖得率为指标,选取提取时间、提取次数、温度、料液比4个因素,在Medical pluralism单因素实验基础上进行正交实验,优化热水提取松茸菌丝体多糖工艺;选取超声次数、料液比、超声功率、超声时间4个因素,在单因素实验基础上进行正交实验优化超声辅助提取松茸菌丝体多糖工艺;以Vc或EDTA-2Na为阳性对照,检测富硒松茸菌丝体多糖DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基、总还原力、铁离子还原抗氧化力和亚铁离子螯合力,明确富硒松茸菌丝体多糖的体外抗氧化活性;通过小鼠口服葡萄糖耐量试验和二甲苯致小鼠耳肿胀试验,研究富硒松茸菌丝体多糖对小鼠有改善葡萄糖耐量和消炎作用。结果松茸菌种保存在含Na?Se O?50μg/m L的平板上能保守良好的长势;最佳深层发酵培养基的配方为3.9%(g/m L)黄豆粉、2.1%(g/m L)玉米淀粉、0.004%(g/m L)VB_6,松茸菌丝体的干重达到0.84 g/100 m L;松茸液体发酵的最适硒浓度为30μg/m L,此条件下松茸菌丝体的干重可达(1.04±0.04)(g/100 m L),显著高于其他硒浓度下培养的菌丝体干重(P<0.05),其菌丝总硒含量为336.4 mg/kg,有机硒含量为304.7mg/kg,发酵液中的总硒含量为8.244 mg/L,有机硒含量为0.681 mg/L;在优化热水提取工艺中,当水浴提取时间3 h、水浴90℃、料液比1:10(g/m L)、提取2次时,松茸菌丝体多糖得率最高,达(1.93±0selleck抑制剂.03)%;超声辅助提取最佳工艺为:料液比1:15(g/m L)、超声功率200 W、超声时间10 min、温度90℃、浸提时间2 h、次数2次,其多糖得率达(2.69±0.10)%,其2 mg/m L的富硒松茸菌丝体多糖溶液中硒含量为0.347 mg/L,有机硒含量为0.314 mg/L。富硒菌丝体多糖的DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基清除能力分别为(21.77±0.25)μmol V_C当量/mg、(76.09±0.90)μmol V_C当量/mg、和(1.66±0.10)mmol V_C当量/mg,铁离子还原抗氧化力分别为(25.85±2.08)μmol V_C当量/mg、亚铁离子螯合力分别为(111.46±2.04)μmol EDTA-2Na当量/mg、总还原力分别为(78.94±1.67)μmol Vc当量/mg;体内实验中,富硒松茸菌丝体多糖能加速健康小鼠的葡GNE-140研究购买萄糖代谢,使二甲苯致小鼠耳肿胀率明显降低(P<0.05)。结论:松茸有着较好的耐硒能力,低浓度硒能显著的促进松茸菌丝体的生长,富硒松茸菌丝体多糖较未富硒松茸菌丝体多糖展现出了更好的抗氧化活性且都具有提高口服葡萄糖耐受和抗炎活性。本研究为松茸进一步的开发和利用奠定了实验基础。