目的:本实验以风寒湿型模型大鼠为研究对象,通过观察热补针法对类风湿关节炎模型大鼠踝关节肿胀度、关节炎指数评分及滑膜组织病理学的影响,检测热补针法对大鼠血清及踝关节滑膜中Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的含量,探讨热补针法治疗RA的效果及可能作用机制,为进一步临床应用提供可靠的实验依据。方法:将40只SPF级SD大鼠按照随机数字表法分为空白组(8只)和造模组(32只),本研究采用完全弗氏佐剂、鸡Ⅱ型胶原诱导加风寒湿环境结合的方法制备RA风寒湿型模型,诱导发bio-based oil proof paper生类风湿关节炎,初次免疫开始第21d根据AI评分结果评判造模成功与否。造模成功后再将造模组随机分为模型、西药组、平补平泻组和热补针法组,每组各8只。自造模完成当天开始,分别给予相应处理,空白组、模型组与各针刺组同时进行抓取与固定,不予针刺干预;西药组甲氨蝶呤0.1mg/100g腹腔注射,7d注射一次,共注射1次;针刺组分别于足三里穴处施以平补平泻针法和热补针法,每次留针时间30min,每天1次,共针刺7d。在实验期间注意每天观察5组大鼠的饮食情况、行动状态、精神状态、毛发光泽等一般状况;并于造模前、造模完成后及治疗后观察和测量实验大鼠的AI指数和左踝关节直径,干预结束后各组统一进行取材,大鼠麻醉后进行心脏负压采血后离心机获得血清,颈椎脱臼处死所有大鼠,取大鼠踝关节滑膜置于4%多聚甲醛中保存待测,制作切片HE染色进行观察踝关节滑膜组织病理改变;ELISA法测定各组大鼠治疗后血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的含量;免疫组化法检测各组大鼠踝关节滑膜组织中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平的表达。结果:1.大鼠的一般情况:空白组大鼠精神状况良好,进食及饮水量正常,体毛洁白有光泽,皮温正常,行动自如,反应灵敏,排便规律,便质正常,爪子无红肿,未观察到关节有炎症改变;模型组大鼠精神状态欠佳,与空白组比较,进食及饮水量明显减少,体毛变黄不光泽,活动明显受限,甚至出现跛行,造模后逐渐出现双后足发红、肿胀,部分大鼠尾根处可触及风湿结节,于加强免疫后第14d足肿胀最为明显;西药组、平补平泻组及热补针法组大鼠的精神状况较模型组更好,进食及饮水基本正常,活动受限逐渐好转,关节肿胀程度降低,皮肤颜色逐渐恢复。2.踝关节直径:在造模前,各组大鼠踝关节直径差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组比较,各造模组大鼠踝关节直径差异有统计学意义(P<0.01),表明本次实验风寒湿模型大鼠造模成功;治疗结束后,西药组、平补平泻组和热补针法组与模型组比较,踝关节直径均变小,差异具有统计学意义(P<0.01),表明经治疗后RA大鼠症状明显改善;西药组和热补针法组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与平补平泻组比较,热补针法组踝关节直径变小,差异具有统计学意义(P<0.01),表明在降低踝关节直径方面,热补针法优于平补平泻组。3.关节炎指数:干预前,造模组大鼠AI评分均超过8分,表明造模成功;干预后,各治疗组与模型组比较AI评分均下降,差异具有统计学意义(P<0.01);与西药组比较,热补针法组AI评分高,差异无统计学意义(P>0.05);与平补平泻组比较,热补针法组AI评分低,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.踝关节滑膜HE染色结果:空白组大鼠踝关节滑膜组织形态学表现为结构正常,滑膜细胞排列规则,表面光滑,无炎症反应相关表现。模型组大鼠滑膜组织可见大量炎症细胞浸润,滑膜表面不整齐,伴血管翳形成。平补平泻组炎性细胞对滑膜的浸润情况较模型组有所改善;西药组及热补针法组大鼠踝关节滑膜组织结构基本正常,只可见少量滑膜炎性细胞浸润,滑膜细胞增生也较少,损伤程度较模型组明显改善。5.大鼠血清ELISA检测结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中的IFN-γ、IL-2含量均显著性提高(P<0.01),IL-4、IL-10的含量均显著性明显下降(P<0.01);治疗后,与模型组比较,西药组、热补针法组、平补平泻组血清中的IFN-γ、IL-2含量均显著性下降(P<0.01),IL-4、IL-10含量均显著性升高(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,热补针法组血清IFN-y和IL-2含量变化经统计学检验,无统计学意义(P>寻找更多0.05),IL-4、IL-10含量降低,差异无统计学意义(P>0.05);与平补平泻组比较,热补针法组血清IFN-yMK-1775作用、IL-2含量降低,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4、IL-10含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。6.大鼠踝关节滑膜组织免疫组化检测结果:与空白组比较,模型组大鼠踝关节滑膜组织中IFN-γ和IL-2的表达量均显著性升高(P<0.01),IL-4、IL-10的表达量均显著性下降(P<0.01);治疗后,与模型组比较,西药组、热补针法组、平补平泻组大鼠踝关节滑膜组织中IFN-γ和IL-2的表达量均显著性下降(P<0.01),IL-4和IL-10的表达量均显著性升高(P<0.01);与西药组比较,热补针法组大鼠踝关节滑膜组织中IL-2表达量显著性下降(P<0.01),IL-10的表达量也显著性下降(P<0.01);与平补平泻组比较,热补针法组大鼠踝关节滑膜组织中IFN-γ和IL-2的表达量均显著性下降(P<0.01),IL-4和IL-10的表达量升高(P<0.01)。结论:1.热补针法可明显降低RA大鼠的踝关节直径及肿胀,降低模型大鼠AI评分,缓解大鼠一般炎症情况,改善大鼠活动受限程度;改善滑膜组织结构,能在一定程度上抑制滑膜炎症反应,减少炎症细胞浸润,改善滑膜增生情况;2.实验数据表明,热补针法可以有效降低大鼠血清及滑膜组织中Th1分泌的促炎因子IFN-γ、IL-2水平,提高Th2分泌的抑炎因子IL-4、IL-10水平,从而维持Th1/Th2细胞免疫平衡,为临床上热补针法治疗该病提供了可靠的依据。