梨果是我国最重要的传统水果之一,营养丰富,全球需求量高。然而,梨果在收获、包装、储存和运输过程中极易受到各种病原真菌的影响。梨果采后由扩展青霉(Penicillium expansum)引起的青霉病是梨果腐烂的主要原因之一。目前P.expansum对梨果的侵染机制还处于初步研究阶段,因此研究P.expansum对采后梨果的侵染机制尤为重要。WSC1主要编码细胞壁完整性和应激反应WSC蛋白,作为MAPK信号通路中的信号接收器,在真菌细胞对外界环境压力应答中起重要作用。本研究拟通过农杆菌介导的同源重组技术将WSC1基因进行敲除和回补,进而分析敲除突变株和回补突变株在生长发育、致病过程等方面的表型变化,再通过转录组学及生物信息Tofacitinib临床试验学技术分析研究WSC1敲除菌株侵染梨果的机制以及梨果对WSC1敲除菌株侵染的防御机制。本论文主要研究结果如下:(1)生物信息学分析发现WSC蛋白相对分子质量为32 k Da,共有318个氨基酸,理论等电点为8.09,不稳定系数为48.16,脂肪系数为63.27,亲水性评估为-0.116,该蛋白为亲水性蛋白。通过信号肽预测发现该蛋白在第1-20位氨基酸残基有一段信号肽序列。亚细胞定位于质膜上且该蛋白在205-225位氨基酸之间形成典型的跨膜螺旋区。(2)通过https://www.selleck.cn/products/Nolvadex.html农杆菌介导的同源重组技术构建WSC1敲除突变株ΔWSC1及回补突变株ΔWSC1-C。功能性验证试验显示WSC1的缺失,一定程度上减缓了WSC1敲除菌株的生长速度,减少了P.expansum的菌丝产量和孢子产量;降低了P.expansum侵染梨果的致病力;降低了P.expanmedial rotating kneesum体外体内产PAT的能力以及产毒活性。同时,WSC1的缺失使得敲除株对细胞壁胁迫因子耐受性降低、抗氧化能力增强、高渗敏感性下降、抗盐胁迫能力下降、多数金属离子较为敏感。(3)利用转录组学及生物信息学技术分析研究WSC1敲除菌株侵染梨果的机制,发现一些与细胞壁完整性及信号转导相关基因、氧化应激相关基因及产毒相关基因的表达水平发生了改变。细胞壁完整性及信号转导相关基因表达量变化,病原菌响应胁迫更敏感;氧化应激相关基因的表达量下调降低了病原菌侵染能力;产毒相关基因表达量下调致产毒能力下降,造成其侵染能力的降低。(4)利用转录组学及生物信息学技术分析研究梨果对WSC1敲除菌株侵染的应答调控机制,发现一些与响应胁迫信号转导相关基因、防御抗性相关基因及氧化应激相关基因的表达水平发生了变化。响应胁迫信号转导相关基因表达量发生变化,梨果响应胁迫做出系列反应;防御抗性相关基因表达量上调,提高了梨果的防御能力;氧化应激相关基因表达量上调,提高了梨果抗氧化能力。