石榴酸(Punicic acid,PA)是一种独特的Omega-5长链多不饱和脂肪酸,主要存在于石榴籽油中,其含量为56%～83%。研究表明,PA具有抗炎、抗氧化、抗癌、调节脂质代谢、抗糖尿病等生理活性,然而PA的免疫调节作用及其机制仍不清楚。该研究首先从石榴籽油中富集制备了PA,利用制备的PA阐明了其在体外细胞水平上的免疫调节活性及其作用机制,然后进一步在动物水平上评价了PA对免疫低下小鼠免疫功能的影响,同时分析了其对免疫低下小鼠肠道菌群组成的影响和脂质代谢的调节作用,并揭示了PA可能是通过改善肠道菌群组成和调节脂质代谢而发挥免疫调节作用。首先,采用冷榨法提取石榴籽油,并通过分子蒸馏富集制备了石榴籽油中的PA;气质联用检测结果表明,富集后PA含量从59.28%提高至87.45%。接下来以小鼠单核巨噬细胞RAW264.7作为研究对象,以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)作为阳性对照,探究了PA的体外免疫调节活性。实验主要考察了PA对RAW264.7细胞增殖、细胞形态、吞噬能力、细胞酶活及细胞因子的影响,同时采用Western-blot检测了细胞中免疫调节信号通路中相关蛋白的表达。结果显示,低浓度的PA促进RAW264.7细胞的增殖,且PA作用后,细胞形态发生改变,吞噬能力增强,同时细胞因子的分泌和细胞酶活提高;Western-blot结果表明,PA激活了细胞中NF-κB和MAPK信号通路。体外细胞实验表明,PA可能通过激活NF-κB和MAPK通路来增强细胞的免疫活性。其次,以环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导的免疫低下小鼠模型作为研究对象,以盐酸左旋咪唑(Levamisole Hydrochloride,LH)作为阳性对照,探究了PA的体内免疫调节活性。实验主要评估了小鼠体重变化、免疫器官指数、脾脏和胸腺组织学形态、脾淋巴细胞增殖能力及血清中免疫球蛋白和细胞因子含量,同时采用Western-blot检测了脾脏中NF-κB信号通路相关蛋白的表达变化。结果表明,小鼠GSI-IX IC50腹腔注射CTX后,体重明显下降,https://www.selleck.cn/products/rsl3.html免疫器官萎缩,各项免疫指标紊乱;灌胃PA后,各项免疫指标逐渐恢复,主要表现为体重增加、免疫器官指数增加、H&E染色可观察到脾脏和胸腺组织形态好转、脾淋巴细胞增殖能力增强、血清中免疫球蛋白和细胞因子含量增加;Western-blot结果表明PA改善了CTX对NF-κB信号通路的抑制。体内动物实验表明,PA可能通过调控NF-κB信号通路在小鼠体内发挥免疫调节作用。最后,通过16S rDNA测序技术和LC-MS/MS分析分别对小鼠肠道菌群和血清脂质组成进行Electrophoresis检测,并通过Spearman统计学分析方法对二者进行关联分析。结果表明,PA改善了CTX造成的肠道菌群紊乱,改善了肠道菌群的群落结构,有益菌(Bacteroidetes门、Lactobacillaceae科和Bacteroidaceae科)的水平增加,致病性细菌(Helicobacteraceae科、Helicobacter属)的水平降低;同时,PA改善了血清脂质组成,甘油三酯(Triglyceride,TG)含量降低,磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine,PE)的比例提高;关联分析表明,脂质紊乱的调节与肠道菌群结构的改变有关。综上所述,PA在体内外均具有良好的免疫调节活性。该研究为其作为免疫调节佐剂或用于功能性产品开发提供了理论依据,同时也为石榴籽的开发利用提供了新思路。