肝纤维化是各种损伤因素所致的慢性肝损伤演变而来,其发病机制是肝脏细胞外基质(ECM,Extracellular Matrix)在肝脏过度沉积,肝星状细胞(HSCs,Hepatic Stellate Cell)是合成和分泌ECM的主要细胞,此外肝巨噬细胞在此过程中同样发挥着至关重要的作用。因此,抑制HSCs的炎性活化以及抑制肝巨噬细胞促炎表型对缓解肝纤维化至关重要。丁香酚具有抗炎、抗氧化等药理作用,有研究显示,丁香酚处理小鼠骨髓来源的间充质干细胞(MSCs,Mesenchymal Stem Cell),可以有效地增强其自我更新等生物学功能,然而丁香酚能否增强人脐带来源的间充质干细胞(HUC-MSCs,Human Umbilical Cord Derived MesenchymIntima-media thicknessal Stem Cells)的抗炎特性,改善其对肝纤维化的治疗作用仍未有研究报道。本课题研究内容如下:目的:观察丁香酚对HUC-MSCs细胞活力和迁移能力的影响;研究丁香酚对HUC-MSCs调控HSCABT-263价格s的炎性活化和巨噬细胞促炎表型能力的影响;研究丁香酚对HUC-MSCs抗小鼠肝纤维化能力的影响。方法:1.组织贴壁法体外培养HUC-MSCs,流式细胞术鉴定HUC-MSCs的表面标志物,特殊染色评估HUC-MSCs多向分化能力;2.MTT法评估丁香酚对HUC-MSCs细胞活力的影响;3.体外划痕实验观察丁香酚对HUC-MSCs迁移能力的影响;4.Western Blot实验检测Eu-MSCs-CM、MSCs-CM处理经转化生长因子-β_1(TGF-β_1,Transforming growth factor-β_1)诱导活化的LX-2细胞,对各组LX-2细胞中α-SMA、COL_1A_1、Smad2/3、P-Smad2/3的表达的影响;5.Eu-MSCs-CM、MSCs-CM处理经脂多糖(LPS,Lipopolysaccharide)诱导为促炎表型THP-1巨噬细胞,流式细胞术检测THP-1巨噬细胞表面标记物CD11b、CD86和CD206的表达,q RT-PCR检测THP-1巨噬细胞细胞促炎基因TNF-α、IL-1β、IL-6的表达;6.促炎型THP-1巨噬细胞与LX-2细胞共培养,Western Blot检测对LX-2细胞的α-SMA、COL_1A_1的影响表达;7.腹腔注射CCL_4构建小鼠肝纤维化模型,尾静脉注射Eu-MSCs、MSCs后,HE、Masson染色检测小鼠肝脏纤维化恢复程度;血清生化检测小鼠血清AST、ALT表达变化。结果:1.组织贴壁法培养得到多边形或梭形细胞,流式细胞术鉴定结果显示该细胞的MSCs标志物CD90、CD73、CD105表达率接近100%,造血细胞标志物CD45、CD19、CD34、CD11selleck产品b、HLA-DR几乎不表达;特殊染色观察到油红0染色阳性的成脂分化细胞和茜素红染色阳性的成骨分化细胞(p<0.05);2.MTT法结果显示0、7.5、15、30μg/m L浓度丁香酚处理HUC-MSCs 24h、48 h后细胞活力在90%以上,可认为对HUC-MSCs没有毒力作用(p<0.05);3.划痕实验显示:加15μg/m L丁香酚处理组的细胞迁移率为(83±1.6)%、未加丁香酚处理组的细胞迁徙率为(42±2.8)%(p<0.05);4.Western Blot结果显示:MSCs-CM处理组和Eu-MSCs-CM处理组,LX-2细胞α-SMA、COL_1A_1、p-Smad2/3、Smad2/3蛋白的表达水平均显著降低,与MSCs-CM处理组相比,Eu-MSCs-CM处理组降低更加显著(p<0.05);5.流式细胞术结果显示:MSCs-CM处理组和Eu-MSCs-CM处理组,THP-1巨噬细胞的M1型极化标志物CD86的表达水平均显著降低,与MSCs-CM处理组相比,Eu-MSCs-CM处理组降低更加显著;q RT-PCR结果显示:MSCs-CM处理组和Eu-MSCs-CM处理组,THP-1巨噬细胞促炎基因TNF-α、IL-1β、IL-6的表达均显著降低,与MSCs-CM处理组相比,Eu-MSCs-CM处理组降低更加显著(p<0.05);6.Western Blot结果显示:促炎型THP-1巨噬细胞与LX-2细胞共培养后,LX-2细胞中的α-SMA、COL_1A_1蛋白表达量显著升高(p<0.05)。7.HE、Masson染色结果显示:MSCs组和Eu-MSCs组小鼠肝纤维化均得到了恢复,与MSCs组相比,Eu-MSCs组恢复更加明显;生化分析结果显示:MSCs组和Eu-MSCs组,AST、ALT水平均显著降低,与MSCs组相比,Eu-MSCs组降低更加显著(p<0.05)。结论:(1)丁香酚可以增强HUC-MSCs的迁移能力;(2)丁香酚可以增强HUC-MSCs对HSCs炎性活化以及对巨噬细胞促炎表型的抑制作用;(3)丁香酚可以增强HUC-MSCs抗肝纤维化作用。