研究背景:酒精已成为我国继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因。酒精性脂肪性肝病目前未有特效药物用于治疗及防护,临床上对于酒精性脂肪性肝病及其损伤的治疗主要通过相应药物的对症支持治疗。目前治疗酒精性脂肪性肝病所用的戒酒、营养支持、化学药物等方法存在疗效不明显,不良反应及并发症多等问题。小花清风藤为清风藤科清风藤属藤本植物,是我国布依族、苗族等少数民族地区的民间用药,其具有清热利湿、祛风止痛、保肝护肝之功效,曾被民间广泛用于防治肝炎且是相关保肝护肝中成药的组方药。但目前其对肝脏的保护作用的相关分子机制及作用靶点尚不明确,限制了小花清风藤的应用及进一步发展。目的:研究并探讨小花清风藤水提物对酒精性脂肪性的影响,探讨小花清风藤提取物对其的防治作用机制,为小花清风藤的应用及开发提供理论依据。方法:(1)将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,正常组、液体饲料对照组、酒精MCC950临床试验液体饲料组、高脂饲料组。实验正式开展前适应性喂养2周,第三周正常组普通大小鼠维持饲料饲养,自由进食进水。液体饲料对照组,按液体对照饲料指导说明饲养。酒精液体饲料组,酒精液体饲料饲养按照Gao-Binge模型建立酒精性脂肪肝模型。高脂饲料组,60%高脂饲料饲养自由进食,20%(v/v)酒精溶液自由饮用。各组记录每日饲料消耗量及体重变化情况。第16天时处死后测定血清转氨酶活性及血清血脂、血糖含量。制备肝组织石蜡切片及冰冻切片,分别HE染色和油红O染色。(2)将33只C57BL/6J雄性小鼠分随机分为6组,正常组、酒精性脂肪肝模型组、多烯磷脂酰胆碱组、小花清风藤水提物低、高剂量组各6只,备用组3只。各组先适应性喂养一周。第二周开始,正常组,普通大小鼠维持饲料饲养。酒精性脂肪性肝病模型组按照Gao-Binge模型建立,酒精液体饲料指导说明饲养。多烯磷脂酰胆碱组、小花清风藤水提物低、高剂量组,按照Gao-Binge模型建立及TP 4030D酒体饲料指导说明饲养。同时,第5天至15天,各按200mg/kg(多烯磷脂酰胆碱-CMC-Na)、400mg/kg、800mg/kg小花清风藤水提物-CMC-Na溶液灌胃。第16天时,各组小鼠进行相应处理后处死。留取相应样本测定血清肝肾功能、血脂、血糖含量,肝组织氧化应激指标等。制备肝、肾、心、脾等组织石蜡切片及冰冻切片,分别HE染色和油红O染色。另取部分肝组织,进行Western-Blot蛋白印迹分析相应组织蛋白表达情况。(3)将33只C57BL/6J雄性小鼠分随机分为6组,正常组、酒精性脂肪肝模型组、美他多辛组、小花清风藤水提物低、高剂量组各6只,备用组3只。各组先适应性喂养一周。第二周开始,正常组,普通大小鼠维持饲料饲养。模型组酒精液体饲料饲养,按照Gao-Binge模型建立。美他多辛组、小花清风藤水提物低、高剂量组,酒精液体饲料饲养按照Gao-Binge模型建立酒精性脂肪肝模型。第16天开始普通大小鼠维持饲料饲养。同时,分别每日按150mg/kg美他多辛-CMC-Na、400mg/kg、800mg/kg小花清风藤水提物-CMC-Na溶液灌胃。第26天各组禁食禁水12小时后,各组小鼠处死后取材。留取相应样本测定血清肝肾功能、血脂、血糖含量,肝组织氧化应激指标等。制备肝、肾、心、脾等组织石蜡切片及冰冻切片,分别HE染色和油红O染色。取部分肝组织,进行转录组学高通量测序以分析小花清风藤水提物对各组小鼠基因表达差异的影响。结果:(1)液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组3组小鼠体重、肝质量与肝质量指数明显低于正常组。酒精液体饲料组ALT、AST、TC、血糖水平显著高于正常组且高于液体饲料对照组。高脂饲料组血清TC、AST、血糖显著高于正常组,血糖高于液体饲料对照组。酒体酒精饲料组小鼠肝中有大量脂质沉积,高脂饲料组次之。(2)小花清风藤水提物能预防且减轻酒精引起的肝脏脂质沉积,降低血清肝功能指标AST、ALT、ALP的活性,增加肝脏抗氧化剂SOD和GSH-PX水平,降低MDA水平,降低血清CR水平,改善肾损伤,降低血脂水平,维持血糖正常。该药物对多种器官无毒性损伤,免疫印迹实验表明它能上selleck HPLC调多种蛋白的表达,如ASC、My D88、TLR-4、NLR-P3、NF-κB等,并下调SREBP1蛋白的表达。(3)小花清风藤水提物能治疗性的改善酒精性脂肪肝肝脏脂质沉积,降低血清AST、ALT、ALP活性,提高肝组织SOD、GSH-PX水平,降低MDA含量,降低血清CR水平,改善肾损伤,降低血脂水平,维持血糖浓度正常,且无明显毒性损伤。肝组织转录组学测序结果表明,小花清风藤水提物对胆汁分泌、细胞周期、细胞色素P450代谢外源物质和P53等相关信号转导通路调节有影响。结论:(1)短期Gao-Binge模型与酒精加高脂饲料模型都能成功诱导C57BL/6J小鼠出现AFL的相应生化与病理特征,且Gao-Binge模型组的相应病理指标比后者更加显著,适合于急性AFL模型的建立。(2)小花清风藤水提物对酒精性脂肪肝所致的肝损伤的预防具有显著的作用。其作用机制可能与其调non-medical products节肝细胞氧化应激损伤、肝细胞炎症反应、糖脂代谢等相关分子机制有关。(3)小花清风藤水提物对酒精性脂肪肝所致的肝损伤的治疗及改善具有一定的作用。肝组织生化结果表明其作用机制可能与其调节肝细胞氧化应激损伤有关。转录组学结果表明其治疗作用的发生可能与胆汁分泌、细胞周期、细胞色素P450、P53蛋白等相关信号转导通路有关。